防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，饲料及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，其为将益生菌接种到含中药的培养基中进行发酵制备而成，所述的中药包括如下重量份的组分：蟛蜞菊20～90份、天胡荽10～70份、仙鹤草25～85份、泽漆5～40份、仙人掌15～80份。其中，所述有益菌为嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、产阮假丝酵母菌和纳豆芽孢杆菌。本发明选择混合益生菌发酵中药组分，利用益生菌中丰富的酶系破解植物细胞壁，使大量活性物质溶出，从而提高活性成分的含量及药物的疗效。
【专利说明】
防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，饲料及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及中药微生态技术领域，具体涉及一种防治鸡新城疫的中药微生态颗粒 剂，饲料及其应用。
【背景技术】
[0002] 新城疫是由新城疫病毒引起的一种急性、高度致死性的禽类传染病，主要侵袭鸡 和火鸡，其它禽类也可感染。主要特征为呼吸困难、下痢、神经机能紊乱、粘膜和浆膜出血， 是危害鸡和火鸡饲养业最大的疫病之一，已给许多国家造成了严重的经济损失。目前，各 国使用新城疫疫苗控制该病，虽然取得较好的效果，但近年来，随国内养禽业的无序快速发 展，新城疫广为流行，在免疫过的鸡群，还有新城疫流行，发病主要集中在雏鸡、育成鸡及开 产至高峰期的产蛋鸡群。随着抗病毒西药的全面禁用，开发安全有效的中兽药愈发迫切，但 在防治新城疫过程中发现，常规中兽药制剂因有效成分不能得到充分利用导致新城疫防治 效果并不理想。
[0003] 中药发酵是近年来提出的新概念，而利用益生菌体外转化中兽药则是新的领域， 它是将生物工程技术引用到中兽药创新研究中，是对传统中兽药的突破，对中兽药制剂创 新和机体内生物利用度的提高具有积极作用，对推动中兽药现代化发展具有重要意义。
【发明内容】
[0004] 为了解决上述问题，本发明提供一种防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，饲料及 其应用。
[0005] 本发明首先提供一种防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，将益生菌接种到含中药 的培养基中进行发酵制备而成，所述的中药包括如下重量份的组分：蟛蜞菊20~90份、天 胡萎10~70份、仙鹤草25~85份、泽漆5~40份、仙人掌15~80份。
[0006] 优选地，所述的中药包括如下重量份的组分：蟛蜞菊35~70份、天胡荽30~55 份、仙鹤草30~60份、泽漆10~25份、仙人掌25~60份。
[0007] 更优选地，所述的中药包括如下重量份的组分：蟛蜞菊50份、天胡荽40份、仙鹤草 45份、泽漆15份、仙人掌40份。
[0008] 在本发明一个实施方案中，所述有益菌优选为嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、产阮 假丝酵母菌和纳豆芽孢杆菌。本发明不限定各益生菌的具体菌株类型，所有的菌种均可市 售获得。
[0009] 本发明还提供所述防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂的制备方法，包括以下步 骤： (1) 制备种子液 将嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、产阮假丝酵母菌、纳豆芽孢杆菌各自培养成二级种子 液备用； (2) 发酵培养基的制备：取配方量的中药，粉碎成100~150目药材细粉，装入发酵罐 中，加入占中药重量的0. 5~3%豆饼粉、0. 05~0. 3%硫酸铵、1~2%蔗糖，加水至含水量 在40~60%，调节pH至5. 5~7. 0,灭菌30min ; (3) 冷却后，按发酵物总重量的6~15%接入混合菌种液，于30~40°C恒温培养2~ 5天，每天搅拌2次，当活菌含量达到1. 0 X 10s~9cfu/ml时停止发酵； (4) 将成熟的固态发酵物加水超声提取2~3次，每次20~30min，合并提取液，过滤， 滤液减压浓缩至相对密度为1. 3~1. 4的稠膏，加入药学可接受的辅料或载体，制粒干燥。
[0010] 其中，所述混合菌液是由嗜酸乳杆菌二级种子液、保加利亚乳杆菌二级种子液、产 阮假丝酵母菌二级种子液、纳豆芽孢杆菌二级种子液按1:1~3:1~3:1~3的比例混合 而成。
[0011] 本发明的颗粒剂可以直接饲喂禽类，也可以作为饲料添加剂，或者添加到其它常 规的饲料添加剂、预混料、浓缩料或配合料中，因此，本发明还提供含有所述的防治鸡新城 疫的中药微生态颗粒剂的饲料添加剂、预混料、浓缩料或颗粒料。
[0012] 本发明还提供所述的防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂在制备治疗和/或预防 鸡新城疫药物中的应用。
[0013] 中兽医认为鸡新城疫属于瘟病，为外邪入侵机体所致，疫毒所到之处，气血瘀阻， 生热发炎。本发明的中药依中兽医理论进行组方：蟛蜞菊为君药，以清热解毒、化痰止咳、凉 血平肝；天胡荽为臣药，助主药清热利湿、祛痰之功；仙鹤草、泽漆为佐药，收敛止血、消炎 止痢、行水去热、泻肺降气；仙人掌为使药，协助君、臣、佐药起到行气活血、散瘀消肿、健脾 止泻之功效。诸药配伍，可协同增效，共奏清热解毒、凉血散瘀、泻火舒肝之功。
[0014] 本发明将传统中药与微生物转化有机结合得到一种新型中药微生态颗粒剂，具有 以下优势：以混合益生菌发酵不同的中药组分，利用益生菌中丰富的酶系破解植物细胞壁， 增加活性成分溶出，增强了药效；本发明的中药颗粒剂与普通颗粒剂相比，防治鸡新城疫的 效果更显著，且无残留，无毒副作用，无耐药性。
【具体实施方式】
[0015] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0016] 实施例1 本实施例的一种防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，是将益生菌嗜酸乳杆菌、保加利 亚乳杆菌、产阮假丝酵母菌和纳豆芽孢杆菌的二级种子液接种到含中药的培养基中进行发 酵制备而成，中药采用如下重量份的组分：蟛蜞菊50份、天胡荽40份、仙鹤草45份、泽漆15 份、仙人掌40份。
[0017] 上述中药微生态颗粒剂的制备方法，包括以下步骤： (1)益生菌种子液制备： 将嗜酸乳杆菌接种于MRS液体培养基中，35°C培养24h，当活菌含量达到1. 0X108~ 9cfu/ml时转接到二级种子液发酵罐扩大培养，接种量为3%，35°C培养，当二级种子液活菌 含量达到1. OX l〇s~ 9cfu/ml时，停止培养，备用； 将保加利亚乳杆菌接种于MRS液体培养基中，37°C，lOOrpm振荡培养24h，当活菌含 量达到1. 0X10S~ 9cfu/ml时转接到二级种子液发酵罐扩大培养，接种量为10%，在37°C， lOOrpm条件下培养，当二级种子液活菌含量达到1.0X10s~9cfu/ml时，停止培养，备用； 将产阮假丝酵母菌接种到麦芽汁培养基中，于30°C、200rpm培养20h，当活菌含量达到 1. Ο X 10s~9cfu/ml时转接到二级种子液发酵罐扩大培养，接种量为5%，培养温度30°C，搅 拌转速200rpm，二级种子液活菌含量达到1. OX 10s~ 9cfu/ml时，停止培养，备用； 将纳豆芽孢杆菌接种到KMB液体培养基中，37°C，250rpm培养12h，当活菌含量达到 1. OX 10s~ 9cfu/ml时转接到二级种子液发酵罐扩大培养，接种量为5%，培养温度37°C，搅 拌转速250rpm，二级种子液活菌含量达到1. OX 10s~ 9cfu/ml时，停止培养，备用； (2) 发酵培养基的制备：取配方量的中药材，粉碎成100目药材细粉，装入发酵罐中，加 入占中药重量的1. 5%豆饼粉、0. 15%硫酸铵、1. 5%蔗糖，加水至含水量在50%，调节pH至 6. 8,灭菌 30min ; (3) 冷却后，接入占发酵物总重量3%的嗜酸乳杆菌二级种子液、3%的产阮假丝酵母 菌、3%的纳豆芽孢杆菌和3%的保加利亚乳杆菌二级种子液，于35°C恒温培养2天，每天搅 拌2次，当活菌含量达到1. OX 10s~ 9cfu/ml时停止发酵； (4) 将成熟的固态发酵物加水超声提取3次，每次25min，合并提取液，过滤，滤液减压 浓缩至相对密度为1. 3的稠膏，加入稠膏重量42 %的蔗糖和8 %的糊精，制软材并过筛制 粒；湿颗粒60°C干燥，再整粒即得到防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂。每lg相当于原生 药lg。
[0018] 实施例2 本实施例的一种防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，是将益生菌嗜酸乳杆菌、保加利 亚乳杆菌、产阮假丝酵母菌和纳豆芽孢杆菌的二级种子液接种到包含中药的培养基中进行 发酵制备而成，中药采用如下重量份的组分：蟛蜞菊20份、天胡荽10份、仙鹤草25份、泽漆 5份、仙人掌15份。
[0019] (1)益生菌种子液制备同实施例1的（1)。
[0020] (2)发酵培养基的制备：取配方量的中药材，粉碎成120目药材细粉，装入发酵罐 中，加入占中药重量的1. 〇%豆饼粉、〇. 1%硫酸铵、2%蔗糖，加水至含水量在55%，调节pH 至 6. 5,灭菌 30min ; (3) 冷却后，接入占发酵物总重量3%的嗜酸乳杆菌二级种子液、3%的产阮假丝酵母 菌、3%的纳豆芽孢杆菌和3%的保加利亚乳杆菌二级种子液，于30恒温培养5,每天搅拌2 次，当活菌含量达到1. 〇X l〇s~ 9cfu/ml时停止发酵； (4) 将成熟的固态发酵物加水超声提取3次，每次25min，合并提取液，过滤，滤液减压 浓缩至相对密度为1. 35的稠膏，加入稠膏重量42%的蔗糖和8%的糊精，制软材并过筛制 粒；湿颗粒60°C干燥，再整粒即得到防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂。每lg相当于原生 药lg。
[0021] 实施例3 本实施例的一种防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，是将益生菌嗜酸乳杆菌、保加利 亚乳杆菌、产阮假丝酵母菌和纳豆芽孢杆菌的二级种子液接种到包含中药的培养基中进行 发酵制备而成，中药采用如下重量份的组分：蟛蜞菊35份、天胡荽30份、仙鹤草30份、泽漆 10份、仙人掌25份。
[0022] (1)益生菌种子液制备同实施例1的（1)。
[0023] (2)发酵培养基的制备：取配方量的中药材，粉碎成120目药材细粉，装入发酵罐 中，加入占中药重量的2%豆饼粉、0. 3%硫酸铵、1. 5%蔗糖，加水至含水量在48%，调节pH 至 6. 2,灭菌 30min ; (3) 冷却后，接入占发酵物总重量3%的嗜酸乳杆菌二级种子液、3%的产阮假丝酵母 菌、3 %的纳豆芽孢杆菌和3%的保加利亚乳杆菌二级种子液，于40培养2天，每天搅拌2 次，当活菌含量达到1. 〇X l〇s~ 9cfu/ml时停止发酵； (4) 将成熟的固态发酵物加水超声提取3次，每次25min，合并提取液，过滤，滤液减压 浓缩至相对密度为1. 4的稠膏，加入稠膏重量42 %的蔗糖和8 %的糊精，制软材并过筛制 粒；湿颗粒60°C干燥，再整粒即得到防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂。每lg相当于原生 药lg。
[0024] 实施例4 本实施例的一种防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，是将益生菌嗜酸乳杆菌、保加利 亚乳杆菌、产阮假丝酵母菌和纳豆芽孢杆菌的二级种子液接种到包含中药的培养基中进行 发酵制备而成，中药采用如下重量份的组分：蟛蜞菊70份、天胡荽55份、仙鹤草60份、泽漆 25份、仙人掌60份。
[0025] (1)益生菌种子液制备同实施例1的（1)。
[0026] (2)发酵培养基的制备：取配方量的中药材，粉碎成150目药材细粉，装入发酵罐 中，加入占中药重量〇. 5 %的豆饼粉、0. 05 %的硫酸铵、1 %的蔗糖，加水至含水量在40 %， 调节pH至5. 5,灭菌30min ; (3) 冷却后，接入占发酵物总重量3%的嗜酸乳杆菌二级种子液、3%的产阮假丝酵母 菌、3%的纳豆芽孢杆菌和3%的保加利亚乳杆菌二级种子液，于35°C恒温培养2天，每天搅 拌2次，当活菌含量达到1. OX 10s~ 9cfu/ml时停止发酵； (4) 将成熟的固态发酵物加水超声提取3次，每次25min，合并提取液，过滤，滤液减压 浓缩至相对密度为1. 34的稠膏，加入稠膏重量42%的蔗糖和8%的糊精，制软材并过筛制 粒；湿颗粒60°C干燥，再整粒即得到防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂。每lg相当于原生 药lg。
[0027] 实施例5 本实施例的一种防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，是将益生菌嗜酸乳杆菌、保加利 亚乳杆菌、产阮假丝酵母菌和纳豆芽孢杆菌的二级种子液接种到包含中药的培养基中进行 发酵制备而成，中药采用如下重量份的组分：蟛蜞菊90份、天胡荽70份、仙鹤草85份、泽漆 40份、仙人掌80份。
[0028] (1)益生菌种子液制备同实施例1的（1)。
[0029] (2)发酵培养基的制备：取配方量的中药材，粉碎成100目药材细粉，装入发酵罐 中，加入占中药重量的3%豆饼粉、0. 3%硫酸铵、2%蔗糖，加水至含水量在60%，调节pH至 7. 0,灭菌 30min ; (3) 冷却后，接入占发酵物总重量3%的嗜酸乳杆菌二级种子液、3%的产阮假丝酵母 菌、3%的纳豆芽孢杆菌和3%的保加利亚乳杆菌二级种子液，于35°C恒温培养2天，每天搅 拌2次，当活菌含量达到1. OX 10s~ 9cfu/ml时停止发酵； (4) 将成熟的固态发酵物加水超声提取3次，每次25min，合并提取液，过滤，滤液减压 浓缩至相对密度为1. 38的稠膏，加入稠膏重量42%的蔗糖和8%的糊精，制软材并过筛制 粒；湿颗粒60°C干燥，再整粒即得到防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂。每lg相当于原生 药lg。
[0030] 以下通过具体试验例来说明本发明的有益效果。
[0031] 试验例1本发明的颗粒剂体外抗新城疫病毒的试验 1、材料与方法 1. 1试验材料 药物：本发明实施例1的颗粒剂。对照药物：蟛蜞菊50份、天胡荽30份、仙鹤草45份、 泽漆15份及仙人掌40份，制成每lg相当于原生药lg的普通颗粒剂。
[0032] 鸡新城疫毒株：新城疫病毒F4SE9S，购自中国兽药监察所。
[0033] 试验鸡胚：SPF鸡胚，购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司。
[0034] 1%鸡红细胞悬液：无菌采鸡血，加抗凝剂，离心去血浆，沉淀用生理盐水清洗3次， 每次3000r/min离心10min，去掉上清液，红细胞用生理盐水配成1%的红细胞悬液。
[0035] 1. 2试验方法 1. 2. 1本发明的颗粒剂对鸡胚安全性测定 将本发明的颗粒剂以生理盐水配成质量浓度为125、62. 5、31. 25mg/mL的溶液，选择10 日龄健康鸡胚，随机分成3组，每组6枚，尿囊腔无菌接种0. 2 mL药液，并设生理盐水对照 组。37°C培养，72 h后鸡胚全部存活的药物质量浓度即为安全性质量浓度。
[0036] 1. 2. 2本发明的颗粒剂鸡胚内抑制鸡新城疫病毒增殖的试验方法 将病毒用生理盐水稀释为1血凝单位，常规方法制备10 μ L/mL鸡红细胞悬液。将本发 明的颗粒剂及对照药物分别配制成质量浓度为125mg/mL的溶液，给药剂量均为0. 2 mL，每 组6枚鸡胚。具体试验方法如下：（1)预防：每胚接种药液0.2 mL，37°C恒温培养1 h后， 接种病毒稀释液0. 1 mL ; (2)治疗：先接种病毒稀释液0. 1 mL，37°C恒温培养1 h后，接种 药液0. 2 mL ; (3)药毒混合：将病毒稀释液与药液混合（V病毒稀释液：V药液=1 :2)，置 室温1 h后，接种鸡胚，每胚0. 3 mL。病毒对照组：将病毒稀释液接种鸡胚，每胚0. 1 mL，1 h后接种生理盐水0. 2 mL。
[0037] 各组接种完毕后于37°C恒温培养，每隔12 h观察1次，弃去24h内死亡的鸡胚，收 取24~72 h死胚和72 h活胚尿囊液，低温保存备用。以血凝（HA)试验检测每组鸡胚尿 囊液的病毒滴度。用SPSS软件对数据进行统计分析。
[0038] 2、试验结果 2.1本发明的颗粒剂对鸡胚安全性结果 经过2次重复试验，接种浓度为125、62. 5和31. 25mg/mL的本发明颗粒剂溶液各组的 鸡胚全部存活(见表1)。因此，将125mg/mL的浓度为正式试验起始浓度。
[0039] 表1药物对鸡胚毒性的试验结果
2. 2本发明的颗粒剂对鸡新城疫病毒在鸡胚内增殖的抑制作用 结果见表2。
[0040] 表2鸡胚红细胞凝集素测定结果（HA)
注："*"表示药物组与病毒对照组相比差异显著（P〈〇. 05) 表示药物组与病毒对 照组相比差异极显著（P〈〇. 01);同一列中字母相同者差异显著（P〈〇. 05)，字母不同者差异 极显著（Ρ〈〇·〇1)。
[0041] 由表2可知本发明颗粒剂在预防、治疗及药毒混合试验中均显示出抑制鸡新城疫 病毒在鸡胚内增殖的作用，与病毒对照组比较差异极显著；药毒混合效果均显著好于预防 和治疗，而预防效果则好于治疗效果。对照药物为普通颗粒剂，处方与本发明实施例1的颗 粒剂相同，同样质量浓度也具有抑制新城疫病毒在鸡胚内增殖的作用，但与本发明的颗粒 剂相比，无论在预防、治疗或药毒混合效果上均存在显著性差异，说明本发明的中药经过混 合菌种转化后可以提1?其疗效。
[0042] 试验例2本发明的颗粒剂对人工感染新城疫的防治效果 1、材料 1. 1试验药物本发明实施例1的颗粒剂。
[0043] 1.2鸡新城疫毒株由本实验室保存。
[0044] 1.3试验动物 1日龄罗曼蛋公鸡，由北京某种鸡厂提供。
[0045] 2、试验方法 2. 1动物分组 1日龄罗曼蛋公鸡，饲养至母源抗体为〇时，选出240只健康的小公鸡，随机分成8组， 每组30只。即阴性对照组、阳性对照组、本发明的颗粒剂预防1、2、3组、本发明的颗粒剂治 疗1、2、3组。喂全价饲料，自由饮水。阳性对照组鸡与其它组鸡分开饲养。
[0046] 2. 2 攻毒 将新城疫病毒尿囊液用灭菌生理盐水稀释成109，除阴性对照组鸡不攻毒外，其余各 组鸡均按每只鸡0. lml滴鼻。
[0047] 2.3用药方法 阴性对照组鸡和阳性对照组鸡不给药。预防1、2、3组，颗粒剂分别按每公斤体重0. 1、 0. 2、0. 4g给药。攻毒前7天开始给药，每天1次，自由饮用(饮用前禁水3小时)，连用7天， 攻毒后不给药。治疗1、2、3组，于攻毒后出现症状开始按每公斤体重0. 2、0. 4、0. 8g剂量给 药，用药方法同预防组，连用7天。攻毒后观察各组鸡的临床症状和病理变化，并比较其严 重程度，记录鸡的死亡和存活数。观察病症出现的潜伏期，观察至攻毒后15天结束。
[0048] 3、试验结果 阴性对照组鸡全部正常，未出现死亡。攻毒各组的潜伏期为3~7天，阳性对照组最短 为3天，治疗3组的潜伏期最长，为7天。所见症状主要有：精神萎靡、食欲不振，羽毛散乱， 排黄绿色稀便，病鸡口腔粘液增多，呼吸困难，少数鸡出现神经症状。功毒后死亡的鸡剖检 可见腺胃黏膜、乳头有出血点，腺胃肿胀，喉头、气管有大量粘液，黏膜有出血点。泄殖腔和 小肠粘膜均有明显出血点，盲肠扁桃体肿胀、出血。用药组鸡的病变较阳性对照组轻。试验 结果见表3。
[0049] 表3本发明的颗粒剂对鸡新城疫病预防与治疗结果
由上表可见，预防2, 3组的存活率与阳性对照组比较，差异极显著（P < 0. 01);治疗2， 3组的存活率与阳性对照组比较，差异极显著（P < 0. 01)，预防3组和治疗3组鸡的存活率 均为100%，说明本发明的颗粒剂按每公斤体重0.4g剂量给药可有效预防鸡新城疫，按每 公斤体重〇. 8g剂量给药对新城疫可起到很好的治疗效果。
[0050] 试验例3本发明的颗粒剂对肉鸡新城疫的治疗 1、试验动物 试验动物为天津某鸡场自然感染发病的肉鸡，根据临床症状、剖检症状及实验室诊断 确诊为鸡新城疫。
[0051] 2、试验药物 本发明的中药微生态颗粒剂(实施例1-5制备);对照药物：蟛蜞菊50份、天胡荽30份、 仙鹤草45份、泽漆15份及仙人掌40份，制成每lg相当于原生药lg的普通颗粒剂。
[0052] 3、试验方法 3. 1分组及用药方法 将自然发病肉鸡630只，平均分成7组。试验组一饮水给药本发明实施例1的颗粒剂， 试验组二饮水给药本发明实施例2的颗粒剂，试验组三饮水给药本发明实施例3的颗粒剂， 试验组四饮水给药本发明实施例4的颗粒剂，试验组五饮水给药本发明实施例5的颗粒剂， 试验组六饮水给药对照药物，试验组七为空白对照组，不做任何处理，让鸡自由采食和饮 水。其中一至六组的给药剂量均按每公斤体重0. 8g饮水给药(用药前禁水3小时)。
[0053] 3. 2观察指标 用药后每天观察各组鸡精神状况，记录采食量、死亡数等，连续15天，治疗后15天做病 原学检测。
[0054] 4、疗效判断标准 无效率：试验结束后，临床症状没有改变，甚至加重或死亡的鸡占该组鸡的比例；有效 率：试验结束后，临床症状逐渐消失，采食量逐渐恢复鸡占该组鸡的比例；治愈率：试验结 束后，临床症状消失，采食量完全恢复，且病原学检测呈阴性的鸡占该组鸡的比例。
[0055] 5、临床治疗结果见表4。
[0056] 表4本发明的颗粒剂对鸡新城疫的治疗结果
6、结论 从以上试验可以看出，本发明实施例1~5的总有效率和治愈率均比对照药物组高，差 异极显著（P〈〇. 01)，说明本发明的中药经过益生菌发酵后制成的颗粒剂比不发酵的普通颗 粒剂疗效好，其中本发明实施例1的治愈率最高，无效率最低。
[0057] 试验例4本发明的颗粒剂对产蛋高峰期蛋鸡新城疫抗体水平的影响 1、材料与方法 1. 1试验药物：本发明实施例1的颗粒剂。
[0058] 1. 2试验动物及分组 在河北某养鸡场，将常规免疫处理的45周龄200只健康蛋鸡随机分成4组，每组设5 个重复，每个重复10只。1组为空白对照组，不添加任何药物，2、3、4组分别按每公斤体重 0. 1、0. 2、0. 4g给予本发明的颗粒剂，每天1次集中自由饮用，连续给药15天。
[0059] 1. 3血样采集及抗体滴度的测定 分别于试验第7、14、21、28天，于各组每个重复随机抽取1只鸡静脉采血5ml，离心，采 用血凝抑制试验测定血清的抗体滴度，每组以5只鸡血清抗体滴度的平均值表示该组的抗 体水平。
[0060] 2、结果 试验结果见表5。
[0061] 表5本发明的颗粒剂对蛋鸡新城疫抗体滴度的影响
从表5可以看出，第4组第7、14、21、28天的抗体滴度与对照组比较，差异显著（？ < 0. 05)，第2组第14、21天的抗体滴度与对照组比较，差异显著（P < 0. 05)，第3组仅第 14天的抗体滴度与对照组比较，差异显著（P < 0. 05)，其它时间的血清抗体滴度与对照组 比较无显著性差异。这一结果表明，以每公斤体重0. 4g剂量应用本发明的颗粒剂能显著提 高产蛋高峰期蛋鸡的新城疫抗体滴度。
[0062] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰 也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，其特征在于，将益生菌接种到含中药的培 养基中进行发酵制备而成，所述的中药包括如下重量份的组分：蟛蜞菊20~90份、天胡荽 10~70份、仙鹤草25~85份、泽漆5~40份、仙人掌15~80份。2. 根据权利要求1所述的防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，其特征在于，所述的中 药包括如下重量份的组分：蟛蜞菊35~70份、天胡荽30~55份、仙鹤草30~60份、泽漆 10~25份、仙人掌25~60份。3. 根据权利要求1所述的防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，其特征在于，所述的中 药包括如下重量份的组分：蟛蜞菊50份、天胡荽40份、仙鹤草45份、泽漆15份、仙人掌40 份。4. 如权利要求1~3任一项所述的防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂，其特征在于，所 述有益菌为嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、产阮假丝酵母菌和纳豆芽孢杆菌。5. 权利要求1~4任一项所述的防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂的制备方法，其特征 在于，包括以下步骤： (1) 制备种子液 将嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、产阮假丝酵母菌、纳豆芽孢杆菌各自培养成二级种子 液备用； (2) 发酵培养基的制备：取配方量的中药，粉碎成100~150目药材细粉，装入发酵罐 中，加入占中药重量的〇. 5~3%豆饼粉、0. 05~0. 3%硫酸铵、1~2%蔗糖，加水至含水量 在40~60%，调节pH至5. 5~7. 0,灭菌30min ; (3) 冷却后，按发酵物总重量的6~15%接入混合菌种液，于30~40°C恒温培养2~ 5天，每天搅拌2次，当活菌含量达到1. 0 X 10s~9cfu/ml时停止发酵； (4) 将成熟的固态发酵物加水超声提取2~3次，每次20~30min，合并提取液，过滤， 滤液减压浓缩至相对密度为1. 3~1. 4的稠膏，加入药学可接受的辅料或载体，制粒干燥。6. 根据权利要求5所述的防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂的制备方法，其特征在 于，所述混合菌液是由嗜酸乳杆菌二级种子液、保加利亚乳杆菌二级种子液、产阮假丝酵母 菌二级种子液、纳豆芽孢杆菌二级种子液按照1 :1~3 :1~3 :1~3的比例混合而成。7. 含有权利要求1~4任一项所述的防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂的饲料添加剂、 预混料、浓缩料或颗粒料。8. 权利要求1~4任一项所述的防治鸡新城疫的中药微生态颗粒剂在制备治疗和/或 预防鸡新城疫药物中的应用。
【文档编号】A61K9/16GK105831391SQ201510022049
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2015年1月16日
【发明人】黄建茹, 刘澜, 韩科厅
【申请人】北京大北农动物保健科技有限责任公司, 韶山大北农动物药业有限公司, 北京伟农生物科技有限公司, 北京大北农科技集团股份有限公司