专利名称：分子沉积法多层固定化酶的制作方法
技术领域：
本发明是关于固定化酶及制备方法。
固定化酶是60年代酶学领域掘起的技术，对酶技术应用于大规模工业生产和酶传感器的开发起到了关键作用。目前已开发了许多固定化酶方法，包括包埋法、交联法和载体结合法等。其中载体结合法是将酶分子通过共价偶联或吸附使其与非水溶性载体结合，从而形成固定化酶。该方法由于酶分子只在载体表面(包括多孔载体内表面)单层结合，因此单位重量载体的酶活力受到限制。
本发明的目的是增加单位重量载体的固定化酶活力。
本发明的目的是这样实现的(1).把酶分子通过共价偶联或吸附使其与非水溶性载体结合形成单层固定化酶。
(2).把(1)中形成的单层固定化酶置于一有机电解质溶液中，放置0.5小时后使有机电解质分子沉积在酶分子表面，洗净抽干后，再置入酶溶液中放置6小时，使酶分子沉积在有机电解质表面，得双层固定化酶。
(3).重复(2)中步骤得多层固定化酶。
本发明提高了单位重量固定化酶的总活力，固定化方法简单，载体可再生，该固定化酶应用于工业生产可缩短反应周期，减少能量消耗，降低成本。
实施例用大孔强碱性聚苯乙烯球系季胺基阴离子交换树脂直接吸附葡萄糖异构酶，形成单层固定化酶，该固定化葡萄糖异构酶活力达11000-12000工业单位/克干载体。
把上述形成的单层固定化葡萄糖异构酶置入季胺基线性聚苯乙烯溶液中，放置0.5小时后洗净、抽干，再放入葡萄糖异构酶溶液中放置6小时，得双层固定化酶，该固定化双层葡萄糖异构酶活力达21000-22000工业单位/克干载体。
用此固定化双层葡萄糖异构酶装入指定管内形成固定床反应器，以pH值为8.0-8.5、浓度为40-42%的葡萄糖溶液为底物，在温度为60℃-62℃的条件下使底物通过反应器，则有42%的葡萄糖转化为果糖，该固定化双层葡萄糖异构酶在上述固定床反应器条件下半寿期为45天，生产能力为1公斤固定化葡萄糖异构酶可转化9500公斤葡萄糖(绝干物质)产生含42%果糖的果葡糖浆。
权利要求
1.一种分子沉积多层固定化酶的方法，它是把酶分子通过共价偶联或吸附使其与非水溶性载体结合，其特征在于a.把形成的单层固定化酶置于一有机电解质溶液中，放置一定时间后使有机电解质分子沉积在酶分子表面，洗净抽干后，再置入酶溶液中放置一定时间，使酶分子沉积在有机电解质表面，得双层固定化酶。b.重复a中步骤得多层固定化酶。
2.一种分子沉积多层固定化酶，其特征是在非水溶性载体上通过有机电解质分子和酶分子交替沉积而形成的多层固定化酶。
全文摘要
一种分子沉积法多层固定化酶及其方法。它是通过把用载体结合法形成的单层固定化酶，反复置入有机电解质溶液中和酶溶液中，使有机电解质分子和酶分子交替沉积，从而形成多层固定化酶。该固定化酶增加了单位重量固定化酶的总活力，方法简单，载体可再生。该固定化酶应用于工业生产可缩短反应周期、减少能量消耗和降低成本。
文档编号C12N11/08GK1087120SQ93116268
公开日1994年5月25日 申请日期1993年8月9日 优先权日1993年8月9日
发明者孔维, 王立平, 周慧, 李惟, 沈家骢 申请人:吉林大学