专利名称：一种用于烟梗处理的枯草芽孢杆菌制剂的制作方法
技术领域：
本发明属于烟用添加剂的技术领域，更具体地说，本发明涉及一种微生物制剂。同时还涉及所述微生物制剂的制备方法及其在烟草工业中的应用。
背景技术：
随着我国卷烟工艺技术水平的提高和烟草行业减害降焦工作的持续开展，膨胀梗丝在卷烟配方中的应用更加广泛。在配方中加入膨胀梗丝后，由于其填充值较高，可以减少卷烟烟丝用量，不仅节约卷烟成本，也可以起到降低卷烟焦油量的作用。然而，目前对烟梗资源综合利用的技术水平较为落后，闲置烟梗浪费大，梗丝在卷烟配方中的掺兑比例低，对烟叶的依存度高，卷烟配方成本较高，还未能更好地发挥其在卷烟产品中提质降耗、减害降焦的效果。因此，改善梗丝质量，提高梗丝的综合利用率，对卷烟减害降焦工作和降低制造成本具有重要的现实意义。另一方面，烟梗的主要成分是细胞壁物质，约占40%以上，其包括木质素、纤维素、 半纤维素和果胶等。这类物质的热裂解产物具有强烈的刺激性，杂气重、呛咳、涩口、香气量少，严重影响了卷烟的吸味品质，直接限制了梗丝在叶组配方中所占的比例。因此，降低梗丝燃烧产生的不良气息，提高梗丝吸味是提高梗丝综合利用率的关键问题。近期研究表明，通过微生物或生物酶处理具有明显消除烟叶的青杂气，减轻刺激性的作用，对烟叶香气质量的改善也有一定的帮助。利用木质素降解菌和降解酶对烟梗进行处理能减轻梗丝的木质气、刺激性。但现有技术中，关于添加微生物制剂直接作用于梗丝并提高梗丝抽吸品质的研究鲜见报道。经文献检索，尚未发现与本发明内容相同的报道。
发明内容
本发明的目的在于针对现有梗丝处理技术的不足，提供一种新的微生物制剂。本发明的另一目的是提供所述微生物制剂的制备方法。本发明进一步的目的是提供所述微生物制剂在梗丝处理中的应用。本发明的目的通过下述技术方案予以实现。*除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。A.本发明提供了一种新的微生物制剂，该微生物制剂是采用下述方法制备获得 取从烤烟叶面上分离得到细菌Van3的液体菌种，按照0. 的接种量接种于200ml的LB 液体培养基中，在37°C摇床，转速180r/min振荡培养至OD值=1. 5 ；3500rpm/min离心 lOmin，用无菌水洗涤沉淀，离心，最后用20mL无菌水振荡均勻，使用时稀释10倍即为所需的微生物制剂；其中，所述的细菌Van3的液体菌种，经鉴定属于枯草芽孢杆菌，该菌株命名为 Bacillus subtilis。B.本发明提供了一种所述微生物制剂的制备方法，该方法采用下述步骤(1)烤烟叶面上分离得到细菌Van3的液体菌种；(2)取液体菌种，按照0. 1 %的接种量接种于200ml的LB液体培养基中；
(3)在 37 "C 摇床，转速 180r/min 振荡培养至 OD 值=1. 5 ； 3500rpm/min 离心 IOmin ；(4)用无菌水洗涤沉淀，离心，然后用20mL无菌水振荡均勻，使用时稀释10倍即为菌剂。C.本发明提供了所述微生物制剂在梗丝处理中的应用。与现有技术相比，本发明具有以下突出的优点(1)本发明提供的微生物制剂能明显提高梗丝的香气量、愉悦性等品质，杂气、刺激性等下降，烟气浓度和劲头减少，余味变得舒适。(2)本发明成本低、可控性强、操作简单，便于实现大规模工业化生产，具有良好的开发应用前景。保藏牛物材料的说明本发明涉及的枯草芽孢杆菌Van3的菌株已经保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址中国.北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期2010年 08月16日；保藏号为CGMCC No. 4091。
具体实施例方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下通过实施例及试验数据，对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明， 并不用于限定本发明的保护范围。实施例1——试管斜面培养采用Luria-Bertani(LB)培养基，配方为蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母提取物 5g，琼脂20g，蒸馏水定容到1000ml。121°C灭菌25分钟，摆成斜面。接种Van35，28°C培养 Mh，获得试管种。实施例2——种子培养采用Luria-Bertani(LB)培养基，配方为蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母提取物 5g，蒸馏水定容到1000ml。121°C灭菌25分钟。接种Van35试管种，培养12h，获得液体菌种。实施例3——制备微生物制剂取液体菌种，按照0. 1 %的接种量接种于200ml的LB液体培养基中，在37°C摇床， 转速180r/min振荡培养至OD值=1. 5。3500rpm/min离心lOmin，用无菌水洗涤沉淀，离心，然后用20mL无菌水振荡均勻，使用时稀释10倍即为菌剂。应用实施例——微生物制剂对梗丝的作用用制备好的微生物制剂对梗丝进行处理，具体实验步骤如下1)称取含水率在11% -13%的梗丝100g。2)取菌剂20ml，用小型喷雾器将其均勻地喷洒到IOOg梗丝上，密封，以防止水分蒸发。3)直接喷洒等量的无菌水作为对照。4)将样品封入密封袋，以防止水分蒸发，30°C恒温乩。5)将梗丝置于120°C烘箱中烘干，使含水率达到11^-13 ^
6)将梗丝于22°C相对湿度为60 %的恒温恒湿箱平衡48h。7)取出部分烟丝，检测主要化学成分含量和致香物质。8)将剩余的烟丝手工卷制成烟支，样品和对照随机编号，由评吸专家组成的评吸小组进行感官评吸。常规化学成分的检测结果表明经所述的微生物制剂处理后，梗丝的生物大分子化合物的含量发生了较大的改变，其中还原糖和总糖的含量显著提高，烟碱含量下降。致香成分检测结果表明经微生物制剂处理后，梗丝的致香成分，包括β-大马酮、香叶丙酮、苯甲醇、苯乙醇、糠醛、二氢猕猴桃内酯、香兰素等的含量较对照显著提高。感官评吸结果表明梗丝经微生物制剂处理后，杂气、刺激性等下降，香气量、愉悦性较对照显著提升，烟气浓度和劲头减少，余味变得舒适。试验结果表明，该发明的微生物制剂具有明显降低梗丝刺激性、掩盖杂气、细腻醇和烟气的效果，能够达到提高梗丝抽吸品质，提高梗丝在卷烟中的掺配量的目的。
权利要求
1.一种微生物制剂，其特征在于，该微生物制剂是采用下述方法制备获得取从烤烟叶面上分离得到细菌Van3的液体菌种为原料，按照0. 1 %的接种量接种于200ml的LB液体培养基中，在37°C摇床，转速180r/min振荡培养至OD值=1.5 ；3500rpm/min离心IOmin, 用无菌水洗涤沉淀，离心，然后用20mL无菌水振荡均勻，使用时稀释10倍即为所需的微生物制剂；其中，所述的细菌Van3的液体菌种，经鉴定属于枯草芽孢杆菌，该菌株命名为 Bacillus subtilis。
2.—种权利要求1所述的微生物制剂的制备方法，该方法采用下述步骤(1)烤烟叶面上分离得到细菌Van3的液体菌种；(2)取液体菌种，按照0.的接种量接种于200ml的LB液体培养基中；(3)在37°C摇床，转速 180r/min 振荡培养至 OD 值=1. 5 ；3500rpm/min 离心 IOmin ；(4)用无菌水洗涤沉淀，离心，最后用20mL无菌水振荡均勻，使用时稀释10倍即为所需菌剂。
3.一种权利要求1所述的微生物制剂在梗丝处理中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种烟用微生物制剂及其制备方法和应用，属于烟用添加剂的技术领域。本发明采用生产菌株液体发酵培养后得到相应的微生物制剂。所述生产菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis.Van3)，该菌株已于2010年8月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.4091。本发明的微生物制剂，能够明显提高梗丝的香气量、愉悦性等品质，杂气、刺激性等下降，烟气浓度和劲头减少，余味变得舒适，从而进一步提高梗丝在卷烟中的掺配量，达到减害降焦、降低卷烟生产成本的目的。
文档编号A24B15/20GK102250812SQ201110199168
公开日2011年11月23日 申请日期2011年7月17日 优先权日2011年7月17日
发明者何靓, 唐丽, 廖头根, 曾晓鹰, 段焰青, 王坚, 王家俊, 陈兴, 黄立斌 申请人:红云红河烟草(集团)有限责任公司