本发明属于海洋化学领域，具体涉及一种富含支链氨基酸的牡蛎寡肽及其制备方法。
背景技术：
支链氨基酸(亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸)作为人体必需氨基酸，不仅是合成机体蛋白质的原料，而且具有特殊生理、生物学功能。支链氨基酸能参与机体能量代谢，蛋白质代谢，能够缓解运动性中枢疲劳，提高机体免疫能力，近几年，主要应用于运动员食品营养强化剂和蛋白质补充剂的开发；此外，支链氨基酸补充剂还能够辅助治疗急性肝损伤、肝硬化和肝性脑病等肝脏代谢疾病，可广泛应用于保肝和护肝功能食品的研究。由于机体中不能合成支链氨基酸，必须从饮食中补充，因此，研究富含支链氨基酸的补充剂具有重要的意义。
技术实现要素：
本发明的目的在于获得一种富含支链氨基酸的牡蛎寡肽及其制备方法。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种富含支链氨基酸的牡蛎寡肽的制备方法，以牡蛎为原料经胰蛋白酶水解，超滤分离，获得分子量<3000da的牡蛎肽，其支链氨基酸含量为19.0％－25.0％。
具体为：以牡蛎为原料，处理成匀浆后加入其质量3－6倍的水混匀，再调节体系的ph为8.0－9.0，调节后升温至40℃－50℃水浴保温0.5h；而后加入牡蛎匀浆质量0.4％－0.8％的胰蛋白酶，搅拌酶解4h－8h，再经沸水灭酶15min，得到牡蛎酶解液，离心，取酶解上清液；所得牡蛎酶解上清液经截留分子量为1000da－5000da的纳滤膜分离，收集牡蛎透过液，浓缩、干燥得牡蛎低聚肽粉。
所述牡蛎透过液浓缩至可溶性固形物占浓缩液总质量10％－20％，喷雾干燥，得到牡蛎低聚肽粉，其支链氨基酸含量为19.0％－25.0％。
一种富含支链氨基酸的牡蛎寡肽，按所述方法制备获得分子量<3000da的牡蛎肽，其支链氨基酸含量为19.0％－25.0％。
本发明具有以下优点：
本发明所得的一种富含支链氨基酸的牡蛎寡肽，其分子量小于3000da，且支链氨基酸含量丰富，易于吸收；本发明的方法，实现了牡蛎资源的高值化利用，为其应用于保健食品和特殊医学用途配方食品等领域提供理论依据，推动了我国海洋生物资源的发展；具体为：
1.本发明制备方法以牡蛎为原料，采用国家标准食品添加剂中的胰蛋白酶进行酶解反应，应用性广；
2.采用本发明方法获得牡蛎寡肽得率高，占牡蛎匀浆质量的15％－30％，其支链氨基酸含量较高，达到19.0％－25.0％，且分子量小于3000da，易于被人体吸收；
3.本发明工艺步骤简单，对设备要求较低，适合工业化生产。
具体实施例
以下实例是对本发明的进一步说明。
实施例1
取新鲜牡蛎，采肉1000g，用粉碎机匀浆，得牡蛎匀浆液；将牡蛎匀浆液导入反应器，加入6倍牡蛎匀浆质量的蒸馏水，加入3.0mol/l的naoh调节体系ph为8.0，加热体系温度达到40℃；然后，加入占牡蛎匀浆总质量0.4％的胰蛋白酶，搅拌酶解4h，酶解结束后，沸水灭酶15min，得到牡蛎酶解液，离心，取酶解上清液；经截留分子量为1000da的纳滤膜分离，收集牡蛎透过液；喷雾干燥，得到牡蛎低聚肽粉。
采用氨基酸自动分析仪测定牡蛎低聚肽粉的氨基酸组成，并计算其中亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸的总含量，即支链氨基酸的含量为19.73％±0.23％。
实施例2
取新鲜牡蛎，采肉5000g，用粉碎机匀浆，得牡蛎匀浆液；将牡蛎匀浆液导入反应器，加入5倍牡蛎匀浆质量的蒸馏水，加入3.0mol/l的naoh调节体系ph为8.5，加热体系温度达到45℃；然后，加入占牡蛎匀浆总质量0.6％的胰蛋白酶，搅拌酶解5h，酶解结束后，沸水灭酶15min，得到牡蛎酶解液，离心，取酶解上清液；经截留分子量为2000da的纳滤膜分离，收集牡蛎透过液；喷雾干燥，得到牡蛎低聚肽粉，测得其支链氨基酸含量为21.65％±0.15％。
实施例3
取新鲜牡蛎，采肉50kg，用粉碎机匀浆，得牡蛎匀浆液；将牡蛎匀浆液导入反应器，加入4倍牡蛎匀浆质量的蒸馏水，加入3.0mol/l的naoh调节体系ph为9.0，加热体系温度达到50℃；然后，加入占牡蛎匀浆总质量0.8％的胰蛋白酶，搅拌酶解6h，酶解结束后，沸水灭酶15min，得到牡蛎酶解液，离心，取酶解上清液；经截留分子量为3000da的纳滤膜分离，收集牡蛎透过液；冷冻干燥或喷雾干燥，得到牡蛎低聚肽粉，测得其支链氨基酸含量为20.43％±0.34％。
实施例4
取新鲜牡蛎，采肉匀浆，得牡蛎匀浆液；将牡蛎匀浆液导入反应器，加入5倍牡蛎匀浆质量的蒸馏水，调节合适的ph值和酶解温度。然后加入占牡蛎匀浆总质量0.4％的胃蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶，木瓜蛋白酶和风味蛋白酶，搅拌酶解5h，酶解结束后，沸水灭酶15min，得到牡蛎酶解液，离心，取酶解上清液；经截留分子量为2000da的纳滤膜分离，收集牡蛎透过液；喷雾干燥，得到不同蛋白酶水解下的牡蛎低聚肽粉，测得其支链氨基酸含量如表1所示。
表1不同蛋白酶获得的牡蛎低聚肽粉中支链氨基酸的含量
从表1可见，胰蛋白酶得到的牡蛎低聚肽粉其支链氨基酸含量最高，为17.96±1.45；其次是胃蛋白酶和风味蛋白酶得到的牡蛎低聚肽粉，其支链氨基酸含量分别为16.97±1.15和16.46±1.38；菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶得到的牡蛎低聚肽粉其支链氨基酸含量较低，分别为13.59±1.05和10.73±0.80。
综上所述，虽然蛋白酶法水解制备活性肽的方法较为常见，但其不同蛋白酶得到的酶解产物的组分含量差异较大，选择合适的蛋白酶获得目标肽段是酶解反应的关键。本发明选择胰蛋白酶为目标蛋白酶水解制备牡蛎低聚肽粉。此外，酶解反应的条件不同也会导致活性肽中目标组分的含量不同，选择合适的酶解条件，获得高含量目标组分的活性肽，是本发明的意义和创新性所在。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。