一种海燕胶原蛋白肽的制备方法
【专利摘要】本发明公开一种海燕胶原蛋白肽的制备方法，按照以下步骤进行：首先将新鲜的海燕处理后在乙酸溶液中进行脱灰质处理，然后将脱除了灰质的海燕体再次浸入乙酸溶液中进行处理，并通过离心等工序获得酶促溶性胶原蛋白，以酶促溶性胶原蛋白作为原料，利用碱性蛋白酶和Alcalase酶进行酶解，最终获得海燕胶原蛋白肽。
【专利说明】一种海燕胶原蛋白肽的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种。胶原蛋白肽的制备方法，特别是一种海燕胶原蛋白肽的制备方法。
【背景技术】
[0002]胶原蛋白现已广泛应用于食品、化妆品、营养保健品、医用材料等，长期以来，牛、猪的皮和骨中的胶原蛋白一直是工业用胶原蛋白的主要来源。近些年来，世界各国都在积极寻找更安全的胶原蛋白来源，从海洋生物中提取安全、卫生、无公害的胶原蛋白逐渐成为各国研究的热门课题，如利用鱼皮、水产品加工废弃物、海蛰、多棘海盘车提取胶原蛋白的研究也有不少报道。
[0003]海燕(Asieriaa pectinifera)属海星纲有棘目海燕科,常见于我国黄海、渤海一带，是分布广泛的海洋生物资源之一。海燕不同于海盘车，它的体壁较宽厚，韧性极强，含有丰富的胶原蛋白和微量元素。目前从海盘车中提取胶原蛋白的报道较多，所产生的废液一方面会对环境造成污染，另一方面废液中的微量元素为无机物，无法直接给人体使用，仅能作为工业生产的原料使用，造成一定的浪费。海星棘皮中这些微量元素及生物活性物质，有助于动物的生长发育，已经有养殖企业现已用作饵料添加成分养殖牙鲆。
[0004]海燕、海盘车广泛分布于黄海、渤海一带,是扇贝养殖的敌害,特别是对于大量底播的扇贝，在养殖过程中很易被海燕、海盘车扑食。其年产量仅在大连海区就达到了近1000吨，严重危害了扇贝的养殖，如果能够对其进行定期扑捞并综合利用，一方面可以充分利用其资源，另一方面还可避免其对沿海周边造成的环境污染。
【发明内容】
[0005]本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种海燕胶原蛋白肽的制备方法，该方法在制备过程中不会对环境造成污染，并且能够产生富含有机微量元素的副产品，可实现对海燕这一资源的综合利用。
[0006]本发明的技术解决方案是:一种海燕胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于:所述的方法按照以下步骤进行:
以海燕酶促溶性胶原蛋白为原料，采用碱性蛋白酶和Alcalase酶进行酶解，且碱性蛋白酶与Alcalase的酶活的比例为5:1，酶解温度为40_50°C，酶解时间为8_10h，酶解PH9-10.5，酶加量为4500-5500U/g，获得海燕胶原蛋白肽，凝胶筛分S印hdex G-50筛分估算该海燕胶原蛋白肽的分子量分布为1.5-11.5kDa。
[0007]所述的海燕酶促溶性胶原蛋白按照以下步骤处理后获得:
首先将新鲜的海燕去除内脏，清洗干净，切段并冷冻干燥，然后将经过干燥处理后的海燕段浸泡在0.6-0.7mol/L的乙酸溶液中进行脱灰质处理，海燕段与乙酸溶液的质量体积比为Ig:8-10mL，获得一次混合溶液，对一次混合溶液进行间隔搅拌处理，每次搅拌时间5-15min,间隔时间0.5_lh，每20_24h将一次混合溶液中的乙酸溶液抽出，并重新向沉淀中加入与抽出乙酸溶液等量的新的乙酸溶液，间隔搅拌处理时间为80-96h，对间隔搅拌处理后的一次混合溶液离心并取沉淀,沉淀为脱除灰质的海燕体；
将脱除灰质的海燕体放入15-20°C、pH2.0-2.5的乙酸溶液中，海燕体与乙酸溶液的比例为Ig:15-20mL，同时向乙酸溶液中加入海燕体重量4%的胃蛋白酶，获得二次混合溶液，在15-20°C的条件下对二次混合溶液进行组织捣碎5-15min，放置浸提40_48h，然后对处理后的二次混合溶液在5000r/min的转速下离心处理30min，向上清液中加入NaCl使NaCl在上清液中的终浓度达到2.5mol/L，并静置上清液24h，然后在10000r/min的转速下离心处理30min，将沉淀透析脱盐后冷冻干燥，获得酶促溶性胶原蛋白。
[0008]本发明同现有技术相比，具有如下优点:
本发明所公开的海燕胶原蛋白肽的制备方法，相比于传统的利用海产品制备胶原蛋白肽的方法，由于其脱除灰质的过程中采用乙酸溶液，因此脱除灰质后所产生的废液中含有大量的有机微量元素，不同于传统 方法中会产生大量无极微量元素，这种废液经处理后，可留作综合利用制备微量元素系列产品的原料，达到了废物利用、节省成本的目的；并且这种方法不会对周围的环境造成污染，是一种清洁、绿色的胶原蛋白肽的制备方法。该方法在保持了较高的肽获得率的同时，对羟自由基还有清除的作用；因此可以说这种方法具备了多种优点，特别适合于在本领域中推广应用，其市场前景广泛，科研意义重大。
【具体实施方式】
[0009]下面将说明本发明的【具体实施方式】。
[0010]实施例一:
首先将新鲜的海燕去除内脏，清洗干净，切段并冷冻干燥，然后将经过干燥处理后的海燕段浸泡在0.65mol/L的乙酸溶液中进行脱灰质处理，海燕段与乙酸溶液的比例为Ig:8mL,获得一次混合溶液，对一次混合溶液进行间隔搅拌处理，间隔搅拌处理过程如下:每次搅拌时间持续5min，然后停止搅拌0.5h,再次搅拌，搅拌时间持续5min，如此的搅拌-停止-搅拌-停止交替进行持续24h，然后将一次混合溶液中的乙酸溶液抽出，并重新加入新的与抽出的乙酸溶液等量的乙酸溶液，更换后再次进行搅拌-停止-搅拌-停止交替的间隔搅拌处理，如此反复，一共更换3次乙酸溶液，历时96h，获得脱除灰质的海燕体；
将脱除了灰质的海燕体放入17°C、pH2.0的乙酸溶液中，并向乙酸溶液中加入海燕体质量4%的胃蛋白酶，获得二次混合溶液，在17°C的条件下对二次混合溶液进行组织捣碎5min，并放置浸提48h，然后对处理后的二次混合溶液在5000r/min的转速下离心处理30min,向上清液中加入NaCl使NaCl在上清液中的终浓度达到2.5mol/L,并静置上清液24h，然后在10000r/min的转速下离心处理30min，将沉淀透析脱盐后冷冻干燥，获得酶促溶性胶原蛋白(PSC) ；PSC的提取率为58% ；
以上述步骤所获得的酶促溶性胶原蛋白(PSC)为原料，采用碱性蛋白酶和Alcalase酶进行酶解，且碱性蛋白酶与Alcalase酶活比例为5:1，酶解温度为50°C,酶解时间为8h，酶解pH9.5，酶加量为5000U/g，获得海燕胶原蛋白肽，且胶原蛋白肽得率为43.5%，凝胶筛分Sephdex G-50筛分估算该海燕胶原蛋白肽的分子量分布为1.5-11.5kDa。
[0011]实施例二:
首先将新鲜的海燕去除内脏，清洗干净，切段并冷冻干燥，然后将经过干燥处理后的海燕段浸泡在0.65mol/L的乙酸溶液中进行脱灰质处理，海燕段与乙酸溶液的比例为Ig:1mL,获得一次混合溶液，对一次混合溶液进行间隔搅拌处理，间隔搅拌处理过程如下:每次搅拌时间持续5min，然后停止搅拌0.5h,再次搅拌，搅拌时间持续5min，如此的搅拌-停止-搅拌-停止交替进行持续24h，然后将一次混合溶液中的乙酸溶液抽出，并重新加入新的与抽出的乙酸溶液等量的乙酸溶液，更换后再次进行搅拌-停止-搅拌-停止交替的间隔搅拌处理，如此反复，一共更换3次乙酸溶液，历时96h，获得脱除灰质的海燕体；
将脱除了灰质的海燕体放入17°C、pH2.0的乙酸溶液中，并向乙酸溶液中加入海燕体质量4%的胃蛋白酶，获得二次混合溶液，在17°C的条件下对二次混合溶液进行组织捣碎5min，并放置浸提48h，然后对处理后的二次混合溶液在5000r/min的转速下离心处理30min,向上清液中加入NaCl使NaCl在上清液中的终浓度达到2.5mol/L,并静置上清液24h，然后在10000r/min的转速下离心处理30min，将沉淀透析脱盐后冷冻干燥，获得酶促溶性胶原蛋白(PSC) ；PSC的提取率为62% ；
以上述步骤所获得的酶促溶性胶原蛋白(PSC)为原料，采用碱性蛋白酶和Alcalase酶进行酶解，且碱性蛋白酶与Alcalase酶活比例为5:1，酶解温度为45°C,酶解时间为10h，酶解ρΗΙΟ.5，酶加量为5500U/g，获得海燕胶原蛋白肽，且胶原蛋白肽得率为45%，凝胶筛分Sephdex G-50筛分估 算该海燕胶原蛋白肽的分子量分布为1.5-11.5kDa。
【权利要求】
1.一种海燕胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于:所述的方法按照以下步骤进行: 以海燕酶促溶性胶原蛋白为原料，采用碱性蛋白酶和Alcalase酶进行酶解，且碱性蛋白酶与Alcalase的酶活的比例为5:1，酶解温度为40_50°C，酶解时间为8_10h，酶解PH9-10.5，酶加量为4500-5500U/g，获得海燕胶原蛋白肽，凝胶筛分S印hdex G-50筛分估算该海燕胶原蛋白肽的分子量分布为1.5-11.5kDa。
2.根据权利要求1所述的海燕胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于:所述的海燕酶促溶性胶原蛋白按照以下步骤处理后获得: 首先将新鲜的海燕去除内脏，清洗干净，切段并冷冻干燥，然后将经过干燥处理后的海燕段浸泡在0.6-0.7mol/L的乙酸溶液中进行脱灰质处理，海燕段与乙酸溶液的质量体积比为Ig:8-10mL，获得一次混合溶液，对一次混合溶液进行间隔搅拌处理，每次搅拌时间5-15min,间隔时间0.5_lh，每20_24h将一次混合溶液中的乙酸溶液抽出，并重新向沉淀中加入与抽出乙酸溶液等量的新的乙酸溶液，间隔搅拌处理时间为80-96h，对间隔搅拌处理后的一次混合溶液离心并取沉淀,沉淀为脱除灰质的海燕体； 将脱除灰质的海燕体放入15-20°C、pH2.0-2.5的乙酸溶液中，海燕体与乙酸溶液的比例为Ig:15-20mL,同时向乙酸溶液中加入海燕体重量4%的胃蛋白酶，获得二次混合溶液，在15-20°C的条件下对二次混合溶液进行组织捣碎5-15min，放置浸提40_48h，然后对处理后的二次混合溶液在5000r/min的转速下离心处理30min，向上清液中加入NaCl使NaCl在上清液中的终浓度达到2.5mol/L，并静置上清液24h，然后在10000r/min的转速下离心处理30min，将沉淀透 析脱盐后冷冻干燥，获得酶促溶性胶原蛋白。
【文档编号】C12P21/06GK104031966SQ201410257078
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月11日 优先权日:2014年6月11日
【发明者】汪秋宽, 任丹丹, 何云海, 宋悦凡, 刘舒, 姜斌 申请人:大连海洋大学