改善槐花水提液苦涩感的微生物筛选方法及发酵工艺

本发明涉及一种改善槐花水提液苦涩感的微生物筛选方法及发酵工艺，属于药品食品发酵。

背景技术：

1、随着科学技术的快速发展，发酵工程也越来越受到人们的重视。现在人们对食品的定义很高，讲究色香味俱全。槐花作为一种传统药食两用中药，还普遍存在着苦、涩等问题。槐花发酵就是改变传统对于槐花的炮制方式，运用现代微生物学以及一些现有的发酵技术来改善槐花食用存在的苦涩问题。以前对于中药发酵炮制主要是自然发酵，存在着杂菌污染的问题。

2、目前关于中药槐花发酵利用的研究主要停留在槐花与各种物质的组合发酵，例如一些其它中药、茶、酒组合物，这些组合方式复杂，对槐花有效成分的变化也是不可控的，且对实验的影响因素也会增多。对于发酵改善槐花口感的微生物筛选方法及应用并没有。因此，需要一种新的技术方案来解决上述的技术问题。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题在于提供一种改善槐花水提液苦涩感的微生物筛选方法及发酵工艺和应用，筛选出可以有效改善槐花苦涩口感的菌种，提高槐花的用途和资源利用效率。

2、为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

3、改善槐花水提液苦涩感的微生物筛选方法及发酵工艺，包括以下步骤：

4、(1)称取适量槐花，自来水浸润30分钟，加入槐花10倍量的自来水煎煮1小时，纱布过滤收集滤液，滤渣加8倍量水煮沸1小时，过滤；两次滤液合并，浓缩料液比为1:10，得到槐花水提液，备用；

5、(2)把步骤(1)得到的槐花水提液分装入11个三角瓶中，121℃高压灭菌；

6、(3)将步骤(2)中的11瓶灭菌槐花水提液，其中1瓶三角瓶不接菌，作空白对照，其余10瓶三角瓶分别接入以下十种可食用菌种：米曲霉、黑曲霉、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、戊糖乳杆菌、瑞士乳杆菌、植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌，接菌量4％；

7、(4)将步骤(3)中的11瓶槐花水提液，在转速200r/min、温度25℃的摇床培养箱培养24h；

8、(5)将步骤(4)中发酵后的样品进行感官评分，筛选出口感评分较高排名前三的三个菌种，分别为瑞士乳杆菌、保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌；

9、(6)将步骤(5)中筛选出来的瑞士乳杆菌、保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌，进行混菌发酵，接菌量为4％，在转速200r/min，温度25℃的摇床培养箱培养24h；

10、(7)依据感官评分和主要有效成分总黄酮的含量变化，筛选出口感好且主要有效成分总黄酮含量高的混菌组合是瑞士乳杆菌、保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌，混菌比例为瑞士乳杆菌：保加利亚乳杆菌：嗜热链球菌为1:1:1；

11、(8)使用步骤(7)中筛选的最好的瑞士乳杆菌、保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌的混菌组合，接种到槐花水提液，进行发酵时间、发酵温度、接菌量的单因素考察分析；

12、(9)以感官评分及总黄酮含量为评价指标，确定步骤(8)中槐花水提液单因素考察时的最佳发酵时间、最佳发酵温度和最佳接菌量；

13、(10)利用design expert v 8.0.5b软件的box-benhnken试验方案，在确定最佳发酵时间、最佳发酵温度和最佳接菌量基础上，设计三因素三水平实验，以感官评分及总黄酮含量为响应值，通过响应面二次回归方程分析，经design expert v 8.0.5b软件预测，得到槐花水提液改善苦涩感的最佳发酵工艺条件；

14、(11)对步骤(10)中得到的槐花水提液改善苦涩感的最佳发酵工艺条件进行三次验证，以感官评分及总黄酮含量为评价指标，对比验证实测值与步骤(10)中理论预测值的相对误差，结合工业生产实际，获得多菌种发酵改善槐花水提液苦涩感最佳发酵工艺条件为：发酵时间20h，发酵温度24℃，接菌量3％。

15、本发明还涉及瑞士乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌在制备槐花产品中的应用。

16、本发明涉及瑞士乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌在改善槐花苦涩口味中的应用。

17、本发明的有益效果：槐花因其独特的风味和药效是消费者喜爱的药食两用中药，但槐花水提液具有一定苦涩不适口感，严重限制其资源的开发利用。槐花作为饮品添加原料使用较广，但多用甜味或鲜味物质掩盖其苦涩味。现有有关槐花的发酵研究，多是槐花和其他中药材组合发酵，发酵的影响因素多。目前尚无利用微生物发酵方法改善槐花水提物口感的研究报道。本发明以十种可食用微生物为发酵菌种，接种至槐花水提液，通过单菌发酵筛选出改善槐花口感效果较好的3种菌种，而后以筛选出的3种菌种为发酵菌种，设计不同菌种混合比例(单菌种、双菌种、三菌种混合)，筛选出发酵改善口感的最佳菌种组合，再运用响应面分析法，优化混合菌种发酵改善口感的工艺条件，获得混合菌种发酵改善槐花水提液口感的最佳工艺条件。可以明显改善槐花提取物苦、涩的不适口感，而且增加了发酵产物的有效成分黄酮含量，可制作成食品添加原料，更好的应用于槐花饮品的开发。本发明只对槐花一种药材水提液进行发酵改善口感研究，且可以显著改善槐花水提液口感，获得的槐花发酵液也可用于后续的食品添加剂，为传统的食药两用中药提供了新开发途径。本发明选用响应面分析法对发酵工艺过程进行优化，获得的最佳发酵工艺可应用于工业生产。

18、与现有技术相比，本发明运用现代发酵技术，区别于传统的自然发酵，使得发酵过程科学可控。发酵过程中严格遵循灭菌处理，食用菌种的加入，极大的避免了杂菌的污染。制作的槐花发酵液也可用于后续的食品添加原料的研发，为传统的食药两用中药提供了新的开发途径。为中药向高端食品行业转化提供了新的技术路线。本发明对槐花单种药材的发酵，区别于其它组合发酵的形式，这种发酵方式影响因素少，利于观察槐花发酵液的口感及主要有效成分的变化。

技术特征：

1.改善槐花水提液苦涩感的微生物筛选方法及发酵工艺，其特征在于，包括以下步骤：

2.瑞士乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌在制备槐花产品中的应用。

3.瑞士乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌在改善槐花苦涩口味中的应用。

技术总结
本发明公开了一种改善槐花水提液苦涩感的微生物筛选方法及发酵工艺和应用，本发明以十种可食用微生物为发酵菌种，接种至槐花水提液，通过单菌发酵筛选出改善槐花口感效果较好的3种菌种，而后以筛选出的3种菌种为发酵菌种，设计不同菌种混合比例，筛选出发酵改善口感的最佳菌种组合，再运用响应面分析法，优化混合菌种发酵改善口感的工艺条件，获得混合菌种发酵改善槐花水提液口感的最佳工艺条件，可以明显改善槐花提取物苦、涩的不适口感，而且增加了发酵产物的有效成分黄酮含量，可制作成食品添加原料，更好的应用于槐花饮品的开发，为传统食药两用中药提供了新的开发途径，为中药向高端食品行业转化提供了新的技术路线。

技术研发人员：晋海军,田维毅,王国凯,龚荣英,杨灵丽,梁建东
受保护的技术使用者：贵州中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22