一种水杨酸脱羧酶降解银杏酸的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，涉及一种水杨酸脱羧酶（Salicylic acid decarboxylase，Sdc)对银杏酸的降解的应用。
【背景技术】
[0002] 银杏在我国分布很广且历史悠久，其叶、种子等部位都有很高的应用价值。但在这 些部位普遍存在一种毒性成分一一银杏酸。
[0003] 银杏酸是一类邻羟基苯甲酸类化合物，包括C13:l、C15:l、C17:2、C15:0、C17:l 等，对人体有很大的危害。
[0004] 物理去除方法和化学去除方法是降解银杏酸的常用方法，国外的文献报道的较 少，国内曾使用微波和超临界萃取等方法脱除银杏酸，这些方法均需要利用有机溶剂对银 杏酸进行溶解，工艺复杂。在生物降解方面，李银亮等人在人工发酵银杏叶中银杏酸含量的 研宄中曾报道通过人工接种冠突散囊菌发酵银杏叶制作发酵茶可以降低其中银杏酸的含 量，但耗时较长，步骤较繁琐。
[0005] 通过检索，发现一篇与本专利申请相关公开专利文献：一种银杏酚酸的生物降 解方法（CN103053876)，该方法是在向含有一定浓度银杏酚酸的降解系统中加入0. 004U/ ml-0. 006U/ml的漆酶LacC的同时（降解体系的PH4. 0-6. 0,降解温度为45°C -60°C，降解 处理时间为l〇-24h)，加入介体物质，特别是加入ABTS，降解率最高可达100%。
[0006] 通过对比，上述公开的文献与本专利申请在技术方案方面有较大不同，获得的技 术效果不同。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种酶降解银杏酸的应用，提供另一种银杏酸的降解途 径。
[0008] 本发明实现目的的技术方案是：
[0009] 一种水杨酸脱羧酶降解银杏酸的应用。所述水杨酸脱羧酶的基因序列如序列1所 述。
[0010] 所述水杨酸脱羧酶讲解银杏酸的温度为5~80 °C，pH为3. 0~11. 0。
[0011] 所述银杏酸为包括银杏酸R = C13:0、银杏酸R = C15:0、银杏酸R = C15:1、银杏 酸 R = C17:l、银杏酸 R = C17:2。
[0012] 一种降解银杏酸的基因工程菌，含有序列如序列1所述的水杨酸脱羧酶。
[0013] 所述质粒载体为pET21a(+)。
[0014] 所述宿主菌为 E. coli BL21(DE3)。
[0015] 本发明的优点和有益效果为：
[0016] 1、本发明提供了一种可以降解银杏酸的酶，该酶为水杨酸脱羧酶Sdc，含有Sdc的 pET21a(+)-sdc/E. coli BL21(DE3)的细胞破碎液可明显降低银杏酸的含量。ImL其细胞破 碎液在40°C、pH= 5.5、5h内使银杏酸C15:l的含量降低了 39.017±0. 131%。
[0017] 2、本发明提供的水杨酸脱羧酶可以在较广的温度和pH范围内发挥对银杏酸的降 解作用，为银杏中取出银杏酸提供更加快捷便利的方法，为银杏的广泛利用提供更多可能 性。
【附图说明】
[0018] 图1为重组质粒pET21a(+)_sdc的构建；
[0019] 图 2 为 pET21a(+)_sdc 重组质粒的鉴定；M :maker (IOkb)，I :pET21a(+)_sdc 的单 酶切结果，2 :pET21a(+)-Sdc的双酶切结果；
[0020] 图3为对照组pET21a(+)重组质粒的鉴定。M :maker(10kb)，I :pET21a(+)的单酶 切结果；
【具体实施方式】
[0021] 下面通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限 定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
[0022] 本发明根据Kirimura等报道的基因序列，人工合成了 sdc基因，并构建该基因的 重组质粒，再将其转入宿主细胞中，将重组菌接种到培养基中培养一定时间，从中取一定量 的发酵液进行细胞破碎。称取一定量的银杏酸标准品，配置成溶液。将细胞破碎液和标准 品溶液混合后，反应一段时间，用LC-MS测定其中的银杏酸含量。
[0023] 其中，银杏酸是指一类2-羟基-6-烷基苯甲酸类化合物，包括银杏酸（R = C13:0)、银杏酸（R = C15:0)、银杏酸（R = C15:l)银杏酸（R = C17:l)银杏酸（R = C17:2) 等。
【主权项】
1. 一种水杨酸脱羧酶降解银杏酸的应用。
2. 根据权利要求1所述的水杨酸脱羧酶降解银杏酸的应用，其特征在于：所述水杨酸 脱羧酶的基因序列如序列1所述。
3. 根据权利要求1所述的水杨酸脱羧酶降解银杏酸的应用，其特征在于：所述水杨酸 脱羧酶讲解银杏酸的温度为5~80 °C，pH为3.O~11. 0。
4. 根据权利要求1所述的水杨酸脱羧酶降解银杏酸的应用，其特征在于：所述银杏酸 为包括银杏酸R=C13:0、银杏酸R=C15:0、银杏酸R=C15:1、银杏酸R=C17:1、银杏酸 R=C17:2〇
5. -种降解银杏酸的基因工程菌，其特征在于：含有序列如序列1所述的水杨酸脱羧 酶。
6. 根据权利要求1所述的降解银杏酸的基因工程菌，其特征在于：所述质粒载体为 pET21a(+)〇
7. 根据权利要求1所述的降解银杏酸的基因工程菌，其特征在于：所述宿主菌为 E.coliBL21(DE3) 〇
【专利摘要】本发明涉及一种水杨酸脱羧酶降解银杏酸的应用，所述酶的基因序列如序列1所述，该酶为水杨酸脱羧酶(Sdc)，含有Sdc的pET21a(+)-sdc/E.coli BL21(DE3)的细胞破碎液可明显降低银杏酸的含量，本发明的酶可以在较广的温度和pH范围内发挥对银杏酸的降解作用，为银杏中取出银杏酸提供更加快捷便利的方法，为银杏的广泛利用提供更多可能性。
【IPC分类】C12N15-60, C12N1-21, A23L1-015, C12R1-19
【公开号】CN104770624
【申请号】CN201510052113
【发明人】戴玉杰, 孙国娟, 孙紫悦, 钟永辉, 魏彧翘, 张会图
【申请人】天津科技大学
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年2月2日