专利名称：一种苏云金杆菌(Bt)液体深层发酵工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种Bt菌液体深层发酵工艺，属生物技术领域。Bt菌属于一种微生物，国内外已广泛用于农作物及林、果、蔬菜和仓库害虫的防治。提高发酵水平，降低生产成本是进一步推广应用的关键。目前发达国家采用的工艺，发酵液效价可达到3000IU/mg (见国外生防P185)。我国八·五攻关取得重大进展，发酵水平已能达到2000-3000IU/mg(见国家八·五攻关总结)，但波动范围过大，毒力不稳定。
本发明的目的是要提供一种Bt液体深层发酵工艺，采用本工艺，可显著提高发酵液毒力效价，选用优良菌种发酵，发酵毒力效价可达到4500-5000IU(PX)/mg；发酵液毒力效价波动范围控制在20％以内；缩短发酵周期，有效地抗噬菌体干扰。
本发明的目的是这样实现的。用饲料酵母、豆饼粉、玉米粉、鱼粉、碳酸钙、氯化钾、豆油或其它消泡剂配制发酵培养基，经高温蒸汽消毒后降温至35℃接种，变温变风量搅拌通气发酵28-35小时，80％芽孢与伴孢晶体分离，90％以上芽孢成熟为发酵终点。发酵液经毒力检测后按行业标准要求，调配加工成粉剂或液剂。
下面结合实例对本发明作进一步说明。
1、配料鱼粉100-150kg，酵母粉60-70kg，玉米粉280-350kg，豆饼粉50-80kg，加水7600kg，调PH至7.5，加入0.3％碳酸钙，0.1％氯化钾，0.15％豆油，打入12立方米发酵罐，夹层或列管通蒸汽预热至80℃后，罐内直接通入蒸汽，维持0.15mPa搅拌消毒40分钟。
2、冷却至35℃接种，通气搅拌发酵。发酵采用变温、变风量发酵，温度变化过程是0-5小时 34±1℃5-8小时 31±1℃8-13小时28±1℃13-15小时 32±1℃15小时后34±1℃根据各项参数确定最大通气量为245立方米/小时，根据最大通气量确定风量变化过程是0-2小时80立方米/小时2-5小时120立方米/小时5-7小时150立方米/小时7-9小时220立方米/小时9小时以后 245立方米/小时发酵28-29小时取样镜检，80％芽孢与伴孢晶体分离，90％芽孢分化成熟，停止发酵，泵入后加工处理车间。
3、加入3％二甲苯，0.3％农孔-600，充分搅拌后取样生测，经生测毒力效价为4800IU(PX)/mg，加入2120kg自来水，充分搅拌后混匀，配制成4000IU(PX)/mg药液，再进行其它后处理，装瓶，即得毒力效价为4000IU(PX)/mg乳剂成品。
权利要求
1.一种苏云金杆菌(Bt)液体深层发酵工艺，包括配料、消毒、冷却、接种，发酵及风量和温度控制，生测步骤。其特征在于采用饲料酵母、豆饼粉、玉米粉、鱼粉、碳酸钙、氯化钾作为基本原料按比例配制培养基；在发酵过程中采用变风量、变温条件。
2.根据权利要求1所述的Bt液体深层发酵工艺，其特征是用饲料酵母、豆饼粉、玉米粉、鱼粉、碳酸钙、氯化钾按以下要求配制发酵培养基。(1)总固形物含量为4-9.5％(2)饲料酵母用量∶豆饼粉用量∶玉米粉用量∶鱼粉用量＝1.0∶1.0-1.8∶4.0-6.0∶3.0-5.0(3)培养基中碳酸钙含量为0.2-0.3％，氯化钾含量为0.05-0.1％(4)碳氮比为3.5-6.5∶1.0
3.根据权利要求1所述的Bt液体深层发酵工艺，其特征是采用变温发酵，温度与发酵时间的对应关系是0-4±1小时 34±1℃4±1-8±2小时31±1℃8±2-13±2小时 28±1℃13±2小时-15±1小时 32±1℃15±1小时34±1℃
4.根据权利要求1所述Bt液体深层发酵工艺，其特征是采用变风量发酵。发酵前要根据各项参数确定最大通气量Vgz，最大通气量Vgz的计算公式是0.00531Vgz＝πR2H＋πR2L－Vm＋VF＋0.667β(1＋P)[VT－R2π(H＋L)]式中，R发酵罐半径(米)Vgz最大通气量(立方米/小时)Vm.培养基体积(立方米)VF下封头体积(立方米)P发酵罐内压(公斤/平方厘米)VT消沫器以下发酵罐体积，如无消沫器，则为罐全体积(立方米)H上档搅拌器园盘距罐筒体下边缘垂直距离(米)β泡沫密度系数(吨/立方米)，与消沫剂性质及用量和培养基性质相关。风量与发酵时间的对应关系是0-2±1小时 1/3Vgz2±1-4±1小时1/2Vgz4±1-7±1小时3/5Vgz7±1-9±1小时8/9Vgz9±1小时后 1Vgz
全文摘要
本发明属于生物技术领域。一种苏云金杆菌(Bt)液体深层发酵工艺。该工艺采用饲料酵母、豆饼粉、玉米粉、鱼粉、CaCO、KCl制备发酵培养基，变温变风量通气搅拌发酵，发酵液毒力可达到4500-5000IU(PX)/mg，采用本工艺发酵，降压生产成本，稳定产品质量，缩小发酵液毒力效价波动范围，缩短发酵时间，有效排除噬菌体干扰。
文档编号C12N1/20GK1133884SQ9610078
公开日1996年10月23日 申请日期1996年2月8日 优先权日1996年2月8日
发明者王成球, 朱珠, 兰家谷, 吕玉平 申请人:王成球