一种凉粉草与溪黄草的dna鉴定方法
【专利摘要】本公开涉及一种凉粉草与溪黄草的DNA鉴定方法，其步骤如下：从样本中提取DNA；以DNA样本为模板，扩增含有ITS2序列的片段，并对其进行测序分析；通过序列比对与系统发育树分析结果表明凉粉草与溪黄草ITS2序列存在明显差异。本公开实现药材凉粉草与混淆品溪黄草的准确、高效、快速鉴定。
【专利说明】一种凉粉草与溪黄草的DNA鉴定方法
【技术领域】
[0001] 本公开属于中药材来源品种鉴定【技术领域】；具体而言，本公开涉及ITS2序列用于 鉴定凉粉草与溪黄草的方法。
【背景技术】
[0002] 凉粉草药材为唇形科植物凉粉草（Mesona chinensis Benth.)的干燥地上部分， 又名仙人草、仙人冻、仙草等。主产于两广、浙江、江西等省。《本草求原》记录凉粉草性涩、 甘、寒，善暑热、解藏府结热毒，治酒风。现代研究表明凉粉草含凉粉草多糖、齐墩果酸、槲皮 素及黄酮类等多种化学活性成分。具有抗肿瘤、抗炎、降血糖、护肝、解肝毒和增强机体免疫 力等作用。同时凉粉草为药食同源药材，常被用于凉粉、凉茶、龟苓膏等消暑品中。
[0003] 溪黄草药材为唇形科线纹香茶菜（Isodon striatus (Benth. )Kudo)(《中国植物 志》中更名为 Isodon lophanthoides (Buchanan-Hamilton ex D. Don) H. Hara)或溪黄草 (Isodon serra(Maxim. )Kudo)的干燥地上部分。该药材有清热利湿、退黄、保肝、利胆等作 用，也被广泛应用。
[0004] 凉粉草与溪黄草药材在我国尤其是岭南地区为常用中草药。两者的基原植物同为 唇形科且形态相似，不易识别。因此，有些地区常出现溪黄草药材被当作凉粉草药材混用的 现象。然而，溪黄草与凉粉草药材药性、功效不同，两者混淆使用给临床用药造成了潜在威 胁。因为两种药材的药用部位均为干燥的全草，依赖传统的形态、显微方法无法准确地鉴 定。
[0005] 现有技术中，有研究人员采用HPLC色谱建立了凉粉草的特征指纹图谱，为凉粉草 的鉴定提供了依据（丁婕等人，凉粉草的特征指纹图谱研究.中草药，2012年11期）。但 是，并未见到应用该方法针对药材凉粉草与其混伪品的鉴定研究，而迄今为止亦未发现任 何药材凉粉草与溪黄草的鉴定方法的报道。
[0006] 因此，亟待寻找一种准确、高效、快速的方法来鉴定药材凉粉草与溪黄草。
【发明内容】
[0007] 鉴于上述现有技术中的缺陷，本公开提供一种鉴定药材凉粉草或其基原植物的方 法，方法包括如下步骤：
[0008] 1)提供药材样本或植物样本；
[0009] 2)提取样本中的DNA ;
[0010] 3)对步骤2)提取的DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，其中所述扩增产物包含完 整的ITS2基因间隔区；
[0011] 4)对步骤3)的扩增产物进行测序，获得核苷酸序列；
[0012] 5)判断扩增产物的核苷酸序列中是否存在SEQ ID No. 1所示序列；
[0013] 6)若存在，则鉴定所述药材为药材凉粉草，所述植物为药材凉粉草的基原植物。
[0014] 在一个具体的实施方式中，提供一种鉴定药材凉粉草或其基原植物的方法，方法 包括如下步骤：
[0015] 1)提供药材样本或植物样本；
[0016] 2)提取样本中的基因组DNA ;
[0017] 3)采用如SEQ ID No. 4和SEQ ID No. 5所示的引物对，对步骤2)提取的基因组 DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，其中所述扩增产物包含完整的ITS2基因间隔区；
[0018] 4)对步骤3)的扩增产物进行测序，获得核苷酸序列；
[0019] 5)去除核苷酸序列两端的5. 8S和26S基因区序列，获得ITS2基因间隔区的核苷 酸序列；
[0020] 6)将ITS2基因间隔区的核苷酸序列与SEQ ID No. 1所示序列进行比对；
[0021] 7)若相同，则鉴定所述药材为药材凉粉草，所述植物为药材凉粉草的基原植物。
[0022] 另一方面，本公开提供一种鉴定药材溪黄草或其基原植物的方法，方法包括如下 步骤：
[0023] 1)提供药材样本或植物样本；
[0024] 2)提取样本中的DNA ;
[0025] 3)对步骤2)提取的DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，其中所述扩增产物包含完 整的ITS2基因间隔区；
[0026] 4)对步骤3)的扩增产物进行测序，获得核苷酸序列；
[0027] 5)判断扩增产物的核苷酸序列中是否存在SEQIDNo. 2或3所示的序列；
[0028] 6)若存在SEQ ID No. 2所示的序列，则鉴定所述药材为药材溪黄草，所述植物为药 材溪黄草的基原植物线纹香茶菜 Isodon lophanthoides(Buchanan-Hamilton ex D.Don) H. Hara ;或者
[0029] 若存在SEQ ID No. 3所示的序列，则鉴定所述药材为药材溪黄草，所述植物为药材 溪黄草的基原植物溪黄草Isodon serra(Maxim.)Kudo。
[0030] 在一个具体的实施方式中，提供一种鉴定药材溪黄草或其基原植物的方法，方法 包括如下步骤：
[0031] 1)提供药材样本或植物样本；
[0032] 2)提取样本中的基因组DNA ;
[0033] 3)采用如SEQ ID No. 4和SEQ ID No. 5所示的引物对，对步骤2)提取的基因组 DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，其中所述扩增产物包含完整的ITS2基因间隔区；
[0034] 4)对步骤3)的扩增产物进行测序，获得核苷酸序列；
[0035] 5)去除核苷酸序列两端的5. 8S和26S基因区序列，获得ITS2基因间隔区的核苷 酸序列；
[0036] 6)将ITS2基因间隔区的核苷酸序列与SEQIDNo. 2和/或SEQIDNo. 3所示序 列进行比对；
[0037] 7)若与SEQ ID No. 2所示序列相同，则鉴定所述药材为药材溪黄草，所述植物为药 材溪黄草的基原植物线纹香茶菜 Isodon lophanthoides(Buchanan-Hamilton ex D.Don) H. Hara ;或者
[0038] 若与SEQ ID No. 3所示序列相同，则鉴定所述药材为药材溪黄草，所述植物为药材 溪黄草的基原植物溪黄草Isodon serra (Maxim.) Kudo。
[0039] 另一方面，本公开提供一种区分药材凉粉草和药材溪黄草的方法；或者一种区分 药材凉粉草基原植物和药材溪黄草基原植物的方法，方法包括如下步骤：
[0040] 1)提供药材样本或植物样本；
[0041] 2)提取样本中的DNA;
[0042] 3)对步骤2)提取的DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，其中所述扩增产物包含完 整的ITS2基因间隔区；
[0043] 4)对步骤3)的扩增产物进行测序，获得核苷酸序列；
[0044] 5)判断扩增产物的核苷酸序列中是否存在选自如下一条或多条的序列：SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 2 和 SEQ ID No. 3 ;
[0045] 6)若存在SEQIDNo. 1所示序列，则鉴定所述药材为药材凉粉草，所述植物为药材 凉粉草的基原植物；或者
[0046] 若存在SEQ ID No. 2所示序列，则鉴定所述药材为药材溪黄草，所述植物为药材 溪黄草的基原植物线纹香茶菜 Isodon lophanthoides(Buchanan-Hamilton ex D.Don) H. Hara ;或者
[0047] 若存在SEQ ID No. 3所示序列，则鉴定所述药材为药材溪黄草，所述植物为药材溪 黄草的基原植物溪黄草Isodon serra(Maxim.)Kudo。
[0048] 在一个具体的实施方式中，提供一种区分药材凉粉草和药材溪黄草的方法；或者 一种区分药材凉粉草基原植物和药材溪黄草基原植物的方法，方法包括如下步骤：
[0049] 1)提供药材样本或植物样本；
[0050] 2)提取样本中的基因组DNA ;
[0051] 3)采用如SEQ ID No. 4和SEQ ID No. 5所示的引物对，对步骤2)提取的基因组 DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，其中所述扩增产物包含完整的ITS2基因间隔区；
[0052] 4)对步骤3)的扩增产物进行测序，获得核苷酸序列；
[0053] 5)去除核苷酸序列两端的5. 8S和26S基因区序列，获得ITS2基因间隔区的核苷 酸序列；
[0054] 6)将ITS2基因间隔区的核苷酸序列分别与选自如下一条或多条的序列进行比 对：SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 2 和 SEQ ID No. 3 ;
[0055] 7)若与SEQIDNo. 1所示序列相同，则鉴定所述药材为药材凉粉草，所述植物为药 材凉粉草的基原植物；或者
[0056] 若与SEQ ID No. 2所示序列相同，则鉴定所述药材为药材溪黄草，所述植物为药 材溪黄草的基原植物线纹香茶菜 Isodon lophanthoides(Buchanan-Hamilton ex D.Don) H. Hara ;或者
[0057] 若与SEQ ID No. 3所示序列相同，则鉴定所述药材为药材溪黄草，所述植物为药材 溪黄草的基原植物溪黄草Isodon serra (Maxim.) Kudo。
[0058] 另一方面，本公开提供一种鉴定药材凉粉草中是否掺杂有药材溪黄草的方法；或 者一种鉴定药材凉粉草基原植物中是否掺杂有药材溪黄草基原植物的方法，方法包括如下 步骤：
[0059] 1)提供药材样本或植物样本；
[0060] 2)提取样本中的DNA ;
[0061] 3)对步骤2)提取的DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，其中所述扩增产物包含完 整的ITS2基因间隔区；
[0062] 4)对步骤3)的扩增产物进行测序，获得核苷酸序列；
[0063] 5)判断扩增产物的核苷酸序列中是否存在SEQIDNo. 2和/或3所示的序列；
[0064] 6)若扩增产物的核苷酸序列中存在SEQIDNo. 2和/或SEQIDNo. 3所示序列， 则鉴定所述药材凉粉草中掺杂有药材溪黄草，所述药材凉粉草基原植物中掺杂有药材溪黄 草基原植物。
[0065] 在一个具体的实施方式中，提供一种鉴定药材凉粉草中是否掺杂有药材溪黄草的 方法；或者一种鉴定药材凉粉草基原植物中是否掺杂有药材溪黄草基原植物的方法，方法 包括如下步骤：
[0066] 1)提供药材样本或植物样本；
[0067] 2)提取样本中的基因组DNA ;
[0068] 3)采用如SEQ ID No. 4和SEQ ID No. 5所示的引物对，对步骤2)提取的基因组 DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，其中所述扩增产物包含完整的ITS2基因间隔区；
[0069] 4)对步骤3)的扩增产物进行测序，获得核苷酸序列；
[0070] 5)去除核苷酸序列两端的5. 8S和26S基因区序列，获得ITS2基因间隔区的核苷 酸序列；
[0071] 6)将ITS2基因间隔区的核苷酸序列分别与选自如下一条或多条的序列进行比 对：SEQ ID No. 2 和 SEQ ID No. 3 ;
[0072] 7)若与SEQ ID No. 2和/或SEQ ID No. 3所示序列相同，则鉴定所述药材凉粉草 中掺杂有药材溪黄草，所述药材凉粉草基原植物中掺杂有药材溪黄草基原植物。
[0073] 在本公开的方法中，只要能够将样本中的DNA提取出来，并且所提取的DNA能用于 DNA测序（优选ITS2序列的测序），任何方法都是可行的。因此，在一些实施方式中，可以 使用任何适当的现有方法甚至未来的方法提取样本中的DNA。
[0074] 在一些实施方式中，DNA是指基因组DNA。
[0075] 在一些实施方式中，对于提取获得的DNA需要事先进行扩增，以便于随后的测序 操作。鉴于此，技术人员可以选择任何适当的扩增方法对DNA进行扩增，包括但不限于 PCR (聚合酶链式反应）。
[0076] 当然，本公开的方法并不排除这种情形：即便不需要对DNA事先进行扩增，也能够 实现对基因组DNA特定区域进行测序的情况下，扩增步骤是可以省去的。鉴于此，在提取 DNA之后，不经扩增，直接对完整ITS2基因间隔区进行测序，得到其核苷酸序列。
[0077] 核糖体内转录间隔区（internal transcribed spacer, ITS)是真核生物核糖体 RNA基因非转录区的一部分，包括ITS1和ITS2两个不同的非编码区域。本 申请人:发现ITS2 区域的核苷酸序列较短，具有极大的保守性，但又在物种水平上变异较快具有特异性。因 此，在一些实施方式中，被扩增的区域需要覆盖完整的ITS2基因间隔区。因此，本公开的方 法对引物没有特殊的要求，只要使得扩增产物覆盖完整ITS2基因间隔区即可。在本公开的 启示下，技术人员可以设计合适的引物进行扩增。
[0078] 在具体的实施方式中，所用引物对的核苷酸序列包括但不限于SEQIDNo. 4和SEQ IDNo. 5所示的引物对：
[0079] SEQ ID No. 4 :5, -ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3,；
[0080] SEQ ID No. 5 :5, -GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3，。
[0081] 当采用这一对引物进行扩增时，扩增产物实际上还包括了 5. 8S和26S基因区序 列。因此，在一些实施方式中，允许去除扩增产物核苷酸序列两端的5. 8S和26S基因区序 列，从而获得ITS2基因间隔区的核苷酸序列。当然，技术人员理解，即便不去除多余的序 列，也能够判断扩增产物的核苷酸序列中是否包含SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 2或SEQ ID No. 3的存在。
[0082] 只要能够获得目标片段（ITS2基因间隔区）的核苷酸序列，任何现有的测序方法 甚至未来的测序方法均适用于本公开的技术方案。包括但不限于，第1代测序（Sanger法）； 第2代测序（循环阵列合成测序法）；第3代测序（直接测序）等。
[0083] 在一些实施方式中，将获得的ITS2基因间隔区的核苷酸序列分别与选自如下一 条或多条的序列进行比对：SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 2和SEQ ID No. 3。在本公开的上下文 中，任何可行的方法均可以用来进行序列的比对。序列不太长的情况下，甚至人工比对也是 可行的；在一些实施方式中，采用公知的比对算法和软件进行序列比对。本公开对于比对方 法没有特殊的要求，任何能够确定两个或多个序列之间的相似性的方法都适用。
[0084] 另一方面，本公开提供ITS2基因间隔区在鉴定药材凉粉草或其基原植物中的 用途。在具体的实施方式中，所述药材凉粉草的基原植物是凉粉草Mesona chinensis Benth.。在具体的实施方式中，所述ITS2基因间隔区的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。
[0085] 另一方面，本公开提供ITS2基因间隔区在鉴定药材溪黄草或其基原植物中 的用途。在具体的实施方式中，所述药材溪黄草或其基原植物是线纹香茶菜Isodon lophanthoides(Buchanan_Hamilton ex D.Don)H.Har。在另一些具体的实施方式中，所述 药材溪黄草或其基原植物是溪黄草Isodon serra(Maxim.)Kudo。在具体的实施方式中，所 述ITS2基因间隔区的核苷酸序列如SEQ ID No. 2或SEQ ID No. 3所示。
[0086] 另一方面，本公开提供ITS2基因间隔区在区分药材凉粉草和药材溪黄草中的用 途；或者ITS2基因间隔区在区分药材凉粉草基原植物和药材溪黄草基原植物中的用途。 [0087]另一方面，本公开提供ITS2基因间隔区在区分线纹香茶菜Isodon lophanthoides (Buchanan-Hamilton ex D. Don) H. Har 和溪黄草 Isodon serra (Maxim.) Kudo中的用途。
[0088] 在本公开上下文中，药材是指生药。在本公开所属领域中，药材尤指是中药材。就 本公开而言，药材尤其是指来自基原植物的中药材；即来自基原植物的纯天然未经过加工 或者未经过炮制的中药原料。
[0089] 在本公开上下文中，基原植物是指药材所属药用植物的物种。
[0090] 当没有明确指明术语指的是药材还是基原植物时，术语"凉粉草"意图包括凉粉草 药材和凉粉草的基原植物两层含义。术语"溪黄草"意图包括溪黄草药材和溪黄草的基原 植物两层含义。
[0091] 本公开还提供一种鉴定试剂盒，其含有允许对完整ITS2基因间隔区进行扩增的 引物对。
[0092] 在具体的实施方式中，所用的引物对是：SEQ IDNo. 4所示的引物；和SEQ IDNo. 5 所示的引物。
[0093] 在一些实施方式中，所述鉴定试剂盒还可以包含选自如下的一种或多种：聚合酶、 dNTP、MgCl 2、水、缓冲液、染料、使用说明书、包装、容器。
[0094] 本公开还提供一种鉴定芯片，其上固定有特异于选自如下序列的探针：SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 2 和 SEQ ID No. 3。
【专利附图】
【附图说明】
[0095] 图1. ITS2序列扩增产物的电泳结果。M为DNA marker DL2000，CK为阴性水对照， 1#至8#分别为凉粉草样本LFC01至LFC08,9#-14#分别为溪黄草样本XHC01至XHC06。
[0096] 图2和图2续.ITS2序列比对的结果。同源性彡50%的碱基用灰度块表示。专利 局不接受彩色图，无法区分颜色。
[0097] 图3?基于ITS2序列，凉粉草与溪黄草构建系统发育NJ树的结果。Bootstrap 1000次重复，枝上数值仅显示自展支持率> 50 %。Mesona chinensis表示凉粉 草 Mesona chinensis Benth., Isodon lophanthoides 表不线纹香茶菜 Isodon lophanthoides (Buchanan-Hamilton ex D. Don) H. Hara, Isodon serra 表不溪黄草 Isodon serra(Maxim.)Kudo。
【具体实施方式】
[0098] 以下实施例用于说明本公开，但不用来限制本公开的范围。
[0099]实施例1:凉粉草与溪黄草的基原植物鉴定
[0100] 1 ?方法：
[0101] ⑴提供样本：
[0102] 收集不同产地的凉粉草基原植物和药材样本共26份，溪黄草基原植物和药材样 本共8份（详见表1)。
[0103] 表1.样本信息表
[0104]
【权利要求】
1. 一种鉴定药材凉粉草或其基原植物的方法，方法包括如下步骤： 1) 提供药材样本或植物样本； 2) 提取样本中的DNA ; 3) 对步骤2)提取的DNA进行PCR扩增得到扩增产物，其中所述扩增产物包含完整的 ITS2基因间隔区； 4) 对步骤3)的扩增产物进行测序，获得核苷酸序列； 5) 判断扩增产物的核苷酸序列中是否存在SEQ ID No. 1所示的序列； 6) 若存在，则鉴定所述药材为药材凉粉草，所述植物为药材凉粉草的基原植物。
2. -种鉴定药材溪黄草或其基原植物的方法，方法包括如下步骤： 1) 提供药材样本或植物样本； 2) 提取样本中的DNA ; 3) 对步骤2)提取的DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，其中所述扩增产物包含完整的 ITS2基因间隔区； 4) 对步骤3)的扩增产物进行测序，获得核苷酸序列； 5) 判断扩增产物的核苷酸序列中是否存在SEQ ID No. 2或SEQ ID No. 3所示的序列； 6) 若存在SEQ ID No. 2所示的序列，则鉴定所述药材为药材溪黄草，所述植物为药材 溪黄草的基原植物线纹香茶菜（Isodon lophanthoides(Buchanan-Hamilton ex D.Don) H. Hara);或者 若存在SEQ ID No. 3所示的序列，则鉴定所述药材为药材溪黄草，所述植物为药材溪黄 草的基原植物溪黄草（Isodon serra(Maxim.)Kudo)。
3. -种区分药材凉粉草和药材溪黄草的方法、或者一种区分药材凉粉草基原植物和药 材溪黄草基原植物的方法，方法包括如下步骤： 1) 提供药材样本或植物样本； 2) 提取样本中的DNA ; 3) 对步骤2)提取的DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，其中所述扩增产物包含完整的 ITS2基因间隔区； 4) 对步骤3)的扩增产物进行测序，获得核苷酸序列； 5) 判断扩增产物的核苷酸序列中是否存在选自如下一条或多条的序列：SEQ ID No. 1、 SEQ ID No. 2 和 SEQ ID No. 3 ; 6) 若存在SEQ ID No. 1所示序列，则鉴定所述药材为药材凉粉草，所述植物为药材凉粉 草的基原植物；或者 若存在SEQ ID No. 2所示序列，则鉴定所述药材为药材溪黄草，所述植物为药材溪黄草 的基原植物线纹香茶菜（Isodon lophanthoides (Buchanan-Hamilton ex D.Don)H. Hara); 或者 若存在SEQ ID No. 3所示序列，则鉴定所述药材为药材溪黄草，所述植物为药材溪黄草 的基原植物溪黄草（Isodon serra (Maxim.) Kudo)。
4. 一种鉴定药材凉粉草中是否掺杂有药材溪黄草的方法；或者一种鉴定药材凉粉草 基原植物中是否掺杂有药材溪黄草基原植物的方法，方法包括如下步骤： 1)提供药材样本或植物样本； 2) 提取样本中的DNA ; 3) 对步骤2)提取的DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，其中所述扩增产物包含完整的 ITS2基因间隔区； 4) 对步骤3)的扩增产物进行测序，获得核苷酸序列； 5) 判断扩增产物的核苷酸序列中是否存在SEQ ID No. 2和/或3所示的序列； 6) 若扩增产物的核苷酸序列中存在SEQ ID No. 2和/或SEQ ID No. 3所示序列，则鉴 定所述药材凉粉草中掺杂有药材溪黄草，所述药材凉粉草基原植物中掺杂有药材溪黄草基 原植物。
5. 根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述的DNA是基因组DNA。
6. 根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述扩增是通过SEQ ID No. 4和SEQ ID No. 5所示的引物对进行的。
7. 根据权利要求6所述的方法，步骤4)之后还包括如下步骤： 去除扩增产物核苷酸序列两端的5. 8S和26S基因区序列。 8. ITS2基因间隔区在鉴定药材凉粉草或其基原植物中的用途， 优选地，所述药材凉粉草的基原植物是凉粉草（Mesona chinensis Benth.); 优选地，所述ITS2基因间隔区的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。 9. ITS2基因间隔区在鉴定药材溪黄草或其基原植物中的用途， 优选地，所述药材溪黄草的基原植物是线纹香茶菜（Isodon lophanthoides (Buchanan-Hamilton ex D. Don) H. Har)、或溪黄草（Isodon serra (Maxim.) Kudo)； 优选地，所述ITS2基因间隔区的核苷酸序列如SEQ ID No. 2或SEQ ID No. 3所示。 10. ITS2基因间隔区在区分药材凉粉草和药材溪黄草中的用途；或者ITS2基因间隔区 在区分药材凉粉草基原植物和药材溪黄草基原植物中的用途， 所述ITS2基因间隔区的核苷酸序列选自：SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 2和SEQ ID No. 3。
11. 一种用于鉴定凉粉草和/或溪黄草的试剂盒，其含有： 允许对完整ITS2基因间隔区进行扩增的引物对， 优选所述引物对是SEQ ID No. 4所示的引物和SEQ ID No. 5所示的引物； 任选地，所述鉴定试剂盒包含选自如下的一种或多种：聚合酶、dNTP、MgCl2、水、缓冲 液、染料、使用说明书、包装和容器。
12. -种用于鉴定凉粉草和/或溪黄草的芯片，其上固定有特异于选自如下序列的探 针：SEQ ID No. 1、SEQ ID No. 2 和 SEQ ID No. 3。
【文档编号】C12Q1/68GK104450905SQ201410720751
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月2日 优先权日:2014年12月2日
【发明者】陈士林, 师玉华, 孙伟, 向丽, 方广宏, 翁少全, 李词周, 郑荣波, 黄晓丹, 杨光, 沈颖莉, 彭绍忠 申请人:中国中医科学院中药研究所, 广州王老吉药业股份有限公司, 广州王老吉大健康产业有限公司