益生菌稳定化的制作方法

益生菌稳定化的制作方法
【专利摘要】本发明涉及包含益生菌的可摄取的组合物，所述益生菌包含在磷脂和甘油酯的混合物中，对婴儿和儿童的营养有用。
【专利说明】
益生菌稳定化
技术领域
[0001] 本公开设及用于个体摄取的生物材料的稳定化。更具体而言，本公开设及包含至 少一种憐脂和至少一种甘油醋的稳定化的混合物，当益生菌包含在营养组合物中时，所述 至少一种憐脂和至少一种甘油醋一起向益生菌生物体提供改进的稳定性。本公开还包括益 生菌稳定化方法。
【背景技术】
[0002] 当前存在用于补充人和动物两者的营养的各种各样的组合物。可W提供运些补充 物W改变、降低或提高个体的肠道内的微生物群，从而对消化产生期望的作用。理想地，补 充可W基于改变人体的胃肠(GI)道内的特定细菌为个体(包括人)培养改进的微生物群。运 种类型的补充可W通过使用益生菌进行，所述益生菌理解为存活的微生物，当W有效量给 予时，其向宿主赋予健康或营养益处。较常见的类型的益生菌之一为乳酸菌，其能够将糖和 其他碳水化合物转化成乳酸。运种转化降低宿主的肠道内的抑并向有害生物体提供较少生 长和通过胃肠感染引起问题的机会。
[0003] 常见的技术挑战为W既针对益生菌的保持又针对个体的健康和愉快的合适方式 将益生菌引入到宿主中。当前的技术包括采用包封和稳定化技术W用保护层或基质防护益 生菌，从而可W将经保护的微生物送到个体的GI道内的适当位置。
[0004] 尽管存在设及包含微生物W递送到动物的消化系统的包封和稳定化技术的发展， 在保护益生菌在分配和储存期间的生存能力的包封或稳定化技术中几乎没有发展。在排除 制冷的情形下，W及进一步在运种制剂可W暴露到各种环境(尤其是与热带气候相关的那 些)的情况下，对有用的稳定化技术存在需要。另外，产物的固有水分具有挑战性，原因是益 生菌一般对水(尤其是与高溫的组合)具有敏感性。迄今为止，没有技术或技能被认为当加 到营养配方中时在中等水分条件（即约0.2和更高且至多约0.4或更高的水活性)和在分配 和储存期间的高溫（即至少约30°C，且至多和高于40°C的溫度）下向益生菌递送充分的保 护。
[0005] 具体而言，益生菌可W向宿主提供各种各样的益处，例如保持健康的胃肠菌群，增 强免疫力，防止腹泻、特应性皮炎和其他疾病等。因此，需要在各种地理位置(包括热带气 候）中给予益生菌，在热带气候中益生菌的生存能力会受到损害。常规的包封和稳定化技术 具有不适用于婴儿配方和/或被儿童使用的化学组成，或已知技术具有显著限制商业机会 的差的稳定性特征。
[0006] 因此需要使用婴儿配方或儿童的营养的可接受成分的稳定化技术和稳定化的细 菌混合物，所述稳定化的混合物允许改进稳定性性质，从而益生菌可W在各种各样的地理 位置和气候中分配，同时保持有用的储存寿命。还需要保护用于营养组合物例如婴儿配方、 补充物和儿童产品的益生菌(例如鼠李糖乳酸菌(rAa皿3〇st/s))的稳定化技 术。实际上，包括与营养因素组合的改进的稳定性的特征的组合，提供适用于产前、婴儿和 儿童的营养的改进的稳定化的混合物。

【发明内容】

[0007]在一些实施方案中，本公开设及包含蛋白质源和益生菌的营养组合物，其中所述 益生菌在保护基质中稳定化，所述保护基质包含至少一种憐脂和至少一种甘油醋。
[000引在运些实施方案中，所述营养组合物包含存活的微生物细胞，例如存活的鼠李糖 乳酸菌细胞。而且，所述基质可W包含水解蛋白质源、果胶、另外的脂质或其任何组合。所述 营养组合物可W为粉末的配方，例如粉末的婴儿配方。而且，所述至少一种甘油醋可W包括 甘油单醋、甘油二醋或其任何组合。
[0009] 在另一个实施方案中，本公开设及保护用于粉末的营养组合物的存活的益生菌的 方法，所述方法包括W下步骤：（i)提供存活的益生菌，（ii)通过将至少一种憐脂和至少 一种甘油醋共混在一起制备用于益生菌的保护基质，和（iii)组合所述存活的益生菌、所 述保护基质和水W产生混合物;和（iv)将步骤(iii)的混合物干燥至约4%或更少的最终水 分含量。运种方法可W包括另外的步骤:a)将所述干燥混合物加到粉末的营养产品，或b) 将步骤(iv)的干燥混合物包封在胶囊中。在运样的一个实施方案中，所述存活的益生菌可 W为鼠李糖乳酸菌、长双歧杆菌BB536、长双歧杆菌婴儿亚种35624、动物双歧杆菌乳酸亚种 BB-12或其任何组合。
[0010] 技术人员在考虑W下描述时变得显而易见的运些方面和其他方面可W通过提供 用于生物材料例如益生菌的稳定化的憐脂和甘油醋混合物来实施，W提供提高的生物材料 稳定性，产生生物材料的改进、长期的生存能力。在一个实施方案中，所述稳定化的混合物 有利地延长益生菌的储存寿命。所述稳定化的混合物可各种各样的方法与益生菌组 合，所述方法包括用于保存益生菌的冷冻干燥、空气干燥、真空干燥、喷雾干燥及其任何组 厶 1=1 〇
[0011] 应当理解W上概述和W下详述两者提供本公开的实施方案且旨在向其所要求保 护的本公开的性质和特征提供理解的综述或框架。
[00。]实施本发明的最佳方式 现在将详细提及本公开的实施方案，在下文描述其一个或多个实例。通过解释本公开 的营养组合物提供各个实例且并不是限制。实际上，本领域技术人员显而易见的是在不偏 离本公开的范围的情况下，可W对本公开的教导进行各种修改和改变。例如，作为一个实施 方案的部分说明或描述的特征可W与另一个实施方案一起使用W产生又一个实施方案。
[0013] 因此，本公开旨在涵盖在随附权利要求及其等价物内进行的运些修改和改变。本 公开的其他目的、特点和方面在W下详述中公开或由W下详述而显而易见。本领域普通技 术人员应当理解本发明的讨论只是例示性实施方案的描述，且并不旨在限制本公开的更广 泛的方面。
[0014] 本公开提供稳定化技术和稳定化（stabilized)混合物（在文中还称为"稳定化 (stabilization)混合物"或"保护基质"），其可W用于改进生物材料（在文中还称为"基 材"）的稳定性。在本公开的实施方案中，所述稳定化基材可W为益生菌，其中在摄取包含稳 定化益生菌的营养组合物时，可W将与稳定化益生菌相关的各种健康益处赋予到个体。
[0015] 虽然认为益生菌具有营养益处，一般认为如果益生菌微生物在微生物仍存活时被 受试者摄取的话，将使益生菌的有益作用最大化。因此，存活的益生菌需要经受住生产和配 置到可消耗的营养组合物(例如食物或饮料）中的条件，w及在产品被摄取和引入到受试者 的胃肠道之前经受住随后的运输和存储时间。许多常规的益生菌组合物采用极其高计数的 存活细胞，且应当理解相当大数目的细胞最终在生产过程、运输和储存期间失去生存能力 并死亡。
[0016] 通过实施本公开，将包含至少一种憐脂和/或至少一种甘油醋的脂质组分加到保 护基质中。所述憐脂和/或甘油醋提高被基质保护的益生菌的稳定性。因此，婴儿和儿童相 容的益生菌可W用包含至少一种憐脂和/或至少一种甘油醋的基质稳定化。在一些实施方 案中，所述基质还包含至少一种另外的脂质，即是至少一种除了憐脂和甘油醋之外的脂质。 由于益生菌呈现出改进的生存能力，所述稳定化益生菌可W用于多种环境。有利地，由于所 述益生菌即使在延长的运输和储存时间之后也将保持生存能力(运是由于稳定化的混合物 的改进稳定性），可W将被本公开的保护基质稳定化的益生菌加到营养组合物中且在经受 潜在损害的溫度波动的延长距离上运输。
[0017] 向益生菌提供稳定化的本发明的方法可W包括使用用于使生物材料稳定化的基 质，其中所述基质包含憐脂、甘油醋和另外的组分，例如一种或多种另外的脂质、一种或多 种碳水化合物和/或化合物粘合剂。
[0018] 虽然保护基质可W用于各种各样的物质，在一个实施方案中，其用于保护至少一 种益生菌，例如鼠李糖乳酸菌。应当理解鼠李糖乳酸菌具有相对良好的生物稳定性，同时对 人肠内粘膜细胞具有高的亲合力。在用作益生菌时，认为鼠李糖乳酸菌定植消化道并平衡 肠内的微生物群。
[0019] 所述保护基质提供益生菌的改进稳定性，运意味着较大百分比的益生菌细胞在加 工、运输和储存条件之后存活。具体而言，当与其他已知的稳定化技术相比时，改进了存活 的益生菌的储存寿命。
[0020] 本公开的保护基质可W用于形成稳定化益生菌产品的多种方法。运些方法包括冷 冻、速冻、冷冻干燥、环境空气干燥、真空干燥、喷雾干燥、低溫干燥及其任何组合。所得的稳 定化益生菌，不管是单独的或整合到营养组合物中，在宽范围的溫度和条件中具有有效的 生存能力，同时呈现改进的储存寿命。而且，可W将所述稳定化益生菌加到各种各样的产 前、婴儿和儿童的营养产品中W改进其肠道微生物群，同时向婴儿或儿童提供营养。
[0021] 因此，在一个实施方案中，本公开设及用于使营养组合物中的生物材料稳定化的 方法。另一个实施方案为用于益生菌的保护基质。又一个实施方案为提高益生菌的储存寿 命的方法，所述方法包括用包含憐脂、甘油醋或其任何组合的稳定化的混合物使益生菌稳 定化。
[0022] 本公开提供新颖的稳定化的混合物和向生物材料例如存活的微生物提供稳定性 和保护的方法。本公开包括包含憐脂和甘油醋的稳定化的混合物，所述憐脂和甘油醋一起 提供保护基质，导致相对于未经保护的益生菌提高了储存寿命。
[0023] 定义 术语护基质"、"稳定化基质"和"稳定化的混合物"可在本发明的整个公开内容中互 换使用。
[0024] 文中所用的"有效量"一般定义为在所给予到的受试者内提供可观察到的结果的 试剂的量。
[0025] "营养组合物"表示满足受试者的营养素需求的至少一部分的物质或制剂。术语 "营养剂"、"营养配方"、"肠内营养剂"和"营养补充剂"在本发明的整个公开内容中用作营 养组合物的非限制性实施例。而且，"营养组合物"可W指液体、粉末、凝胶、膏剂、固体、浓缩 物、悬浮液或肠内配方、口腔配方、婴儿配方、儿科受试者配方、儿童配方、成长乳和/或成人 配方的即用型形式。
[0026] 术语"肠内"表示可通过胃肠或消化道递送或在胃肠或消化道内递送。"肠内给予" 包括到消化道中的口腔喂养、胃内喂养、经幽口给予或任何其他的给予。"给予"比"肠内给 予"更加广泛且包括胃肠外给予或由此将物质摄取到受试者的身体中的任何其他的给予途 径。
[0027] "儿科受试者"表示年龄小于13岁的人。在一些实施方案中，儿科受试者是指小于8 岁的人类受试者。在其他实施方案中，儿科受试者是指年龄为1-6岁的人类受试者。在又一 个实施方案中，儿科受试者是指年龄为6-12岁的人类受试者。
[0028] "婴儿"表示年龄从出生至不超过1岁的范围的人类受试者且包括0-12个月矫正年 龄的婴儿。短语"矫正年龄"表示婴儿的实足年龄减去婴儿早产的时间量。因此，如果怀胎已 达足月，矫正年龄为婴儿的年龄。术语婴儿包括低出生重量的婴儿、非常低出生重量的婴儿 和早产婴儿。"早产婴儿"为在少于约37周妊娠之后出生的婴儿。文中所用的"足月婴儿"表 示在至少约37周妊娠之后出生的婴儿。
[0029] "儿童"表示年龄为12个月-约12岁范围的受试者。在一些实施方案中，儿童为年龄 为1-12岁的受试者。在其他实施方案中，术语"儿童(children)"或"儿童（chiId)"指1-约6 岁或约7-约12岁的受试者。在其他实施方案中，术语"儿童(children)"或"儿童(child)"指 年龄为12个月-约12岁的任何范围。
[0030] "儿童的营养产品"是指满足儿童的营养素需求的至少一部分的组合物。成长乳 (GUM)为儿童的营养产品的例子。
[0031] 文中所用的"水解蛋白质"表示蛋白质水解产物。在本公开内，水解蛋白质和蛋白 质水解物可互换地用于描述蛋白质水解产物;充分水解的蛋白质用于描述其中至少70%、更 优选至少约90%的水解蛋白质具有少于2000道尔顿的分子量的蛋白质水解产物。
[0032] 术语"水解度"是指至肤键被水解方法破坏的程度。
[0033] 术语"不含蛋白质"表示包含不可测量的量的蛋白质，如通过标准蛋白质检测方法 例如十二烷基（月桂基)硫酸钢-聚丙締酷胺凝胶电泳(SDS-PAGE)或分子排阻色谱测量。在 一些实施方案中，所述营养组合物基本上不含蛋白质，其中"基本上不含"在下文限定。
[0034] "婴儿配方"表示满足婴儿的营养素需求的至少一部分的组合物。在美国，婴儿配 方的内含物通过在21C.F.R.第100、106和107章中描述的联邦法规指定。运些法规限定常量 营养素、维生素、矿物质和其他成分水平，W致力于模拟人体母乳的营养和其他性质。
[0035] 术语"成长乳"是指宽类别的营养组合物，其旨在用作多样化膳食的一部分W便支 持年龄为约1-约6岁的儿童的正常生长和发育。
[0036] "基于乳的"表示包含从哺乳动物的乳腺汲取或提取的至少一种组分。在一些实施 方案中，基于乳的营养组合物包含衍生自驯养的有蹄动物、反当动物或其他哺乳动物或其 任何组合的乳的组分。而且，在一些实施方案中，基于乳的表示包含牛酪蛋白、乳清、乳糖或 其任何组合。而且，"基于乳的营养组合物"可W指包含本领域已知的任何乳衍生的或基于 乳的产品的任何组合物。
[0037] "营养完全"表示可W用作营养唯一来源的组合物，其将供应基本上所有的所需要 的日常量的维生素、矿物质和/或痕量元素 W及蛋白质、碳水化合物和脂质。实际上，"营养 完全"描述营养组合物，其提供支持受试者的正常生长和发育所需要的足够量的碳水化合 物、脂质、必需脂肪酸、蛋白质、必需氨基酸、条件必需氨基酸、维生素、矿物质和能量。
[0038] 对于早产婴儿"营养完全"的组合物将通过定义定性和定量地提供早产婴儿生长 所需要的足够量的所有碳水化合物、脂质、必需脂肪酸、蛋白质、必需氨基酸、条件必需氨基 酸、维生素、矿物质和能量。对足月婴儿"营养完全"的组合物将通过定义定性和定量地提供 足月婴儿生长所需要的足够量的所有碳水化合物、脂质、必需脂肪酸、蛋白质、必需氨基酸、 条件必需氨基酸、维生素、矿物质和能量。对儿童"营养完全"的组合物将通过定义定性和定 量地提供儿童生长所需要的足够量的所有碳水化合物、脂质、必需脂肪酸、蛋白质、必需氨 基酸、条件必需氨基酸、维生素、矿物质和能量。
[0039] 当应用到营养素时，术语"必需"是指无法通过身体W足W正常生长和保持健康的 量合成且因此必需通过膳食供应的任何营养素。当应用到营养素时，术语"条件必需"表示 在身体无法获得足够量的前体化合物W进行内生合成的条件下，营养素必须由膳食供应。
[0040] 术语"益生菌"表示对宿主的健康发挥有益作用的具有低的或没有致病性的微生 物。"存活的益生菌"表示对宿主的健康发挥有益作用的存活或活性的微生物。
[0041] 术语"失活益生菌"或"失活LGG"表示其中所提及的益生菌或鼠李糖乳酸菌GG (LGG)生物体的代谢活性或繁殖能力降低或损害的益生菌。在一个实施方案中，益生菌可W 为存活的或非存活的。文中所用的术语"存活的"是指存活的微生物。术语"非存活的"或"非 存活的益生菌"表示非存活的益生菌微生物、其细胞组分和/或其代谢物。运种非存活的益 生菌可W被热杀死或W其他方式失活，但它们保留有利影响宿主的健康的能力。本公开中 有用的益生菌可W为天然存在的、合成的或通过生物体的基因操作开发的，不管运种源现 在是已知的或之后开发的。
[0042] "益生元(9'日13；[01:;[(3)"表示通过选择性刺激个体的生长和/或活性有利影响宿主 的不可消化的食物成分或可W改进宿主的健康的在消化道中的有限量的细菌。
[0043] "植物营养素"表示在植物中天然存在的化学化合物。植物营养素可W包含在任何 植物衍生的物质或提取物中。术语"植物营养素"涵盖多种由植物产生的宽类别化合物，例 如，多酪类(polyphenolic)化合物、花青素、原花色素和黄烧-3-醇（即儿茶素、表儿茶素）， 且可W例如衍生自水果、巧或茶提取物。而且，术语植物营养素包括所有的类葫萝l·素、植物 固醇、硫醇和其他植物衍生的化合物。
[0044] "β-葡聚撒'表示所有的β-葡聚糖，包括特定类型的β-葡聚糖，例如β-1，3-葡聚糖 或β-1，3;1，6-葡聚糖。而且，β-1，3;1，6-葡聚糖为一类β-1，3-葡聚糖。因此，术语巧-1,3-葡 聚糖"包括0-1，3; 1,6-葡聚糖。
[0045] "果胶"表示包含可W在植物的细胞壁中发现的半乳糖醒酸的任何天然存在的寡 糖或多糖。而且，果胶可W包含具有由D-化喃半乳糖醒基（galac化ronopyranosyl)形成的 多种链长度的分子。具有变化的物理和化学性质的不同种类和级别的果胶在本领域中已 知。实际上，果胶的结构可W在植物之间、在组织之间且甚至在单细胞壁之间显著变化。一 般地，果胶由带负电荷的酸性糖(半乳糖醒酸)组成且一些酸性基团为甲基醋基团的形式。 果胶的醋化程度为连接到用甲醇醋化的化喃半乳糖基糖醒酸单元的簇基基团的百分比的 量度。
[0046] 具有小于50%的醋化程度（即将小于50%的簇基基团甲基化W形成甲基醋基团）的 果胶分为低醋、低甲氧基或低甲基化（"LM")的果胶，而具有50%或大于50%的醋化程度（即将 超过50%的簇基基团甲基化）的那些分为高醋、高甲氧基或高甲基化（"HM")的果胶。很低 ("VL")的果胶，一个低甲基化的果胶的子集，具有小于约15%的醋化程度。而且，在一些实施 方案中，果胶分子具有与其本身和/或与二价阳离子例如巧通过静电相互作用来相互作用 的能力W形成高分子量网络和凝胶。醋化程度影响运些分子间相互作用的程度。
[0047] "脂质"是指可W包括游离脂肪酸和/或其中脂肪酸被醋化成W下物质的径基基团 的分子的疏水分子，所述物质为：（i)糖，例如单糖或二糖，（ii)醇，其中所述醇可W包含 例如长的或中等的碳链长度（10-20单元），或（iii)甘油。运些醋化的脂肪酸或游离脂肪酸 可W为直链的、饱和或不饱和的。而且，在一些实施方案中，脂质组分包含甘油醋、憐脂、銷 氨醇衍生的分子(例如神经节巧脂、脑巧脂和神经銷憐脂)或其任何组合。且在某些实施方 案中，脂质组分还包含疏水性质的分子，例如类固醇、类葫萝l·素和/或脂肪可溶的维生素。 [004引"甘油醋"表示衍生自甘油或糖主链的任何分子，其中用脂肪酸将径基基团中的一 个或多个醋化。在一些实施方案中，甘油醋组分包含甘油单醋、甘油二醋、单糖醋、二糖醋或 其组合。
[0049] "憐脂"表示衍生自憐脂酸的任何分子，其中将来自甘油主链的一个或两个碳醋化 成脂肪酸，且将封端的碳之一醋化成憐酸醋基团。在某些实施方案中，憐酸醋基团为还被醋 化成另一种功能分子例如胆碱、丝氨酸或肌醇的憐酸二醋。在一些实施方案中，憐脂组分包 含甘油憐脂和/或憐酷基甘油。而且，憐脂组分可W包含溶血憐脂，其中来自甘油主链的碳 之一保持为未醋化的径基基团。且在一些实施方案中，憐脂组分包含卵憐脂，其可W例如从 大豆或从蛋黄提取且可W包含憐脂酷基-胆碱、憐脂酷基-肌醇和憐脂酷基丝氨酸的组合。 在一些实施方案中，憐脂可W包含大豆卵憐脂、蛋卵憐脂、乳脂衍生的憐脂或其组合。
[0050] 除非另有指定，否则文中所用的所有百分比、份数和比率为W包含稳定化益生菌 的全部营养组合物的重量计。
[0051] 规定为"每天"给予的所有量可W在24小时周期的过程中给予的一个单位剂量、单 份递送或两个或更多个剂量或份给予。
[0052] 本公开的营养组合物可W基本上不含文中所述的任何任选或选择的成分，前提是 剩余的营养组合物仍包含文中所述的所有需要的成分或特点。在该上下文中，且除非另有 指定，否则术语"基本上不含"表示所选择的组合物可W包含小于功能量的任选成分，通常 小于0.1%重量，且还包含0%重量的运种任选或选择的成分。
[0053] 本公开对单数特征或限制的所有提及应当包括相应的复数特征或限制，且反之亦 然，除非另有指定或通过所提及的上下文作出明确相反说明。
[0054] 文中所用的方法或方法步骤的所有组合可任何顺序进行，除非另有指定或通 过提及组合的上下文作出明确相反说明。
[0055] 本公开的方法和组合物(包括其组分)可W包含、由或基本上由文中所述的实施方 案的必需要素和限制W及文中所述的或另外在营养组合物中有用的任何另外或任选成分、 组分或限制组成。
[0056] 文中所用的术语"约"应当视为指规定为任何范围的端点的两个数字。对范围的任 何提及应当认为是对该范围内的任何子集提供支持。
[0057] 保护基质 在本公开的实施中，至少一种憐脂和至少一种甘油醋用作使生物材料稳定化的保护基 质的组分。
[0058] 本公开的保护基质中的憐脂和/或甘油醋的使用向益生菌(包括鼠李糖乳酸菌)提 供优异保护，其超过本领域先前已知的保护。
[0059] 保护基质的脂质组分可W包含，但不限于动物源，例如乳脂、黄油、黄油脂肪、乳憐 月旨、蛋黄脂质、蛋黄憐脂;海产源，例如鱼油、海产油、单细胞油;蔬菜和植物油，例如玉米油、 油菜巧油(canola oil)、向日葵油、大豆油、大豆憐脂、栋桐液油、挪子油、高油酸向日葵油、 月见草油、菜巧油、橄揽油、亚麻仁(亚麻巧)油、棉花巧油、高油酸红花油、栋桐硬脂酸甘油 醋、栋桐仁油、麦胚芽油；中链甘油Ξ醋油和乳液W及脂肪酸的醋;及其任何组合。
[0060] 在一些实施方案中，稳定化的混合物包含W干基计算约0.5-约50克脂质组分/100 克混合物。在某些实施方案中，稳定化的混合物包含W干基计算约2.5-约30克脂质组分/ 100克混合物。
[0061] 稳定化的混合物可W包含憐脂组分。在某些实施方案中，稳定化的混合物包含W 干基计算约0.5-约2克憐脂组分/100克混合物。在一些实施方案中，稳定化的混合物包含W 干基计算约0.75-约1.25克憐脂组分/100克混合物。
[0062] 同样，稳定化的混合物可W包含甘油醋组分。在一些实施方案中，稳定化的混合物 包含W干基计算约0.5-约2克甘油醋组分/100克混合物。在某些实施方案中，稳定化的混合 物包含W干基计算约0.75-约1.25克甘油醋组分/100克混合物。而且，甘油醋组分可W包含 甘油单醋、甘油二醋或其任何组合。
[0063] 在某些实施方案中，基于干重量基准的稳定化的混合物的主要组分为一种或多种 碳水化合物，其可W包括多糖、二糖和单糖。实际上，保护基质可W包括乳果糖、乳薦糖、棉 子糖、葡萄-寡糖、海藻糖、菊粉、聚右旋糖、半乳-寡糖、果-寡糖、异麦芽-寡糖、大豆寡糖、乳 薦糖、木-寡糖、壳-寡糖、甘露-寡糖、阿拉伯-寡糖、唾液酸-寡糖、岩藻-寡糖、龙胆-寡糖和/ 或其任何组合。在一些实施方案中，保护基质包括第一碳水化合物，其选自：具有约2-约6的 右旋糖当量的薦糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖、麦芽Ξ糖、麦芽糖糊精及其任何组合。在某些实 施方案中，保护基质包括第二碳水化合物，其选自：具有大于约8的右旋糖当量的菊粉、聚右 旋糖、半乳寡糖、果寡糖、淀粉、麦芽糖糊精及其任何组合。
[0064] 在一些实施方案中，稳定化的混合物可W包含W干基计算约50-约80克第一碳水 化合物/100克混合物；W干基计算约60-约70克第一碳水化合物/100克混合物;或W干基计 算约65-约70克第一碳水化合物/100克混合物。第一碳水化合物可W选自：具有约2-约6的 右旋糖当量的薦糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖、麦芽Ξ糖、麦芽糖糊精及其任何组合。
[0065] 稳定化的混合物可W还包含W干基计算约1-约10克第二碳水化合物/100克混合 物；W干基计算约4-约6克第二碳水化合物/100克混合物;或W干基计算约5克第二碳水化 合物/100克混合物。在一些实施方案中，第二碳水化合物选自：具有大于约8的右旋糖当量 的菊粉、聚右旋糖、半乳寡糖、果寡糖、淀粉、麦芽糖糊精及其任何组合。
[0066] 稳定化的混合物的其他组分可W为化合物粘合剂(还称为凝胶试剂），其可W充当 增稠剂并产生凝胶状的稠度。可w包含在本公开的保护基质中的化合物粘合剂包括藻酸盐 例如藻酸钢、果胶、壳聚糖、簇基甲基纤维素及其混合物，等等。化合物粘合剂的加入提供粘 稠稠度的形成，运提供有效基质的形成和适用于随后干燥的结构品质。
[0067] 在一些实施方案中，化合物粘合剂可W形成胶状材料并提高将胶状材料加到其中 的混合物的粘度。另外，化合物粘合剂还可W使组分更易于混合在一起。例如，藻酸钢还可 W具有乳化剂特征。
[0068] 在一些实施方案中，稳定化的混合物可W包含LM果胶、歷果胶、化果胶或其任何混 合物。所包含的果胶可W在水中溶解。
[0069] 文中所用的果胶通常具有8,000道尔顿或更大的峰值分子量。本公开的果胶具有 8，000-约500，000的优选峰值分子量，更优选为约10，000-约200，000且最优选为约15，000- 约100，000道尔顿。在一些实施方案中，本公开的果胶可W为水解果胶。在某些实施方案中， 保护基质包含水解果胶，所述水解果胶的分子量小于完整或未改性的果胶的分子量。本公 开的水解果胶可W通过本领域中已知的降低分子量的任何方式制备。所述方式的例子为化 学水解、酶促水解和机械剪切。降低分子量的优选方式为在高溫下通过碱性或中性水解。在 一些实施方案中，保护基质包含部分水解果胶。在某些实施方案中，部分水解果胶具有小于 完整或未改性的果胶的分子量但超过3，300道尔顿的分子量。
[0070] 稳定化的混合物可W包含W干基计算约0.5-约5克化合物粘合剂(例如藻酸钢和/ 或果胶)/100克混合物。在某些实施方案中，稳定化的混合物包含W干基计算约1-约3克化 合物粘合剂/100克混合物。且在一个实施方案中，稳定化的混合物包含W干基计算约2克化 合物粘合剂/100克混合物。
[0071] 而且，稳定化的混合物可W还包含至少一种淀粉、淀粉的源和/或淀粉组分。在一 些实施方案中，稳定化的混合物可W例如包含天然或改性的淀粉，例如蜡质玉米淀粉、蜡质 大米淀粉、蜡质马铃馨淀粉、蜡质木馨淀粉、玉米淀粉、大米淀粉、马铃馨淀粉、木馨淀粉、小 麦淀粉或其任何混合物。
[0072] 稳定化的混合物还可W包括另外的成分，其向益生菌或摄取稳定化益生菌的个体 提供其他益处。运些成分可W包含矿物质、维生素、抗氧化剂、痕量元素、固醇、抗氧化剂、月旨 肪酸、功能分子及其任何组合。其他成分可W包括抗性淀粉、高直链淀粉、瓜尔胶和槐豆胶、 琼脂、黄原胶、角叉胶、葡聚糖及其任何组合。
[0073] 在一些实施方案中，稳定化的混合物可W包含W干基计算约5-约90克益生菌和/ 或其他生物材料/100克混合物。在一些实施方案中，稳定化的混合物包含约50-约90克益生 菌和/或其他生物材料/100克稳定化的混合物。在某些实施方案中，稳定化的混合物包含W 干基计算约9-约12克益生菌和/或其他生物材料/100克混合物。且在一个实施方案中，稳定 化的混合物包含W干基计算约10.2-约11.4克益生菌和/或其他生物材料/100克混合物。在 另一个实施方案中，益生菌例如LGG在保护基质中的浓度为约1 X 106-约1 X l〇i4cfu/克保护 基质，更优选约1 X 1〇9-约1 X IQiicfu/克保护基质。
[0074] 稳定化的混合物可W用于向益生菌生物体提供稳定性，所述益生菌生物体可W对 个体的健康和福利发挥有益作用。合适的益生菌的例子包括但不限于酵母菌(例如酿酒酵 母（SaccAaromjces cereWseae))、霉菌（例如曲霉(心jOer扣·JJt/s)、根霉（WizOjOt/s)、毛 霉（#ucor))和细菌（例如乳杆菌）。合适的益生菌微生物的具体例子为：黑曲霉 (心jOe巧別扣5 niger)、米曲霉(儿oiyzae)、凝结芽抱杆菌(公aci^t/s coa卵Jans)、迟缓芽 抱杆菌（公.Jenit/s)、地衣芽抱杆菌（公.7icAeni/ormis)、肠膜芽抱杆菌（公. mesaoierict/s)、短小芽抱杆菌(化、枯草芽抱杆菌(公.、纳豆芽抱杆菌 (公./33。0)、青春双歧杆菌（知'/7加63。（61'扣扭3加765。6/3。5)、动物双歧杆菌（公. animals)、短双歧杆菌（公.61'6^"6)、双歧双歧杆菌（公.6_?'/7抓/?)、婴儿双歧杆菌（公. i打/aniis)、乳双歧杆菌（公.Jaciis)、长双歧杆菌（公.iongt/ffl)、长双歧杆菌BB536(公. 扣打即扭化幻、长双歧杆菌ΑΗ!2〇6 (NCIMB: 4!382)、短双歧杆菌ΑΗ!2〇5 (NCIMB: 41387)、婴儿双歧杆菌35624 (NCIMB: 41003)、长双歧杆菌ΑΗ1714 (NCIMB 41676)、动物 双歧杆菌乳酸亚种BB-12(DSM号10140)、假长双歧杆菌(公.^seuc/o如ngt/ffl)、嗜热双歧杆菌 (B. thermophilum)、Candida pintolepesii、了驗腹舊{Clostridium Aui/rict/m)、乳月旨肠 球菌（i?nterococct/s cremoris)、二下酬肠球菌（i?. c/iaceijJaciis)、粪肠球菌（怎. /aecit/m)、中间型肠球菌化.iniermec/it/s)、乳酸肠球菌化.Jaciis)、i?.皿znic/i、嗜热肠 球菌（i?. tAermo如_z7t/s)、嗜酸乳杆菌（Zacio6acj7Jt/s acic/〇j〇A_z7t/s)、消化乳杆菌（Z. aJimaoia_rit/s)、食淀粉乳杆菌（Z. amjJoraras)、卷曲乳杆菌（Z. crisjoait/s)、短乳杆菌 (Z. 6rwis)、干酪乳杆菌（Z. case)、弯曲乳杆菌（Z. ct/rrait/s)、纤维二糖乳杆菌（Z. (：?6別0知'05^5)、德氏乳杆菌保加利亚亚种(1.沁761^6。必。55.如始'31'如^5)、香肠乳杆菌 (Z. /arciminis)、发酵乳杆菌(Z.扣rmaoit/m)、加氏乳杆菌(Z. gasseri)、瑞:t乳杆菌(Z. Ae八eiict/s)、乳乳杆菌（Z. Jaciis)、植物乳杆菌（Z. jOJaniart/m)、约氏乳杆菌（Z. 、路氏乳杆菌U. ret/ieri)、鼠李糖乳杆菌、鼠李糖乳杆菌GG(ATCC号53103)、清 酒乳杆菌U. saAei)和唾液乳杆菌U. sa^raWt/s)及其任何组合。在一个实施方案中， 稳定化益生菌可W为存活或非存活的。在本公开中有用的稳定化益生菌可W为天然存在 的、合成的或通过生物体的基因操作开发的，不管运种新的源现在是已知的或之后开发的。
[0075] 在本公开的一个实施方案中，鼠李糖乳酸菌GG用作可W通过本公开的保护基质稳 定化的益生菌。鼠李糖乳酸菌GG在授权给化arwood等的美国专利申请4,839,281中描述，其 通过引用W其整体结合到文中。特别地，Sharwood等将鼠李糖乳酸菌GG描述为一种物类，其 中细菌对肠内的细胞具有显著的粘着力，同时能够在低pH下存活并产生大量的乳酸。
[0076] 所选择的益生菌在与本公开的稳定化的混合物组合之前优选浓缩至湿膏状的稠 度。W干燥形式的益生菌起始也是一个备选方案。所选择的益生菌的浓度水平包括约3X-约 20X的浓度，尽管可W包括较少或较大的浓度，运取决于具体的益生菌生物质和随后的加工 步骤。
[0077] -般地，稳定化益生菌的制备包括W下步骤:浓缩所选择的一种益生菌或多种益 生菌；W需要量提供稳定化的混合物的组分;将所述稳定化的混合物与浓缩的益生菌混合； 使所述稳定化益生菌干燥且将所述稳定化益生菌包装或组合成营养产品，例如婴儿配方。
[0078] 在一些实施方案中，本公开设及保护用于营养组合物的存活的益生菌的方法，所 述方法可W包括W下步骤:提供存活的益生菌，通过共混W下组分制备用于益生菌的保护 基质：（i)憐脂组分，和（ii)甘油醋组分及其任何组合，随后组合所述存活的益生菌、所述 保护基质和水W产生混合物且将所述混合物干燥至约4%或更少的最终水分含量，且进一步 将干燥混合物加到粉末的营养产品或胶囊。
[0079] 在优化益生菌的稳定化时，在如文中所述且如表1-4中所示的一些实施方案中，可 W改变多种成分。在一些实施方案中，脂质可W包含约10%-50%(w/w)的稳定化的混合物。在 一些实施方案中，稳定化的混合物可W包含约5%-约25%(w/w)的憐脂组分和约5%-约25%(w/ W)的甘油醋组分。在其他实施方案中，稳定化的混合物可W包含约5%-约25%(w/w)的憐脂组 分、约2.5-约12.5%(w/w)的甘油醋组分和约2.5%-约12.5%(w/w)的另外的/其他的脂质组 分。在又一个实施方案中，稳定化的混合物的全部脂质可W包含约3%-约17%(w/w)的憐脂组 分、约3-约17%(w/w)的甘油醋组分和约3%-约17%(w/w)的另外的/其他的脂质组分。
[0080] 稳定化益生菌可W包装和市售或可W另外与各种各样的营养产品组合或用其他 功能组分例如二十二碳六締酸包封。运种营养产品可W包括婴儿配方和儿童产品两者，其 用于其中需要将益生菌加到使改进的储存寿命和稳定性成为必要的营养产品的应用。
[0081] 表1呈现根据本公开的稳定化益生菌混合物/保护基质的样品实施方案。
[0082] 表1:保护基质的实施方案
表2呈现根据本公开的稳定化益生菌混合物/保护基质的样品实施方案。表2:保护基质 的实施方案
'^表3呈现根据本公开的稳定化益生菌混合物/保护基质的又一个例子实施方案。 '
[0083] 表3:保护基质的实施方案_
表4也提供根据本公开的稳定化益生菌混合物/保护基质的例子实施方案。
[0084] 表4:保护基质的实施方案
用于与稳定化益生菌组合的营养产品 根据上文所述制备的稳定化益生菌可W与营养产品组合W形成新颖的营养组合物。
[0085] 例如，稳定化益生菌可W与营养产品例如婴儿配方或儿童的营养产品组合W形成 稳定化营养组合物。在另一个实施方案中，稳定化益生菌可W与人乳增强剂组合，将所述人 乳增强剂加到人乳W便增强人乳的营养价值。
[0086] 而且，本公开的稳定化益生菌可W与提供最少、部分或全部营养支持的营养产品 组合。运种营养产品可W为营养补充物或膳食替代品。实际上，稳定化益生菌可W在被受试 者摄取之前与食物或其他营养产品互相混合。
[0087] 用于与稳定化益生菌组合的营养产品可W但不需要为营养完全的。同样，稳定化 益生菌与营养产品的组合可W产生营养完全的营养组合物。在一个实施方案中，本公开的 营养组合物为营养完全的且包含合适类型和量的脂质、碳水化合物、蛋白质、维生素和矿物 质。
[0088] 由本公开形成的稳定化益生菌可W与W本领域中已知的任何形式(包括粉末、凝 胶、悬浮液、膏剂、固体、液体、液体浓缩物或即用型产品）提供的营养产品组合。在一种组合 中，营养产品为婴儿配方，尤其为适用作婴儿单一营养源的婴儿配方。
[0089] 描述用于与稳定化益生菌组合的营养产品可W肠内给予。
[0090] 包含稳定化益生菌的营养组合物 此外，根据上文所述制备的稳定化/经保护的益生菌可W与营养产品组合W形成新颖 的营养组合物。
[0091] 营养组合物可W包含本领域中已知或使用的任何另外的脂肪或脂质源，包括但不 限于动物源，例如乳脂、黄油、黄油脂肪、蛋黄脂质;海产源，例如鱼油、海产油、单细胞油;蔬 菜和植物油，例如玉米油、油菜巧油、向日葵油、大豆油、栋桐液油、挪子油、高油酸向日葵 油、月见草油、菜巧油、橄揽油、亚麻仁(亚麻巧)油、棉花巧油、高油酸红花油、栋桐硬脂酸甘 油醋、栋桐仁油、麦胚芽油；中链甘油Ξ醋油和乳液W及脂肪酸的醋;及其任何组合。脂质或 脂肪在营养组合物中的量通常在约1-约7g/100kcal中变化。
[0092] 而且，营养组合物可W包含牛奶蛋白质的源。牛奶蛋白质的源可W包括，但不限 于，乳蛋白粉末、乳蛋白浓缩物、乳蛋白分离物、脱脂乳固体、脱脂乳、脱脂干乳、乳清蛋白 质、乳清蛋白质分离物、乳清蛋白质浓缩物、甜乳清、酸乳清、酪蛋白、酸酪蛋白、酪蛋白酸盐 (例如酪蛋白酸钢、酪蛋白酸巧钢、酪蛋白酸巧)及其任何组合。
[0093] 在某些实施方案中，营养组合物可W包含完整蛋白质。在其他实施方案中，作为完 整蛋白质和水解度为约4%-10%的部分水解蛋白质两者的组合，提供营养组合物的蛋白质。 由于营养产品的稳定剂和蛋白质两者只包含水解蛋白质，运些实施方案中的某些可W为极 其低变应原的。在又一个实施方案中，营养组合物可W用含谷氨酷胺的肤补充。
[0094] 营养组合物的蛋白质源的乳清:酪蛋白比率可W类似于人母乳中发现的。在一个 实施方案中，营养组合物的蛋白质源包含约40%-约80%的乳清蛋白质。在另一个实施方案 中，蛋白质源可W包含约20%-约60%的酪蛋白。营养组合物中的蛋白质的量通常在约1-约 7g/100kcal 中变化。
[0095] 在其他实施方案中，营养组合物包含乳铁蛋白，其在人体肠道中保持其稳定性和 活性W抵抗某些不合乎需要的细菌病原体。
[0096] 在一些实施方案中，文中所述的营养组合物还可W包含非人类的乳铁蛋白、通过 基因修饰的生物体产生的非人类的乳铁蛋白和/或通过基因修饰的生物体产生的人乳铁蛋 白。乳铁蛋白一般描述为具有两个近乎相同的叶（lobes)的结构的80千道尔顿糖蛋白，两个 叶包括铁结合位点。如在出版物BIOCHEMISTRY AND C化L BIOLOGY,第275-281页（2006)中 出现的('Perspectives on Interactions Between Lactoferrin and Bacteria(对乳铁蛋 白和细菌之间相互作用的看法)"中所描述，来自不同宿主物种的乳铁蛋白可W在氨基酸序 列中变化，尽管通常在内叶（internal lobe)的末端区域处具有相对高的等电位点与带正 电荷的氨基酸。认识到乳铁蛋白具有杀菌和抗微生物活性。在至少一个实施方案中，乳铁蛋 白为牛乳铁蛋白。
[0097] 意料不到地，文中所包括的乳铁蛋白的形式保持相关活性，即使暴露到低pH(即低 于约7且甚至低至约4.6或更低)和/或高溫（即高于约65%，且高达约120°〇条件，所述条件 预期会破坏或严重限制人乳铁蛋白或重组体人乳铁蛋白的稳定性或活性。在用于文中所述 类型的营养组合物的某些加工方案（例如加热杀菌法)期间，可W预期运些低抑和/或高溫 条件。
[0098] 在一个实施方案中，乳铁蛋白W约5111旨/1001?3曰^约16111旨/1001?3曰1的量存在于营养 组合物中。在另一个实施方案中，乳铁蛋白W约9111邑/1〇〇1?3日^约14111邑/1001?3日1的量存在。在 又一个实施方案中，营养组合物可W包含约2mg-约200mg乳铁蛋白/lOOkcal。且在某些实施 方案中，营养组合物可W包含约90mg-约148mg乳铁蛋白/lOOkcal。
[0099] 营养组合物可W还包含TGF-β。在一些实施方案中，TGF-β的水平可W为约0.0150 (P邑/yg)ppm-约0.1000(pg/yg)ppm。在其他实施方案中，包含稳定化益生菌的最终组合物中 的 TGF-β 的水平为约 0.0225(pg/yg)ppm-约 0.0750(pg/yg)ppm。
[0100] 在营养组合物的一些实施方案中，TGF-β的水平为约250〇9旨/1^-约10,00〇9旨/1^， 更优选约300〇9旨/1^-约800〇9旨/1^。在一个实施方案中，TGF-βΙ :TGF-的的比率在约1:1-约 1:20的范围中，或更具体而言，在约1:5-约1:15的范围中。
[0101] 在一些实施方案中，TGF-β在营养组合物中的生物活性通过加入生物活性的乳清 级分来增强。本领域中已知的任何生物活性的乳清级分可W在运些实施方案中使用，前提 是获得所预期的结果。在一个实施方案中，运种生物活性的乳清级分可W为乳清蛋白质浓 缩物。在一个具体的实施方案中，乳清蛋白质浓缩物可W为Salibra? 800,得自Glanbia Nutritionalso
[0102] 营养组合物可W包含除了稳定化益生菌之外的一定量的益生菌。当稳定化益生菌 与营养产品组合时，所得的营养组合物可W包含向受试者有效提供约1 X 1〇4-约1X l〇w菌 落形成单位(C化)/kg体重/天的总量的益生菌。在其他实施方案中，益生菌的量可W在约1 X 106-约1 X 109c化/kg体重/天中变化。在甚至其他实施方案中，营养组合物可W包含有效 提供约1X106C化/kg体重/天的量的益生菌。
[0103] 在某些实施方案中，本公开的营养组合物包含约1 X 106 C化的益生菌和约1 X l〇w cfu/lOOkcal的组合物。在一些实施方案中，益生菌的量可W在约1 X 1〇6 cfu-约1 X 1〇9 C化/lOOkcal的组合物范围中。另外，营养组合物可W包含不稳定化益生菌，且最终组合物 包含一些稳定化益生菌和一些不稳定化益生菌。
[0104] 营养组合物还可W包含至少一种益生元。文中所用的术语"益生元"是指对宿主发 挥健康益处的不可消化的食物成分。运种健康益处可w包括，但不限于，选择性刺激一种或 有限量的有益肠道细菌的生长和/或活性、刺激经摄取的益生菌(稳定化或不稳定化)微生 物的生长和/或活性、选择性减少肠道病原体且有利影响肠道短链脂肪酸分布。运种益生元 可W为天然存在的、合成的或通过生物体和/或植物的基因操作开发的，不管运种新的源现 在是已知的或之后开发的。益生元可W包括寡糖、多糖和包含果糖、木糖、大豆、半乳糖、葡 萄糖和甘露糖的其他益生元。更具体而言，在本公开中有用的益生元可W包括乳果糖、乳薦 糖、棉子糖、葡萄-寡糖、菊粉、聚右旋糖、聚右旋糖粉、半乳-寡糖、果-寡糖、异麦芽-寡糖、大 豆寡糖、乳薦糖、木-寡糖、壳-寡糖、甘露-寡糖、阿拉伯-寡糖、唾液酸-寡糖、岩藻-寡糖和龙 胆-寡糖及其组合。
[0105] 在一些实施方案中，存在于营养组合物中的益生元的总量可W为约1.0邑几-约 10.Og/L的组合物(液体形式）。在某些实施方案中，存在于营养组合物中的益生元的总量可 W为约2.0邑/1-约8. Og/L的组合物。
[0106] 营养组合物可W包含聚右旋糖(PDX)。如果聚右旋糖用作益生元，在一个实施方案 中，聚右旋糖在营养组合物中的量可W在约1. 〇邑/1-约4. Og/L范围内。如果聚右旋糖用作益 生元，在包含稳定化益生菌的组合物的一个实施方案中，聚右旋糖在营养产品中的量可W 在约0.1111旨/1001?3曰^约0.5111旨/1001?3曰1范围内。在另一种组合物中，聚右旋糖的量可^为约 0.3mg/100kcal。在一个优选的实施方案中，至少20%的益生元应当包含聚右旋糖(PDX)。
[0107] 在某些实施方案中，营养组合物包含半乳-寡糖。半乳-寡糖在营养组合物中的量 可W为约〇.2mg/100kcal-约1 .Omg/lOOkcal。在其他实施方案中，半乳-寡糖在营养组合物 中的量可W为约0 . Img/lOOkcal-约0.5mg/100kcal。半乳-寡糖和聚右旋糖还可W W约 0.6mg/100kcal的总量补充到营养组合物中。
[0108] 在一些实施方案中，营养组合物包含另外的碳水化合物源，即是，除了在本发明的 整个公开中所述的其他碳水化合物之外提供的碳水化合物源。合适的另外的碳水化合物源 可W为用于本领域中的任一种，例如乳糖、葡萄糖、果糖、玉米糖浆固体、麦芽糖糊精、薦糖、 淀粉、大米糖浆固体等。另外的碳水化合物在营养组合物中的量通常可W在约5g-约25g/ lOOkcal中变化。在一些实施方案中，碳水化合物的量为约6g-约22 g/lOOkcal。在其他实施 方案中，碳水化合物的量为约12g-约14g/100kcal。
[0109] 营养组合物可W包含长链的多不饱和脂肪酸化CPUFA)的源，所述长链的多不饱和 脂肪酸包括二十二碳六締酸(DHA)。其他合适的LCPUFA包括，但不限于，α-亚油酸、丫-亚油 酸、亚油酸、亚麻酸、二十碳五締酸化ΡΑ)和花生四締酸(ARA)。
[0110] 在一些实施方案中，营养组合物可W用DHA和ARA两者补充，且ARA: DHA的重量比率 可W为约1:3-约9:1。在某些实施方案中，ARA:DHA比率为约1:2-约4:1。
[0111] 长链的多不饱和脂肪酸在营养组合物中的量可W在约5mg/100kcal-约lOOmg/ lOOkcal中、更优选在约10111邑/1001?3日^约50111邑/1001?3日1中变化。
[0112] 而且，营养组合物可W使用本领域中已知的标准技术用包含DHA和ARA的油补充。 例如，可W通过置换通常存在于营养组合物中的当量的全部脂肪共混物的剩余部分将包含 DHA和ARA的油加到营养组合物。
[0113] 如果采用的话，DHA和ARA的源可W为本领域中已知的任何源，例如海产油、鱼油、 单细胞油、蛋黄脂质和脑脂质。在一些组合物中，畑A和ARA来源于单细胞Madek油、DHASC0 ?或其变体。DHA和ARA可W为天然形式，前提是LCPUFA源的剩余部分不对婴儿产生任何明 显有害的作用。或者，DHA和ARA可精制形式使用。
[0114] 在营养组合物的一个实施方案中，DHA和ARA的源为单细胞油，如在美国专利号5， 374，567、5，550，156和5，397，591中教导，其公开内容通过引用W其整体组合到文中。
[0115] 在某些实施方案中，营养组合物可W为提供生理化学和生理学益处的基于乳的营 养组合物。如本领域中已知的，牛奶蛋白质包含两种主要组分:酸可溶的乳清蛋白质和酸不 可溶的酪蛋白，后者表示牛奶的全部蛋白质含量的约80%。当进入胃的酸性环境时，酪蛋白 沉淀和与矿物质复合，形成变化尺寸和坚实度的半固体凝乳。与较大较硬的凝乳相比，较软 较小的凝乳更易于被身体消化。凝乳形成在营养组合物的开发中可能是重要考虑因素，所 述营养组合物包括，但不限于婴儿配方、医疗食品和早产儿配方。因此，稳定化益生菌可W 与包含比标准婴儿配方较软且较小的凝乳的组合物组合。
[0116] 还可足W供应受试者的日常营养需求的量将一种或多种维生素和/或矿物质 加到营养组合物中。本领域普通技术人员应当理解维生素和矿物质需求将例如基于儿童的 年龄而变化。例如，婴儿可W具有不同于年龄为1-13岁的儿童的维生素和矿物质需求。因 此，该实施方案并不旨在将营养组合物限制到具体的年龄组，而是提供可接受的维生素和 矿物质组分的范围。
[0117] 营养组合物可W任选包括，但不限于，W下维生素或其衍生物中的一种或多种:维 生素 Bi(硫胺、焦憐酸硫胺、ΤΡΡ、Ξ憐酸硫胺、TTP、盐酸硫胺、一硝酸硫胺）、维生素 B2(乳黄 素、黄素单核巧酸、FMN、黄素腺嚷岭二核巧酸、FAD、乳黄素（lactoflavin)、核黄素 (ovoflavin))、维生素 B3(烟酸、尼克酸、尼克酷胺、烟酷胺、尼克酷胺腺嚷岭二核巧酸、NAD、 尼克酸单核巧酸、NicMN、化晚-3-甲酸）、维生素 B3-前体色氨酸、维生素 B6(化唉醇、化唉醒、 化唉胺、盐酸化唉醇）、泛酸(泛酸盐、泛醇）、叶酸盐(叶酸、叶酸(folacin)、蝶酷谷氨酸）、维 生素 Bi2(钻胺素、甲基钻胺素、脱氧腺巧钻胺素、氯钻胺素、径基钻胺素、腺巧钻胺素）、生物 素、维生素 C(抗坏血酸）、维生素 A(视黄醇、乙酸视黄醋、栋桐酸视黄醋、与其它长链脂肪酸 形成的视黄醋、视黄醒、视黄酸、视黄醇醋）、维生素 D(骨化醇、胆骨化醇、维生素化、1，25，- 二径基维生素 D)、维生素 Ε(α-生育酪、α-生育酪乙酸醋、α-生育酪班巧酸醋、α-生育酪烟酸 醋、α-生育酪）、维生素 Κ(维生素 Κι、叶绿酿、糞酿、维生素 Κ2、甲基糞酿-7、维生素 Κ3、甲基糞 酿-4、甲糞酿、甲基糞酿-8、甲基糞酿-8Η、甲基糞酿-9、甲基糞酿-9Η、甲基糞酿-10、甲基糞 酿-11、甲基糞酿-12、甲基糞酿-13)、胆碱、肌醇、β-胡萝h素及其任何组合。
[0118] 而且，营养组合物可W任选包括，但不限于，W下矿物质或其衍生物中的一种或多 种:棚、巧、乙酸巧、葡糖酸巧、氯化巧、乳酸巧、憐酸巧、硫酸巧、氯化物、铭、氯化铭、化晚甲 酸铭、铜、硫酸铜(copper sul化te)、葡糖酸铜、硫酸铜(cupric sulfate)、氣化物、铁、幾基 铁三价铁、富马酸亚铁、正憐酸铁、铁研制剂、多糖铁、舰化物、舰、儀、碳酸儀、氨氧化儀、氧 化儀、硬脂酸儀、硫酸儀、儘、钢、憐、钟、憐酸钟、舰化钟、氯化钟、乙酸钟、砸、硫、钢、多库醋 钢、氯化钢、砸酸钢、钢酸钢、锋、氧化锋、硫酸锋及其混合物。矿物质化合物的非限制性示例 性衍生物包括任何矿物质化合物的盐、碱性盐、醋和馨合物。
[0119] 可按W下盐的形式将矿物质加到营养组合物中：例如憐酸巧、甘油憐酸巧、巧樣酸 钢、氯化钟、憐酸钟、憐酸儀、硫酸亚铁、硫酸锋、硫酸铜、硫酸儘和亚砸酸钢。可加入本领域 已知的其它维生素和矿物质。
[0120] 本公开的营养组合物可任选包括W下调味剂的一种或多种，包括但不限于调味提 取物、挥发油、可可或巧克力调味料、花生酱调味料、饼干屑、香草或任何市售调味料。有用 的调味剂的例子包括但不限于纯茵香提取物、仿制香蕉提取物、仿制樓桃提取物、巧克力提 取物、纯巧樣提取物、纯澄提取物、纯薄荷提取物、蜂蜜、仿制渡萝提取物、仿制朗姆酒提取 物、仿制草替提取物或香草提取物;或挥发油，例如蜜蜂花油、月桂油、香巧樣油、雪松木油、 樓桃油、肉桂油、T子香油或薄荷油;花生酱、巧克力调味料、香草饼干屑、奶油糖果、太妃糖 及其混合物。调味剂的量可根据所用的调味剂而大幅变化。可选择本领域已知的调味剂的 类型和量。
[0121] 本公开的营养组合物可W任选地包含可W为最终产品的稳定性而加入的一种或 多种乳化剂。合适的乳化剂的例子包括，但不限于，卵憐脂(例如，来自蛋或大豆）、〇乳白蛋 白和/或甘油单醋和甘油二醋，及其混合物。其它乳化剂对技术人员而言是显而易见的，且 合适的乳化剂的选择将部分取决于制剂和最终产品。在一些实施方案中，本公开的营养组 合物可W包含乳化剂，例如甘油单醋和/或甘油二醋的巧樣酸醋、甘油单醋和/或甘油二醋 的二乙酷基酒石酸醋和/或辛締基班巧酸酢改性的淀粉。
[0122] 本公开的营养组合物可任选地包含一种或多种防腐剂，也可W将其加入W延长产 品的储存寿命。合适的防腐剂包括，但不限于，山梨酸钟、山梨酸钢、苯甲酸钟、苯甲酸钢、 邸TA二钢巧及其混合物。
[0123] 本公开的营养组合物可任选地包括一种或多种稳定剂。用于实施本公开的营养组 合物的合适稳定剂包括但不限于阿拉伯胶、茄替胶、刺梧桐胶、西黄著胶、琼脂、红藻胶、瓜 尔胶、吉兰糖胶、刺槐豆胶、果胶、低甲氧基果胶、明胶、微晶纤维素、CMC(簇甲基纤维素钢）、 甲基纤维素、径丙基甲基纤维素、径丙基纤维素、MTEM(甘油单醋和甘油二醋的二乙酷基酒 石酸醋）、葡聚糖、角叉胶及其混合物。
[0124] 本公开的营养组合物还可W包括至少一种另外的植物营养素，即是，除了文中所 述的果胶、淀粉或其他植物营养素组分之外的另一种植物营养素组分。在人乳中鉴定的植 物营养素或其衍生物、缀合形式或前体优选包含在营养组合物中。例如，在一些实施方案 中，本公开的营养组合物可WW8盎司（236.6mL)份包含约80-约300mg花青素、约100-约 600mg原花色素、约50-约500mg黄烧-3-醇或其任何组合或混合物。在其他实施方案中，营养 组合物包含苹果提取物、葡萄巧提取物或其组合或混合物。而且，营养组合物的至少一种植 物营养素可W衍生自水果、葡萄巧和/或苹果或茶提取物中的任一种或共混物。
[0125] 适用于营养组合物的另外的植物营养素的例子包括，但不限于，花青素、原花色 素、黄烧-3-醇（即儿茶素、表儿茶素等）、黄烧酬、类黄酬、异类黄酬、类巧(sti化enoid)(即 白襲芦醇等）、原花色素、花青素、白襲芦醇、栋精、姜黄色素和/或其任何混合物W及植物营 养素的纯化形式或天然形式的任何可能组合。某些组分，尤其是营养组合物的基于植物的 组分可W提供植物营养素的源。
[01%]营养组合物的植物营养素组分还可W包含抽皮素、澄皮素、花青素、栋精、山奈酪、 表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素-没食子酸醋、表没食子儿茶素-没食子酸醋或其任何 组合。在某些实施方案中，营养组合物包含约50-约2000nmol/L的表儿茶素、约40-约 2000nmol/L的表儿茶素没食子酸醋、约100-且约4000nmol/L的表没食子儿茶素没食子酸 醋、约50-约2000nmol/L的抽皮素、约5-约500nmol/L的山奈酪、约40-约4000nmol/L的澄皮 素、约25-约2000nmol/L的花青素、约25-约500nmol/L的栋精或其混合物。而且，营养组合物 可W包含植物营养素或其母体化合物的代谢物，或其可W包含其他种类的食用植物营养 素，例如芥子油巧(glucosinolate)或萝h硫素。在某些实施方案中，营养组合物包含类葫萝 l·素，例如叶黄素、玉米黄素、邮青素、番茄红素、0-胡萝l·素、α-胡萝l·素、丫-胡萝l·素和/或0- 隐黄素。
[0127] 营养组合物还可包含异类黄酬和/或异黄酬。实例包括，但不限于，木黄酬(染料木 巧）、大豆黄素（大豆巧）、黄豆黄素、鹰嘴豆素 A、刺芒柄花素、香豆雌酪(coumestrol)、尊尾 素 （iri lone)、四径基异黄酬(orobo 1)、假說黄素(pseudobaptigenin)、类臭豆碱异黄酬A和 B (anagyroid isoflavone A和B)、毛蕊异黄酬（calycosin)、黄豆黄素、尊尾巧元 (irigenin)、5-0-甲基木黄酬、红车轴草素(pratensein)、樓黄素(prunetin)、φ-尊尾黄素、 凹猪尿豆碱(retusin)、尊尾黄素、尊尾巧（iridin)、芒柄花巧(ononin)、葛根素、尊尾黄酬 巧（tectoridin)、大鱼藤异黄酬（derrubone)、羽扇豆异黄酬（luteone)、异戊締基异黄酬 (讯；[曲160]16)、高山金莲花素（曰1口；[]1皿13〇；1^1曰￥〇]16)、[1比喃异黄酬化曰&1邑61'0]16)、二-0-甲基 高山金莲花素和4'-甲基-高山金莲花素。富含异类黄酬的植物源包括，但不限于，大豆、补 骨脂、葛、羽扇豆、蚕豆、鹰嘴豆(chick pea)、紫花首猜、豆芙和花生。
[0128] 在一个实施方案中，本公开的营养组合物包含有效量的胆碱。有效量的胆碱为约 20mg胆碱/8盎司（236.6mL)份-约 1 OOmg/8盎司（236.6mL)份。
[0129] 所公开的营养组合物可W另外包含β-葡聚糖的源。葡聚糖为多糖，特别是葡萄糖 的聚合物，其为天然存在的且可W在细菌、酵母菌、真菌和植物的细胞壁中发现。β-葡聚糖 本身为葡萄糖聚合物的多样化子集，其由通过β型葡糖巧键连接在一起W形成复杂的碳水 化合物的葡萄糖单体的链组成。
[0130] β-1,3-葡聚糖为例如由酵母菌、磨茹、细菌、海藻或谷类纯化的碳水化合物聚合物 (Stone BA'Clarke ΑΕ.化emistiT and Biology of (l-3)-Beta-Glucans (β-1,3-葡聚 糖的化学和生物性质）.London:化；rtland Press Ltd; 1993.)。0-1,3-葡聚糖的化学结构 取决于0-1,3-葡聚糖的源。而且，各种物理化学参数，例如溶解度、主要结构、分子量和支化 对β-1,3-葡聚糖的生物活性有作用（Yadomae T.，St;ruc1:ure and biological activities of fungal beta-1,3-Glucans(真菌的β-1,3-葡聚糖的结构和生物活性）.Yakugaku Zasshi. 2000; 120:413-431.)。
[0131] β-1，3-葡聚糖为具有或不具有β-1，6-葡萄糖或1，4-葡萄糖支化侧链的天然存在 的多糖，其在各种各样植物、酵母菌、真菌和细菌的细胞壁中发现。
[0132] 衍生自面包酵母菌酿酒酵母（SaccAaroffljces cereWsiae)的β-葡聚糖由D-葡萄 糖分子链组成，所述D-葡萄糖分子链通过1和3位置的葡糖巧键连接，具有通过1和6位置的 葡糖巧键连接的葡萄糖侧链。酵母菌衍生的β-葡聚糖是不可溶的、纤维状、复杂的糖，其具 有葡萄糖单元的直链通用结构，所述葡萄糖单元具有β-1，3主链，其散布有在长度上一般为 6-8个葡萄糖单元的β-1，6侧链。更具体而言，衍生自面包酵母菌的β-葡聚糖为聚（1，6)-β- D-化喃葡萄糖基-(1，3)-β-0-化喃葡萄糖。
[0133] 而且，β-葡聚糖具有良好耐受性且在儿科受试者中不产生或引起过多的气体、腹 胀、胃气胀或腹泻。将0-葡聚糖加到儿科受试者的营养组合物(例如婴儿配方、成长乳或另 一种儿童营养产品）将通过提高对入侵的病原体的抵抗性并因此保持或改进整体健康，改 进受试者的免疫反应。
[0134] 本公开的营养组合物可W包含β-葡聚糖。在一些实施方案中，β-葡聚糖为β-1，3; 1，6-葡聚糖。在一些实施方案中，β-1，3 ; 1，6-葡聚糖衍生自面包酵母菌。营养组合物可W包 含全葡聚糖颗粒β-葡聚糖、粒状β-葡聚糖、微粒β-葡聚糖、PGG-葡聚糖(聚1，6-β-Ο-化喃葡 萄糖基-1，3-β-0-化喃葡萄糖）或其任何混合物。在一些实施方案中，微粒β-葡聚糖包含具 有直径小于2皿的β-葡聚糖颗粒。
[0135] 在一些实施方案中，组合物中所存在的β-葡聚糖的量为营养组合物的约0.010-约 0.080g/100g。在其他实施方案中，营养组合物包含约10-约30mg β-葡聚糖/份。在另一个实 施方案中，营养组合物包含约5-约30mg β-葡聚糖/8盎司（236.6mL)份。在其他实施方案中， 营养组合物包含足W提供约15mg-约90mg β-葡聚糖/天的量的β-葡聚糖。在一些实施方案 中，营养组合物可多个剂量递送W达到整天递送到受试者的β-葡聚糖的目标量。
[0136] 在一些实施方案中，β-葡聚糖在营养组合物中的量为约3mg-约17mg/100kcal。在 另一个实施方案中，β-葡聚糖的量为约6mg-约17mg/100kcal。
[0137] 营养组合物可W直接排出到受试者的肠道中。在一些实施方案中，营养组合物直 接排出到肠内。在一些实施方案中，组合物可W在医生的指导下配制成肠内消耗或给予，且 可W预期用于针对性地饮食管理疾病或病症，例如腹腔疾病和/或食物过敏，由此基于所认 识到的科学原理通过医学评估建立不同的营养需求。
[0138] 本公开的营养组合物并不限于包含文中具体列出的营养素的组合物。出于满足营 养需求的目的和/或为了优化受试者中的营养状态，任何营养素可W作为组合物的部分递 送。
[0139] 本公开的营养组合物可W标准化成具体的热量含量，其可W作为即用型产品提 供，或其可W W浓缩形式提供。
[0140] 在一些实施方案中，本公开的营养组合物是成长乳。成长乳为预期用于1岁W上年 龄(通常1-3岁年龄、4-6岁年龄或1-6岁年龄)的儿童的强化型基于乳的饮料。设计成长乳W 期用作多样化膳食的补充，为儿童获得所有的必需维生素和矿物质、常量营养素加其它功 能性膳食组分(例如具有声称的促进健康性质的非必需营养物）的持续的每日摄取量提供 额外的保障。
[0141] 根据本公开的营养组合物的确切组成可W在市场之间变化，运取决于地方法规和 目标人群的膳食摄入量信息。在一些实施方案中，根据本公开的营养组合物包含乳蛋白源， 例如全脂乳或脱脂乳，加上实现所需感官性能所添加的糖和甜味剂，和添加的维生素和矿 物质。脂肪组合物通常衍生自乳原材料。可设计总蛋白质的指标W与人乳、牛乳或下限值的 相符。通常确定总的碳水化合物的指标W提供尽可能少的添加糖(例如薦糖或果糖）W实现 可接受的味道。通常，W符合地方性牛乳的营养基值的水平添加维生素 A、巧和维生素 D。此 夕h在一些实施方案中，可W提供膳食参考摄入量(DRI)的约20%或每份每日值(DV)的约20% 的水平，添加维生素和矿物质。而且，根据已确定的预期人群的营养需求、原料基值和地区 法规，营养素值在市场间可变化。
[0142] 在某些实施方案中，营养组合物是低变应原的。在其他实施方案中，营养组合物为 犹太教食品。在又一个实施方案中，营养组合物为非基因修饰的产品。在一个实施方案中， 营养制剂不含薦糖。营养组合物还可W不含乳糖。在其他实施方案中，营养组合物不包含任 何中链甘油Ξ醋油。在一些实施方案中，在组合物中不存在角叉胶。在其他实施方案中，营 养组合物不含所有胶。
[0143] 因此，通过实施本公开内容，制备具有迄今未认识的稳定性的稳定化益生菌。所述 稳定化细菌混合物通过使用水解哺乳动物蛋白质而表现出极高的稳定性，所述水解哺乳动 物蛋白质尤其是具有超过70%的肤的分子量小于2000道尔顿的水解哺乳动物蛋白质。所述 稳定化益生菌独特地对中等湿度水平(例如水活性高达0.4)的营养应用有效，其中在湿热 环境下提高的胆存期和稳定性是所需的。所述稳定化的益生菌可W单独包装，或与本文所 述的营养组合物的任何实施方案组合。
[0144] 本说明书引用的所有参考文献，包括而不限于所有的论文、出版物、专利、专利申 请、简报、教科书、报告、底稿、小册子、书籍、互联网文章、杂志文章、期刊等，通过引用W其 整体结合到本说明书中。本文的参考文献的讨论仅仅意在概括其作者所做出的断言，并非 承认任何参考文献构成现有技术。
【申请人】保留对所引用的参考文献的准确性和相关性提出 异议的权利。
[0145] 虽然使用特定术语、装置和方法描述了本公开的实施方案，但是运类描述只用于 说明目的。所用词汇是描述词汇而不是限制词汇。应当理解在不偏离随附权利要求书中阐 述的本公开的精神和范围的情况下，本领域普通技术人员可进行变动和改变。另外，应当理 解各种实施方案的方面可全部或部分互换。例如，虽然业已例示用于生产根据那些方法制 备的市售无菌液体营养补充物的方法，还可W考虑其他使用。因此，随附权利要求书的精神 和范围不应限于其中所含优选形式的描述。
【主权项】
1. 一种营养组合物，其包含 蛋白质源;和 在保护基质中稳定化的益生菌，所述保护基质包含， a. 至少一种磷脂;和 b. 至少一种甘油酯。2. 权利要求1的组合物，其中所述益生菌包含存活的微生物细胞。3. 权利要求2的组合物，其中所述存活的微生物细胞包括鼠李糖乳酸菌 {Lactobacillus rhamnosus)。4. 权利要求1的组合物，其中所述基质还包含碳水化合物源。5. 权利要求1的组合物，其中所述基质还包含果胶。6. 权利要求1的组合物，其中所述至少一种磷脂包含卵磷脂。7. 权利要求1的组合物，其中所述至少一种甘油酯包含甘油单酯、甘油二酯或其任何组 合。8. 权利要求1的组合物，其中所述营养组合物为粉末的婴儿配方。9. 权利要求1的组合物，其中所述营养组合物还包含至少一种另外的脂质组分。10. 权利要求1的组合物，其中所述营养组合物还包含非存活的益生菌。11. 保护用于粉末的营养组合物的存活的益生菌的方法，所述方法包括： a. 提供存活的益生菌； b. 通过共混以下组分制备用于益生菌的保护基质 i. 至少一种磷脂;和 ii. 至少一种甘油酯； c. 组合所述存活的益生菌、所述保护基质和水以产生混合物;和 d. 使步骤(c)的混合物干燥至约4%或更少的最终水分含量。12. 权利要求11的方法，其包括将步骤(d)的干燥混合物加到粉末的营养产品的另外的 步骤。13. 权利要求11的方法，其包括将步骤(d)的干燥混合物包封在胶囊中的另外的步骤。14. 权利要求13的方法，其中所述胶囊还包含一定量的二十二碳六烯酸。15. 权利要求11的方法，其中所述存活的益生菌包含鼠李糖乳酸菌。16. 权利要求1 1的方法，其中所述存活的益生菌包含长双歧杆菌BB536 _/〇叹? BB536)、长双歧杆菌婴儿亚种35624 subsp. _//3/^/3?^535624)、动物双歧杆菌乳酸亚种BB-12 a/3i?a_/is subsp. _/aciis BB-12)或其任何组合。
【文档编号】A23L33/135GK106028839SQ201480066665
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2014年11月6日
【发明人】J.M.冈萨雷斯, B.塞瓦略斯, B.沙, M.阮
【申请人】Mjn 美国控股有限责任公司