含有3，5-二咖啡酰奎宁酸或菊花提取物的用于预防及治疗肌肉疾病或改善肌功能的组合物的制作方法

本申请对2016年12月30日申请的韩国专利申请第10-2016-0183649号主张优先权，下述说明书所有内容为本申请的参照文献。

本发明涉及用于预防、改善或治疗肌肉疾病或用于改善肌功能的组合物，具体是含有3，5-二咖啡酰奎宁酸(3，5-dicaffeoylquinicacid)或菊花提取物的用于预防、改善或治疗肌肉疾病或用于改善肌功能的组合物。

背景技术：

在过去50～100年，已知人类身体活动的减少现象与2型糖尿病、肥胖、心血管疾病等代谢性疾病的发病率增加有关。缺乏身体活动是世界卫生组织发表的第四大死因。由于这些现象，世界卫生组织、美国心脏协会和英国心脏基金会等组织建议每周5天以上至少进行30分钟的有氧运动。事实上，运动可以降低糖尿病、肥胖、乳腺癌和大肠癌的发病率，对抑郁症也有很好的治疗效果(br.j.pharmacol.,170：1153-1166，2013；am.j.cardiol.,110：58b-68b，2012)。

骨骼肌纤维一般分为第一型(氧化/慢(oxidative/slow))和第二型(糖酵解/快(glycolytic/fast))纤维，肌纤维根据形态在收缩、代谢、易疲劳((susceptibilitytofatigue))中具有显著差异。第一型纤维具有许多线粒体，主要为了产生能量而使用氧化代谢(oxidativemetabolism)，因此可长时间稳定地提供腺苷三磷酸(atp)，进而可承受疲劳。因此，第一型纤维多的骨骼肌中不会发生肌肉消耗(musclenerve，31：339-348，2005)。第二型纤维中线粒体和氧化酶少，作为主要能源依赖于糖酵解代谢(glycolyticmetabolism)，因此容易疲劳。

过氧化物酶体增殖物激活受体δ(peroxisomeproliferatoractivatedreceptorδ，pparδ)存在于骨骼肌，尤其，主要存在于第一型纤维(过氧化物酶体增殖物激活受体α(pparα)的10倍，过氧化物酶体增殖物激活受体γ(pparγ)的50倍)，通过激活与长链脂肪酸的β氧化有关的酶来燃烧脂肪细胞中的脂肪的主要转录调节因子(cell，113：159-170，2003)，是促进第一型纤维形成的第一转录因子。众所周知，这种过氧化物酶体增殖物激活受体δ被活化时参与调节线粒体的生物合成、增加运动能力、增加与肥胖相关的抵抗力的复杂的途径(plosbiol.,2：1532-1539，2004)。因此，众所周知，通过运动适应性地制成的第一型纤耐疲劳。但是，据报告，即使不经运动而在肌肉内以人为方式过表达过氧化物酶体增殖物激活受体δ，也具有相同效果。在小鼠的肌肉以人为方式过表达过氧化物酶体增殖物激活受体δ的结果，线粒体生物合成增加，并且脂肪酸β氧化酶的表达及第一型肌纤维增加，相对于常规小鼠，能够持续跑步的时间和距离分别增加了67％、92％(plosbiol.,2：1532-1539，2004)。因此，若过氧化物酶体增殖物激活受体δ被激活，则肌纤维的形态发生变化，从而可带来运动执行能力也得以提高的结果。

促进能量消耗来提高运动执行能力的代表性方法之一是通过线粒体增加脂肪酸氧化(fattyacidoxidation)来产生腺苷三磷酸能量的方法。发现掌管其线粒体的数量和能力是由过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α(peroxisomeproliferator-activatedreceptor-gammacoactivator1alpha，pgc-1α)辅助激活因子调节，过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α活性由沉默调节蛋白1(sirtuin1，sirt1)调节(embo.j.,26：1913-1923，2007，cellmetab.,1：361-370，2005)。

肌萎缩(muscleatrophy)是由肌肉量逐渐减少引起的，是指肌肉衰弱及退化(cell，119(7)：907-910，2004)。肌萎缩由不活动、氧化应激和慢性炎症促进并削弱肌功能和运动能力(clin.nutr.,26(5)：524-534，2007)。决定肌功能的最重要的因素是肌肉量，这通过蛋白质的合成和分解的平衡来维持。当蛋白质分解多于合成时发生肌萎缩症(int.j.biochem.cellbiol.,37(10)：1985-1996，2005)。

若作为转录因子(transcriptionfactor)的叉头框(forheadbox，foxo)在细胞质中迁移到核中，则使参与蛋白质分解的e3泛素连接酶(e3ubiquitinligase)因子atrogin-1和肌环指蛋白-1(musclering-fingerprotein-1，murf-1)的表达增加(dis.model.mech.,6：25-39，2013)。若他们的表达量增加，则促进肌肉中的蛋白质分解，从而肌肉量减少。因此，抑制atrogin-1的表达减少肌肉蛋白量损失并维持肌功能。

菊花的学名为chrysanthemummorifoliumramat.,一般用于观赏，但是，利用花来制作菊花茶，或者利用于沙拉、汤、酒等(ediblemedicinalandnon-medicinalplants，7：250-269，2012)。据报告，菊花具有抗氧化效果(afr.j.biotechnol.,10(82)：19197-19202，2011)、抗结核作用(biol.pharm.bull.,28(1)：158-160，2005)、抗癌效果(cancerlett.,177：7-12，2002)。

据报告，菊花中包含的3，5-二咖啡酰奎宁酸具有抗病毒效果(biochem，pharmacol.,49：1165-1170，1995)、抗过敏作用(j.agric.foodchem.,54：2915-2920，2006)、神经保护效果(phytother.res.,19：243-245，2005)。

但是，在本发明之前，尚不清楚有关菊花及3，5-二咖啡酰奎宁酸的运动执行能力增加效果或肌肉疾病预防及改善效果。

技术实现要素：

技术问题

本发明提供含有菊花提取物作为有效成分的用于预防或治疗肌肉疾病的药学组合物。

本发明的再一目的在于，提供包含下述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸作为有效成分的用于预防或治疗肌肉疾病的药学组合物，

化学式1：

本发明另一目的在于，提供含有菊花提取物作为有效成分的用于预防或改善肌肉疾病或者用于改善肌功能的食品组合物。

本发明的还有一目的在于，提供含有上述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸作为有效成分的用于预防或改善肌肉疾病或者用于改善肌功能的食品组合物。

本发明的又一目的在于，提供含有菊花提取物作为有效成分的用于预防或改善肌肉疾病或者用于改善肌功能的化妆料组合物。

本发明的又一目的在于，提供含有上述化学式1的化合物作为有效成分的用于预防或改善肌肉疾病或者用于改善肌功能的化妆料组合物。

本发明的又一目的在于，提供含有菊花提取物作为有效成分的用于增强运动执行能力的药学组合物。

本发明的又一目的在于，提供含有下述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸作为有效成分的用于增强运动执行能力的药学组合物，

化学式1：

本发明的又一目的在于，提供含有菊花提取物作为有效成分的用于增强运动执行能力的食品组合物。

本发明的又一目的在于，提供含有上述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸作为有效成分的用于增强运动执行能力的食品组合物。

本发明的又一目的在于，提供含有菊花提取物作为有效成分的用于增强运动执行能力的化妆料组合物。

本发明的又一目的在于，提供含有由上述化学式1表示的3，5-二咖啡酰奎宁酸作为有效成分的用于增强运动执行能力的化妆料组合物。

但是，本发明所要解决的技术问题并不局限于以上提及的技术问题，从以下记载中，本技术领域的技术人员可以清楚地理解未提及的其他技术问题。

解决问题的方案

作为用于解决上述技术问题的方案，本发明提供含有菊花提取物作为有效成分的用于预防或治疗肌肉疾病的药学组合物。

作为用于解决上述技术问题的方案，本发明提供含有由下述化学式1表示的3，5-二咖啡酰奎宁酸或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于预防或治疗肌肉疾病的药学组合物，

化学式1：

并且，本发明提供含有菊花提取物或由上述化学式1表示的3，5-二咖啡酰奎宁酸或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于预防或改善肌肉疾病或用于改善肌功能的食品组合物。

并且，本发明提供含有菊花提取物或由上述化学式1表示的3，5-二咖啡酰奎宁酸或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于预防或改善肌肉疾病或用于改善肌功能的化妆料组合物。

上述菊花提取物可含有由上述化学式1表示的3，5-二咖啡酰奎宁酸作为有效成分。

上述菊花提取物可以是将水、碳数为1至6的有机溶剂或它们的混合物作为溶剂来对菊花进行提取的。

上述菊花提取物可以是通过亚临界流体提取法、超临界流体提取法或超高压提取法来对菊花进行提取的。

上述3，5-二咖啡酰奎宁酸可利用从菊花提取物分离的化合物或者通过合成来利用或者利用市售的化合物。

上述肌肉疾病可以为由肌功能下降、肌肉消耗或肌肉退化引起的肌肉疾病。

上述肌肉疾病可以为选自由张力缺乏症(atony)、肌萎缩症(muscularartrophy)、肌营养不良症(musculardystrophy)、肌无力症、恶病质(cachexia)及肌少症(sarcopenia)组成的组中的一种以上的疾病。

上述组合物可促进肌纤维形成。

并且，本发明提供含有菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于增强运动执行能力的药学组合物。

并且，本发明提供含有菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于增强运动执行能力的食品组合物。

并且，本发明提供含有菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于增强运动执行能力的化妆料组合物。

上述组合物可具有增加可运动时间(exerciseendurance)、强化肌力、增加平衡感和/或增加运动适应能力(exerciseadaptation)的效果。

上述组合物可增加线粒体的氧化代谢功能。

上述组合物可促进肌纤维形成。

发明的效果

本发明涉及含有菊花提取物及3，5-二咖啡酰奎宁酸作为有效成分的用于预防或治疗肌肉疾病的组合物，上述菊花提取物及3，5-二咖啡酰奎宁酸减少作为参与肌蛋白分解的主要生物指标的atrogin-1和肌环指蛋白-1(murf-1)的信使核糖核酸(mrna)表达，并增加作为参与肌蛋白形成的主要生物指标的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mtor)以及与作为参与肌肉分化相关的生物指标的肌细胞生成素(myogenin)和生肌决定因子(myod)的信使核糖核酸表达，从而可减少肌肉损失，可利用于肌肉疾病的预防、治疗或肌功能改善。并且，上述菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸使作为参与运动执行能力的主要生物指标的过氧化物酶体增殖物激活受体δ及pgc-1α的活性增加，从而具有显著提高运动执行能力的效果。

附图说明

图1为示出根据菊花热水及10％、30％、50％、70％、90％的乙醇提取物处理的过氧化物酶体增殖物激活受体δ配体结合域(pparδligandbindingdomain)的活性测定结果。

图2为示出根据菊花热水及10％、30％、50％、70％、90％的乙醇提取物处理的过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α的表达量测定结果。

图3为示出根据菊花95％的乙醇提取物处理的测定过氧化物酶体增殖物激活受体δ配体结合域的活性测定结果。

图4为示出根据菊花95％的乙醇提取物处理的沉默调节蛋白1的表达量测定结果。

图5为示出根据菊花95％的乙醇提取物处理的过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α的表达量测定结果。

图6为示出根据菊花30％的乙醇提取物处理的线粒体生物合成量测定结果。

图7为示出根据菊花30％的乙醇提取物处理的atrogin-1及肌环指蛋白-1的信使核糖核酸表达量测定结果。

图8为示出根据菊花30％的乙醇提取物处理的哺乳动物雷帕霉素靶、p70s6k、4ebp1的蛋白质表达量测定结果。

图9为示出根据菊花30％的乙醇提取物处理的生肌决定因子、肌细胞生成素的信使核糖核酸表达量测定结果。

图10为示出根据3，5-二咖啡酰奎宁酸处理的沉默调节蛋白1的表达量测定结果。

图11为示出根据3，5-二咖啡酰奎宁酸处理的过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α的表达量测定结果。

图12为示出根据3，5-二咖啡酰奎宁酸处理的atrogin-1及肌环指蛋白-1的信使核糖核酸表达量测定结果。

图13为示出根据3，5-二咖啡酰奎宁酸处理的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白表达量测定结果。

图14为示出根据3，5-二咖啡酰奎宁酸处理的生肌决定因子、肌细胞生成素的信使核糖核酸表达量测定结果。

具体实施方式

最佳实施方式

本发明人通过发现菊花提取物及3，5-二咖啡酰奎宁酸具有肌肉生成活性及运动执行能力提高活性来完成了本发明。

在本发明中，“肌”是指所有的筋、肌肉、腱，“肌功能”是指通过肌肉收缩发挥力量的能力，包括作为肌肉能够发挥最大收缩力以克服阻力的能力的肌力、作为肌肉对于给定重量下能够重复收缩和弛缓多久或多少次的能力的肌耐力、作为在短时间内发挥强大力量的应变能力。这些肌功能由肝主管，与肌肉量成比例，“肌功能改善”是指更好地提高肌功能。

在本发明中，“运动执行能力”是指当把在日常生活中或体育运动中看到的身体动作根据外形分类成跑步、跳跃、投掷、游泳等时，可快速、强烈、准确、持久、熟练地完成上述动作，运动执行能力由肌力、敏捷性及耐力等因素决定，“运动执行能力提高”是指改善或提高运动执行能力。

以下，详细说明本发明。

用于预防或治疗肌肉疾病的药学组合物

本发明提供含有菊花提取物作为有效成分的用于预防或治疗肌肉疾病的药学组合物。

上述菊花提取物可含有由下述化学式1表示的3，5-二咖啡酰奎宁酸作为有效成分。

优选上述菊花为菊花科(asteraceae)的菊花属(chrysanthemum)植物的杭菊(chrysanthemummorifolium)，但并不限定于此。此时，上述菊花的叶、茎、花、根、皮、果实或它们的混合物可成为提取对象。

具体地，上述菊花提取物可将水、碳数为1至4的有机溶剂或它们的混合物作为溶剂来进行提取。此时，优选上述有机溶剂为c1至c4的低醇(alcohol)、丙酮(acetone)、醚(ether)、苯(benzene)、氯仿(chloroform)、乙酸乙酯(ethylacetate)、二氯甲烷(methylenechloride)、己烷(hexane)、环己烷(cyclohexane)及石油醚(petroleumether)的组成中选择一种以上，但并不限定于此。

并且，更优选是使用于上述菊花的提取的低醇也为乙醇或甲醇，最优选为乙醇。具体是上述菊花的提取的溶剂在使用乙醇的情况下，通过使用10％至95％的乙醇水溶液来制备菊花提取物，运动执行能力增强效果及肌蛋白质分解抑制活性可能更加显著。进一步是当制备上述菊花提取物时，最优选使用30％至95％的乙醇水溶液作为溶剂，但并不限定于此。

提取时，粉碎干燥的菊花后，添加粉碎的菊花重量的2倍至20倍的水、酒精或它们的混合物，更优选为添加3倍至10倍，但并不限定于此。提取温度为20℃至100℃，更优选为60℃至100℃，但并不限定于此。提取时间为1小时至10小时，更优选为2小时至5小时，但并不限定于此。提取方法均可利用冷浸、超声波提取或回流冷却提取方法，优选为回流冷却提取方法，但并不限定于此。优选，提取次数为1次至5次，更优选为2次至3次，但并不限定于此。

并且，上述菊花提取物可通过超高压提取法、亚临界流体提取法或超临界流体提取法来执行。

本发明还提供包含由下述化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于预防或治疗肌肉疾病的药学组合物，

化学式1：

上述化学式1的化合物又称3，5-二咖啡酰奎宁酸。

上述3，5-二咖啡酰奎宁酸的结构名为(3r，5r)-3，5-双[[(e)-3-(3，4-二羟基苯基)丙-2-烯酰基]氧基]-1，4-二羟基环己烷-1-羧酸((3r，5r)-3，5-bis[[(e)-3-(3，4-dihydroxyphenyl)prop-2-enoyl]oxy]-1，4-dihydroxycyclohexane-1-carboxylicacid)，casno.为89919-62-0。

上述化学式1的化合物可从菊花提取物分离或合成来使用，或者可使用市售的化合物。

根据本发明的组合物可抑制肌损伤。具体是减少作为参与肌蛋白分解的主要生物指标的atrogin-1和肌环指蛋白-1的信使核糖核酸表达，增加作为参与肌蛋白形成的主要生物指标的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白和作为参与肌肉分化相关的生物指标的肌细胞生成素和生肌决定因子的信使核糖核酸表达，因此可利用于肌肉疾病的预防或治疗。

本发明的肌肉疾病是由肌功能下降、肌肉消耗或肌肉退化引起的肌肉疾病，优选为在本技术领域中已报告的疾病，具体是选自由张力缺乏症、肌萎缩症、肌营养不良症、肌肉退化、肌无力症、恶病质及肌少症组成的组中的一种以上，但并不限定于此。

上述肌肉消耗或退化是由先天因素、后天因素、老化等原因发生，肌肉消耗的特征是肌肉量的逐渐损失，肌肉，尤其骨骼肌或随意肌及心肌的衰弱及退化。

在本发明的组合物中，优选上述菊花提取物的用量为1μg/ml至100μg/ml，上述3，5-二咖啡酰奎宁酸为1μm至100μm，但并不限定于此。

根据本发明的用于预防或治疗肌肉疾病的组合物分别根据常规的方法可剂型化成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮液、乳液、糖浆、气雾剂等口服剂剂型、外用剂、栓剂及灭菌注射溶液的形态来使用，为了剂型化可包含通常使用于药学组合物的制备的适当的载体、赋形剂或稀释剂。

作为上述载体或赋形剂或稀释剂可列举包含乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油等的多种化合物或混合物。

在进行制剂化的情况下，可通过使用通常使用的填充剂、增量剂、结合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂来制备。

用于口服给药的固体制剂可在上述菊花提取物中混合至少一种以上的赋形剂来制备，例如，淀粉、碳酸钙、蔗糖或乳糖、明胶等。并且，除了简单的赋形剂之外，还可使用硬脂酸镁、滑石等润滑剂。

用于口服给药的液体制剂有悬浮液、内用液剂、乳剂、糖浆剂等，除了经常使用的作为简单稀释剂的水、液体石蜡之外，可包括多种赋形剂，例如，湿润剂、甜味剂、芳香剂、保存剂等。

用于非口服给药的制剂包括灭菌的水溶液、非水溶剂、悬浮剂、乳剂、冷冻干燥制剂、栓剂。作为非水溶剂、悬浮剂可使用如丙二醇、聚乙二醇、橄榄油等植物油，以及油酸乙酯等可注射的酯等。作为栓剂的基剂可使用witepsol、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可油、椰子油、甘油明胶等。

根据本发明的用于预防或治疗肌肉疾病的药学组合物的优选给药量根据患者的状态、体重、疾病的程度、药物形态、给药途径及期间而不同，但可以由本技术领域技术人员适当地选择。但是，为了获得优选的效果，1天给药0.0001mg/kg至2000mg/kg，优选为0.001mg/kg至2000mg/kg。给药可以每天进行一次，还可分几次给药。但是，本发明的范围并不限定于上述给药剂量。

根据本发明的用于预防或治疗肌肉疾病的药学组合物能够以多种途径给药于鼠、小鼠、家畜、人等哺乳动物。给药的所有方式，例如可通过口服、直肠或静脉、肌肉、皮下、子宫内硬膜或脑血管内(intracerebroventricular)注射来给药。

用于预防或改善肌肉疾病的保健功能食品组合物

本发明提供包含菊花提取物作为有效成分的用于预防或改善肌肉疾病的保健功能食品组合物。

并且，本发明提供包含上述化学式1或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于预防或改善肌肉疾病的保健功能食品组合物。

上述菊花可以为属于菊花科的菊花属植物的杭菊，上述菊花如上所述。上述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸使用从菊花提取物分离或合成的，或者可以为市售的化合物，具体如上所述。

用于改善肌功能的食品组合物

本发明提供包含菊花提取物作为有效成分的用于预防或改善肌肉疾病的保健功能食品组合物。

并且，本发明提供包含上述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于预防肌肉疾病或用于改善肌功能的食品组合物。

上述菊花可以为属于菊花科的菊花属植物的杭菊，上述菊花如上所述。

上述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸使用从菊花提取物分离或合成的，或者可以为市售的化合物，具体如上所述。

在根据本发明的用于改善肌功能的食品组合物中，在将上述菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸用作保健功能食品的添加物的情况下，可直接添加或者与其他食品或食品成分一起使用，可根据常规方法适当使用。有效成分的混合量可根据预防、健康或治疗等各个使用目的来确定。

保健功能食品的剂型为散剂、颗粒剂、丸、片剂、胶囊剂的形态，还可以为普通食品或饮料的形态。

对于上述食品的种类没有特别限制，作为可添加上述物质的食品的例有肉类、香肠、面包、巧克力、糖类、点心类、饼干类、披萨、拉面、其他面类、口香糖类、包括雪糕类的乳制品、各种汤、饮料、茶、饮品、酒精饮料及维生素复合剂等，在常规意义下可包括所有食品。

在一般情况下，当制备食品或饮料时，相对于100重量份的原料，可添加15重量份以下的上述菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸，优选为10重量份以下的量。但是，在以健康及卫生为目的或者以调节健康为目的的长期摄取的情况下，上述量可以为上述范围以下，并且，由于本发明使用来自天然物质的分馏物，在安全性方面没有问题，因此还可使用上述范围以上的量。

根据本发明的保健功能食品中饮料如普通饮料可包含各种风味剂或天然碳水化合物等作为额外成分。所述的天然碳水化合物可以为单糖，如葡萄糖、果糖；二糖，如麦芽糖、蔗糖；以及多糖，如糊精、环糊精；糖醇，如木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等。作为甜味剂可使用索马甜、甜叶菊提取物等天然甜味剂或糖精、阿斯巴甜等合成甜味剂等。上述天然碳水化合物的比例为每100ml的根据本发明的饮料可以为0.01～0.04g，优选为约0.02～0.03g。

除了上述物质之外，根据本发明的用于改善肌功能的保健功能食品包含各种营养剂、维生素、电解质、风味剂、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、ph调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精、使用于碳酸饮料的碳酸化剂。除此之外，本发明的用于改善睡眠的组合物可包含用于制备天然果汁、果汁饮料及蔬菜饮料的果肉。这些成分可单独使用或混合使用。对于这些添加剂没有限制，但是，相对于100重量份的本发明的保健功能食品，通常选自0.01～0.1重量份的范围。

用于改善肌功能的化妆料组合物

本发明提供包含菊花提取物作为有效成分的用于改善肌功能的化妆料组合物。

并且，本发明提供包含上述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于改善肌功能的化妆料组合物。

上述菊花可以为属于菊花科的菊花属植物的杭菊，上述菊花如上所述。

上述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸使用从菊花提取物分离或合成的，或者可以为市售的化合物，具体如上所述。

本发明的化妆料组合物包含菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸作为有效成分，与皮肤学上可接受的赋形剂一同可制备成基础化妆料组合物(化妆水、面霜、精华、洗面奶及卸妆水等洁面乳、面膜、润肤油)、彩妆组合物(粉底、口红、睫毛膏、隔离霜)、头发产品组合物(洗发水、护发素、护发精油、发胶)及香皂等形态。

上述赋形剂并不限定于此，例如，可包含润肤剂、皮肤渗透促进剂、着色剂、芳香剂、乳化剂、浓化剂及溶剂。并且，还可包含香料、色素、杀菌剂、抗氧化剂、防腐剂及保湿剂等，还可包含以物性改善为目的的增稠剂、无机盐类合成高分子物质等。例如，在利用本发明的化妆料组合物制备洁面乳及香皂的情况下，在常规的洁面乳及香皂基材中可通过添加上述菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸来容易地制备。在制备面霜的情况下，在常规的水包油型(o/w)的面霜基材中可通过添加菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸和其盐来制备。其中还可添加香料、螯合剂、色素、抗氧化剂、防腐剂等和以物性改善为目的的蛋白质、矿物质、维生素等合成或天然材料。包含在本发明的化妆料组合物的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸的含量并不限定于此，但是相对于所有组合物总重量，优选为0.001重量百分比至10重量百分比，更优选为0.01重量百分比至5重量百分比。在上述含量小于0.001重量百分比的情况下，不能期待目的抗老化或皱纹改善效果，在大于10重量百分比的情况下，在稳定性或剂型的制备上可能存在困难。

用于增强运动执行能力的药学组合物

本发明提供含有菊花提取物作为有效成分的用于增强运动执行能力的药学组合物。

并且，本发明提供包含上述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于增强运动执行能力的药学组合物。

上述菊花可以为属于菊花科的菊花属植物的杭菊，上述菊花如上所述。

上述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸使用从菊花提取物分离或合成的，或者可以为市售的化合物，具体如上所述。

上述组合物可使线粒体的氧化代谢功能增加，具体地，本发明的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸在肌细胞中对着沉默调节蛋白1和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α表达量显著增加，可使运动执行能力增加。

并且，上述组合物可促进肌纤维形成，具体地，本发明的菊花提取物随着过氧化物酶体增殖物激活受体δ的活性显著增加，可使运动执行能力增加。

并且，上述组合物诱导运动执行能力增强，因此可预防或治疗选自由退行性疾病、线粒体异常疾病、耐力低下症、应变能力低下症、无力症、肌肉废除及抑郁症组成的组中的一种以上的疾病。

用于增强运动执行能力的食品组合物

本发明提供包含菊花提取物作为有效成分的用于增强运动执行能力的食品组合物。

并且，本发明提供包含上述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于增强运动执行能力的食品组合物。

上述菊花可以为属于菊花科的菊花属植物的杭菊，上述菊花如上所述。

上述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸可使用从菊花提取物分离或合成的，或者可以为市售的化合物，上述3，5-二咖啡酰奎宁酸如上所述。

用于增强运动执行能力的化妆料组合物

本发明提供包含菊花提取物作为有效成分的用于增强运动执行能力的化妆料组合物。

并且，本发明包含由上述化合物1表示的3，5-二咖啡酰奎宁酸或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于增强运动执行能力的化妆料组合物。

上述菊花可以为属于菊花科的菊花属植物的杭菊，上述菊花如上所述。

上述化学式1的3，5-二咖啡酰奎宁酸使用从菊花提取物分离或合成的，或者可以为市售的化合物，具体如上所述。

以下，提出优选的实施例便于理解本发明。但是，下述实施例仅用于更便于理解本发明而提供，本发明的内容并不限定于下述实施例。

具体实施方式

实施例

实施例1.菊花提取物的制备

(1)菊花甲醇提取物的制备

利用搅拌机粉碎干燥的菊花后，将10g的粉碎的菊花试样加入100ml的甲醇，在28℃的温度下搅拌并提取180分钟。提取的试样利用沃特曼(whatman)2号滤纸减压过滤，利用真空旋转浓缩机浓缩过滤的提取液来去除溶剂成分后，制备了菊花乙醇提取物。

(2)菊花乙醇提取物的制备

除了使用10％、30％、50％、70％、90％，95％的乙醇之外，以与实施例1-(1)相同的方法执行，其结果制备了菊花10％、30％、50％、70％、90％，95％的乙醇提取物。

(3)菊花乙酸乙酯提取物的制备

除了使用乙酸乙酯之外，以与实施例1-(1)相同的方法执行，其结果制备了菊花乙酸乙酯提取物。

(4)菊花己烷提取物的制备

除了使用己烷之外，以与实施例1-(1)相同的方法执行，其结果制备了菊花己烷提取物。

(5)菊花热水提取物的制备

利用搅拌机粉碎干燥的菊花后，将10g的粉碎的菊花试样加入100ml的水，在82℃的温度下搅拌并提取180分钟。然后，以与实施例1-(1)相同的方法执行，其结果制备了菊花热水提取物。

(6)菊花氯仿提取物的制备

除了使用氯仿之外，以与实施例1-(5)相同的方法执行，其结果制备了菊花氯仿提取物。

(7)菊花超高压提取物的制备

利用搅拌机粉碎干燥的菊花后，将1g的粉碎的菊花试样和76ml的18％的乙醇放入聚乙烯(polyethylene)袋密封后，利用超高压提取装置(frescalmfp-7000；日本东京三菱重工(mitsubishiheavyindustries，tokyo，japan))进行提取。超高压提取条件：提取压力为320mpa，提取时间为5分钟。提取的试样利用沃特曼2号滤纸过滤，将过滤的提取液利用真空旋转浓缩机浓缩并去除溶剂成分，从而制备了菊花超高压提取物。

(8)菊花超临界提取物的制备

利用搅拌机粉碎干燥的菊花后，将1g粉碎的菊花试样填充到试样灌流器并利用超临界流体提取装置(sfx3560，美国内布拉斯加洲林肯isco公司(iscoinc.,lincoln，ne，usa))进行提取。超临界流体提取条件：提取压力为20mpa，提取温度为60，超临界二氧化碳的流速为60ml/分钟，提取时间为60分钟。当完成超临界流体提取时，降低提取装置的压力，解除超临界流体状态来获得菊花超临界流体提取物。

(9)菊花亚临界提取物的制备

利用搅拌机粉碎干燥的菊花后，将50g的粉碎的菊花和1l的水一同加入亚临界提取装置(韩国京畿biovan公司(biovan，gyeonggi，korea))的亚临界水反应器并密封。密封后，将反应器的温度上升至200，当反应器的温度达到200时，保持上述温度20分钟并进行提取。20分钟后，将提取物移送到提供冷却水的储存罐并急速冷却至30后，以3600rpm离心分离30分钟，以分离悬浮残留物并仅取上清液。利用冷冻干燥器(韩国首尔伊尔辛实验室有限公司(ilshinlabco.ltd.,seoul，korea))去除所有溶剂，由此获得了菊花亚临界提取物。

实施例2.3，5-二咖啡酰奎宁酸的分离

将在实施例1-(2)中制备的菊花乙醇提取物溶于2l的水，利用乙酸乙酯和正丁醇分别分离在3个溶剂中。将正丁醇溶剂部分装在由rp-18填充的柱后，利用将甲醇的比率从15％转换为70％的溶剂系统来分取。根据上述分取顺序分为16个下部分馏物。利用真空旋转浓缩机再次浓缩第七个分馏物去除溶剂成分。向由rp-18填充的柱装入浓缩液后，利用甲醇进行分取。根据上述分取分为6个下部分馏物。其中，在两次分馏物中分离并纯化作为下述化学式1的化合物的3，5-二咖啡酰奎宁酸。

化学式1：

实施例3.包含在菊花乙醇提取物的3，5-二咖啡酰奎宁酸含量分析

利用搅拌机粉碎干燥的菊花后，将10g的粉碎的菊花试样加入100ml的30％的乙醇，在70℃的温度下提取3小时。提取的试样利用沃特曼2号滤纸减压过滤，利用真空旋转浓缩机浓缩过滤的提取液去除溶剂成分后，制备了菊花30％的乙醇提取物，此时，菊花提取物收率为23.24％。利用高效液相色谱(high-performanceliquidchromatography，hplc，yl9100hplcsystem；韩国京畿扬麒仪器有限公司(younglininstrumentsco.,ltd.,gyeonggi，korea))分析菊花提取物中的下述化学式1的化合物3，5-二咖啡酰奎宁酸含量。为了高效液相色谱分析，使用了0.01％的磷酸(phosphoricacid)和乙腈(acetonitrile)溶剂，以330nm的波长及1.0ml/分钟的流速分析菊花30％的乙醇提取物。在滞留时间为11分钟时检测出3.5-二咖啡酰奎宁酸，菊花30％的乙醇提取物中含有2.17％的3，5-二咖啡酰奎宁酸。

实验例

实验例1.菊花提取物的运动执行能力分析

(1)根据菊花提取物处理的过氧化物酶体增殖物激活受体δ增加活性

根据使用表达过氧化物酶体增殖物激活受体δ的质粒和具有受ppre控制的荧光素酶(luciferase)基因的载体的公知的方法(cell，68：879-887，1992；j.biol.chem.,272：25252-25259，1997)进行。

将不能表达ppar相关基因的细胞cos7(cv-1inoriginsimian-7，美国弗吉尼亚州马纳萨斯美国菌种保藏中心(atcc，manassas，va，usa))在含有10％的胎牛血清(fetalbovineserum，fbs，美国马里兰州盖塞斯堡gibco(gibco，gaithersburg，md，usa))的达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(dulbeccomodifiedeaglemedium，dmem，hyclone，logan，ut，usa)中培养并在24孔板(wellplate)中培养5小时以上。为了转染(transfection)，在没有血清的dmem(hyclone)中加试剂(plusreagent，aptabio，韩国京畿)和过氧化物酶体增殖物激活受体δ质粒(pparδplasmid)和pfr-荧光素酶(pfr-luciferase)载体(美国加利福尼亚州拉由拉市stratagene公司(stratagene，lajolla，ca，usa))混合在一起，在培养(incubation)15分钟后，混入脂质体试剂(lipofecterreagent)(aptabio)并在常温下重新培养15分钟后，滴在细胞中。4小时后，将培养基换成含10％的胎牛血清(fbs)(gibco)的dmem(hyclone)培养基后，稳定24小时。以10μg/ml的浓度处理在实施例1-(2)中制备的菊花10％、30％、50％、70％、90％的乙醇提取物及在实施例1-(5)中制备的菊花热水提取物，加入荧光素酶底物(luciferasesubstrate)(美国威斯康星州麦迪逊普洛麦格(promega，madison，wi，usa))后，使用microlumatepluslb96v光度计(microlumatepluslb96vluminometer，berthlod，德国维尔德巴特(wildbab，germany))定量化对配体结合域(ligandbindingdomain)进行激活的程度，其结果如图1所示。

其结果，如图1所示，菊花热水提取物及10％、30％、50％、70％的乙醇提取物显著(*p<0.05)提高了过氧化物酶体增殖物激活受体δ活性。这表明，本发明的菊花提取物作为过氧化物酶体增殖物激活受体δ的配体激活过氧化物酶体增殖物激活受体δ的能力优秀。

(2)根据菊花提取物处理的过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α增加活性

为了确认cos7细胞(美国菌种保藏中心)中根据菊花提取物处理的过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α的表达量增加，以与上述实验例1-(1)相同的方法用pta-luc-pgc-1α质粒(addgene)转染cos7细胞(美国菌种保藏中心)。此时，以10μg/ml的浓度处理在实施例1-(2)中制备的菊花10％、30％、50％、70％、90％的乙醇提取物及在实施例1-(5)中制备的菊花热水提取物，并其结果示出于图2。

其结果，如图2所示菊花热水提取物及10％、30％、50％、70％乙醇提取物显著(*p<0.05)提高了作为参与线粒体生物合成的主要因素的过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α活性。这表明，本发明的菊花提取物通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α来促进线粒体生物合成的能力优秀。

(3)菊花95％的乙醇提取物的过氧化物酶体增殖物激活受体δ增加活性

为了确认cos7细胞(美国菌种保藏中心)中根据菊花95％的乙醇提取物处理的过氧化物酶体增殖物激活受体δ的活性增加效果，以与上述实验例1-(1)相同的方法，当以5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml的浓度处理在实施例1-(2)中制备的菊花95％的乙醇提取物时对配体结合域的激活程度示于图3中。

其结果，如图3所示，菊花95％的乙醇提取物以浓度依赖性地提高了过氧化物酶体增殖物激活受体δ活性，与对照组相比，具有显著差异(**p<0.01)。这表明，本发明的菊花95％的乙醇提取物作为过氧化物酶体增殖物激活受体δ的配体激活过氧化物酶体增殖物激活受体δ的能力优秀。

(4)菊花95％的乙醇提取物的沉默调节蛋白1增加活性

为了确认cos7细胞(美国菌种保藏中心)中根据菊花提取物处理的沉默调节蛋白1的表达量增加效果，以与上述实验例1-(1)相同的方法，利用pta-luc-sirt1质粒(addgene)转染了cos7细胞(美国菌种保藏中心)。此时，以20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml的浓度处理在上述实施例1-(2)中制备的菊花95％的乙醇提取物，并将其结果示出于图4。

其结果，如图4所示，菊花95％的乙醇提取物使作为参与线粒体生物合成的主要因子的沉默调节蛋白1的表达量显著(**p<0.01)增加。这表明，本发明的菊花95％的乙醇提取物通过增加线粒体生物合成来增进运动执行能力的能力优秀。

(5)菊花95％的乙醇提取物的过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α增加活性

为了确认cos7细胞(美国菌种保藏中心)中根据菊花95％的乙醇提取物处理的过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α的表达量增加效果，以与上述实验例1-(2)相同的方法，以10μg/ml、40μg/ml的浓度处理在上述实施例1-(2)中制备的菊花95％的乙醇提取物，并将其结果示出于图5。

其结果，如图5所示，菊花95％的乙醇提取物在40μg/ml的条件下，使作为参与线粒体生物合成的主要因子的过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α活性显著(**p<0.01)增加。这表明，本发明的菊花95％的乙醇提取物通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α来促进线粒体生物和合成的能力优秀。

(6)菊花30％的乙醇提取物的线粒体生物合成促进活性

将作为肌细胞的l6成肌细胞(myoblast)(美国菌种保藏中心)与含有10％的胎牛血清(gibco)的dmem(hyclone)一同放入6孔板，以使为1×10⁵细胞/ml。当细胞密度为约80～85％时，去除孔中的培养基，将含有2％的hs(hyclone)的dmem(hyclone)和在上述实施例1-(2)中制备的菊花30％的乙醇提取物溶解成5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的浓度后，处理于细胞并诱导肌管(myotube)分化。此时，每隔2天更换新的培养基和样品，共分化6天。分化诱导结束后，抽吸培养基并用溶解于dmem(hyclone)的100nm的mitotracker(美国马萨诸塞州沃尔瑟姆赛默飞世尔科学公司(thermofisherscientificinc.,waltham，ma，usa))处理30分钟。去除培养基，在各孔中分别加入1ml的甲醇溶剂后，利用酶标仪(microplatereader)(美国加利福尼亚州桑尼维尔versamax(versamax，sunnyvale，ca，usa))在490nm的吸收波长和516nm的发射波长测定荧光。将其结果示出于图6。

其结果，如图6所示，菊花30％的乙醇提取物使肌肉中的线粒体量显著(*p<0.05，**p<0.01)增加。这表明，本发明的菊花30％的乙醇提取物通过促进线粒体生物合成来增进运动执行能力的能力优秀。

实验例2.菊花30％的乙醇提取物的肌蛋白分解抑制活性

将作为肌细胞的l6成肌细胞(美国菌种保藏中心)与含有10％的胎牛血清(gibco)的dmem(hyclone)一同放入6孔板，以使为1×10⁵细胞/ml。当细胞密度为约80～85％时，去除孔中的培养基，并将含有2％的hs(hyclone)的dmem(hyclone)处理于细胞来诱导肌管分化。每隔2天更换新的培养基和样品，共分化6天。分化后，将在上述实施例1-(2)中制备的菊花30％的乙醇提取物以1μg/ml、10μg/ml的浓度溶解于含有50ng/ml的肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactoralpha，tnf-α；美国新泽西州洛基山派普泰克(peprotech，rockyhills，nj，usa))的dmem(hyclone)后，处理于细胞。6小时后，使用trizol试剂(日本滋贺宝日(takara，shiga，japan))分离了总rna。分离的总rna利用nanodrop(nanodrop1000；赛默飞世尔科技公司(thermofisherscientificinc.))进行定量。定量的16μl的rna利用逆转录酶预混料(reversetranscriptasepremix)(elpis-biotech，daejeon，korea)和聚合酶链式反应(pcr)机器(geneamppcrsystem2700；美国加利福尼亚州福斯特城美国应用生物系统(appliedbiosystems，fostercity，ca，usa))在于42℃的温度下55分钟、于70℃的温度下15分钟的条件下合成cdna。利用16μl的生成的cdna中利用4μl的cdna、下述特定引物(韩国大田柏业(bioneer，daejeon，korea))和聚合酶链式反应预混料(pcrpremix)(elpis-biotech)以于95℃的温度下30秒钟、于60℃的温度下1分钟、于72℃的温度下1分钟重复30次来进行聚合酶链式反应。使用于聚合酶链式反应的引物的序列如下述表1所示。对通过聚合酶链式反应扩增的cdna利用1.5％的琼脂糖凝胶(agarosegel)进行电泳来分离，利用g；boxef成像系统(英国剑桥syngene(syngene，cambridge，uk))确认cdna带(cdnaband)。将其结果如示出于图7。

表1

其结果，如图7所示，因肿瘤坏死因子α(tnf-α)肌蛋白分解相关主要生物指标atrogin-1和肌环指蛋白-1的表达量显著(^##p<0.01)增加，根据处理菊花30％的乙醇提取物因肿瘤坏死因子α增加的atrogin-1和肌环指蛋白-1的信使核糖核酸表达量显著(**p<0.01)减少。这表明，本发明的菊花30％的乙醇提取物在肌细胞中抑制肌蛋白分解的能力优秀。

实验例3.菊花30％的乙醇提取物的肌蛋白合成促进活性

为了确认作为肌细胞的l6成肌细胞(美国菌种保藏中心)中菊花提取物的肌蛋白表达增加活性，以与实验例2相同的方法进行分化后，以1μg/ml、10μg/ml的浓度对在实施例1-(2)中制备的菊花30％的乙醇提取物进行样品处理。在样品处理24小时后，利用含有蛋白酶抑制剂混合物(proteinaseinhibitorcocktail；美国密苏里州圣路易斯西格玛(sigma，st.louis，mo，usa))的np-40缓冲溶液(elpis-biotech)溶解细胞。将溶解于缓冲溶液的细胞移至1.5ml的管(tube)以13000rpm离心10分钟后，仅取上清液。对于在上面获得的上清液利用考马斯亮蓝(bradford；美国加利福尼亚州赫拉克勒斯伯乐生命医学公司(bio-radlaboratoriesinc.,hercules，ca，usa))法进行定量。将定量的蛋白质煮沸5分钟后，利用10％的聚丙烯酰氨凝胶电泳(sds-page)进行电泳来分离，将分离的蛋白质传递到硝化纤维膜。将p-mtor、mtor、p-4ebp1、4ebp1、p-p70s6k、p70s6k和α-微管蛋白(α-tubulin)第一抗体在2.5％的牛血清白蛋白(bovineserumalbumin，bsa；美国俄亥俄州都柏林巴傲得(bioworld，dublin，oh，usa))中以1：1000的比率稀释并与传递到硝化纤维膜的蛋白质在常温下反应20小时。使第一抗体反应后，利用tris缓冲盐溶液吐温20(tris-buffersalinetween20，tbst)将硝化纤维膜清洗膜10分钟为三次。清洗后，在2.5％的牛血清白蛋白中稀释识别第一抗体的第二抗体，以使为1：5000，并在常温下与硝化纤维膜反应2小时，利用tbst清洗三次，每次为10分钟。蛋白质带(proteinband)利用蛋白印迹检测试剂(westernblottingdetectionreagents；日本东京安玛西亚(amersham，tokyo，japan))来显色，利用g；boxef成像系统(g；boxefimagingsystem，syngene)确认显色的蛋白质带(proteinband)。将其结果示出于图8。

如图8所示，因肿瘤坏死因子α肌蛋白生成相关主要生物指标p-mtor、p-4ebp1和p-p70s6k的蛋白质表达量显著(^##p<0.01)减少，因处理菊花30％的乙醇提取物处理而通过肿瘤坏死因子α减少的p-mtor、p-4ebp1和p-p70s6k蛋白质表达量显著(**p<0.01)增加。这表明，本发明的菊花30％的乙醇提取物在肌细胞中使肌肉生成增加的能力优秀。

实验例4.菊花30％的乙醇提取物的肌肉分化促进活性

为了确认在作为肌细胞的l6成肌细胞(美国菌种保藏中心)中对于菊花提取物的肌肉分化促进活性，以与实验例1-(6)相同的方法，将在上述实施例1-(2)中制备的菊花30％的乙醇提取物以5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的浓度处理于细胞，诱导肌管分化。以与实验例2相同的方法，具有下述表2的特定引物(bioneer)，并进行逆转录-聚合酶链反应(rt-pcr)，并将其结果示出于图9。

表2

如图9所示，在处理菊花30％的乙醇提取物的情况下，肌细胞的分化活性中作为主要基因的生肌决定因子和肌细胞生成素信使核糖核酸表达显著(**p<0.01)增加。这表明，本发明的菊花30％的乙醇提取物在肌细胞中促进肌肉分化的效果优秀。

实验例5.3，5-二咖啡酰奎宁酸的运动执行能力

(1)沉默调节蛋白1增加活性

为了确认cos7细胞(美国菌种保藏中心)中根据3，5-二咖啡酰奎宁酸处理的沉默调节蛋白1的表达量增加效果，以与上述实验例1-(4)相同的方法，以5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml的浓度处理在上述实施例2中获得的3，5-二咖啡酰奎宁酸，并将其结果示出于图10。

其结果，如图10所示，3，5-二咖啡酰奎宁酸在20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml条件下，使沉默调节蛋白1的表达量显著(**p<0.01)增加。这表明，本发明的3，5-二咖啡酰奎宁酸通过激活沉默调节蛋白1来促进线粒体生物合成的能力优秀。

(2)过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α增加活性

为了确认cos7细胞(美国菌种保藏中心)中根据3，5-二咖啡酰奎宁酸处理的过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α的表达量增加效果，以与上述实验例1-(2)相同的方法，以5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml的浓度处理在上述实施例2中获得的3，5-二咖啡酰奎宁酸，并将其结果示出于图11。

其结果，如图11所示，3，5-二咖啡酰奎宁酸在5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml的条件下，使作为参与线粒体生物合成的主要因子的过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α的表达量显著(**p<0.01)增加。这表明，本发明的3，5-二咖啡酰奎宁酸通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子1α来促进线粒体生物合成的能力优秀。

实验例6.3，5-二咖啡酰奎宁酸的肌蛋白分解抑制活性

为了确认作为肌细胞的l6成肌细胞(美国菌种保藏中心)中根据3，5-二咖啡酰奎宁酸处理的肌蛋白分解抑制活性，以与上述实验例2相同的方法，以1μg/ml、10μg/m的浓度将在上述实施例2中获得的3，5-二咖啡酰奎宁酸处理于细胞后，确认atrogin-1及肌环指蛋白-1的信使核糖核酸表达量，并将其结果示出于图12。

其结果，如图12所示，因肿瘤坏死因子α肌蛋白分解相关主要生物指标atrogin-1和肌环指蛋白-1的表达量增加，根据3，5-二咖啡酰奎宁酸处理，因肿瘤坏死因子α增加的atrogin-1及肌环指蛋白-1的信使核糖核酸表达浓度依赖性地减少。这表明，本发明的3，5-二咖啡酰奎宁酸在肌细胞中抑制肌蛋白分解的能力优秀。

实验例7.3，5-二咖啡酰奎宁酸的肌蛋白合成促进活性

为了确认作为肌细胞的l6成肌细胞(美国菌种保藏中心)中根据3，5-二咖啡酰奎宁酸处理的肌蛋白合成促进活性，以与实验例3相同的方法，以1μg/ml、10μg/ml的浓度将在上述实施例2中获得的3，5-二咖啡酰奎宁酸处理于细胞后，确认p-mtor蛋白质的表达量，其结果如图13所示。

其结果，如图13所示，因肿瘤坏死因子α肌蛋白生成相关主要生物指标p-mtor、p-4ebp1和p-p70s6k的蛋白质表达量减少，根据3，5-二咖啡酰奎宁酸的处理减少的p-mtor蛋白质表达量浓度依赖性地增加。这表明，本发明的3，5-二咖啡酰奎宁酸在肌细胞中使肌肉生成增加的能力优秀。

实验例8.3，5-二咖啡酰奎宁酸的肌肉分化促进活性

为了确认作为肌细胞的l6成肌细胞(美国菌种保藏中心)中根据3，5-二咖啡酰奎宁酸处理的肌蛋白合成促进活性，以与实验例4相同的方法，以10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的浓度将在上述实施例2中获得的3，5-二咖啡酰奎宁酸处理于细胞后，确认生肌决定因子、肌细胞生成素信使核糖核酸的表达量，并将其结果示出于图14。

其结果，如图14所示，根据3，5-二咖啡酰奎宁酸处理的l6肌细胞中参与肌肉分化的主要生肌决定因子、肌细胞生成素的信使核糖核酸表达量浓度依赖性地增加。这表明，本发明的3，5-二咖啡酰奎宁酸在肌细胞中促进肌肉分化的能力优秀。

以下，对包含本发明的提取物及成分组合物的制备例进行说明，本发明仅用于具体说明，而并非限定于此。

制备例

制备例1：散剂的制备

20mg的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、100mg的乳糖水合物、10mg的滑石

混合上述成分并填充在气密布来制备散剂。

制备例2：片剂的制备

10mg的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、100mg的玉米淀粉、100mg的乳糖水合物、2mg的硬脂酸镁

混合上述成分后，按照常规的片剂制备方法通过打锭来制备片剂。

制备例3：胶囊剂的制备

10mg的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、3mg的微晶纤维、14.8mg的乳糖水合物、0.2mg的硬脂酸镁

混合上述成分后，按照常规的胶囊剂制备方法填充于明胶胶囊来制备胶囊剂。

制备例4：注射剂的制备

10mg的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、180mg的甘露醇、2974mg的注射用灭菌蒸馏水、26mg的磷酸一氢钠

混合上述成分后，按照常规的注射剂的制备方法以每安瓿(2ml)中包含上述成分的方式制备。

制备例5：液剂的制备

10mg的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、10mg的异构糖、5mg的甘露醇、适量纯化水、适量柠檬香

按照常规制备方法将上述成分分别溶解于纯化水，并加入适量的柠檬香后添加纯化水来将整体调节为100ml后，灭菌，填充于褐色瓶中来制备液剂。

制备例6：保健功能食品的制备

10mg的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、适量维生素混合物、70μg的维生素a乙酸酯、1.0mg的维生素e、0.13mg的维生素b1、0.15mg的维生素b2、0.5mg的维生素b6、0.2μg的维生素b12、10mg的维生素c、10μg的生物素、1.7mg的烟酸酰胺、50μg的叶酸、0.5mg的泛酸钙、适量无机混合物、1.75mg的硫酸亚铁、0.82mg的氧化锌、25.3mg的碳酸镁、15mg的磷酸二氢钾、55mg的磷酸二钙、30mg的柠檬酸钾、100mg的碳酸钙、24.8mg的氯化镁

上述维生素及矿物质混合物的组成比为以优选的实施例将较适合于保健食品的成分混合组成，但是，任意改变其配合比也无妨，按照常规的保健食品制备方法混合上述成分后，制备颗粒，按照常规的方法可使用于保健食品组合物制备。

制备例7：保健饮料的制备

10mg的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、15g的维生素c、100g的维生素e(粉末)、19.75g的乳酸铁、3.5g的氧化锌、3.5g的烟酸酰胺、0.2g的维生素a、0.25g的维生素b1、0.3g的维生素b2、适量纯化水

按照常规的保健饮料制备方法混合上述成分后，在85℃的温度下搅拌加热约1小时后，过滤制成的溶液，取在灭菌的2l容器，密封灭菌后冷藏保管，然后使用于本发明的保健饮料组合物制备。

上述组成比为以优选的实施例将较适合于嗜好饮料的成分混合组成，但是，根据所需阶层或所需国家、使用用途等地区和民族喜好度任意改变其配合比也无妨。

制备例8：阴阳化妆水(乳液)的制备

2.0重量百分比的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、5.0重量百分比的角鲨烷、4.0重量百分比的蜂蜡、1.5重量百分比的聚山梨醇酯60、1.5重量百分比的倍半油酸山梨坦、0.5重量百分比的液体石蜡、5.0重量百分比的辛酸/癸酸甘油三酯、3.0重量百分比的甘油、3.0重量百分比的丁二醇、3.0重量百分比的丙二醇、0.1重量百分比的羧乙烯基聚合物、0.2重量百分比的三乙醇胺、适量防腐剂、色素、香料、100重量百分比的纯化水

上述配合比为以优选的实施例将较适合于营养化妆水的成分混合组成，但是，任意改变其配合比也无妨，可按照在常规的化妆品领域中的制备方法制备。

制备例9：润肤乳(润肤液)的制备

2.0重量百分比的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、3.0重量百分比的甘油、2.0重量百分比的丁二醇、2.0重量百分比丙二醇、0.1重量百分比的羧乙烯基聚合物、0.2重量百分比的peg12壬基苯基醚、0.4重量百分比的聚山梨酯80、10.0重量百分比的乙醇、0.1重量百分比的三乙醇胺、适量防腐剂、色素、香料、100重量百分比的纯化水

上述配合比为以优选的实施例将较适合于润肤乳的成分混合组成，但是，任意改变其配合比也无妨，可按照常规的化妆品领域中的制备方法来制备。

制备例10：营养霜的制备

2.0重量百分比的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、1.5重量百分比的聚山梨醇酯60、0.5重量百分比的倍半油酸山梨坦、2.0重量百分比的peg60硬化蓖麻油、10重量百分比的液体石蜡、5.0重量百分比的角鲨烷、5.0重量百分比的辛酸/癸酸甘油三酯、5.0重量百分比的甘油、3.0重量百分比的丁二醇、3.0重量百分比丙二醇、0.2重量百分比的三乙醇胺、适量防腐剂、适量色素、适量香料、100重量百分比的纯化水

上述配合比为以优选的实施例将较适合于营养霜的成分混合组成，但是，任意改变其配合比也无妨，可按照常规的化妆品领域中的制备方法来制备。

制备例11：按摩霜的制备

1.0重量百分比的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、10.0重量百分比的蜂蜡、1.5重量百分比的聚山梨醇酯60、2.0重量百分比的peg60硬化蓖麻油、0.8重量百分比的倍半油酸山梨坦、40.0重量百分比的液体石蜡、5.0重量百分比的角鲨烷、4.0重量百分比的辛酸/癸酸甘油三酯、5.0重量百分比的甘油、3.0重量百分比的丁二醇、3.0重量百分比的丙二醇、0.2重量百分比的三乙醇胺、适量防腐剂、色素、香料、100重量百分比的纯化水

上述配合比为以优选的实施例将较适合于按摩霜的成分混合组成，但是，任意改变其配合比也无妨，可按照常规的化妆品领域中的制备方法来制备。

制备例12：面膜的制备

1.0重量百分比的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、13.0重量百分比的聚乙烯醇、0.2重量百分比的羧甲基纤维素钠、5.0重量百分比的甘油、0.1重量百分比的尿囊素、6.0重量百分比的乙醇、0.3重量百分比的peg12壬基苯基醚、0.3重量百分比的聚山梨醇酯60、适量防腐剂、色素、香料、100重量百分比的纯化水

上述配合比为以优选的实施例将较适合于面膜的成分混合组成，但是，任意改变其配合比也无妨，可按照常规的化妆品领域中的制备方法来制备。

制备例13：凝胶的制备

0.5重量百分比的菊花提取物或3，5-二咖啡酰奎宁酸、0.05重量百分比的乙二胺乙酸钠、5.0重量百分比的甘油、0.3重量百分比的羧乙烯基聚合物、5.0重量百分比的乙醇、0.5重量百分比的peg60硬化蓖麻油、0.3重量百分比的三乙醇胺、适量防腐剂、色素、香料、100重量百分比的纯化水

上述配合比为以优选的实施例将较适合于凝胶的成分混合组成，但是，任意改变其配合比也无妨，可按照常规的化妆品领域中的制备方法来制备。

上述配合比为以优选的实施例将较适合于化妆料组合物的成分混合组成，可适用于除此之外的包括彩妆的多种用途的化妆品，根据其功效可用作薄薄地涂敷于人体的药剂，即软膏，根据所需阶层或所需国家、使用用途等地区和民族喜好度任意改变其配合比也无妨。

前述的本发明的说明仅用于例示，本发明所属技术领域的普通技术人员可理解，在不改变本发明的技术思想或必要特征的情况下，可易于改成其他具体形态。因此，以上所述的实施例在所有方面都应被认为是例示性的而非限制性的。

序列表

<110>延世大学校产学协力团（industry-academiccooperationfoundation,yonseiuniversity）

纽特丽生物科技（nutribiotech）

<120>含有3，5-二咖啡酰奎宁酸或菊花提取物的用于预防及治疗肌肉疾病或改善肌功能的组合物

<130>pct5036951

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