精子制动液及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种精子制动液及其制备方法，该精子制动液包含对精子进行处理的组合物、杀菌剂及指示剂。本发明的精子制动液各项指标达到体外培养液的标准使用安全且易于判断培养液是否变质，为辅助生殖技术提供有力保证。
【专利说明】精子制动液及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及人工辅助生殖技术，尤其涉及一种精子制动液及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 精子制动液已广泛应用于试管婴儿技术中。精子制动液的目的是降低精子活动力。精子制动液的用途:在对精子进行显微操作时人为降低精子活动力的培养液。
[0003]目前，我国辅助生殖技术中的精子制动液依赖进口成品，成本高且溶液的有效性的好坏不能很好的表现，如果在培养液变质后仍继续使用将对实验或临床操作造成不可逆转的结果。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种各项指标达到体外培养液的标准使用安全且易于判断培养液是否变质的精子制动液，为辅助生殖技术提供有力保证。
[0005]本发明的精子制动液，包含对精子进行处理培养的组合物、杀菌剂及指示剂。
[0006]所述杀菌剂为庆大霉素9.5-10.5mg/L。
[0007]所述指示剂为酚红，浓度9.5-10.5mg/L。
[0008]所述组合物中包含氯化钠92.815-102.585mmol/L,氯化钾 4.465-4.935mmol/L,硫酸镁 0.19-0.21mmol/L,氯化钙 1.9-2.1 mmol/L,碳酸氢钠 3.8-4.2mmol/L, 4-羟乙基喊嚷乙横酸HEPES 19.95-22.0SmmoI /I,,葡萄糖2.66-2.94mmol/L,丙丽酸纳
0.314-0.347mmol/L、乳酸钠 2.2743-2.5137g/L、丙氨酰谷氨酰胺 0.95-1.05mmol/L、牛磺酸 0.095-0.105mmol/L,非必需氨基酸 0.95%-1.05% (v/v),磷酸二氢钾 0.352-0.389mmol/L,庆大霉素 9.5-10.5 mg/L,酚红 9.5-10.5mg/L,人血清白蛋白 4.75%_5.25% (v/v),聚乙烯吡咯烷酮 PVP 66.5-73.5g/L。
[0009]所述非必需氨基酸为L-丙氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、甘氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸中的一种或者几种。
[0010]精子制动液的溶剂采用超纯水。
[0011]本发明的精子制动液的ρΗ=7.20-7.40，渗透压300-330m0sm/Kg。
[0012]本发明精子制动液的制备方法，包括下面步骤:
(1)基础液的配制
a、先按照比例称量各组分，并分开放置；
b、先将称量好的组分(除杀菌剂、指示剂、碳酸氢钠、人血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮PVP)溶于超纯水中，溶解过程中遵循先固体后液体，NaHCO3最后加入的原则；
C、向步骤b所得溶液中加入称量好的杀菌剂、指示剂和NaHCO3 ；d、检测溶液渗透压和pH值，如果pH值不在范围内则用配制好的盐酸和氢氧化钠溶液调节PH值，并记录最终渗透压和pH值，得到基础液；
(2)精子制动液原液的配制a、在基础液中加入PVP(PVP学名是聚乙烯吡咯烷酮，一种水溶性的具有高效粘合性的合成聚合物)，将加了 PVP的基础液在超净工作台下利用0.2 μ m的滤膜过滤除菌，得到滤液A ；
b、在滤液A中加入人血清白蛋白，震荡或搅拌混合均匀，得到精子制动液的原液；
(3)精子制动液原液的处理
a、在无菌环境下对精子制动液原液进行分装封口，得到市售的精子制动液，将其放置冰箱或冷库内保存。
[0013]b、取分装好的精子制动液进行检测，检测项目是pH值、渗透压、细胞毒性、皮内刺激、致敏、无菌、热原、细菌内毒素、体外鼠胚试验、精子活力试验来判断精子制动液是否合格。
[0014]本发明的有益效果是，1、精子制动液中含有指示剂酚红，酚红在pH变化时颜色变化明显，pH在7.20-7.40范围内酚红溶液为粉红色到橙红色，当pH值小于6.8时为黄色，当PH值大于8.4时为红色，变色比较明显；精子制动液的pH 7.20-7.40在此范围内溶液为粉红色到橙红色，当精子制动液颜色与此不符时，说明该精子制动液变质，不能用于实验或临床，从而避免了使用变质精子制动液而产生的风险。2、使用抗生素来抑制细菌的生长，如庆大霉素是一种广谱、热稳定性好的抗生素，在精子制动液中添加庆大霉素可以有效抑制细菌的生长。3、本发明精子制动液的原料均是已经证明其安全性的物质，在制备过程中其溶剂采用超纯水，超纯水的总有机碳(TOC)超低，避免了因杂质过多影响测定的结果。4、国内还没有成型的用于试管婴儿技术的培养液，此配方和制备方法为国内的试管婴儿技术提供了有力的保证，避免了国外产品因长途运输带来的不明因素，同时配制工艺操作简单合理，检测严密，能够提供新鲜的培养液供生殖中心或科研院所使用。
【具体实施方式】
[0015]以下通过实施例对本发明做进一步的说明。
[0016]一、精子制动液配方及制备方法表1精子制动液配方
【权利要求】
1.一种精子制动液，其特征在于，包含对精子进行处理培养的组合物、杀菌剂及指示剂。
2.根据权利要求1所述的精子制动液，其特征在于，所述杀菌剂为庆大霉素9.5-10.5mg/L。
3.根据权利要求1所述的精子制动液，其特征在于，所述指示剂为酚红，浓度9.5-10.5mg/L。
4.根据权利要求1所述的精子制动液，其特征在于，所述组合物中包含氯化钠 92.815-102.585mmol/L,氯化钾 4.465-4.935mmol/L,硫酸镁 0.19-0.21mmol/L，氯化钙1.9-2.1 mmol/L,碳酸氢钠3.8-4.2mmol/L, 4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES19.95-22.05mmol/L,葡萄糖 2.66-2.94mmol/L,丙酮酸钠 0.314-0.347mmol/L,乳酸钠2.2743-2.5137g/L,丙氨酰谷氨酰胺 0.95-1.05mmol/L,牛磺酸 0.095-0.105mmol/L,非必需氨基酸 0.95%-1.05%, v/v,磷酸二氢钾 0.352-0.389mmol/L,庆大霉素 9.5-10.5 mg/L,酚红9.5-10.5mg/L,人血清白蛋白4.75%_5.25%，v/v，聚乙烯吡咯烷酮PVP 66.5-73.5g/L。
5.根据权利要求4所述的精子制动液，其特征在于，所述非必需氨基酸为L-丙氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、甘氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸中的一种或者几种。
6.根据权利要求1所述的精子制动液，其特征在于，精子制动液的溶剂采用超纯水。
7.制备如权利要求1-6任一项所述的精子制动液方法，其特征在于包括下面步骤: (1)基础液的配制 a、先按照比例称量各组分，并分开放置； b、先将除杀菌剂、指示剂、碳酸氢钠、人血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮PVP外的称量好的组分溶于超纯水中，溶解过程中遵循先固体后液体，NaHCO3最后加入的原则； C、向步骤b所得溶液中加入称量好的杀菌剂、指示剂和NaHCO3 ； d、检测溶液渗透压和pH值，如果pH值不在范围内则用配制好的盐酸和氢氧化钠溶液调节PH值，并记录最终渗透压和pH值，得到基础液； (2)精子制动液原液的配制 a、在基础液中加入PVPJfWTPVP的基础液在超净工作台下利用0.2 μ m的滤膜过滤除菌，得到滤液A ; b、在滤液A中加入人血清白蛋白，震荡或搅拌混合均匀，得到精子制动液的原液； (3)精子制动液原液的处理 a、在无菌环境下对精子制动液原液进行分装封口，得到精子制动液，将其放置冰箱或冷库内保存； b、取分装好的精子 制动液进行检测，检测项目是pH值、渗透压、细胞毒性、皮内刺激、致敏、无菌、热原、细菌内毒素、体外鼠胚试验、精子活力试验来判断精子制动液是否合格。
【文档编号】C12N5/076GK104130974SQ201410391000
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2014年8月8日 优先权日:2014年8月8日
【发明者】王维华, 吕汝举, 刘美静, 庄巍, 王英超 申请人:山东威高新生医疗器械有限公司