Cp4-epsps蛋白的单克隆抗体的制作方法
【专利摘要】本发明涉及抗原-抗体蛋白质的【技术领域】，特别是本发明之一涉及用于检测抗草甘膦CP4-EPSPS蛋白的单克隆抗体。该单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，且重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；之二提供了一种上述单克隆抗体的应用；之三提供了一种用于检测CP4-EPSPS蛋白的试剂盒；之四提供了一种所述试剂盒的应用；之五提供了一种DNA序列，所述DNA序列包括编码上述的单克隆抗体的重链可变区的DNA序列，以及编码上述的单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列；以及之六提供了一种细胞，所述细胞中含有上述的DNA序列。
CGMCC NO:10099
20141204
【专利说明】CP4-EPSPS蛋白的单克隆抗体
【技术领域】
[0001] 本发明涉及抗原-抗体蛋白质的【技术领域】，特别涉及用于检测抗草甘膦的 CP4-EPSPS蛋白的单克隆抗体。
【背景技术】
[0002] 随着转基因技术的发展，大量的转基因作物进入商品流通领域。其中，以孟山都 (Monsanto)公司的专利基因，CP4-EPSPS基因使用最为广泛。目前以广泛用于玉米、大豆、 棉花等农作物。CP4-EPSPS基因来源于土壤农杆菌株系（Agrobacterium sp)CP4株系， CP4-EPSPS基因编码CP4-EPSPS合成酶，该酶对除草剂草甘膦有高抗性。
[0003] 由于各种各样转基因农产品通过贸易大量进入国际市场，转基因食品的安全性备 受人们的关注。世界各国对转基因食品的安全性存在着较大的争议，欧盟、日本等地区已经 制定了相关法规对转基因农产品进行了严格的管理。
[0004] 目前，中国是世界第四大大豆生产国，年产量仅次于美国、巴西和阿根廷。2010年， 中国大豆产量约1450万吨，而进口大豆达到4750万吨，超过了国内产量的3倍之多。大豆 是我国主要进口农产品之一，然而进口大豆的绝大部分是抗除草剂的转基因大豆，因而对 转基因食品的管理成为了我国的一项重要课题。
[0005] 而对转基因农产品的管理，要从转基因农产品检测开始。目前，对于转基因产品的 检测主要有以DNA为目标的检测方法，例如以DNA为目标的PCR法、Southern blot法和生 物芯片法等；以及以蛋白为目标的检测方法，例如ELISA或胶体金快速检测试纸条等。其 中，DNA检测虽然灵敏度高，但是由于不同农作物CP4-EPSPS的检测没有通用的引物，对样 品的采集处理及提取方法重复性差，导致PCR结果假阳性和假阴性率高，检测方法繁琐耗 时、检测成本高且需要配备较先进昂贵的仪器，检测人员也要经过专业培训才能胜任。这些 缺点使其不能承担国际和国内贸易中进出口产品的大量或常规检测工作，也难于在基层单 位推广使用。以蛋白为目标的检测方法，由于灵敏度不够高，也会出现假阳性和/或假阴性 率高的问题。
[0006] 为此，需要开发出一种能够节省时间、降低检测成本且操作更为简单的能够准确 检测转CP4-EPSPS基因的转基因植物的产品。
【发明内容】
[0007] 本发明之一提供了一种CP4-EPSPS蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括重链 可变区和轻链可变区，且所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，所述轻链可变 区的氨基酸序列如SEQ ID N0:2所示。
[0008] 所述单克隆抗体的亲和力常数为2. 61 X 1012。也就是说，其与抗原的抗原决定簇 的特异性结合强度非常高，优于现有技术中的CP4-EPSPS蛋白的单克隆抗体的结合强度， 因而，该抗体的应用比现有技术中的所述抗体的应用更具有优势。在利用双抗夹心ELISA 检测目标蛋白时，本发明的CP4-EPSPS单克隆抗体与其他抗体，例如可以是北京华大蛋白 质研发中心有限公司的货号为AbM59705-3-PU的单克隆抗体，配对抗体时，可以检测到 含量低至lng/ml的转基因蛋白，并且具有100%的特异性。这充分说明，使用本发明的 CP4-EPSPS单克隆抗体作为检测含有CP4-EPSPS基因的转基因植物时的灵敏度和特异性相 当高，因而更容易检测到目标基因，而不至于漏检或错检。这将对鉴定含有CP4-EPSPS基因 的转基因植物具有重要的意义，为我国的转基因农产品的管理迈出了坚实的一步。
[0009] 而且，利用CP4-EPSPS蛋白抗原-抗体反应能够准确检测含有CP4-EPSPS基因的 转基因植物，并且能够节省时间，降低检测成本，操作更为简单。
[0010] 在一个具体的实施例中，所述单克隆抗体可以选自单价抗体、单链抗体、双链抗 体、双特异性抗体和嵌合抗体中的一种。
[0011] 在一个具体的实施例中，所述单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO: 10099的杂交瘤 细胞株分泌产生。
[0012] 本发明之二提供了一种如上所述的单克隆抗体的应用。
[0013] 本发明之三提供了一种用于检测CP4-EPSPS蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括如上 所述的单克隆抗体。
[0014] 本发明的用于检测CP4-EPSPS蛋白的试剂盒包括但不限于ELISA试剂盒、酶免疫 层析检测试剂盒、化学发光检测试剂盒以及免疫荧光检测试剂盒。
[0015] 在一个具体的实施方式中，为ELISA检测试剂盒，该试剂盒中可以包括样品稀释 液、洗涤液、显色液、终止液、阳性对照以及阴性对照。阳性对照例如可以是原核或真核表达 的纯化的CP4-EPSPS蛋白；阴性对照例如可以是非转基因大豆种子的全蛋白。
[0016] 在一个具体的实施方式中，所述ELISA检测试剂盒中的所述样品稀释液为含有脱 脂奶的磷酸盐缓冲液，优选为含有10% (w/ν)脱脂奶的磷酸盐缓冲液；
[0017] 所述洗涤液为含有Tween-20的磷酸盐缓冲液，优选为含有0· 05% (V/V) Tween-20 的磷酸盐缓冲液；
[0018] 所述显色液包括显色液A和显色液B，所述显色液A含3, 3'，5, 5' -四甲基联苯 胺（TMB) 20mg、无水乙醇10ml，并用ddH20定容至IOOml ;所述显色液B含朽1檬酸2. lg、无水 Na2HP042. 82g、0. 75% (V/V)的过氧化氢尿素 0. 64ml，并用 CldH2O 定容至 IOOml ;
[0019] 所述终止液为2mol/L H2S04。
[0020] 术语"磷酸盐缓冲液"是指含有磷酸或其盐并被调至理想pH值的溶液，是生物化 学研究中使用最为广泛的一种缓冲液。一般地，磷酸盐缓冲液是从磷酸或磷酸盐（包括但 不限于钠和钾盐）制备的。本领域已经知道一些磷酸盐，例如磷酸二氢钠和磷酸二氢钾、磷 酸氢二钠和磷酸氢二钾、磷酸钠和磷酸钾。已经知道磷酸盐是以盐的水合物形式存在的。由 于缓冲液的二级解离作用，缓冲的pH值范围很宽，例如约pH 4至约pH 10的范围，优选约 pH 5至pH 9的范围，更有选约pH 6至约pH 8的范围，最优选约pH 7.4。进一步优选地， 所述磷酸盐缓冲液为含氯化钠和/或氯化钾的磷酸盐缓冲液。
[0021] 用于检测CP4-EPSPS蛋白的ELISA检测试剂盒的制备方法可以包括以下步骤：
[0022] (1)克隆所述CP4-EPSPS全蛋白（如SEQ ID N0:6所示的序列）的DNA(如SEQ ID NO: 5所不的序列），并进行蛋白质表达；
[0023] (2)利用所述蛋白免疫小鼠产生杂交瘤细胞，然后通过大量的筛选，得到性能优良 的分泌抗CP4-EPSPS蛋白的单克隆抗体CP4-EPSPS AS5102 ;其中，单克隆抗体CP4-EPSPS AS5102由保藏号为CGMCC NO: 10099的杂交瘤细胞株分泌产生。
[0024] 在一个具体的实施方式中，所述ELISA检测试剂盒的制备方法还可以包括上述步 骤（2)之后的步骤（3):将步骤（2)所制得的单克隆抗体CP4-EPSPS AS5102在酶标板上进 行包被；将市售单克隆抗体进行酶标记；该市售单克隆抗体例如可以是北京华大蛋白质研 发中心有限公司的货号为AbM59705-3-PU的单克隆抗体；
[0025] (4)配制样品稀释液、洗涤液、显色液A液、显色液B液、终止液，制备阳性对照以及 阴性对照；
[0026] (5)将步骤（3)制备的组分，和/或（4)制备的任选的组分组装成ELISA检测试剂 盒。
[0027] 作为本发明的一种优选实施方式，在本发明的所述ELISA检测试剂盒的制备方法 中，所述步骤（3)中包被时所用的包被液可以为碳酸盐缓冲液，优选为pH9. 6的碳酸盐缓冲 液，4°C包被过夜或37°C包被2小时，封闭时所用的封闭液为1 % (W/V)牛血清白蛋白（BSA) 的磷酸盐缓冲液（PBS)、5% (W/V)脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液、1.5% (V/V)明胶的磷酸盐缓 冲液或5% (V/V)犊牛血清FCS的磷酸盐缓冲液中的任一种，37°C封闭2小时，洗涤时所用 洗涤液为含有Tween-20的磷酸盐缓冲液，优选为含有0· 05 % (V/V) Tween-20的磷酸盐缓冲 液。
[0028] 本发明的所述ELISA检测试剂盒的使用方法可以包括以下步骤：
[0029] (1)将待检血清按100 μ 1/孔加入包被有单克隆抗体CP4-EPSPS AS5102的酶标板 上，37°C反应60min，加入200 μ 1/孔洗涤液洗3-5次，Imin/次，洗完后在吸水纸上拍干。
[0030] (2)将100 μ 1/孔的1:10000倍（V/V)稀释的辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP)标记的市售单克隆抗体加入至包被有单克隆抗体CP4-EPSPS AS5102的 酶标板上，37 °C反应60min，之后加入200 μ 1/孔洗涤液洗3-5次，Imin/次，洗完后在吸 水纸上拍干。该市售单克隆抗体例如可以是北京华大蛋白质研发中心有限公司的货号为 AbM59705-3-PU的单克隆抗体。
[0031] (3)加入底物显色液A和显色液B的混合液100 μ 1/孔，室温避光放置15min。
[0032] (4)加入50 μ 1/孔终止液以终止反应。
[0033] (5)在酶标仪上读取OD45tl的值，并按照判定标准进行计算和判定。
[0034] 在一个具体的实施方式中，所述ELISA检测试剂盒的使用方法还可以包括：与上 述步骤（1)同时进行的步骤（Γ ):将阴性对照、阳性对照按?οομ 1/孔加入包被有单克隆 抗体CP4-EPSPS AS5102的酶标板上，37°C反应60min，加入200μ 1/孔洗涤液洗3-5次， Imin/次，洗完后在吸水纸上拍干。其余步骤同步骤（2)到（5)。
[0035] 本发明之四提供了一种如上所述的试剂盒的应用。
[0036] 本发明之五提供了一种DNA序列，所述DNA序列包括编码如上所述的单克隆抗体 的重链可变区的DNA序列，以及编码如上所述的单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列。
[0037] 在一个具体的实施例中，编码所述单克隆抗体重链可变区的DNA序列为如SEQ ID Ν0:3所示的序列，编码所述单克隆抗体轻链可变区的DNA序列为如SEQ ID Ν0:4所示的序 列。
[0038] 本发明之六提供了一种细胞，所述细胞中含有如上所述的DNA序列。
[0039] 在一个具体的实施方式中，所述DNA序列可以是内源的或外源的DNA序列，并且可 以表达如上所述的单克隆抗体。
[0040] 在一个具体的实施方式中，所述细胞可以选自真核细胞株或原核细胞株；所述细 胞优选大肠杆菌表达细胞株、酵母表达细胞株、昆虫表达细胞株、鼠源性杂交瘤株；特别优 选保藏编号为CGMCC NO: 10099的杂交瘤细胞株。
[0041] 本发明中的术语"CP4-EPSPS蛋白"是指抗草甘膦抗性蛋白-5-烯醇丙酮酰-莽草 酸-3-憐酸合成酶（5_enolpyruvyl-shikimate-3-phosphate synthase，EPSPS)全蛋白，基 因编码序列如 Genbank Accession No. AF464188 的序列。
[0042] 本发明中的术语"单克隆抗体（Mb) "是指含有由唯一轻链基因产物和唯一重链基 因产物组成的唯--个物种的抗体群体。具体而言，在群体的所有分子中单克隆抗体的互 补性决定区域（CDR)相同。Mab含有能够免疫结合特征在于对其有独特亲和力的抗原的特 定表位的抗原结合位点。其包括天然的或遗传修饰的形式，诸如单链的、嵌合的、合成的、 重组的、杂合的、突变的、嫁接的和体外制备的抗体。其也可以包括如Fab、F(ab'）2、Fv、 scFv、FcU dAb、Fe和其他组合物，尤其是保持抗原结合功能的抗体片段，或含有与抗原结合 结构域的任何多肽，以及融合至另一多肽的、包含与抗原结合结构域的嵌合体分子或者等 同物也包括在其中。还可以包括将编码抗体的免疫球蛋白可变区或互补性决定区（CDRs) 的DNA引入不同免疫球蛋白的恒定区或恒定区加框架区。此外，也对杂交瘤细胞或产生抗 体的其它细胞进行遗传突变或其它改变，可以改变或者不改变所产生抗体的结合特异性。 具体来说，"单克隆抗体"也可用重组DNA方法获得，例如根据本发明公开的DNA人工合成或 用PCR法扩增得到，将该序列连入合适的表达载体中，在适合本发明抗体表达的条件下，培 养转化所得的宿主细胞，然后本领域技术人员应用熟知的常规分离纯化手段纯化得到本发 明的单克隆抗体。
[0043] 本发明中的短语"特异性结合"是指这样的结合反应，在所述结合反应中结合对的 两个成员（例如，抗体和包含该抗体目标表位的分子）彼此结合的亲和性比所述成员对异 质混合物其他组分（例如，杂交瘤培养物上清液或其他蛋白的混合物）的亲和性高至少100 倍。
[0044] 在本发明中没有特殊说明的情况下，本发明中的术语均属于现有技术中所指的通 用术语。
[0045] 在本说明书中，用语"包含"或者诸如"包括"的变形应理解为表示包括一个指定 的元素、整数或步骤或者元素、整数或步骤的组，但不排除任何其他元素、整数或步骤或者 元素、整数或步骤的组。用语"可以"或其变形应理解为表示可以选择指定的元素、整数或 步骤或者元素、整数或步骤的组，但也可以不是选择指定的元素、整数或步骤或者元素、整 数或步骤的组，而是根据实际情况进行等同替换或其他相应的选择。
【专利附图】
【附图说明】
[0046] 图1经纯化后的在大肠杆菌中表达的CP4-EPSPS蛋白的SDS-PAGE电泳图，其中M 为蛋白Marker。
[0047] 图2利用本申请制备的单克隆抗体CP4-EPSPS AS5102与CP4-EPSPS蛋白的 Western blot，其中 M 为蛋白 Marker。
[0048] 图3单克隆抗体CP4-EPSPS AS5102与转基因材料和非转基因材料的Western blot。
[0049] 细朐保藏
[0050] 小鼠骨髓杂交瘤细胞株AS5102保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏 编号为CGMCC N0:10099,保藏日期为2014年12月4日。中国普通微生物菌种保藏管理 中心的地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编100101。小鼠骨髓杂交瘤细胞株 AS5102产生的单克隆抗体为CP4-EPSPS AS5102。
【具体实施方式】
[0051] 下面结合实施例和附图对本发明做以下详细说明。但这些实施例仅是范例性的， 并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精 神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改和替换，但这些修改和替换均落 入本发明的保护范围内。
[0052] 实施例1
[0053] 抗原的制备
[0054] 设计CP4_EPSPS(序列如SEQ ID NO:5)的引物，在引物的两端分别加入NdeI和 XhoI位点，然后将CP4-EPSPS基因克隆到pET30a表达载体上，抗性为卡那霉素。最终在 B121中表达，基本条件为在抗性条件下，25°C低温诱导过夜。
[0055] 利用His标签对诱导产生的上述蛋白进行纯化，条件为15mM咪唑洗脱，60mM咪唑 洗涤，150mM咪唑洗脱，300mM咪唑洗脱。将150mM咪唑洗脱获得的组分用IOmM Tris-HCl透 析，测定蛋白质浓度为0. 9mg/ml。纯化后的CP4-EPSPS蛋白（序列如SEQ ID N0:6)SDS-PAGE 电泳图见图1。
[0056] 实施例2
[0057] 单克隆抗体的制备
[0058] 1)动物免疫
[0059] 用CP4-EPSPS蛋白按60 μ g/只小鼠的量，皮下初次免疫4只SPF BALB/c雌性小 鼠，编号为：1、2、3、4。皮下第一次加强免疫，蛋白的免疫量为30 μ g/只；皮下第二次加强免 疫，蛋白的免疫量为30 μ g/只；皮下第三次加强免疫，蛋白的免疫量为30 μ g/只；皮下第 四次加强免疫，蛋白的免疫量为30 μ g/只；眼眶取血，测血清效价。
[0060] 2)免疫效价检测
[0061] 步骤：将CP4-EPSPS蛋白用包被液，2μ g/ml，4°C包被过夜；2%脱脂牛奶，37°〇封 闭2h ;血清从200倍开始2倍梯度稀释，空白对照（blank)为PBS，阴性对照（negative)为 阴性血清200倍稀释。结果：选取免疫效价最高3号小鼠做腹腔冲击细胞融合实验。
[0062] 3)细胞融合实验
[0063] 用上述纯化的CP4-EPSPS蛋白免疫原50 μ g，腹腔冲击3号小鼠。取小鼠脾细胞与 SP2/0细胞，采用PEG法进行融合。融合完细胞用半固体培养基（含HAT)进行筛选培养。
[0064] 实验器材
[0065] 灭菌的手术器械：三把剪刀、三把镊子、一个细胞筛、一个注射器的内芯、一个平 皿、湿盒、2个500ml烧杯、2个50ml离心管、3个15ml离心管。
[0066] 实验试剂
[0067] 頂DM培养基
[0068] MDM完全培养基（含15 %血清）
[0069] 2. 2% 甲基纤维素：厂家：SIGMA ;货号：M0262-100G
[0070] 新生牛血清：10ml
[0071] PEGl5OO :厂家：Roche ;货号：78364
[0072] HAT :厂家：Sigma ;货号：H0262-10VL
[0073] HT :厂家：Sigma ;货号：H0137-10VL
[0074] 融合实验步骤
[0075] i.将状态良好的sp2/0细胞轻柔的从培养瓶壁上吹打下来，吸入到50ml离心管 中。
[0076] ii.小鼠摘眼球取血，然后拉颈处死，放入75%的酒精中浸泡5min。
[0077] iii.在平皿中倒入少量无血清的MDM培养基，将细胞筛及注射器内芯放入平皿 中。用剪刀和镊子取下小鼠的脾脏，放到细胞筛上。用注射器的内芯轻轻地将脾充分碾碎， 将碾好的细胞吸入到装sp2/0的离心管中，离心1500rad/min，5min。
[0078] iv.用剪刀和镊子取下小鼠的胸腺，碾碎。将碾好的胸腺细胞到15ml离心管中，再 加入2ml的HAT，2ml的HT放在孵箱中备用。
[0079] V.将离心好的细胞，倒掉上清，用无血清的MDM培养基将细胞小心轻柔地吹匀， 离心（1500rad/min，5min)。
[0080] Vi.将离心好的细胞上清尽量倒掉。拍打离心管底充分悬浮细胞，将离心管放入 37°C温水中，在1分钟内缓慢加入Iml的PEG，加完后，在温水中静置lmin。然后2min内缓 慢加入2ml的无血清的MDM培养基，接着2min内缓慢加入8ml无血清的MDM培养基。离 心 1000rad/min,5min〇
[0081] vii.倒掉上清，加入IOml的血清，小心的将细胞吹匀，倒入前面准备好的胸腺细 胞。再加入25ml灭过菌的半固体培养基，充分混匀。然后均匀倒入30个细胞培养皿中。将 细胞培养皿放入湿盒中，然后放入孵箱中培养。
[0082] 4)筛选杂交瘤细胞
[0083] 待融合的细胞培养至第7天时，即细胞培养至覆盖10%孔底时，吸取96孔培养 板的孔中出现克隆细胞簇的培养上清用间接ELISA法检测抗体含量，经有限稀释进行二 次亚克隆筛选，依抗体的分泌情况筛选出高效价、高特异性的细胞株，扩大培养，并将高效 价、高特异性的细胞株冻存。最终筛选出一株杂交瘤细胞，命名为小鼠骨髓杂交瘤细胞株 AS5102,将其保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO: 10099。其产 生的单克隆抗体命名为CP4-EPSPS AS5102。
[0084] 利用单克隆抗体 CP4-EPSPS AS5102 与 CP4-EPSPS 蛋白的 Western blot 见图 2。
[0085] 利用单克隆抗体CP4-EPSPS AS5102与转基因材料和非转基因材料的Western blot见图3。
[0086] 实施例3
[0087] 单克隆抗体的特征
[0088] 1)单克隆细胞亚类鉴定
[0089] 实验试剂包括：PBS-T为加有0. 05 %吐温20的PBS溶液。购自于Southern Biotech的包被抗体；封闭液，溶于PBS的2% BSA和3%蔗糖；显色液，0. 2ml A液和10 μ I 30% H2O2溶于IOml的B液中（A液：15mg/ml ABTS溶于H2O ;B液：柠檬酸缓冲液，pH4. 0); 购自于Southern Biotech的各型亚类二抗。
[0090] 实验步骤
[0091] A.用 IOOmM PBS(pH7. 4)稀释包被抗体至 0. 5μ g/ml，每孔加 0. lml，4°C，过夜。
[0092] PBS-T洗2次，每孔加入200 μ 1封闭液，37°C孵育2h。
[0093] C. PBS-T洗3次；每孔加入100 μ 1杂交瘤上清，37°C孵育lh。
[0094] D. PBS-T洗3次；用封闭液1 :1000(κ，λ)或I :2000稀释的HRP标记的抗体0. Iml 每孔，分别加入适当的孔中，37°C孵育lh。
[0095] E. PBS-T洗3次；每孔加50 μ 1底物溶液，10-20min内于双波长（450nm，630nm)测 吸光值，记录保存数据。
[0096] 数据分析结果表明单克隆抗体CP4-EPSPS AS5102的亚类为IgGl (见表1)。
[0097] 表 1
[0098]
【权利要求】
1. 一种CP4-EPSPS蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变 区，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，所述轻链可变区的氨 基酸序列如SEQ ID N0:2所示。
2. 根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体选自单价抗体、单 链抗体、双链抗体、双特异性抗体和嵌合抗体中的一种。
3. 根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏编号为 CGMCC NO: 10099的杂交瘤细胞株分泌产生。
4. 根据权利要求1至3任意一项所述的单克隆抗体的应用。
5. -种用于检测CP4-EPSPS蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1 至3任意一项所述的单克隆抗体。
6. 根据权利要求5所述的试剂盒的应用。
7. -种DNA序列，其特征在于，所述DNA序列包括编码权利要求1至3任意一项所述的 单克隆抗体的重链可变区的DNA序列，以及编码权利要求1至3任意一项所述的单克隆抗 体的轻链可变区的DNA序列。
8. 根据权利要求7所述的DNA序列，其特征在于，编码所述单克隆抗体重链可变区的 DNA序列为如SEQ ID NO: 3所示的序列，编码所述单克隆抗体轻链可变区的DNA序列为如 SEQ ID NO:4所示的序列。
9. 一种细胞，其特征在于，所述细胞中含有如权利要求7或8所述的DNA序列。
10. 根据权利要求9所述的细胞，其特征在于，所述细胞选自真核细胞株或原核细胞 株；所述细胞优选大肠杆菌表达细胞株、酵母表达细胞株、昆虫表达细胞株、鼠源性杂交瘤 株；特别优选保藏编号为CGMCC NO: 10099的杂交瘤细胞株。
【文档编号】C12N5/20GK104497142SQ201410770732
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月12日 优先权日:2014年12月12日
【发明者】束长龙, 张 杰, 耿丽丽, 宋福平, 彭琦, 梁影屏 申请人:中国农业科学院植物保护研究所