多巴胺d1受体基因型检测芯片及其检测多巴胺d1受体的方法
【专利摘要】本发明公开了一种多巴胺D1受体基因型检测芯片及其检测多巴胺D1受体的方法，该多巴胺D1受体基因型检测芯片包括固相载体和有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针；所述寡核苷酸探针的核苷酸序列如SEQIDNo.73～SEQIDNo.108所示。该多巴胺D1受体基因型检测芯片检测多巴胺D1受体的方法具有以下步骤：①制备染色体DNA；②用聚合酶链反应方法扩增所制得的染色体DNA的基因片段；③将扩增产物与多巴胺D1受体基因型检测芯片进行杂交；④检测多巴胺D1受体基因型检测芯片上的杂交信号。本发明的多巴胺D1受体基因型检测芯片检测操作简单，检测灵敏度率大于96%，检测特异度率大于98%。
【专利说明】多巴胺D1受体基因型检测芯片及其检测多巴胺D1受体的 方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分子生物学【技术领域】，具体涉及一种多巴胺D1受体基因型检测芯片 及其检测多巴胺D1受体的方法。
【背景技术】
[0002] 多巴胺受体在中枢神经系统中表达，控制运动功能、情绪、内分泌生理系统。多巴 胺受体与某些神经精神病(如药物依赖、帕金森病、精神分裂症、狂躁、抑郁症等)、肾病、心 血管疾病有关。
[0003] 多巴胺作为中枢神经系统的重要神经递质，主要参与运动、情感以及神经内分泌 的调节。目前已分离出五种多巴胺受体（DA2R)，根据它们的生物化学和药理学性质，分为 D1类受体和D2类受体两大家族。D1类受体则包括D1受体和D5受体(在大鼠中分别称为 D1A受体和DIB受体）两种，它们激活后会升高细胞内cAMP水平。D2类受体则包括D2受 体、D3受体以及D4受体三种，它们激活后则会降低细胞内cAMP水平。
[0004] 两类受体的C端含有磷酸化和棕榈酰化位点，涉及激动剂依赖性受体的去敏感化 过程和第四胞内环的形成多巴胺的配体化合物很容易将D1类受体和D2类受体两大家族区 分开来，但大多数化合物不能区分同一家族的受体亚型（比如D1受体和D5受体)。
[0005] 20世纪90年代以来分子生物学以及基因遗传学迅速发展，推动了脑内多巴胺受 体（dopamine receptor,DR)的分子克隆、DR亚型结构与功能的关系研究。随着对多巴胺受 体亚型研究的不断深入，人们发现多巴胺D1受体的遗传多态性与神经性精神病直接相关。 具体来说，多巴胺D1受体在人群中存在不同的基因型（即基因多态性)，而基因型不同的多 巴胺D1受体对不同的精神药物作用明显不同，最终导致基因型不同的精神病患者对同一 精神药物的药效存在差异。因此检测多巴胺D1受体的基因型方法的研究是学界研究热点。
[0006] 但目前测定多巴胺D1受体的基因型的方法主要是采用聚合酶链式反应-限制性 片断长度多态性（PCR-RFLP)、手工或自动顺序、序列特异性引物PCR等方法，这些方法不仅 操作繁琐，检测周期长，而且影响检测结果的因素多，不易控制，难以满足实际应用的要求， 使科研单位和临床上至今还无法广泛开展有关多巴胺D1受体的基因型的检测。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的之一在于解决上述问题，提供一种操作简单、结果准确、检测周期短 的多巴胺D1受体基因型检测芯片。
[0008] 本发明的另一目的在于提供上述多巴胺D1受体基因型检测芯片检测多巴胺D1受 体的方法。
[0009] 实现本发明目的之一的技术方案是：一种多巴胺D1受体基因型检测芯片，包括固 相载体和有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针；所述寡核苷酸探针的核苷酸序列为 以下序列或其互补序列中突变位点在内的14?20个碱基：DRD1_109G > A(rsl0061709)、 DRD1_262T > C (rs265981)、DRD1_371G > T (rsll742764)、DRD1_968G > A (rs5326)、 DRD1_1014G > A (rs4532)、DRDl_1170A > C (rs5327)、DRDl_1171C > G (rs5328)、 DRD1_1202C > G (rs5329)、DRD1_1211G > T (rs5330)、DRD1_1259G > A (rsl799914)、 DRD1_1656T > G (rs5331)、DRD1_1746G > A (rsl3306309)、DRD1_2105C > T (rs6272)、 DRD1_2324A > G (rsl55417)、DRDl_2413G > A (rs5332)、DRDl_2464C > T (rs686)、 DRD1_2465T>C (rsl788861)、DRDl_3265A>G (rs4867798)。
[0010] 为了增强检测信号的强度，提高检测结果的准确率，所述突变位点位于14?20个 喊基的中部。
[0011] 所述寡核苷酸探针的5'端还具有一段氨基修饰的16聚脱氧胸苷酸。
[0012] 所述固相载体包括但不限于尼龙膜、未修饰的或经活性基团修饰的玻璃片、塑料 片、硅片。
[0013] 所述活性基团包括但不限于醛基、氨基、异硫酸基，优选醛基。
[0014] 上述基因型检测芯片的制备可按照生物芯片的常规制造方法进行。
[0015] 例如，如果固相载体采用的是经修饰的载玻片或者硅片，探针的5'端含有氨基修 饰的聚dT串，则可将寡核苷酸探针配置成溶液，然后用点样仪将其点在经修饰的载玻片或 者硅片上，排列成预定的阵列，然后通过放置过夜来固定，就可得到本发明的基因型检测芯 片。
[0016] 又如，如果寡核苷酸探针不含氨基修饰的聚dT串，则可参照：王申五主编的《基因 诊断技术-非放射性操作手册》或者马立人，蒋中华主编的《生物芯片》。
[0017] 实现本发明另一目的的技术方案是：一种多巴胺D1受体基因型检测芯片检测多 巴胺D1受体的方法，具有以下步骤： ① 制备染色体DNA ; ② 用聚合酶链反应方法扩增所制得的染色体DNA的基因片段； ③ 将扩增产物与多巴胺D1受体基因型检测芯片进行杂交； ④ 检测多巴胺D1受体基因型检测芯片上的杂交信号。
[0018] 上述步骤①制备用于PCR扩增的染色体DNA的方法有很多，可以从全血中制备、也 可以从发根中制备，还可以从口腔黏膜的脱落物中制备。
[0019] 上述步骤②用PCR方法扩增染色体DNA的基因片段的方法采用常规技术，其中的 关键在于扩增引物的设计。
[0020] 上述步骤③的杂交可按照本领域的经典方法进行，可以先将基因型检测芯片与预 杂交液进行预杂交，再与扩增产物在杂交缓冲液中进行杂交。
[0021] 本发明具有的积极效果：（1)本发明的多巴胺D1受体基因型检测芯片检测操作简 单，检测灵敏度率大于96%，检测特异度率大于98%。（2)本发明的基因型检测芯片通过将能 反映样本中大量基因信息的寡核苷酸探针有序固定在固相支持物上形成阵列，通过与实际 样本或者扩增产物进行杂交反应，只需一次实验，即可高通量获得所有待检基因的信息，具 有广阔的推广应用前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0022] 图1为制备实施例1的多巴胺D1受体基因型检测芯片的点样阵列。
[0023] 图2为应用例中检测到的多巴胺D1受体基因型检测芯片上的杂交信号。
【具体实施方式】
[0024] (实施例1) 本实施例的多巴胺D1受体基因型检测芯片包括固相载体和有序固定在固相载体上的 寡核苷酸探针。
[0025] 本实施例采用的固相载体为醛基修饰的载玻片(产品编号：BSM03011，上海百傲科 技有限公司）。
[0026] 寡核苷酸探针经人工合成得到（上海生工生物工程技术服务有限公司），其核苷酸 序列如 SEQ ID No. 73 ?SEQ ID No. 108 所示。
[0027] 该基因型检测芯片的制备方法为：将寡核苷酸探针用水溶解至浓度为100 mM，然 后用2X点样缓冲液(产品编号：BST02010,上海百傲科技有限公司）等比例混合，接着用 Affmetrix公司的GMS417点样仪按照图1所示阵列点制，最后室温（15°C?25°C，下同）放 置过夜，即得。
[0028] (应用例） 本应用例为采用实施例1的多巴胺D1受体基因型检测芯片（非诊断目的）检测多巴胺 D1受体的方法，具有以下步骤： ①制备染色体DNA。
[0029] 用一次性无菌注射针头抽取待检者全血500mL，收集于含50mL浓度为2wt%的 EDTA溶液的无菌的1. 5mL离心管中，将管盖盖上，上下颠倒数次，混合均匀。
[0030] 向另一支无菌的1. 5mL的离心管中加入均勻的待检全血100mL和纯水300 mL,充 分混合均匀，室温静置8min ;将离心管置离心机中，10, 000g离心lmin ;取出离心管，倾去上 清液，离心管底部可见少量白色沉淀；向离心管中加入抽提液(产品编号：BST01010,上海 百傲科技有限公司）60 mL，充分振荡使沉淀溶解；沸水浴中15min;取出离心管，置离心机 中，12,000g 离心 15min。
[0031] 离心后的上清液(即为染色体DNA)可直接用于PCR扩增。
[0032] ②用聚合酶链反应（PCR)方法扩增所制得的染色体DNA的基因片段。
[0033] 所述的染色体DNA的基因片段的核苷酸序列如SEQ ID No. 1?SEQ ID No. 36所 /_J、1 ο
[0034] 扩增过程如下： A、设计并合成扩增引物(委托上海生工生物技术服务有限公司合成)，扩增引物的核苷 酸序列如SEQ ID No. 37?SEQ ID No. 72所示。
[0035] B、用水将扩增引物溶解并稀释至10mM。
[0036] C、将市售的10X缓冲液(产品编号：Lot00083585, Fermentas)、dNTP (产品编号： Lot00083613, Fermentas)、Taq 酶（产品编号：Lot00085632, Fermentas)、上述扩增引物、纯 水以及染色体DNA制备过程中获得的PCR扩增模板按表1的配方配制PCR扩增体系。
[0037] 表 1
【权利要求】
1. 一种多巴胺D1受体基因型检测芯片，包括固相载体和有序固定在所述固相载体上 的寡核苷酸探针；其特征在于：所述寡核苷酸探针的核苷酸序列为以下序列或其互补序列 中突变位点在内的14?20个碱基 ： DRD1_109G > A (rsl0061709), DRD1_262T > C (rs265981), DRD1_371G > T (rsll742764)、DRDl_968G > A (rs5326)、DRDl_1014G > A (rs4532)、DRDl_1170A > C (rs5327)、DRDl_1171C > G(rs5328)、DRDl_1202C > G(rs5329)、DRDl_1211G > T(rs5330)、 DRD1_1259G > A (rsl799914)、DRDl_1656T > G (rs5331)、DRDl_1746G > A (rsl3306309)、 DRD1_2105C > T (rs6272)、DRD1_2324A > G (rsl55417)、DRD1_2413G > A (rs5332)、 DRD1_2464C>T (rs686)、DRDl_2465T>C (rsl788861)、DRDl_3265A>G (rs4867798)。
2. 根据权利要求1所述的多巴胺D1受体基因型检测芯片，其特征在于：所述突变位点 位于14?20个碱基的中部。
3. 根据权利要求1或2所述的多巴胺D1受体基因型检测芯片，其特征在于：所述寡核 苷酸探针的5'端还具有一段氨基修饰的16聚脱氧胸苷酸。
4. 根据权利要求3所述的多巴胺D1受体基因型检测芯片，其特征在于：所述寡核苷酸 探针的核苷酸序列如SEQ ID No. 73?SEQ ID No. 108所示： SEQ ID No. 73 ：DRD1_109G (rsl0061709) probe ： NH2-5,-tttttttttttttttt-ccagagcCttggcga~3 ,； SEQ ID No. 74 ：DRD1_109A (rsl0061709) probe ： NH2-5, -tttttttttttttttt-ccagagcTttggcga~3,； SEQ ID No. 75 ：DRD1_262T (rs265981) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_cggcggcAgcccact_3,; SEQ ID No. 76 ：DRD1_262C (rs265981) probe ： NH2-5, -tttttttttttttttt-cggcggcGgcccact-3,； SEQ ID No. 77 ：DRD1_371G (rsll742764) probe ： NH2-5, -tttttttttttttttt-agcgcgcCtgagccc-3,； SEQ ID No. 78 ：DRD1_371T (rsll742764)probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_agcgcgcAtgagccc_3,; SEQ ID No. 79 ：DRD1_968G (rs5326)probe ： NH2-5,-tttttttttttttttt-tccccacCaggcagc-3 ,； SEQ ID No. 80 ：DRD1_968A (rs5326) probe ： NH2-5,-tttttttttttttttt-tccccacTaggcagc-3 ,； SEQ ID No. 81 ：DRD1_1014G (rs4532) probe ： NH2-5,-tttttttttttttttt-agatttcCaggagtc~3 ,； SEQ ID No. 82 ：DRD1_1014A (rs4532) probe ： NH2-5,-tttttttttttttttt-agatttcTaggagtc~3 ,； SEQ ID No. 83 ：DRD1_1170A (rs4532) probe ： NH2-5,-tttttttttttttttt-aggagcgTggacagg-3 ,； SEQ ID No. 84 ：DRD1_1170C (rs5327) probe ： NH2-5, -tttttttttttttttt-aggagcgGggacagg-3,； SEQ ID No. 85 ：DRD1_1171C (rs5328)probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_caggagcGtggacag_3,; SEQ ID No. 86 ：DRD1_1171G (rs5328) probe ： NH2-5,-tttttttttttttttt-caggagcCtggacag-3 ,； SEQ ID No. 87 ：DRD1_1202C (rs5329) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_tgataacGgcagcac_3,; SEQ ID No. 88 ：DRD1_1202G (rs5329) probe ： NH2_5,-tttttttttttttttt_tgataacCgcagcac_3 ,; SEQ ID No. 89 ：DRD1_1211G (rs5330) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_gtcggaaCctgataa_3,; SEQ ID No. 90 ：DRD1_1211T (rs5330) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_gtcggaaActgataa_3,; SEQ ID No. 91 ：DRD1_1259G (rsl799914)probe ： NH2-5, -tttttttttttttttt-acacagcCaaggaga~3,； SEQ ID No. 92 ：DRD1_1259A (rsl799914)probe ： NH2-5, -tttttttttttttttt-acacagcTaaggaga~3,； SEQ ID No. 93 ：DRD1_1656T (rs5331) probe ： NH2_5,-tttttttttttttttt_attacagAggatgag_3 ,; SEQ ID No. 94 ：DRD1_1656G (rs5331) probe ： NH2_5,-tttttttttttttttt_attacagCggatgag_3 ,; SEQ ID No. 95 ：DRD1_1746G (rsl3306309) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_aaggccgCaatgcgc_3,; SEQ ID No. 96 ：DRD1_1746A (rsl3306309) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_aaggccgTaatgcgc_3,; SEQ ID No. 97 ：DRD1_2105C (rs6272) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_aaagtctGtagcatc_3,; SEQ ID No. 98 ：DRD1_2105T (rs6272) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_aaagtctAtagcatc_3,; SEQ ID No. 99 ：DRD1_2324A (rsl55417) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_atatgacTgataggg_3,; SEQ ID No. 100 ：DRD1_2324G (rsl55417)probe ： NH2_5,-tttttttttttttttt_atatgacCgataggg_3 ,; SEQ ID No. 101 ：DRD1_2413G (rs5332) probe ： NH2-5,-tttttttttttttttt-caggattCatctgcg-3 ,； SEQ ID No. 102 ：DRD1_2413A (rs5332) probe ： NH2-5,-tttttttttttttttt-caggattTatctgcg-3 ,； SEQ ID No. 103 ：DRD1_2464C (rs686) probe ： NH2_5,-tttttttttttttttt_atagcaaGccccaga_3 ,; SEQ ID No. 104 ：DRD1_2464T (rs686) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_atagcaaAccccaga_3,; SEQ ID No. 105 ：DRD1_2465T (rsl788861) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_aatagcaAgccccag_3,; SEQ ID No. 106 ：DRD1_2465C (rsl788861) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_aatagcaGgccccag_3,; SEQ ID No. 107 ：DRD1_3265A (rs4867798)probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_atactttTttaaatt_3,; SEQ ID No. 108 ：DRD1_3265G (rs4867798) probe ： NH2_5, -tttttttttttttttt_atactttCttaaatt_3, 〇
5. -种权利要求4所述的多巴胺D1受体基因型检测芯片检测多巴胺D1受体的方法， 具有以下步骤： ① 制备染色体DNA ; ② 用聚合酶链反应方法扩增所制得的染色体DNA的基因片段； ③ 将扩增产物与多巴胺D1受体基因型检测芯片进行杂交； ④ 检测多巴胺D1受体基因型检测芯片上的杂交信号； 步骤②中所述的染色体DNA的基因片段的核苷酸序列如SEQ ID No. 1?SEQ ID No. 36 所示： SEQ ID No. 1 ：DRD1_109G (rsl0061709)： tagggctgaaggccgcccgaggttcgccaaGgctctgggctctcgaaaggaagccaagaaa ； SEQ ID No. 2 ：DRD1_109A (rsl0061709)： tagggctgaaggccgcccgaggttcgccaaAgctctgggctctcgaaaggaagccaagaaa ； SEQ ID No. 3 ：DRD1_262T (rs265981)： aacaatctccagctcttcaaggaagtgggcTgccgccgcctctcttgggacctggcctggg ； SEQ ID No. 4 ：DRD1_262C (rs265981)： aacaatctccagctcttcaaggaagtgggcCgccgccgcctctcttgggacctggcctggg ； SEQ ID No. 5 ：DRD1_371G (rsll742764)： acccctgctgcgcgcagctggctgggctcaGgcgcgcttcctcaacgtttcggagccgctg ； SEQ ID No. 6 ：DRD1_371T (rsll742764)： acccctgctgcgcgcagctggctgggctcaTgcgcgcttcctcaacgtttcggagccgctg ； SEQ ID No. 7 ：DRD1_968G (rs5326)： gaagcaatctggctgtgcaaagtgctgcctGgtggggaggactcctggaaatctgactgac ； SEQ ID No. 8 ：DRD1_968A (rs5326)： gaagcaatctggctgtgcaaagtgctgcctAgtggggaggactcctggaaatctgactgac ； SEQ ID No. 9 ：DRD1_1014G (rs4532)： gcaaagtgctgcctggtggggaggactcctGgaaatctgactgacccctattccctgcttg ； SEQ ID No. 10 ：DRD1_1014A (rs4532)： gcaaagtgctgcctggtggggaggactcctAgaaatctgactgacccctattccctgcttg ； SEQ ID No. 11 ：DRD1_1170A (rs5327)： gcctgtttcctgtcgctgctcatcctgtccAcgctcctggggaacacgctggtctgtgctg ； SEQ ID No. 12 ：DRD1_1170C (rs5327)： gcctgtttcctgtcgctgctcatcctgtccCcgctcctggggaacacgctggtctgtgctg ； SEQ ID No. 13 ：DRD1_1171C (rs5328)： cctgtttcctgtcgctgctcatcctgtccaCgctcctggggaacacgctggtctgtgctgc ； SEQ ID No. 14 ：DRD1_1171G (rs5328)： cctgtttcctgtcgctgctcatcctgtccaGgctcctggggaacacgctggtctgtgctgc ； SEQ ID No. 15 ：DRD1_1202C (rs5329)： gctcctggggaacacgctggtctgtgctgcCgttatcaggttccgacacctgcggtccaag ； SEQ ID No. 16 ：DRD1_1202G (rs5329)： gctcctggggaacacgctggtctgtgctgcGgttatcaggttccgacacctgcggtccaag ； SEQ ID No. 17 ：DRD1_1211G (rs5330)： gaacacgctggtctgtgctgccgttatcagGttccgacacctgcggtccaaggtgaccaac ； SEQ ID No. 18 ：DRD1_1211T (rs5330)： gaacacgctggtctgtgctgccgttatcagTttccgacacctgcggtccaaggtgaccaac ； SEQ ID No. 19 ：DRD1_1259G (rsl799914)： caaggtgaccaacttctttgtcatctccttGgctgtgtcagatctcttggtggccgtcctgg ； SEQ ID No. 20 ：DRD1_1259A (rsl799914)： caaggtgaccaacttctttgtcatctccttAgctgtgtcagatctcttggtggccgtcctgg ； SEQ ID No. 21 ：DRD1_1656T (rs5331)： agcctcagcaggacatatgccatctcatccTctgtaataagcttttacatccctgtggcca ； SEQ ID No. 22 ：DRD1_1656G (rs5331)： agcctcagcaggacatatgccatctcatccGctgtaataagcttttacatccctgtggcca ； SEQ ID No. 23 ：DRD1_1746G (rsl3306309)： aggattgctcagaaacaaatacggcgcattGcggccttggagagggcagcagtccacgcca ； SEQ ID No. 24 ：DRD1_1746A (rsl3306309)： aggattgctcagaaacaaatacggcgcattAcggccttggagagggcagcagtccacgcca ； SEQ ID No. 25 ：DRD1_2105C (rs6272)： gaaggcattttcaaccctcttaggatgctaCagactttgccctgcgacgaataatgccata ； SEQ ID No. 26 ：DRD1_2105T (rs6272)： gaaggcattttcaaccctcttaggatgctaTagactttgccctgcgacgaataatgccata ； SEQ ID No. 27 ：DRD1_2324A (rsl55417)： acccttggagaagctgtccccagccctatcAgtcatattggactatgacactgacgtctct ； SEQ ID No. 28 ：DRD1_2324G (rsl55417)： acccttggagaagctgtccccagccctatcGgtcatattggactatgacactgacgtctct ； SEQ ID No. 29 ：DRD1_2413G (rs5332)： acggtcagcacccaacctgaactcgcagatGaatcctgccacacatgctcatcccaaaagc ； SEQ ID No. 30 ：DRD1_2413A (rs5332)： acggtcagcacccaacctgaactcgcagatAaatcctgccacacatgctcatcccaaaagc ； SEQ ID No. 31 ：DRD1_2464C (rs686)： tcccaaaagctagaggagattgctctggggCttgctattaagaaactaaggtacggtgagact ； SEQ ID No. 32 ：DRD1_2464T (rs686)： tcccaaaagctagaggagattgctctggggTttgctattaagaaactaaggtacggtgagact ； SEQ ID No. 33 ：DRD1_2465T (rsl788861)： cccaaaagctagaggagattgctctggggcTtgctattaagaaactaaggtacggtgagac ； SEQ ID No. 34 ：DRD1_2465C (rsl788861)： cccaaaagctagaggagattgctctggggcCtgctattaagaaactaaggtacggtgagac ； SEQ ID No. 35 ：DRD1_3265A (rs4867798)： tttttctgaaaagattttgaaaaatttaaAaaagtatagctactactgtgttcaaaacgt ； SEQ ID No. 36 ：DRD1_3265G (rs4867798)： tttttctgaaaagattttgaaaaatttaaGaaagtatagctactactgtgttcaaaacgt ； 步骤②中所述的扩增采用的扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID No. 37?SEQ ID No. 72 所示： SEQ ID N〇.37:DRD1_109G>A (rsl0061709)上游引物： Biotin-5, - CGCAACTCTGCCTGTCAAG -3,； SEQ ID No. 38 :DRD1_262T>C (rs265981)上游引物： Biotin-5, - CGCAACTCTGCCTGTCAAG -3,； SEQ ID No.39:DRDl_371G>T (rsll742764)上游引物： Biotin-5, - CGCAACTCTGCCTGTCAAG -3,； SEQ ID No.40 :DRD1 968G>A (rs5326)上游引物： Biotin-5' - CGGTCCTCTCATGGAATGTT -3' ； SEQ ID No.41 :DRD1_1014G>A (rs4532)上游引物： Biotin-5' - CGGTCCTCTCATGGAATGTT -3' ； SEQ ID N〇.42:DRD1_1170A>C (rs5327)上游引物： Biotin-5' - CGGTCCTCTCATGGAATGTT -3' ； SEQ ID No.43:DRDl_1171C>G (rs5328)上游引物： Biotin-5' - CGGTCCTCTCATGGAATGTT -3' ； SEQ ID N〇.44:DRD1_1202C>G (rs5329)上游引物： Biotin - caagtgatttggctggattg -3,； SEQ ID No.45:DRDl_1211G>T (rs5330)上游引物： Biotin - caagtgatttggctggattg -3,； SEQ ID No.46:DRDl_1259G>A (rsl799914)上游引物： Biotin - caagtgatttggctggattg -3,； SEQ ID No.47:DRDl_1656T>G (rs5331)上游引物： Biotin - caagtgatttggctggattg -3,； SEQ ID No.48:DRDl_1746G>A (rsl3306309)上游引物： Biotin 5' - GCAGGACATATGCCATCTCA -3' ； SEQ ID N〇.49:DRD1_2105C>T (rs6272)上游引物： Biotin 5' - GCAGGACATATGCCATCTCA -3' ； SEQ ID No. 50 :DRD1_2324A>G (rsl55417)上游引物： Biotin 5' - GCAGGACATATGCCATCTCA -3' ； SEQ ID No.51 :DRD1_2413G>A (rs5332)上游引物： Biotin 5' - GCAGGACATATGCCATCTCA -3' ； SEQ ID No. 52 :DRD1_2464C>T (rs686)上游引物： Biotin 5' - GCAGGACATATGCCATCTCA -3' ； SEQ ID No.53:DRDl_2465T>C (rsl788861)上游引物： Biotin 5' - GCAGGACATATGCCATCTCA -3' ； SEQ ID No. 54 :DRD1_3265A>G (rs4867798)上游引物： Biotin 5' - AAGCCAATGAAGCAAACACA -3' ； SEQ ID N〇.55:DRD1_109G>A (rsl0061709)下游引物： Biotin-5, - CACGTCAAGCCCAACCTAAT -3,； SEQ ID No. 56 :DRD1_262T>C (rs265981)下游引物： Biotin-5, - CACGTCAAGCCCAACCTAAT -3,； SEQ ID No.57:DRDl_371G>T (rsll742764)下游引物： Biotin-5, - CACGTCAAGCCCAACCTAAT -3,； SEQ ID No. 58 :DRD1_ 968G>A (rs5326)下游引物： Biotin-5' - GTGGTGGTCTGGCAATTCTT -3' ； SEQ ID No. 59 :DRD1_1014G>A (rs4532)下游引物： Biotin-5' - GTGGTGGTCTGGCAATTCTT -3' ； SEQ ID N〇.60:DRD1_1170A>C (rs5327)下游引物： Biotin-5' - GTGGTGGTCTGGCAATTCTT -3' ； SEQ ID No.61 :DRD1_1171C>G (rs5328)下游引物： Biotin-5' - GTGGTGGTCTGGCAATTCTT -3' ； SEQ ID N〇.62:DRD1_1202C>G (rs5329)下游引物： Biotin 5' - GTGGTGGTCTGGCAATTCTT -3' ； SEQ ID No.63:DRDl_1211G>T (rs5330)下游引物： Biotin 5' - GTGGTGGTCTGGCAATTCTT -3' ； SEQ ID No.64:DRDl_1259G>A (rsl799914)下游引物： Biotin 5' - GTGGTGGTCTGGCAATTCTT -3' ； SEQ ID No.65:DRDl_1656T>G (rs5331)下游引物： Biotin 5' - GTGGTGGTCTGGCAATTCTT -3' ； SEQ ID No.66:DRDl_1746G>A (rsl3306309)下游引物： Biotin 5' - GCAGGACATATGCCATCTCA -3' ； SEQ ID N〇.67:DRD1_2105C>T (rs6272)下游引物： Biotin 5' - GTGTGTTGGAAAGCAGCAGA -3' ； SEQ ID No.68:DRDl_2324A>G (rsl55417)下游引物： Biotin 5' - GTGTGTTGGAAAGCAGCAGA -3' ； SEQ ID No.69:DRDl_2413G>A (rs5332)下游引物： Biotin 5' - GTGTGTTGGAAAGCAGCAGA -3' ； SEQ ID No. 70 :DRD1_2464C>T (rs686)下游引物： Biotin 5' - GTGTGTTGGAAAGCAGCAGA -3' ； SEQ ID No.71 :DRD1_2465T>C (rsl788861)下游引物： Biotin 5' - GTGTGTTGGAAAGCAGCAGA -3' ； SEQ ID No. 72 :DRD1_3265A>G (rs4867798)下游引物： Biotin 5' _ AAAAGATGGAGAGGGCCAAT- 3'
【文档编号】C12Q1/68GK104195248SQ201410432450
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月27日 优先权日:2014年8月27日
【发明者】瞿发林, 陈颖, 过伟, 余海鹰, 魏渊, 吴娜 申请人:中国人民解放军第一〇二医院, 江苏大学