1.本发明涉及婴幼儿用排便促进剂、婴幼儿用排便促进组合物和婴幼儿用排便促进包装体。
背景技术：
2.已知的是，婴幼儿、特别是刚出生不久的新生儿几乎一天都是以仰卧的姿势度过的，因此由运动不足引起通便变差、所谓的便秘的症状。另外，排便功能不完善的婴幼儿在进入断奶而开始摄取食物的时期而开始摄取固体食物时，大便容易变硬、患上便秘的风险提高。如果婴幼儿患上便秘，则会引起食欲减退而陷入营养不良、或者发生排便功能不发育这样的问题。因此，在寻求促进婴幼儿排便的方法。
3.此处，益生菌特、别是双歧杆菌是新生儿肠道的优势菌种(参照例如非专利文献1)，近年获知，双歧杆菌在肠道的定植会改善婴儿的肠道功能、免疫能力，进而促进神经发育，有对儿童的身体发育/精神运动发展带来正面影响的可能性(非专利文献2)。因此，对于婴幼儿、特别是身体发育或精神运动发展存在障碍的概率高的早产儿或者低出生体重儿等高风险儿，特别期待其效果。
4.现有技术文献
5.非专利文献
6.非专利文献1：tsuji，et al.molecular monitoring the development of intestinal microbiota in japanses infants.beneficial microbes，3，113-125，2012
7.非专利文献2：goyal ms，et al.feeding the brain and nurturing the mind：linking nutrition and the gut microbiota to brain development.proc natl acad sci usa 2015；112：14105-14112.
技术实现要素：
8.发明要解决的问题
9.然而，一直以来对于益生菌促进婴幼儿排便并没有进行详细的研究，在何种条件下使婴幼儿摄取益生菌能促进婴幼儿排便等并不了解。
10.因此，本发明的目的在于提供用于促进婴幼儿排便的制剂。
11.用于解决问题的方案
12.经过本发明人等的深入研究，发现在出生初期的特定期间且持续规定时间使之摄取益生菌，由此能够促进婴幼儿的排便，至此完成本发明。
13.即，本发明如下。
14.1.一种婴幼儿用排便促进剂，其含有益生菌，所述婴幼儿用排便促进剂以对出生0～10天的婴儿开始给予、使之持续摄取2周以上的方式使用。
15.2.根据前述1所述的婴幼儿用排便促进剂，其中，所述益生菌为双歧杆菌或乳酸菌。
16.3.根据前述2所述的婴幼儿用排便促进剂，其中，前述双歧杆菌为两岐双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)。
17.4.根据前述2所述的婴幼儿用排便促进剂，其中，所述双歧杆菌为两岐双歧杆菌olb6378菌株(bifidobacterium bifidum、保藏编号：nite bp-31)。
18.5.根据前述1～4中任一项所述的婴幼儿用排便促进剂，其中，前述益生菌为活菌。
19.6.根据前述1～5中任一项所述的婴幼儿用排便促进剂，其中，以一天摄取1
×
108cfu以上的菌数的前述益生菌的方式使用。
20.7.根据前述1～6中任一项所述的婴幼儿用排便促进剂，其用于促进出生后18个月以内的婴幼儿的排便。
21.8.一种婴幼儿用排便促进组合物，其含有前述1～7中任一项所述的婴幼儿用排便促进剂。
22.9.一种婴幼儿用排便促进包装体，其在包装材料内包装有前述8所述的婴幼儿用排便促进组合物。
23.发明的效果
24.对出生初期的婴儿开始给予本发明的婴幼儿用排便促进剂，使之持续摄取规定期间，由此能够促进婴幼儿的排便。
具体实施方式
25.本发明中，婴幼儿包括婴儿和幼儿，更详细而言包括婴儿、幼儿和新生儿，进一步详细而言包括婴儿、幼儿、新生儿、未成熟儿、早产儿和低出生体重儿。婴儿是指处于婴儿期的孩子，婴儿期是指以母乳等乳作为主要营养源的时期；人类的情况下，通常不满1岁相当于婴儿期。幼儿通常是指处于学龄前(满6～7岁)时期的孩子。新生儿是指处于新生儿期的孩子，新生儿期是指出生后不久的时期，人类的情况下，通常出生起4周以内相当于新生儿期。
26.本发明的婴幼儿用排便促进剂(以下也称为本发明的制剂)所含有的益生菌是指通过改善肠道内微生物所形成的肠道内菌群的平衡，从而对宿主动物发挥有益作用的菌。
27.作为本发明中的益生菌，可列举出例如乳酸菌和双歧杆菌，没有特别的限定，可例示出属于双歧杆菌(bifidobacterium)属、乳杆菌(lactobacillus)属、链球菌(streptococcus)属、乳球菌属(lactococcus)等的菌类。
28.作为双歧杆菌(bifidobacterium)属，可列举出例如长双歧杆菌(bifidobacterium longum)株、婴儿双歧杆菌(bifidobacterium infantis)株、短双歧杆菌(bifidobacterium breve)株、两岐双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)株、青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)株等。
29.其中优选的是两岐双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)株，进一步优选为两岐双歧杆菌olb6378(bifidobacterium bifidum、保藏编号：nite bp-31)。
30.本技术人将这些菌株保藏在国家技术评估学会，专利微生物保藏中心。以下记载限定保藏的内容。(1)保藏机构名称：国家技术评估学会，专利微生物保藏中心
31.(2)地址：〒292-0818日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8(现在是：日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室)
32.电话号码0438-20-5580
33.(3)保藏编号：nite bp-31
34.(4)微生物分类命名：两岐双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)olb6378
35.(5)原保藏日：2004年10月26日
36.(6)向基于布达佩斯条约的保藏移管的移管日：2006年1月18日
37.两岐双歧杆菌olb6378株是源自人婴幼儿粪便的革兰氏阳性专性厌氧杆菌。在bl琼脂培养基(荣研化学株式会社)平板上涂布本菌，在由使用anaeropack-anaero(三菱瓦斯化学公司制)导致的厌氧状态下、37℃下培养48小时时，形成不透明的圆形半球状的具有光泽的菌落。
38.另外，两岐双歧杆菌olb6378株在使用了两岐双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)特异性引物(肠道内菌群座谈会8、肠道内菌群的分子生物学检测/鉴定、光冈知足、松本隆广(2001))、具体而言作为16s rrna区域的种特异性引物的bibif-1：cca cat gat cgc atg tga tt(序列号1)、和bibif-2：ccg aag gct tgc tcc caa a(序列号2)的pcr中能确认到pcr产物。另外，对于半乳糖、葡萄糖、果糖、乳糖、龙胆二糖具有发酵性。
39.作为乳杆菌(lactobacillus)属，可列举出例如格氏乳杆菌(lactobacillus gasseri)株、保加利亚乳杆菌(lactobacillus bulgaricus)株等。
40.作为链球菌(streptococcus)属，可列举出例如嗜热链球菌(streptococcus thermophilus)株等。
41.本发明中的益生菌不限于这些种，另外，这些菌株可以单独使用或者组合两种以上使用。
42.作为本发明中使用的用于培养益生菌的培养基，可以使用益生菌的培养中通常使用的培养基。即，本发明中可以利用的培养基没有特别的限定，只要是在主碳源之外还以规定范围的量含有氮源、无机物以及其他营养素的培养基，则任意培养基均可以使用。
43.作为碳源，可以根据所使用的菌的同化性而使用乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、淀粉水解物、废糖蜜等。作为氮源，可以使用酪蛋白的水解物、乳清蛋白水解物、大豆蛋白水解物等含有机氮的物质。此外，作为增殖促进剂使用肉提取物、鱼肉提取物、酵母提取物等。
44.培养优选在厌氧条件下进行，可以适用一边通入二氧化碳一边进行培养的方法等公知的手法，但也可以使用通常使用的由液体静置培养等带来的微需氧条件、或者分批培养条件下等其他手法进行培养。培养温度为25～50℃、特别优选为35～42℃，但本发明不限定于此，只要是菌能够生长发育的温度则也可以是其他的温度条件。
45.培养中的培养基的ph优选维持在6.0～7.0，只要是菌能够生长发育的ph则其他ph条件也可以。培养时间优选为3～48小时、进一步优选为8～24小时、特别优选为10～20小时，只要是菌能够生长发育的时间，也可以是其他的培养时间。
46.得到的菌体可以以进行了以下那样的处理的益生菌处理物的形式包含于本发明的制剂。作为益生菌处理物，包括：培养结束后状态的培养物、培养结束后进行了离心分离或过滤等的培养物、它们的浓缩物、进而加工成糊状的物质、利用各种方法得到的干燥物(喷雾干燥物、冷冻干燥物、真空干燥物、滚筒干燥物等)、分散于介质的液状物、利用稀释剂得到的稀释物、经加热处理得到的加热处理物(加热处理菌体)、利用紫外线和/或辐射线进行了处理的光照射处理物(光照射处理菌体)、利用药剂(杀菌剂、抗菌剂、抑菌剂)进行了处
理的药剂处理物(药剂处理菌体)、将干燥物用磨等进行了破碎的破碎物等。
47.离心分离、过滤、浓缩和破碎等用通常所使用的手法进行。另外，干燥可以通过例如真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥、滚筒干燥等进行。另外，上述介质、稀释剂和药剂(杀菌剂、抗菌剂、抑菌剂)等可以适宜选择使用现有已知的物质。
48.本说明书中，有时将这些物质简称为“益生菌处理物”或“处理物”。
49.通过上述方法得到的益生菌和/或处理物可以以原状、活菌、或制成加热处理菌后进行破碎或未进行粉碎的处理物的形式、以单独或多种混合物的形式包含于本发明的制剂中。
50.若是活菌，则可以期待在摄取后在体内(肠道内)进行增殖等的效果。另外，若是进行了加热处理的菌体，则不需要考虑在氧的存在下难以生存这样的益生菌的特性，作为本发明的制剂，应用范围扩大。
51.进而，益生菌可以使用从通过培养等在培养基中进行了增殖的物质中利用离心分离等去除了培养基而得到的物质。此时，通过形成不清洗而残留培养基成分的状态，由此还包含益生菌的培养物，从而能够进一步提高本发明的制剂的排便促进效果。
52.作为加热处理的条件，例如加热温度通常为60～300℃、优选为60℃～200℃、更优选为60～150℃、进一步优选为60～140℃、更优选为60～130℃、进一步优选为60～120℃、更优选为60～110℃、进一步优选为60～100℃、进一步优选为70～100℃、进一步优选为70～90℃、特别优选为75～85℃。
53.作为加热处理的条件，设定为60℃以上则可杀死益生菌的营养细胞，故而优选。另外，作为加热处理的条件，设为300℃以下则益生菌不会炭化而残留，故而优选。
54.另外，加热处理的时间通常为0.01～120分钟、优选为0.015～60分钟、更优选为0.02～40分钟、进一步优选为0.025～30分钟、进一步优选为0.03～25分钟、进一步优选为0.03～20分钟。特别优选为加热5分钟以上。通过将加热处理的时间设定为5分钟以上，可杀死益生菌的营养细胞。另外，通过将加热处理的时间设定为120分钟以下，能够抑制热变性且高效率地杀死营养细胞，因此优选。
55.低温区(60～100℃)的加热处理中，最适合的加热处理时间可以设为例如0.2～120分钟、优选为0.2～60分钟、更优选为0.2～40分钟、进一步优选为0.2～30分钟、进一步优选为0.2～25分钟、特别优选为0.2～20分钟。
56.另外，高温区(100～300℃)的加热处理中，最适合的加热处理时间可以设为例如0.01～0.5分钟、优选为0.015～0.5分钟、更优选为0.02～0.5分钟、进一步优选为0.025～0.5分钟、进一步优选为0.03～0.5分钟、特别优选为0.03～0.5分钟。
57.例如，益生菌的加热处理优选在80℃下10分钟、或者90℃下15秒的条件下进行。
58.对于加热处理方法没有特别的限定。例如，可以对得到的菌体使用板式杀菌机、管式杀菌机、直接加热式杀菌机、带夹套的罐等加热杀菌装置在规定的条件下进行加热。
59.为了对婴幼儿发挥排便促进效果，应摄取的益生菌的菌数例如按照优选的顺序是一天1
×
108cfu以上、1
×
108～1
×
10
12
cfu、1
×
108～1
×
10
11
cfu、5
×
108～5
×
10
11
cfu、1
×
109～1
×
10
11
cfu、1
×
109～1
×
10
10
cfu、5
×
109～5
×
10
10
cfu、6
×
109～4
×
10
10
cfu、7
×
109～3
×
10
10
cfu、8
×
109～2
×
10
10
cfu、9
×
109～2
×
10
10
cfu。
60.另外，本发明的制剂的持续摄取时间设为2周以上。优选为3周以上。另外，本发明
的制剂的持续摄取时间优选2周以上且小于8周，更优选为3周以上且小于8周，进一步优选为3周以上且小于6周，特别优选为3周以上且小于5周。
61.通过使本发明的制剂的摄取时间在上述范围内，由此能够对婴幼儿发挥高的排便促进效果。特别是，优选使之持续摄取2周以上一天1
×
108cfu以上的菌数的益生菌，更优选使之持续摄取2周以上一天1
×
108cfu以上且1
×
10
11
cfu以下的菌数的益生菌，进一步优选使之持续摄取2周以上一天1
×
109cfu以上且1
×
10
10
cfu以下的菌数的益生菌。
62.本发明的制剂对出生0～10天的婴儿开始给予。优选对出生3～7天的婴儿开始给予，更优选对出生4～6天的婴儿开始给予。
63.另外，本发明的制剂对刚出生后不久的婴儿开始给予，之后持续进行给予，由此能够发挥对婴幼儿的排便促进效果。该效果例如在给予开始起至出生后第12个月为止的期间持续，更优选在给予开始起至出生后18个月为止的期间持续。
64.本发明的制剂可以单独使用制剂，另外也可以与其他成分混合而以本发明的婴幼儿用排便促进组合物(以下也称为本发明的组合物)的形式使用。本发明的组合物中的本发明的制剂的配混量可以根据其目的、用途、形态、剂型、症状和体重等而任意规定。
65.相对于本发明的组合物整体，本发明的制剂能够以例如0.001～90％(w/w)的含量配混，进而以0.001～50％(w/w)的含量进行配混。
66.本发明的制剂或本发明的组合物可以以经口给予或非经口给予(肌肉内、皮下、静脉内、栓剂和经皮等)的任意者进行给予。
67.本发明的制剂或本发明的组合物也可以以医药品或饮食品的任意形式进行利用。例如通过以医药品的形式直接给予，或以特定保健用食品等特别用途食品、营养食品的形式直接摄取，能够期待对婴幼儿发挥排便促进效果。另外，作为特别用途食品、营养食品的例子，为配方奶粉、流动食品、患者用食品、婴儿用配方奶粉、幼儿用奶粉等食品、哺乳妇女用奶粉等食品、补充剂、营养强化食品等。
68.将本发明的制剂或本发明的组合物以医药品的形式使用时，作为形态，可列举出例如通过片剂、包覆片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、溶液、糖浆剂、乳液等制剂的经口给予。这些各种制剂可以按照常规方法，通过对作为主剂的益生菌和/或处理物使用分散剂、赋型剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味矫臭剂、溶解辅助剂、悬浊剂、包覆剂等医药制剂技术领域中通常能使用的已知的辅助剂进行制剂化，从而能够制成经口用制剂。
69.其中，本发明的制剂优选以与分散剂混合而成的组合物的形式使用。作为分散剂，可列举出例如酪蛋白等乳蛋白、大豆蛋白、肽、氨基酸、淀粉、糊精、木聚糖、寡糖、糖类(葡萄糖、乳糖、蔗糖、半乳糖、麦芽糖)、糖醇(海藻糖、木糖醇、赤藓糖醇、帕拉金糖、海藻糖、木糖)等。分散剂中特别优选糊精。通过使用糊精作为分散剂，由此能够将粉末造粒，分散溶解等的处理容易并且还能够长期保存。
70.分散剂、特别是糊精的形状优选为颗粒。由于是颗粒，不仅溶解性高且填充性能高，因此能够以少量进行分装。另外，是因为在制造上有如下优点：只需使包装材料落下而进行分装，就能够质量分布无偏差而正确地进行分装。
71.本发明的组合物中，本发明的制剂与分散剂的质量比优选为1：100～1：2，更优选为1：100～1：10，进一步优选为1：100～1：20。通过将本发明的制剂与分散剂的质量比设定为上述范围，从而能够使本发明的感染防御剂效率良好地分散。
72.例如在将含有本发明的制剂和糊精的本发明的组合物经口给予的情况下，可以将本发明的组合物分为规定量的小份，包装于包装材料内而制成包装体(婴幼儿用排便促进包装体)，然后进行给予。本发明中，包装成每份为一次的用量和包装成多份构成一次的用量是优选的，尤其优选包装成一次的用量。
73.将本发明的制剂和组合物添加至食品组合物中的情况下，可以向各种饮食品(牛奶、清凉饮料、发酵乳、酸奶、奶酪、面包、饼干、薄脆饼干、披萨饼皮、配方奶粉、流动食品、患者用食品、婴儿用配方奶粉、幼儿用奶粉等食品、哺乳妇女用奶粉等食品、营养食品等)中添加并进行摄取。可以直接使用本发明的制剂和组合物或者与其他食品或食品成分混合等，按照通常的食品组合物的常规方法进行使用。
74.另外，关于其性状，也可以是通常所使用的饮食品的状态，例如固体状(粉末、颗粒状等)、糊状、液状或悬浊状的任意者。通过制成为这样的形态，能够感受不到心理障碍地摄取本发明的制剂。
75.另外，也可以制成将本发明的制剂或组合物与没有副作用的水、蛋白质、糖质、脂质、维生素类、矿物质类、有机酸、有机碱、果汁、风味剂类等进行混合而得到的组合物而使用。
76.作为蛋白质，可列举出例如全脂奶粉、脱脂奶粉、部分脱脂奶粉、酪蛋白、乳清粉、乳清蛋白、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物、α-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、乳铁蛋白、大豆蛋白、鸡蛋蛋白、肉蛋白等动植物性蛋白质、它们的水解物；黄油、乳矿物质、奶油、乳清、非蛋白氮、唾液酸、磷脂、乳糖等各种来源于奶的成分等。作为医药品、饮食品具有实际使用效果的、没有副作用的物质全部可以使用。另外，这些成分可以组合两种以上使用。
77.作为糖质，可列举出例如糖类、加工淀粉(除了糊精之外还有可溶性淀粉、英国淀粉(british starch)、氧化淀粉、淀粉酯、淀粉醚等)、膳食纤维等。
78.作为脂质，可列举出例如猪油、鱼油等、它们的分提油、氢化油、酯交换油等动物性油脂；棕榈油、红花油、玉米油、菜籽油、椰子油、它们的分提油、氢化油、酯交换油等植物性油脂等。
79.作为维生素类，可列举出例如维生素a、胡罗卜素类、维生素b族、维生素c、维生素d族、维生素e、维生素k族、维生素p、维生素q、尼亚新(niacin)、烟酸、泛酸、生物素、肌醇、胆碱、叶酸等。
80.作为矿物质类，可列举出例如钙、钾、镁、钠、铜、铁、锰、锌、硒等。
81.作为有机酸，可列举出例如苹果酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸等。作为医药品、饮食品具有实际使用效果的、没有副作用的物质全部可以使用。另外，这些成分可以组合两种以上使用。
82.以食品、药剂的形式提供本发明的制剂或本发明的组合物的情况下，制造方法可以按照本领域技术人员公知的方法来进行。只要是本领域技术人员，可以适宜组合将本发明益生菌或处理物与其他成分进行混合的工序、成形工序、杀菌工序、发酵工序、烧制工序、干燥工序、冷却工序、造粒工序和包装工序等，从而能够制造所希望的食品、药剂。
83.进而，保健功能食品、患者用食品中也可以应用本发明的制剂或本发明的组合物。保健功能食品制度是基于国内外的动向、与以往的特定保健用食品制度的整合性，不仅以
通常的食品还以制成片剂、胶囊等形状的食品为对象而设置的，包括特定保健用食品(个别许可型)和营养功能食品(标准基准型)2种类型。通过以含有本发明的制剂或组合物的特定保健用食品等特别用途食品、营养功能食品形式直接摄取，可以期待能够发挥感染防御效果。
84.作为将本发明的制剂和组合物添加至配方奶粉时的方式，可列举出例如婴儿用配方奶粉、肽奶(peptide milk)、阶段配方奶粉(follow up milk)、成长阶段奶粉(growing up milk)、低出生体重儿用配方奶粉、无乳糖奶粉、低钠特殊奶粉和母乳添加用粉末等婴儿用的感染防御用的经口组合物，只要是能够期待本发明的效果/效能的物质，就没有特别的限制。本发明的制剂和组合物除了配方奶粉以外，还可以不受限制地加入至饮食品中。例如酸奶、点心类。
85.可以向医药组合物、能够预期具有饮食习惯且副作用少的饮食品、或者能够期待预防感染的组合物中，将本发明的作为有效成分的益生菌作为添加剂而使用，也可以经口或经管进行摄取。
86.作为本发明的有效成分的益生菌不限定于对人，对哺乳动物(哺乳类)也显示上述优异的效果/效能。因此，本发明还可以是含有益生菌作为有效成分的饲料和饲料添加剂，特别是哺乳动物饲养用的奶粉和奶粉添加剂。
87.实施例
88.以下，通过实施例对本发明进一步具体地进行说明。需要说明的是，本发明并不限定于以下的实施例。
89.作为样品，使用包含两岐双歧杆菌olb6378株(保藏编号：nite bp-31)的活菌制剂(商品名“明治双歧杆菌olb6378”；1份(0.5g)中含有活菌数5
×
109cfu)0.5g。
90.将对象患者分为样品给予组(n＝15)和非给予组(n＝15)这2组。给予组在出生后5天龄开始样品的给予，在出生后1个月龄为止每天连续地、早1次晚1次(1天2次)给予样品。样品溶解于2ml的白开水中，将其中的1ml用滴管进行了经口给予。另一方面，非给予组没有给予样品。
91.两组均是在1岁时(出生后12～13个月)来院进行检查、通过下述式调查1岁为止的有过排便的天数的比例。需要说明的是，该检查在于试验中被排除的对象患者以外的患者中进行，样品给予组和非给予组均是n＝15。
92.有过排便的天数的比例(％)
93.＝{有排便的天数/(有排便的天数+无排便的天数)}
×
100
94.此处，上述有过排便的天数是指从试验开始起至1岁龄为止期间的有过排便的天数；上述无排便的天数是指从试验开始起至1岁龄为止期间的无排便的天数。
95.试验的结果，有过排便的天数的比例，非给予组中是84.0％，与此相对，给予组中是92.4％，给予组与非给予组相比，结果显著高(p＝0.034)。由该结果可知，对于出生0～10天的婴儿开始益生菌的给予，使之持续摄取2周以上，由此能够促进婴幼儿排便。
96.需要说明的是，获知：样品给予组与非给予组在痢疾的罹患次数、罹患天数方面没有显著差别，上述给予组中有过排便的天数的比例变高并不是促进罹患痢疾的结果。