一组丹顶鹤基因的微卫星引物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一组丹顶鹤基因的微卫星引物。该组微卫星引物的36对丹顶鹤微卫星引物，是针对三碱基至六碱基重复的微卫星位点设计的引物，能够扩增出具有较高多态性且重复性好的丹顶鹤微卫星座位序列；通过微卫星标记技术可实现丹顶鹤的亲子鉴定，未来可通过该组引物建立丹顶鹤圈养种群现代遗传管理档案，从而为解决丹顶鹤种群管理混乱等现实问题提供理论支持；也可用于野生丹顶鹤的遗传多样性分析，为丹顶鹤的保护做出相应贡献。
【专利说明】—组丹顶鹤基因的微卫星引物
【技术领域】
[0001]本发明属基因微卫星生物领域，具体地说，涉及一组丹顶鹤基因的微卫星引物。
【背景技术】
[0002]丹顶鹤属于国家一级保护动物，目前全世界的丹顶鹤总数估计仅有1500只左右，其中在中国境内越冬的有1000只左右，近年来随着人类活动区域的不断扩大以及人类对土地资源的开发强度不断增加，丹顶鹤的生存受到了严重的威胁，分布区域不断缩小，数量不断下降。
[0003]在人们的关注下丹顶鹤生存环境得到了一些改善。但仍存在一系列问题，严重制约着丹顶鹤种群的进一步发展。栖息地的丧失是丹顶鹤所面临的一个主要威胁。环境污染也是一个潜在威胁。此外在圈养条件下，丹顶鹤种群的小规模、再分配，以及非自然选择的危险，可能导致遗传变异的损失以及诸如亲子关系混乱、近亲繁殖等问题。建立丹顶鹤谱系，并应用遗传标记对丹顶鹤进行亲子鉴定，遗传评估和监测已成为丹顶鹤移地保护工程的当务之急。
[0004]微卫星标记技术具有高水平的杂合性和突变率、双亲遗传模式等优势，加之便于检测，被认为是确定人和动物间相互关系以及群体遗传学研究的有效遗传标记，是目前用得最为广泛的分子标记之一。现阶段在丹顶鹤的微卫星【技术领域】，仅有19个微卫星位点被开发出来:0.HASEGAWA(2000)等在丹顶鹤基因组中找到了 7个两碱基重复微卫星位点。Zhou Hong等(2010)年开发了 12个丹顶鹤微卫星位点并采用了 6个蓝鹤的微卫星位点(Meares et al.，2008) 共同进行分析。由于目前公开发表的微卫星位点不多，并且我们在实际应用中发现现有位点尚不能满足丹顶鹤亲子鉴定的需要，因此更多的丹顶鹤微卫星位点需要被开发出来。
[0005]微卫星序列在PCR扩增过程中可能产生滑链现象，从而在电泳图中呈现多个峰值，不容易判断该等位基因到底是纯合子还是杂合子。有研究显示重复单位越短越容易产生滑链现象，也就是说两碱基重复的微卫星位点较三碱基重复、四碱基重复或更多的碱基重复微卫星位点PCR扩增时滑链的概率更大；此外，由于采用微卫星位点进行物种亲子鉴定时对位点要求极高，因此研究多针对具体物种开发而非采用近源物种微卫星引物。为了更加准确的研究丹顶鹤的遗传多样性，解决丹顶鹤种群管理混乱的问题，迫切需要获得更多稳定性高，多态信息含量丰富的丹顶鹤微卫星标记。
【发明内容】
[0006]本发明所要解决的技术问题是提供一组丹顶鹤基因的微卫星引物，该组微卫星引物能扩增出具有较高多态性且重复性好的微卫星座位序列，微卫星引物中的碱基重复数为3-6个，能够较好的减少PCR扩增过程中出现的滑链现象；该组微卫星引物稳定性高，多态信息含量丰富，能成功实现丹顶鹤亲子鉴定，未来可通过该组引物建立丹顶鹤圈养种群现代遗传管理档案，从而为解决丹顶鹤圈养种群管理混乱等现实问题提供理论支持；也可用于野生丹顶鹤的遗传多样性分析，为丹顶鹤的保护做出相应贡献。
[0007]本发明解决上述技术问题所釆用的技术方案是:
[0008]一组丹顶鹤基因的微卫星引物，其特征在于，所述微卫星引物为:
[0009]
【权利要求】
1.:组丹顶鹤基因的微卫星引物，其特征在于，所述微卫星引物为:_
2.根据权利要求1所述的一组丹顶鹤基因的微卫星引物，其特征在于，所述微卫星引物的PCR反应条件为:
3.根据权利要求1所述的一组丹顶鹤基因的微卫星引物，其特征在于，所述微卫星引物对应的指标参数为:
4.根据权利要求1所述的一组丹顶鹤基因的微卫星引物，其特征在于，所述该组微卫星引物成功实现了丹顶鹤的亲子鉴定，未来可应用于丹顶鹤遗传多样性分析、圈养种群管理以及野外种群保护。
【文档编号】C12Q1/68GK104164490SQ201410346013
【公开日】2014年11月26日 申请日期:2014年7月21日 优先权日:2014年7月21日
【发明者】张亮, 侯蓉, 张志和, 沈富军, 张文平, 刘玉良 申请人:成都大熊猫繁育研究基地