鸡抗病新品系的培育方法及与鸡抗病能力相关的snp标记的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种鸡抗病新品系的培育方法及与鸡抗病能力相关的SNP标记。所述SNP标记多态性与异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值显著相关，可应用于鸡抗病新品系育种，通过异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值表型选择与SNP标记基因型辅助选择相结合，建立鸡抗病新品系选育技术。
【专利说明】鸡抗病新品系的培育方法及与鸡抗病能力相关的SNP标记
【技术领域】
[0001] 本发明涉及SNP分子标记及家禽育种，具体地说，涉及鸡抗病新品系的培育方法 及与鸡抗病能力相关的SNP标记。
【背景技术】
[0002] 禽病每年给家禽养殖业造成的经济损失十分巨大。采用遗传改良方法从本质上提 高鸡对病原的抗性，进行抗病育种，是禽病防治的有效途径之一。
[0003] 与鸡抗病性有关的生化指标较多，包括抗体含量、血清介质水平、淋巴细胞转化率 等。有些指标与特定病原有关，代表性较差，有些指标受环境、品种和营养等因素影响，变异 范围大，很难应用于抗病鸡的新品系选育中。因此，抗病家禽新品系选育始终是育种中的一 个难题。
[0004] 异嗜性粒细胞在细胞免疫中起到抵抗外间微生物入侵第一道屏障的作用。淋巴细 胞和异嗜性粒细胞在鸡体液免疫、细胞免疫反应中均起到重要作用。异嗜性粒细胞/淋巴 细胞的比值（heterophil/lymphocyte，H/L)已知与家禽抗应激程度相关（Gross和Siegel, 1986)。H/L值越低指示鸡抗应激能力较强。但目前尚未见到在DNA分子水平上与异嗜性粒 细胞/淋巴细胞比率相关的报道。
【发明内容】
[0005] 为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种与鸡抗病能力相关的 SNP标记及其应用。
[0006] 为了实现本发明目的，本发明首先提供一种与鸡抗病能力相关的SNP标记，其核 苷酸序列如序列表SEQ ID No. 1所示，在第1832位有1个A1832-G1832碱基突变，所述SNP 标记的多态性与异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值显著相关，并与鸡抗病能力相关。
[0007] 本发明还提供了用于检测所述SNP标记的引物对，所述引物对含有正向引物F : 5' -TGAACTTCCTGAAATGGGT-3' 和反向引物 R:5' -GGTGTGTGGCATATCATTG-3'。
[0008] 本发明还提供了所述SNP标记在选择抗病能力强的鸡品系（种）中的应用。
[0009] 进一步地，所述应用包括以下步骤：
[0010] ⑴提取待测鸡的基因组DNA ;
[0011] ⑵以待测鸡的基因组DNA为模版，利用引物F和R，通过PCR反应扩增出鸡Toll 样受体4基因（TLR4) 73bp片段（如SEQ ID No. 2所示），其中，
[0012] F: 5 ' -TGAACTTCCTGAAATGGGT-3 ' ；
[0013] R: 5，-GGTGTGTGGCATATCATTG-3，；
[0014] (3)检测PCR扩增产物，如果扩增产物序列中43bp处的碱基为A，则待测鸡属于抗 病能力强的个体。
[0015] 其中，PCR反应体系以50 μ 1计为：
[0016]
[0017] PCR 反应条件为：94 °C IOmin,
【权利要求】
1. 一种与鸡抗病能力相关的SNP标记，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No. 1所 示，在第1832位有1个A1832-G1832碱基突变，所述SNP标记的多态性与鸡抗病能力相关。
2. 用于检测权利要求1所述的SNP标记的引物对，其特征在于，所述引物对含有正向引 物 F :5' -TGAACTTCCTGAAATGGGT-3' 和反向引物 R :5' -GGTGTGTGGCATATCAITG-3'。
3. 权利要求1所述的SNP标记在鉴定抗病力强的鸡品系中的应用。
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括以下步骤： (1)提取待测鸡的基因组DNA ; ⑵以待测鸡的基因组DNA为模版，利用引物F和R，通过PCR反应扩增出鸡Toll样受 体4基因73bp片段，其中， F:5, -TGAACTTCCTGAAATGGGT-3,； R:5' -GGTGTGTGGCATATCATTG-3' ； (3)检测PCR扩增产物，如果扩增产物序列中43bp处的碱基为A，则待测鸡属于异嗜性 粒细胞/淋巴细胞的比值低，抗病力强的个体。
5. 权利要求1所述的SNP标记在鸡抗病新品系育种中的应用。
6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括以下步骤： (一） 采用聚合酶链式反应和测序技术筛选到与鸡抗病能力相关的SNP标记； (二） 检测待测鸡的SNP标记基因型； (三） 根据基因型进行抗病能力优势品系的选育。
7. -种鸡抗病新品系的培育方法，其特征在于，通过候选个体血液中异嗜性粒细胞/ 淋巴细胞的比值与权利要求1所述SNP标记共同对抗病能力优势个体进行选育。
8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括以下步骤： (a) 对候选个体采血，测定血液中异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值，同时采血提取基因 组DNA，测定SNP标记1832bp位点的碱基状态； (b) 留种时，首先利用异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值进行优势双亲个体的选择，其次 查看SNP A1832G的多态性，避免选择GG型个体； (c) 按照每个世代不低于30只公鸡，公母比例不低于1:3的留种数量组建新的家系和 繁种。
9. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述候选个体数量不小于500只，所述优 势个体的选择为由低到高选择异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值较低的个体。
10. 根据权利要求9所述的方法，其特征在于，包括以下步骤： (a) 对55-60日龄的候选个体翅下静脉采血，制作血液涂片，测定异嗜性粒细胞/淋巴 细胞的比值；同时取静脉血，制成抗凝血，提取基因组DNA，测定SNP标记1832bp位点的碱 基状态； (b) 留种时，首先利用异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值进行优势双亲个体的选择；其次 查看SNP A1832G的多态性，避免选择GG型个体； (c) 按照每个世代不低于30只公鸡，公母比例1:3的留种数量组建新的家系和繁种。
【文档编号】C12N15/11GK104404037SQ201410654722
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月17日 优先权日:2014年11月17日
【发明者】赵桂苹, 文杰, 刘冉冉, 郑麦青, 李鹏, 李庆贺 申请人:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所