一种巧克力包埋肠道菌群的方法与流程

本发明属于微生物发，特别涉及一种通过健康食品对肠道菌群冻干粉有效包埋方法。

背景技术：

1、近几年，随着肠道菌群宏基因组的研究发现，越来越多的疾病与肠道菌群有关。环境、饮食结构以及是否使用抗生素等因素都影响着肠道菌群的结构和数量。不同的肠道菌群状态影响人体的代谢、免疫和有害物质的清除能力。重建肠道菌群主要有三种途径：抗生素、益生菌和肠菌移植(fecal microbiota transplantation，fmt)。然而人体肠道菌群的复杂性，使得人类现在只能鉴别1/3的菌群种类，能够培养出来的少之又少，不能被培养出来的菌群就可用肠道菌群移植的方式将其移植到人体内。fmt是将健康人粪便中的功能菌群，移植到患者胃肠道内，重建新的肠道菌群，实现肠道及肠道外疾病的治疗。fmt作为重建肠道菌群的有效手段，已用于难辨梭状芽孢杆菌感染等多种菌群相关性疾病的治疗和探索性研究，并被认为是近年的突破性医学进展。

2、需要移植的肠道菌群在进入肠道的过程中，会经历多种恶劣的环境条件，首先口腔当中含有大量黏蛋白，矿物离子以及淀粉酶等物质，这些物质在和菌群混合吞入达到食道后，由于食道ph值大约在1～3左右，酸性较强，不利于菌群生存，5分钟左右就会导致活菌大量减少，之后又要经历胃里较高的离子强度，胃蛋白酶以及机械性搅拌都会不同程度上影响到菌群的生存能力，所以到达肠道内的菌群少之又少；鉴于上述过程对菌群活性的影响，采用措施对菌群的保护是必要的，这里我们选择一种对人体无害且健康的材料对肠道菌群进行包埋，以此来抵御菌群到达肠道前的损害。

3、巧克力是国际公认的健康食品，巧克力有利于心脏健康。巧克力中的多酚具有与阿司匹林相似的抗炎作用，在一定浓度下可以降低血小板活化，转移自由基在血管壁上的沉积。巧克力降低血液中的胆固醇水平。可可豆中天然存在的可可脂可以使巧克力具有独特的平滑感和入口即化的特性。研究表明，可可脂中含有的硬脂酸可以降低血液中的胆固醇水平。另外，巧克力中的单不饱和脂肪酸中含有的油酸具有抗氧化作用，橄榄油中也含有相同的物质。

4、使用巧克力进行包埋能够便于人们接受，如专利申请201910445817.2公开了一种益生菌强化微维固体饮料及其制备方法，其应用(活)多菌种、经过三层包埋、能够通过胃酸屏障、在肠粘膜上定殖的益生菌，以营养强化剂—复合维生素—矿物质元素为主料，以药食同源成份：a-亚麻酸、黑芝麻、红糖等辅料为载体。将主料与辅料经过多次混合搅拌后，把搅拌均匀物料，在40-46℃温度下，通过封闭式传送带输送至巧克力涂层机入口处，进行两次巧克力涂层。

5、然而，上述的方法仅仅是利用天然可可粉和天然可可脂将益生菌复合菌剂包埋起来，并未考虑到益生菌菌株的成活率，存在着成活率不高的缺陷，难以达到健康保健的效果。

技术实现思路

1、基于此，本发明的首要目地是提供一种巧克力包埋肠道菌群的方法，该方法使用巧克力进行包埋，不但可以覆盖菌群本身带来的难以接受的气味，同时改善人们的接受程度，而且还可以为被包埋的菌群提供营养物质，提高菌群在包埋材料中的一个存活率；既能抵御口腔、胃液中的酶类对菌群的杀伤，保证到达肠道时菌群的活菌数，又能作为益生元，提高机体的抗氧化水平。

2、本发明的另一个目地在于提供一种巧克力包埋肠道菌群的方法，该方法使用巧克力作为包埋介质对肠道菌群冻干粉进行包埋，大大提高了菌群的存活率，包埋后存活率达到67.54％，且经胃液处理2h后存活率仍有25.06％，包埋效率高，可以抵御胃液成功得将需移植的菌群护送至肠道内。

3、为实现上述目的，本发明的技术方案为：

4、一种巧克力包埋肠道菌群的方法，其特征在于步骤如下所示：

5、步骤1，制备巧克力浆；

6、巧克力浆以巧克力为载体，巧克力包括有可可液块和可可脂，将巧克力中加入葡聚糖、低聚半乳糖、脱脂奶粉混合制成巧克力浆；

7、进一步，巧克力浆由10～50份可可液块、1～10份葡聚糖、1～10份菊粉、12～30份可可脂、1～9份低聚半乳糖和1～5份脱脂奶粉混合制成。

8、更进一步，所述方法中，用料还包括有大豆卵磷脂及肠道菌群冻干粉，所述巧克力浆、大豆卵磷脂及肠道菌群冻干粉的用量为：10～50份可可液块、1～10份葡聚糖、1～10份菊粉、12～30份可可脂、1～9份低聚半乳糖、1～5份脱脂奶粉和1～3份大豆卵磷脂及1～5份肠道菌群冻干粉。

9、将称取的可可液块及可可脂在40℃下熔化后，加入葡聚糖、菊粉、低聚半乳糖、脱脂奶粉，混合均匀后制得巧克力浆，将巧克力匀浆置于70℃的环境下，精炼，不停搅拌，将各物料混匀；

10、步骤2，菌粉填充剂制备；

11、取新鲜粪便，溶解于的生理盐水中，经粪便自动提取仪处理去除残渣，得到菌悬液，将供体菌悬液放入磁力搅拌器中混匀，分装入离心管；

12、菌悬液经离心后去上清液，洗涤后，菌体沉淀用冻干保护剂重悬后冷冻干燥得到冻干菌粉。

13、进一步，菌悬液经离心(4℃、8000×g)10min后去上清液,洗涤后,菌体沉淀用按1：6(菌体1，冻干保护剂6)的冻干保护剂重悬后冷冻干燥。冻干菌粉(活菌数1011cfu/g)保藏于-20℃备用。

14、步骤3，包埋肠道菌群冻干粉；

15、在精炼过程中，将大豆卵磷脂加入巧克力浆中；精炼结束后，加入冻干菌粉使巧克力中达到1011cfu/g，将低聚半乳糖加入到制备的样品中，搅拌后，进行3阶段的调温；

16、第1阶段，将物料冷却至29℃；

17、第2阶段，从29℃冷却至结晶温度(26℃)并结晶；

18、第3阶段，回温至29～30℃，期间加入肠道菌群冻干粉回温，浇注成型后置于8℃下冷却，然后脱模得到巧克力包埋的肠道菌群。

19、进一步，在精炼结束前，将大豆卵磷脂加入巧克力浆中,并继续混合30min；精炼结束后，在37℃下加入冻干菌粉使巧克力中达到1011cfu/g，将低聚半乳糖加入到制备的样品中，搅拌10min后，进行3阶段的调温如下：

20、第1阶段，将物料冷却至29℃；

21、第2阶段，从29℃冷却至结晶温度(26℃)并结晶20min；

22、第3阶段，回温至29～30℃，期间加入1～5份肠道菌群冻干粉回温持续10min；浇注成型后置于8℃下冷却25min，脱模。

23、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

24、本发明组建有效的巧克力组方，通过巧克力组方对肠道菌群进行包埋，巧克力属于热敏性食品，其熔点与肠道菌群的适宜温度相似，也成为了快速判断肠道菌群在巧克力中是否能够生存的温度指示剂，若温度超过肠道菌群生长的适宜时，巧克力也会随之融化，从而提高了菌群的存活率。

25、同时，通过巧克力作为原料，同时具有相当成熟的生产工艺，具有更低的价格和颇为成熟，便于包埋肠道菌群，从而使得人们更加易于接受菌群移植。

技术特征：

1.一种巧克力包埋肠道菌群的方法，其特征在于步骤如下所示：

2.如权利要求1所述的巧克力包埋肠道菌群的方法，其特征在于步骤1中，膳食补充剂由10～50份可可液块、1～10份葡聚糖、1～10份菊粉、12～30份可可脂、1～9份低聚半乳糖、1～5份脱脂奶粉和1～3份大豆卵磷脂混合制成。

3.如权利要求2所述的巧克力包埋肠道菌群的方法，其特征在于所述方法中，用料还包括有大豆卵磷脂及肠道菌群冻干粉，所述巧克力浆、大豆卵磷脂及肠道菌群冻干粉的用量为：10～50份可可液块、1～10份葡聚糖、1～10份菊粉、12～30份可可脂、1～9份低聚半乳糖、1～5份脱脂奶粉和1～3份大豆卵磷脂及1～5份肠道菌群冻干粉。

4.如权利要求1所述的巧克力包埋肠道菌群的方法，其特征在于步骤2中，菌悬液经离心10min后去上清液，洗涤后，菌体沉淀用冻干保护剂重悬后冷冻干燥得到冻干菌粉，冷冻干燥中，用量比例为：菌体1，冻干保护剂6。

5.如权利要求1所述的巧克力包埋肠道菌群的方法，其特征在于步骤3中，在精炼过程中，将大豆卵磷脂加入其中，并继续混合30min；精炼结束后，在37℃下加入冻干菌粉使巧克力中达到1011cfu/g，将低聚半乳糖加入到制备的样品中，搅拌10min后，进行3阶段的调温如下：

技术总结
本发明公开了一种巧克力包埋肠道菌群的方法，包括步骤如下：步骤1，制备巧克力浆；巧克力浆以巧克力为载体，巧克力包括有可可液块和可可脂，将巧克力中加入葡聚糖、低聚半乳糖、脱脂奶粉混合制成巧克力浆；步骤2，菌粉填充剂制备；步骤3，包埋肠道菌群冻干粉；在精炼结束前，将大豆卵磷脂加入巧克力浆中；精炼结束后，加入冻干菌粉使巧克力中达到10<supgt;11</supgt;CFU/g，将低聚半乳糖加入到制备的样品中，搅拌后，进行3阶段的调温，然后脱模得到巧克力包埋的肠道菌群。本发明能够提高菌群在包埋材料中的一个存活率，保证到达肠道时菌群的活菌数，又能作为益生元，提高机体的抗氧化水平。

技术研发人员：肖传兴,徐炜,林檀,任颉,李源涛,张帮周,何剑全
受保护的技术使用者：上海承葛生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16