本发明涉及益生菌的包埋，尤其涉及一种植物乳杆菌的包埋方法。
背景技术：
1、植物乳杆菌作为一种与人类关系密切的益生菌，对人类健康有着巨大的贡献。无论是在食品发酵、乳酸发酵方面还是在医疗保健方面，都有广泛的应用。植物乳杆菌具有增强机体免疫功能、抑制病原菌生长、降低血清胆固醇含量以及抑制肿瘤细胞的形成等功能。
2、益生菌是一类对人类生活健康有益的微生物，但因其对外界环境的高度敏感，在使用和生产过程中经常出现存活率低的现象。而包埋技术可以对益生菌在一定程度上进行保护，抵抗外界的不良环境。近年来益生菌包埋技术迅速发展，为高效保护益生菌提供了更多选择。
3、传统的对益生菌的包埋方法有挤压法、真空冷冻干燥法和喷雾干燥法。挤压法制作的微胶囊较低且均匀性差、产率低，不适宜大规模生产；真空冷冻干燥具有较高的存活率和长期的保存时间，但过程中会对菌体造成一定伤害；喷雾干燥法有着简单的要求条件且效率高，但在制作过程中菌体会暴露在高温环境中，容易造成菌体损伤。
4、现代常使用的益生菌前沿技术主要有pickering乳化法、内源乳化法、复合凝聚法和多层包埋。pickering乳液具有长期稳定性，但目前食品级的pickering固体颗粒种类较少；内源乳化法具有制作成的微胶囊粒径小的特点，但制作成本高，目前还处于实验室阶段。复合凝聚法制备成本相对较高，并且微胶囊的溶解性和润湿性较差，给产品的应用带来一些不便。多层包埋且制备得到的微胶囊粒径普遍偏大，增加了益生菌芯材释放的难度，影响释放率。因此，如何提供一种新的应用于植物乳杆菌的包埋方式，既可以保护植物乳杆菌在较高的温度下继续发挥作用，且材料无毒无害是食品级材料，成为本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
1、为克服现有技术中存在的上述缺陷，本发明提供了一种植物乳杆菌的包埋方法，该方法可以保护植物乳杆菌在较高的温度下继续发挥作用，提高植物乳杆菌在花草茶泡制过程中的存活率，且材料无毒无害是食品级材料，工艺较简单，成本较低，无污染，容易实现工业化生产。
2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
3、本发明提供了一种植物乳杆菌的包埋方法，包括如下步骤：
4、(1)将植物乳杆菌原液接种至mrs培养基中进行原液培养，挑取白色且单个菌种直径为2.5～3.5mm的菌群接种至mrs培养液中进行二次培养，然后离心，洗涤凝固的培养液，得植物乳杆菌细胞液；
5、(2)将海藻酸钠与明胶混合，加水进行水浴搅拌，然后在室温下静置至无气泡，得水凝胶；
6、(3)将步骤(1)中所述植物乳杆菌细胞液与步骤(2)中所述水凝胶混合，得植物乳杆菌悬浮液；
7、(4)将所述植物乳杆菌悬浮液与氯化钙溶液混合，风干固化后得植物乳杆菌水凝胶珠；
8、(5)将壳聚糖与水、冰醋酸混合，加水定容，调节ph值至3.5～6，得壳聚糖混合液；
9、(6)将步骤(4)中所述植物乳杆菌水凝胶珠与步骤(5)中所述壳聚糖混合液混合进行搅拌，静置，过滤收集微胶囊。
10、优选的，步骤(1)中所述植物乳杆菌原液与mrs培养基的体积比为0.8～1.2:100。
11、优选的，步骤(1)中所述mrs培养基包括如下组分：蛋白胨8～12g，牛肉膏8～12g，酵母膏4～6g，葡萄糖18～22g，吐温80 0.8～1.2ml，无水磷酸氢二钾1～3g，无水乙酸钠1～3g，柠檬酸氢二铵1～3g，无水硫酸镁0.1～0.3g，硫酸锰0.2～0.3g，琼脂14～16g，蒸馏水900～1100ml，所述mrs培养基的ph值为6.2～6.4；
12、所述mrs培养液包括如下组分：蛋白胨8～12g，牛肉膏8～12g，酵母膏4～6g，葡萄糖18～22g，吐温80 0.8～1.2ml，无水磷酸氢二钾1～3g，无水乙酸钠1～3g，柠檬酸氢二铵1～3g，无水硫酸镁0.1～0.3g，硫酸锰0.2～0.3g，蒸馏水900～1100ml，所述mrs培养液的ph值为6.2～6.4。
13、优选的，步骤(1)中所述原液培养的温度为25～35℃，所述原液培养的时间为20～25h，所述菌群的接种量为占所述mrs培养液体积的5～12％，所述二次培养的温度为25～35℃，所述二次培养的时间为14～16h。
14、优选的，步骤(1)中所述离心的温度为3～5℃，所述离心的转速为7500～8500rpm，所述离心的时间为8～12min，所述洗涤为用生理盐水洗涤1～3次，所述生理盐水的浓度为0.8～0.9wt％。
15、优选的，步骤(2)中所述海藻酸钠与明胶的混合质量比为2～4:1，所述加水加至海藻酸钠与明胶的总终浓度为1～3wt％，所述水浴搅拌的温度为45～55℃，所述水浴搅拌的转速为400～800rpm，所述水浴搅拌的时间为25～35min。
16、优选的，步骤(3)中所述植物乳杆菌细胞液与所述水凝胶的混合比例为4～6ml:20～30g；
17、步骤(4)中所述植物乳杆菌悬浮液与氯化钙溶液的混合体积比为40～60:240～260，所述氯化钙溶液的摩尔浓度为0.5～1.5mol/l，所述风干固化的时间为0.8～1.2h。
18、优选的，步骤(5)中所述壳聚糖与水、冰醋酸的混合比例为0.2～1g:85～95ml:0.3～0.5ml，所述加水定容后的溶液的总体积与冰醋酸的体积比为100:0.3～0.5，所述调节ph值的组分为氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度为0.8～1.2mol/l。
19、优选的，步骤(6)中所述植物乳杆菌水凝胶珠与所述壳聚糖混合液的混合比例为1～2g:50～80ml，所述搅拌的转速为90～110rpm，所述搅拌的时间为15～25min，所述静置的时间为50～70min。
20、本发明还提供了上述包埋方法在提高植物乳杆菌在花草茶泡制过程中的存活率中的应用。
21、与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
22、1、本发明产品均使用食品级材料，无毒无害，避免了食用危险。
23、2、本发明能够在高温下实现有效包埋，使其提高花茶的营养成分，有条件实行工业化生产。
24、3、本发明方法可提高植物乳杆菌在较高温度下的存活率，保证产品在一定环境下的使用。
1.一种植物乳杆菌的包埋方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种植物乳杆菌的包埋方法，其特征在于，步骤(1)中所述植物乳杆菌原液与mrs培养基的体积比为0.8～1.2:100。
3.根据权利要求1或2所述的一种植物乳杆菌的包埋方法，其特征在于，步骤(1)中所述mrs培养基包括如下组分：蛋白胨8～12g，牛肉膏8～12g，酵母膏4～6g，葡萄糖18～22g，吐温80 0.8～1.2ml，无水磷酸氢二钾1～3g，无水乙酸钠1～3g，柠檬酸氢二铵1～3g，无水硫酸镁0.1～0.3g，硫酸锰0.2～0.3g，琼脂14～16g，蒸馏水900～1100ml，所述mrs培养基的ph值为6.2～6.4；
4.根据权利要求3所述的一种植物乳杆菌的包埋方法，其特征在于，步骤(1)中所述原液培养的温度为25～35℃，所述原液培养的时间为20～25h，所述菌群的接种量为占所述mrs培养液体积的5～12％，所述二次培养的温度为25～35℃，所述二次培养的时间为14～16h。
5.根据权利要求4所述的一种植物乳杆菌的包埋方法，其特征在于，步骤(1)中所述离心的温度为3～5℃，所述离心的转速为7500～8500rpm，所述离心的时间为8～12min，所述洗涤为用生理盐水洗涤1～3次，所述生理盐水的浓度为0.8～0.9wt％。
6.根据权利要求5所述的一种植物乳杆菌的包埋方法，其特征在于，步骤(2)中所述海藻酸钠与明胶的混合质量比为2～4:1，所述加水加至海藻酸钠与明胶的总终浓度为1～3wt％，所述水浴搅拌的温度为45～55℃，所述水浴搅拌的转速为400～800rpm，所述水浴搅拌的时间为25～35min。
7.根据权利要求6所述的一种植物乳杆菌的包埋方法，其特征在于，步骤(3)中所述植物乳杆菌细胞液与所述水凝胶的混合比例为4～6ml:20～30g；
8.根据权利要求7所述的一种植物乳杆菌的包埋方法，其特征在于，步骤(5)中所述壳聚糖与水、冰醋酸的混合比例为0.2～1g:85～95ml:0.3～0.5ml，所述加水定容后的溶液的总体积与冰醋酸的体积比为100:0.3～0.5，所述调节ph值的组分为氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度为0.8～1.2mol/l。
9.根据权利要求8所述的一种植物乳杆菌的包埋方法，其特征在于，步骤(6)中所述植物乳杆菌水凝胶珠与所述壳聚糖混合液的混合比例为1～2g:50～80ml，所述搅拌的转速为90～110rpm，所述搅拌的时间为15～25min，所述静置的时间为50～70min。
10.权利要求1～9任意一项所述的包埋方法在提高植物乳杆菌在花草茶泡制过程中的存活率中的应用。