果糖二磷酸钠口服溶液及其制备方法

专利名称：果糖二磷酸钠口服溶液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗心血管疾病，如心肌炎、心肌病、缺血性脑病等病的口服制剂，具体地说即作为心肌缺血辅助治疗药的果糖二磷酸钠口服溶液，本发明还涉及该口服溶液的制备方法。
果糖二磷酸(FDP)是机体中葡萄糖酵解过程中重要的中间代谢产物，它存在于人体及其它一切高等动植物细胞内，具有调节糖代谢中若干酶的活性，恢复和改善细胞代谢的分子水平。当外源性FDP进入体内后，对糖酵解各步反应所需的酶，如磷酸果糖激酶，丙酮酸激酶等均有激活作用，使糖酵解能进行下去。因此，FDP不仅能直接为细胞代谢提供能量，而且是分子水平代谢的调节剂。
对于FDP的研究，早在1905年Harden-Yong先完成了对FDP的分离，80年代以来，由Markov等人首先发现其药用价值，以后由意大利福斯卡玛生化制药公司利用酶工程技术，生产FDP并迅速上市。经过国内外大量基础和临床研究表明FDP在人体很多代谢途径中起着重要的调节作用，能改善细胞能量代谢，并增加能量利用，加速组织修复，恢复正常功能，保护红细胞韧性及向身体组织释放氧的能力，并能抑制氧自由基的产生，它可以保护心肌缺氧，防止膜系统受损。对改善心肌收缩和舒张功能，有益于缺血性心肌恢复改善心功能。因此，FDP对心绞痛，心肌梗塞，各种原因引起的心脏功能不全，外周血管病和各种休克等病人，在抢救和治疗过程中是不可缺少的药物。
现通常使用的FDP注射液在治疗急性心肌梗塞、心肌缺血发作及休克急救等心血管系统疾病方面具有一定的疗效。但由于经注射液滴注后的病人，各种症状虽然已明显好转，但为了使病人能维持FDP的效用，巩固临床疗效，且对于出院后处于恢复期的病人，在需要继续治疗巩固疗效时，注射液剂型显然不能够满足需要。
意大利福斯卡玛生化制药公司的FDP钙盐片剂(Esafosfina Glutammica，依福那)每片含果糖-1，6-二磷酸钙盐0.25g(相当于无水果糖二磷酸钙0.155g)，左旋谷氨酸0.02g，维生素B10.002g，维生素B60.0005g，泛酸钙盐0.001g等。适用于FDP静脉滴注后恢复期的病人、糖尿病等各种代谢疾病的辅助治疗、伴有体力虚弱的各种疾病、各类心血管疾病的发病初期，还可增强儿童的免疫力，减少各类儿童疾病的发病率。国内目前有上海海军医学研究所生产果糖二磷酸钠胶囊剂，批准文号(93)后卫字第084号。用于频发房性早搏，偶发室性早搏，病毒性心肌炎，冠心病，心绞痛等心肌疾病及肝炎，非特异性胃肠道疾病。及由专利号为“ZL94111522.4”公开号为“CN 1116930A”公开的“1，6-二磷酸果糖钠盐胶囊”等。
上述FDP或其盐的口服制剂的缺点在于有明确疗效的只有片剂和胶囊剂，而众所周知片剂和胶囊剂均存在不易被人体吸收的缺点，且其中通常添加的某些赋形剂，如淀粉、糖等会影响某些特殊人群如糖尿病等患者的服用。现有公布的FDP或其盐的口服液的资料中显示其均无明确的治疗作用，通常是只具有抗衰老、滋补强身等作用的保健品。
本发明的目的在于提供一种可治疗心肌炎、心肌病、缺血性脑病、各类肝脏疾病、抗疲劳及作为化疗药物的心肌保护等病症的果糖二磷酸钠口服溶液及其制备方法，具有吸收快，服用方便剂量大小易控制和安全的特点，并为用于口服给药增加新的剂型。对出院后处于恢复期的病人，可继续服用果糖二磷酸钠口服溶液，帮助他们迅速恢复健康，适用于绝大多数类型的患者，满足临床和患者的需要。
本发明的另一目的在于果糖二磷酸钠口服溶液的制备方法。
本发明果糖二磷酸钠口服制剂中含有果糖二磷酸钠50～800克/1000毫升，较优选的范围是100～600克/1000毫升的果糖二磷酸钠及适量的防腐剂、矫味剂，还可添加适量的香精等附加剂。其中果糖二磷酸钠的结构式为
分子式为C6H11O12P2Na3化学名称D-果糖-1，6-二(二氢磷酸)三钠盐分子量为406.06果糖二磷酸钠可通过葡萄糖经啤酒酵母发酵及离子交换树脂纯化，反渗透浓缩等精制过程，而获得的含量在10％以上的果糖二磷酸钠盐的水溶液。
果糖二磷酸钠溶液的制备工艺及精制方法主要包括●发酵●树脂纯化(树脂交换)●反渗透防腐剂的选择
山梨酸或其钾盐本品为常用防腐剂，其浓度通常为0.05～0.2％。其特点为对霉菌、酵母菌的抑制力较好。最低抑菌浓度为0.08～0.12％。山梨酸的防腐效果在酸性溶液中最好，以pH4.5最适宜，但山梨酸在水溶液中易氧化。
羟苯乙酯及其类似物本品为对羟基苯甲酸酯类抑菌剂中应用最广的一种。该类化合物是一类优良的防腐剂，毒性低、无刺激性，具有可靠的抑菌作用，因此广泛地应用于各种药剂的防腐。对霉菌及酵母菌的抑制效能较强。适用于酸性和中性的药液，一般在pH3～6范围内效果较好；本品常用抑菌浓度为0.05～0.1％。
苯甲酸或苯甲酸钠苯甲酸有较好的抑菌作用，适用于内服或外用制剂作防腐剂，其有效浓度为0.03～0.2％。其防腐力在于其没有电离的分子，其离子几乎无抑菌作用。因此pH值对苯甲酸类的抑菌作用影响很大。苯甲酸钠也是一种有效的防腐剂，在酸性溶液中苯甲酸钠的防腐作用实际与苯甲酸相同，一般用量为0.1～0.5％。
本发明果糖二磷酸钠口服制剂中可采用的防腐剂及其浓度范围为山梨酸及其钾盐 0.5～2.0克/1000毫升；或羟苯乙酯或其类似物 0.2～1.0克/1000毫升；或苯甲酸或苯甲酸钠 1.0～2.0克/1000毫升等。
矫味剂的选择阿司巴坦(Aspartame)具有高甜度——为蔗糖的200倍，低热量——其发热量仅为蔗糖的1/200，安全性高——无毒，在体内能迅速代谢成天门冬氨酸和苯丙氨酸而被吸收，不会造成龋齿和肥胖，味觉好——具有砂糖的纯正甜味，不含苦味、化学味或金属异味。但本品在水溶液中不稳定，长时间强热能使阿司巴坦分解而失去甜味，但低温和pH3～5时较稳定。40℃以下及pH值4.3左右时最稳定。
蛋白糖FTL50是以阿司巴坦为基料的复方甜味剂，为白色或黄色粉末状，冷热水中均能较好溶解，性质稳定，对热稳定性比阿司巴坦高。使用简便，特别适用于糖尿病人及小儿防龋齿。
本发明果糖二磷酸钠口服制剂中可采用的矫味剂及其浓度范围为阿司巴坦 0.5～10克/1000毫升或蛋白糖FTL500.2～10克/1000毫升等。
本发明果糖二磷酸钠口服制剂可采用通常的口服液制备方法，较好的制备方法为(1)将已去除氯离子的果糖二磷酸钠的适量水溶液作为溶液①；(2)将防腐剂溶于适量水中，加热溶解后再加入矫味剂搅拌溶解后作为溶液②；(3)将溶液②加入溶液①中，搅拌溶解；(4)用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至3.5-5.0；(5)加入香精搅拌均匀后加水至足量；(6)经0.22μ--0.45μ的微孔滤膜过滤；(7)分装。
本口服溶液的剂量为每日2～3次，每次1～2g。
本发明的果糖二磷酸钠口服溶液，通过调节糖代谢中若干酶的活性，提高细胞内三磷酸腺苷和磷酸肌酸的浓度，促进钾离子内流，增加红细胞内二磷酸甘油酸的含量，抑制氧自由基和组织胺释放等多种药理作用。能减轻机体因缺血、缺氧造成的损害，尤其是对缺血性心脏病更显出良好的保护作用。对冠心病心绞痛病人疗效确切，可使心绞痛次数及硝酸甘油消耗量明显减少，心肌缺血得到改善。可适用于心肌炎、心肌病、缺血性脑病、各类肝脏疾病、抗疲劳及作为化疗药物的心肌保护等病症。
本发明的果糖二磷酸钠口服溶液，具有疗效准确，适用范围广。药物的分散度较大，吸收快，起效迅速，服用方便，剂量大小易伸缩、容易控制和安全的特点。对出院后处于恢复期的病人，可继续服用果糖二磷酸钠口服溶液，帮助他们迅速恢复健康，适用于除高磷酸盐血症及肾衰竭者外，绝大多数类型如糖尿病人及龋齿患者等的患者，且副作用小，应用安全。满足临床和患者的需要。其采用的较好的制备方法避免了传统口服液制备工艺中可能影响其活性成分稳定性的缺陷。
实施例(1)配方(以每1000ml溶液计)配方a果糖二磷酸钠100g山梨酸 1g阿司巴坦3g桔子香精1ml配方b
果糖二磷酸钠 100g山梨酸 1g蛋白糖FTL503g桔子香精 3ml配方c果糖二磷酸钠100g羟苯乙酯0.5g阿司巴坦3g桔子香精2ml配方d(优选)果糖二磷酸钠100g羟苯乙酯0.5g蛋白糖FTL50 3g桔子香精2ml配方e果糖二磷酸钠200g羟苯乙酯0.5g蛋白糖FTL50 3g桔子香精2ml配方f
果糖二磷酸钠300g羟苯乙酯0.5g蛋白糖FTL50 3g桔子香精2ml配方g果糖二磷酸钠400g羟苯乙酯0.5g蛋白糖FTL50 3g桔子香精2ml配方h果糖二磷酸钠500g羟苯乙酯0.5g蛋白糖FTL50 3g桔子香精2ml配方i果糖二磷酸钠600g羟苯乙酯0.5g蛋白糖FTL50 3g桔子香精2ml配方j
果糖二磷酸钠700g羟苯乙酯0.5g蛋白糖FTL50 3g桔子香精2ml配方k果糖二磷酸钠800g羟苯乙酯0.5g蛋白糖FTL50 3g桔子香精3ml(2)赋形剂的选择采用果糖二磷酸钠为主要活性成分，对防腐剂山梨酸、羟苯乙酯和矫味剂阿司巴坦、蛋白糖FTL50及桔子香精等附加剂进行筛选，拟定四个组方<
种不同的果糖二磷酸钠口服溶液共三批，置60℃恒温水浴中进行加速试验，分别于0，12，24，48，72 h各取样品，按照果糖二磷酸钠注射液部颁标准WS-062(X-054)94的方法，测定其色泽、含量，对组方进行考察。其结果见表1。
表1果糖二磷酸钠口服溶液组方筛选试验结果
考察结果四个组方中赋形剂对果糖二磷酸钠含量无明显影响，但溶液颜色变化较大，变化顺序为组方1＞组方2＞组方3＞组方4，其原因可能由于山梨酸在水溶液中氧化所致。
根据以上赋形剂的筛选，认为组方4较好，故本发明组方中赋形剂优选羟苯乙酯作为防腐剂、蛋白糖FTL 50作为矫味剂，附加剂优选桔子香精。
(2)pH值的选择根据文献报道果糖二磷酸钠在pH 2～4的溶液中较为稳定。我们采用组方4的成分配制成果糖二磷酸钠口服溶液，分别调pH为3.5、4.2、5.0、6.0四个不同的pH值，共三批，分别置60℃恒温水浴，进行加速试验，分别于0、12、24、48、72小时各取样测定其色泽、含量，发现果糖二磷酸钠的含量随着pH的增加，呈下降趋势，pH3.5和4.2无明显变化。pH5.0、6.0时色泽及含量变化均较明显，故本发明果糖二磷酸钠口服制剂的pH值范围可为3.5～5.0，优选范围为3.4～4.2。pH对果糖二磷酸钠口服溶液的影响试验结果见表2。
表2 pH对果糖二磷酸钠口服溶液的影响试验结果
(3)优选制备工艺参见图8工艺流程图。
与优选配方d相应的优选制备工艺如下①取蒸馏水适量，加热至70℃左右，加入羟苯乙酯搅拌使溶解，再加入蛋白糖FTL50，搅拌使溶解，作为溶液①。
②将已去除氯离子的果糖二磷酸钠溶液，在38℃以下，经旋转蒸发或反渗透浓缩至24～26％作为溶液②(为了避免果糖二磷酸钠口服溶液在配制过程中，由于加热而影响其稳定性，故事先在38℃以下，采用旋转蒸发或反渗透将果糖二磷酸钠溶液浓缩至24～26％)。
③将溶液①冷却到38℃以下，加入溶液②中，搅拌均匀，用NaOH或HCl调pH至3.8～4.2，加入桔子香精2毫升，加水至1000毫升。经0.22μ滤膜除菌过滤。
④滤液分装于10ml或60ml口服溶液瓶中(事先将玻璃瓶冼净，并经干热灭菌)，压盖，经检验合格后包装。
口服溶液的传统生产工艺在生产过程中有加热溶解过程，因此有可能影响其稳定性。为了避免该工艺的缺陷，首先将10％果糖二磷酸钠溶液在38℃以下浓缩(果糖二磷酸钠发酵温度为38℃，因此选择该温度以下进行浓缩)，浓缩至12％以上，而后再加入含有防腐剂的水溶液。果糖二磷酸钠口服溶液的有关药效学的实验报告果糖二磷酸(简称FDP)，是细胞代谢的重要产物，具有调节糖代谢过程中若干酶活性之功效，产生比葡萄糖高一倍的ATP，加速糖酵解，改善心肌在缺氧状态下的能量代谢，增加红细胞内的DPG(二磷酸甘油)，有益于红细胞向组织释放氧，同时还提高细胞内外钾离子比，提高细胞内外pH值，而有利于改善缺血心肌的供血，提高机体能量。本实验由两部分组成，实验以药物致心肌缺血小鼠为动物模型，以乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)为指标，分别观察了果糖二磷酸钠口服溶液对小鼠心肌缺血损伤，以及小鼠对常压缺氧耐受性的影响。结果表明，果糖二磷酸钠口服溶液对药物所致心肌缺血小鼠的心肌损伤，及在心肌缺血情况下小鼠对常压缺氧耐受性均有明显改善作用。实验一.果糖二磷酸钠口服溶液与辅酶Q10片剂、果糖二磷酸钠静脉注射液对小鼠心肌缺血损伤影响的比较实验目的在药物所致心肌缺血小鼠模型上，以LDH、MDA为指标，观察果糖二磷酸钠口服溶液对心肌缺血损伤的影响，并与辅酶Q10片剂及果糖二磷酸钠静脉注射液的作用相比较。
药物1.果糖二磷酸钠口服溶液按配方d制备的本发明口服制剂，规格10ml/支，含量10％，溶剂为0.05％羟苯乙酯、0.3％蛋白糖FTL50、桔子香精适量的水溶液，将该溶液用低温旋转蒸发仪浓缩成15％、30％。
2.辅酶Q10片剂沈阳卫材制药有限公司生产，批准文号(93)卫药准字J-01号，批号970701，规格10mg/片，研碎后溶解于空白对照溶液中，作为阳性对照药。
3.盐酸异丙肾上腺素注射液上海禾丰制药有限公司生产，批号960803，规格1mg/2ml/支，用以制作心肌缺血动物模型。
4.阴性空白对照液0.05％羟苯乙酯、0.3％蛋白糖FTL50、桔子香精适量的水溶液。
动物
昆明种小鼠，合格证号医动字第01-3082号，来源首都医科大学实验动物中心。体重27～30g，性别雌雄各半，每组10只。
实验方法、步骤1.盐酸异丙肾上腺素致小鼠心肌缺血量效曲线昆明种小鼠18只，分别称重、编号，按体重均分3组，每组6只，雌雄各半。各组动物均以戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，连接肢体导联，监视、记录II导联ECG。待稳定后，各组分别以异丙肾上腺素0.016mg/Kg、0.032mg/kg及0.32mg/Kg作腹腔注射。以引起小鼠ECG明显缺血性变化的异丙肾上腺素剂量作为实验用剂量标准。
2.取昆明种小鼠60只，分别称重、编号，按体重均分6组，10只/组，雌雄各半。其中3组在注射异丙肾上腺素前20分钟、后15分钟分别用不同剂量果糖二磷酸钠口服溶液灌胃，即1.5g/Kg，3.0/Kg，6.0g/Kg。另外3组在同样时间分别用辅酶Q10、空白对照液灌胃，及果糖二磷酸钠静脉注射液作腹腔注射(60mg/Kg/次)。各种液体灌胃每次量均为0.6ml，腹腔注射均为0.2ml。
3.各组动物在异丙肾上腺素注射后30分钟断头取血，即时离心取血清送检测定LDH、MDA的量。(生化检测由首医大临床检测中心完成。)4.将6组动物血清生化检测结果数据分别以均值±标准差(X±SD)表示，用t检验进行统计学处理，p＜0.05为有显著性差异。
实验结果
根据ECG监测结果，全部实验动物以0.032mg/Kg剂量异丙肾上腺素作腹腔注射，以制作心肌缺血模型。
从表4可以看出，前5组血清样本LDH值均显著低于空白对照组。其中，果糖二磷酸钠口服溶液1.5g/Kg组p＜0.05，其他4组p＜0.01。表明本发明的果糖二磷酸钠口服溶液与FDP静脉注射液、辅酶Q10同样能够明显降低心肌缺血引起的小鼠血清LDH增高，也就是同样能够有效的保护缺血造成的心肌细胞损伤。
从MDA项中可以看出，果糖二磷酸钠口服溶液3.0g/kg、6.0g/Kg组能够明显降低心肌缺血引起的MDA升高，与辅酶Q10同样能显著地降低MDA的增高。且果糖二磷酸钠口服溶液6.0g/Kg组与辅酶Q10组，MDA值之间无明显差异(p＞0.05)。
表4不同剂量果糖二磷酸钠口服溶液对心肌缺血小鼠血清LDH、MDA的影响(X±SD)<
与空白对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01表明在本实验条件下，以6.0g/Kg本发明的果糖二磷酸钠口服溶液给小鼠灌胃，其对抗心肌缺血产生自由基的作用与辅酶Q10相似。实验二.果糖二磷酸钠口服溶液与辅酶Q10片对心肌缺血小鼠对常压缺氧耐受性影响的比较目的本实验以存活时间为指标，在药物致心肌缺血小鼠模型上，观察果糖二磷酸钠口服溶液对心肌缺血小鼠对常压缺氧耐受性的影响，并与辅酶Q10片剂的作用相比较。
药物1.果糖二磷酸钠口服溶液按配方4制备的本发明口服制剂，规格10ml/支，含量10％，溶剂为0.05％羟苯乙酸，0.3％蛋白糖FTL50，桔子香精适量的水溶液，将该溶液用低温旋转蒸发仪浓缩成15％、30％、60％。
2.辅酶Q10片沈阳卫材制药有限公司生产。批准文号(93)卫药准字J-01号，批号970701，规格10mg/片。研碎溶解于空白对照液中，作为阳性对照药。
3.盐酸异丙肾上腺素注射液，上海禾丰制药有限公司生产，批号9960803，规格1mg/2ml/支，用以制作心肌缺血动物模型。
4.阴性空白对照液0.05％羟苯乙酯，0.3％蛋白糖FTL50，桔子香精适量的水溶液。动物昆明种小鼠，合格证号医动字第01-3082号，来源首都医科大学实验动物中心。体重27-30g，性别雌雄各半，每组10只。
实验方法、步骤1.取昆明种小鼠50只，分别称重、编号，按体重均分5组，10只/组，雌雄各半。其中3组在注射异丙肾上腺素前20分钟、后15分钟分别以3.0g/Kg、6.0g/Kg、12.0/kg果糖二磷酸钠口服溶液灌胃，另外两组则用辅酶Q10及空白对照液。异丙肾上腺素用量同实验一。
2.在注射异丙肾上腺素30分钟后，将各组动物单只分别装入一盛有20g钠石灰的250ml广口瓶内。事先以凡士林涂抹瓶口，盖严，立即记时。以呼吸停止为指标，观察记录小鼠在缺氧状态下存活时间。
3.各组动物存活时间以均值±标准差(X±SD)表示，用t检验进行统计学处理，p＜0.05为有显著差异。
实验结果表5不同剂量果糖二磷酸钠口服溶液对心肌缺血小鼠对常压缺氧耐受性的影响(X±SD)
与空白对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01实验结果表明当小鼠ig 6.0g/Kg，12g/Kg果糖二磷酸钠口服溶液均可明显提高心肌缺血小鼠对常压缺氧的耐受时间，与阳性对照组辅酶Q10作用相似。
结论1.本发明的果糖二磷酸钠口服溶液能够明显降低心肌缺血引起小鼠血清LDH和MDA升高，能有效的保护缺血造成的心肌细胞损伤。
2.能显著的提高心肌缺血小鼠对常压缺氧的耐受性。
实验一及实验二均由首都医科大学生理系心血管生理研究室设计并完成。动物急性毒性试验果糖二磷酸钠口服给药的LD50测定试验目的本试验通过小鼠口服(po)的LD50测定，观察其急性毒性。
试验材料(1)试验动物昆明种小白鼠，品系壹级标准，合格证号013023号，中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心购入。
(2)试验样品将果糖二磷酸钠原料溶液，经冷冻干燥后，所得的冻干粉。按1∶0.8剂距精确称取果糖二磷酸钠4.800g、3.840g、3.072g、2.458g、1.966g分别溶至6ml水中。
试验方法与结果根据预试验结果找出最小全死量和最大全不死量，取小鼠1 8～22g，按体重随机分成五组，每组10只，雌雄各半，每组小鼠体重均重为20g。按1∶0.8的剂距，分别po不同浓度的果糖二磷酸钠0.5ml/20g体重，观察一周，实验小鼠于po后死亡动物多数在4小时内出现，24小时后不再有死亡现象出现，不死小鼠基本恢复正常。毒性及不良反应表现为po后15分钟出现行动不便，静卧，呼吸困难，1小时左右开始出现死亡。对死亡及未死亡一周后处死的实验动物进行尸检，肉眼观察各脏器均未见异常，结果见表6。
表6果糖二磷酸钠口服给药的LD50测定结果。剂量组 剂量对数 动物数 死亡率 回归机LD50±L95平均(g/kg) (只) (％)率单位可信限 (g/kg)20.00 1.30110 100 6.408316.00 1.20410 50 5.416112.80 1.10710 30 4.4239 14.57±2.1910.24 1.01010 10 3.43178.19 0.91310 0 2.4384该结果用Bliss法在计算机上计算。
小结果糖二磷酸钠原料药的口服给药LD50＝14.57g/kg，其95％可信限为12.54～16.92g/kg。
本实验由北京制药工业研究所设计并完成。
急性毒性试验资料表明，以0.4和0.6g/kg/min速度静脉滴注FDP，试验鼠与试验兔的致死量分别可达5.0和5.8g/kg。，FDP的急性毒性效应似乎与大剂量FDP水解后造成大量无机磷进入体循环所致毒性有关，。以100mg和200mg/kg的剂量分别给试验犬和兔输注FDP共30天，未发现有形态和功能方面的病理改变。
采用小鼠口服和静脉注射两种不同给药途径的急性毒性试验测定FDP半数致死量(LD50)，结果小鼠口服给药，其LD50±L95平均可信限为14.57±2.19g/kg。静脉注射给药，其LD50±L95平均可信限为2.11±0.09g/kg。
对交配后6天至18天的有孕试验兔分别以100mg和200mg/kg的剂量输注FDP，对受孕后30天的胎兔进行检查，未发现致畸现象，而母兔也未发现有病理改变。
简言之，从以上综述的结果可以看出，FDP是有明显的药理作用，且毒性小，并具有一定的临床疗效。药代动力学用同位素标记的FDP-(14C)经静脉输入试验鼠，结果表明给药10分钟后达最高血药浓度，并分布于组织，给药20分钟后，可在组织中检测到，其分布情况肾＞肝＞回肠＞肌肉＞肺＞心＞脑。
临床药理研究发现以250mg/kg给健康志愿者静脉输注FDP，5分钟内血浆浓度可达到770mg/L，其半衰期约10～15分钟，并通过向血管外组织分布，并经水解形成无机磷和果糖而从血浆中消失。
人工胃肠液对FDP口服溶液含量的影响实验材料与含量测定方法人工胃液、人工肠液按中国药典1995年版二部附录64～65页配制。含量测定按照“果糖二磷酸钠注射液”部标准WS-062(X-054)-94的方法，测定按照配方d制备的果糖二磷酸钠口服溶液中的FDP的含量。
人工胃液对果糖二磷酸钠口服溶液含量的影响将人工胃液和果糖二磷酸钠口服溶液按1∶1和2∶1混合后，分别置于4个小烧杯中，放入37℃恒温水浴中，放置1，2，3，4小时后取样，测定果糖二磷酸钠口服溶液中FDP含量，并与0时比较结果见表7。
表7人工胃液对果糖二磷酸钠口服溶液含量的影响
人工肠液对果糖二磷酸钠口服溶液含量的影响将人工肠液和果糖二磷酸钠口服溶液按1∶1和2∶1混合后，分别置于4个小烧杯中，放入37℃恒温水浴中，放置1，2，3，4小时后取样，测定果糖二磷酸钠口服溶液中果糖二磷酸钠含量，并与0时比较结果见表8。
表8人工肠液对果糖二磷酸钠口服溶液含量的影响
结论本体外试验表明果糖二磷酸钠口服溶液中FDP在人体胃肠液中不受影响。证明果糖二磷酸钠口服溶液不会被胃肠液破坏。
临床验证报告一、临床验证目的1.验证本发明的果糖二磷酸钠口服溶液用于人体的安全性和有效性。
2.验证本发明的果糖二磷酸钠口服溶液作为一种心肌缺血的辅助治疗药物，临床应用后可否使心肌缺血情况得到恢复和改善。
二、方案设计3.1病例选择3.1.1心绞痛诊断标准①有典型心绞痛症状(应除外主动脉瓣病、心肌病、严重贫血)。
②缺血性心电图改变心绞痛发作时，心电图中R波占优势的导联上自J点后0.08秒测得的ST段呈水平或下斜压低，与P-R段相比压低≥1.0mm，或ST段抬高≥1.0mm。
③冠状动脉造影示1支主要冠状动脉或其大分枝有固定的狭窄，狭窄程度达正常血管口径的50％以上，，或狭窄虽不足50％但有血管痉挛。
具有标准①而同时有标准②或③，或心绞痛发作时口含硝酸甘油片后三分钟内症状缓解，或以往有肯定的心肌梗塞者均符合本试验心绞痛的诊断要求。
3.1.2病例入选标准①符合上述诊断标准者，年龄在18-75岁，男女不限，合作并自愿参加试验。
②心绞痛病程持续1个月以上，在日常生活中或运动后诱发的心绞痛发作每周至少5次。
③静息时心电图正常，心绞痛发作时或负荷试验后出现缺血性ST-T改变者。
④6个月内无心肌梗塞，并排除即将发生心肌梗塞的可能。
⑤绝经期前后女性一般不作为受试对象。
⑥受试者受试期间不停用心血管的基本药物，但需停用各种能量合剂，包括辅酶Q10、ATP等药物。
3.2病例排除标准如有下述情况者不入选①其它疾患所致的疼痛，如胆囊炎、胆石症、溃疡病、食道裂孔疝、肺部或其它有关疾患，如甲亢、颈椎病等；②可使心电图出现类似缺血性ST-T改变的情况，如电解质紊乱、药物(洋地黄、奎尼丁等)影响；③冠状动脉阻塞以外影响心肌耗氧增加的因素如心动过缓、心动过速、心律不齐、心衰和高血压等。
④胰岛素依赖性糖尿病；⑤非胰岛素依赖性糖尿病，血糖控制差者；⑥胃肠疾病或有胃肠手术史，可能影响药物吸收者；⑦妊娠；⑧精神性疾病，无法准确表达个人意愿者；⑨实验室检查示明显异常，包括a)肌酐为正常值上限1.5倍；b)AST(SQOT)和/或ACF(SGPT)为正常值上限的2倍和/或总胆红素为正常值上限的1.5倍。
3.3病例淘汰标准①用药物间发生与本药无关的病情变化，不宜继续试验者。
②疗程未结束，但因其它原因中断用药者，自动出院者及死亡者。
3.4实验方法随机平行法进行临床观察。附随机表。
3.5验证药与对照药验证药按照配方d制备的果糖二磷酸钠口服溶液，10mL/支，规格每支含果糖二磷酸钠0.8337g，对照药河北长天保定药业有限公司生产的，果糖二磷酸钙片(长天欣平片)，规格每片含FDP钙盐0.125g。
3.6病例数、剂量、疗程及给药方法病例数验证组104例，对照组64例。
疗程4周。
给药方法①果糖二磷酸钠口服溶液(验证药)1支Bid(即每日二次，每次1支)口服。
②对照药4片Tid(即每日三次，每次4片)口服。
基础用药可应用硝酸酯类、阿司匹林，必要时可加用β受体阻滞剂，钙拮抗剂，心绞痛发作时可含服硝酸甘油片。
3.7观察指标①心绞痛发作次数和条件及诱发心绞痛发作的劳累强度变化。
②硝酸甘油的日消耗量(注意前后使用剂型应一致)③血压、心率④试验前、后描记12导联心电图⑤治疗前后血常规、尿常规、肝肾功能、血糖、血脂及血钾、钠、氯、钙、磷。
四、疗效评定显效同等劳累程度不引起心绞痛或心绞痛发作次数减少80％以上，硝酸甘油消耗量减少80％以上。
有效心绞痛发作次数及硝酸甘油消耗量减少50％～80％。
无效心绞痛发作次数及硝酸甘油消耗量减少不到50％。
加重心绞痛发作次数、程度及持续时间加重，硝酸甘油消耗量增加。
心电图疗效判定标准显效静息ECG恢复正常，次极限量运动试验由阳性转为阴性，或运动耐量上升二级(+)。
改善静息ECG恢复正常或次极限量运动试验ECG缺血性ST段下降，治疗后回升1.5mm以上，但未正常；或主要导联倒置T波变浅达50％以上或T波由平坦转为直立；或运动耐量上升一级(+)。
无改变静息或次极限量运动试验ECG与治疗前基本相同。
加重静息或次极限量运动试验ST段较治疗前下降≥0.5mm，主要导联倒置T波加深≥50％或直立T波变为平坦；或平坦T波变为倒置；或次极限量运动试验较前运动耐量下降一级(+)。
五、试验结果1.实际各组患者入选数量随机试验验证组60例；对照组64例开放试验验证组44例合计验证组104例；对照组64例2.随机试验两组基本情况分析(表9-13)表9 年龄与病期组别 例数 平均年龄平均病期(年)性别男女验证药组6063.9±9.86.6±7.1 3921对照药组6461.6±9.26.5±6.1 3529表10 合并用药情况比较组别 硝酸酯类 β-阻滞剂 阿司匹林钙拮抗剂验证药组 60(100％) 14(23.3％)33(55.0％) 22(36.7％)对照药组 64(100％) 19(29.7％)29(45.3％) 27(42.2％)表11伴随疾病情况比较组别 陈旧心梗高血压 高血脂 糖尿病 吸烟 肥胖验证药组 11 39 21 8 137对照药组 17 32 35 9 1213表12治疗前两组血压、心率比较组别 血压(mmHg) 心率(次/分)收缩压 舒张压验证药组 136.5±21.0 81.9±10.973.4±9.6对照药组 139.1±22.4 83.5±10.873.4±12.4表13治疗前两组心绞痛次数、硝酸甘油用量比较组别心绞痛次数(次/周)NTG用量(mg/日)验证药组5.87±3.24 2.50±7.36对照药组6.52±3.70 2.15±5.34上述资料经统计学处理无显著性差异，表明验证药组与对照药组在年龄、性别、病程、血压、心率、心绞痛次数及硝酸甘油消耗量等方面无明显差异，两组资料具有可比性。
3.随机试验两组疗效分析3.1治疗后两组心绞痛次数及硝酸甘油消耗量均明显减少。(表14-15)表14 两组治疗前后心绞痛次数验证组对照组治疗前 治疗后 治疗前 治疗后次数(次/周) 5.87±3.24 1.42±1.82 6.52±3.70 2.00±3.19p值 ＜0.01 ＜0.01表15 两组治疗前后NTG用量验证组 对照组治疗前 治疗后 治疗前 治疗后NTG用量(mg/天) 2.50±7.36 0.51±2.60 2.14±5.34 1.21±5.27p值＜0.01 ＜0.01注NTG指口含硝酸甘油量。
3.2两组药对冠心病心绞痛均有较好的辅助治疗作用验证药组60例，显效36例，有效15例，总有效率为85.0％，其中心电图有效21例，总有效率为35.0％。对照组64例，显效36例，有效15例，总有效率为79.7％，心电图有效20例，总有效率为31.3％。两组治疗有效率经统计学处理无显著性差异(p＞0.05，见表16-17)。表16 验证药组及对照药组疗效比较组别总例数 显效 有效 无效 总有效率验证药组 603615985.0％对照药组 64361513 79.7％表17 验证药组及对照药组心电图比较组别 总例数 有效 无效 加重 总有效率验证药组 6021372 35.0％对照药组 6420431 31.3％3.随机试验两组对血压及心率的影响验证药组及对照药组治疗前后血压及心率无明显变化，治疗后验证药及对照药两组的血压及心率无显著性差异(见表18)。表18 两组治疗前后血压、心率变化
5.验证药组104例，治疗前后情况分析5.1验证药组104例，治疗后心绞痛次数及NTG用量明显减少(p＜0.01)见表19。表19 验证药组104例治疗前后情况分析项目 治疗前 治疗后p值收缩压137.9±20.9133.3±15.3 ＞0.05(mmHg)舒张压82.4±10.7 79.8±8.3 ＞0.05(mmHg)心率 75.0±10.8 73.3±8.9 ＞0.05(次份)心绞痛次数6.6±3.6 1.4±1.8 ＜0.01(次/周)NTG用量 2.1±5.7 0.4±1.9 ＜0.01(mg/天)5.2验证药组104例疗效分析按心绞痛次数及NTG用量判定，总有效率为86.5％，心电图改善率为35.6％，见表20。表20 验证药组104例疗效分析判定指标 显效 有效 无效 加重总有效率心绞痛次数573314 0 86.5％或NTG用量心电图7 3065 2 35.6％6.不良反应验证药组104例，不良反应主要表现为轻微的消化系统症状。其中腹胀4例(3.8％)；烧心1例(0.96％)；稀便1例(0.96％)。)。
对照药组64例，不良反应表现为腹胀4例(6.3％)；恶心、烧心各1例(1.6％)；便秘1例(1.6％)。
以上两组出现的不良反应，患者均能耐受，皆顺利服完全疗程。治疗前后血脂、血糖、电解质、肝肾功能及血尿常规未见异常变化。六、讨论疗效分析
果糖-1，6-二磷酸(FDP)是一种分子水平的药物，是细胞内葡萄糖代谢的重要中间产物，具有调节代谢中若干酶活性的功能，具有促进细胞内高能基团的重建，保持红细胞韧性及向组织释放氧的能力以及促进葡萄糖代谢等作用。
目前国际上已普遍应用FDP治疗缺血性心脏病、心力衰竭等，有研究表明应用FDP可促进磷酸果糖激酶及丙酮酸激酶的作用，促进糖酵解产生更多的ATP，增加细胞膜的稳定性，改善心肌收缩和舒张功能，有益于缺血心肌的能量代谢[1]。心脏整体或局部缺血后，由于ATP的损耗和在灌注时氧自由基触发的组织损伤，使心肌机械功能受损，FDP能增进缺血心肌的无氧酵解和抑制氧自由基的产生，从而减轻动物和人急性心肌梗塞时的心肌损伤以及改善心脏功能[2]。另有研究表明FDP对泵衰竭合并外周低灌注压组有明显疗效，特别可使左心室做功指数明显回升，可减轻心肌损害的心电图表现，对心率失常也有一定的疗效。国内学者应用FDP对充血性心力衰竭、心绞痛病人的治疗也取得了较好的疗效。
应用本发明的果糖二磷酸钠口服溶液对冠心病心绞痛病人进行治疗，并以河北长天保定药业有限公司生产的FDP钙盐片剂作为对照药物，结果表明本发明的果糖二磷酸钠口服溶液有较好的疗效，其中验证组的有效率为86.5％，心电图有效率为35.6％，均达到了对照组的疗效。
不良反应分析两组病人中均未见严重的不良反应，主要表现为消化系统的轻微症状，如腹胀，恶心、烧心、便秘及稀便，验证药组的发生率低于对照组。各项设计中检查的化验指标前后无异常变化，说明果糖二磷酸钠口服溶液不良反应少，应用安全。
七、结论本发明的果糖二磷酸钠口服溶液作为一种抗心肌缺血的辅助治疗药物，对冠心病心绞痛病人疗效确切，可使心绞痛次数及硝酸甘油消耗量明显减少，心肌缺血得到改善。临床有效率及心电图有效率分别达86.5％及35.6％，且副作用小，应用安全。典型病例1、高淑美 女 52岁 病例号969191中日友好医院主诉患者曾患有高血压病5年，最高血压180/100-110mmHg。经服用洛丁新加寿比山，血压控制在150/86mmHg。近半年来，心前区发作性憋闷，二周来加重，体育活动持续2小时出现心前区憋痛，紧缩感，持续3～5分钟，休息片刻即缓解。次日外出骑车30分钟后又发作心前区痛。心电图显示冠状动脉供血不足，服用德脉宁40mg/日。
查体一般好，神清，BP160/96mmHg，心律齐，心率58次/分，未闻杂音。两肺无罗音，肝脾均未及，双下肢无浮肿。ECG(

图1)示TV2、V3、V4深倒置-3mm，ST aVF、V4、V5水平下降-1mm，冠状动脉供血不足。SPECT核素心肌断层扫描结果左侧前壁、前间壁缺血。活动平板试验负荷心率为70次/分。运动2分钟后患者发作心绞痛，此刻ECG、ST-T比运动前ST段明显下降及T加深，故终止试验。结论运动试验阳性。血生化T-cho308mg/dl，TG108mg/dl，GPT16u/L，BUN14.8mg/dl，Glu97mg/L。
诊断冠心病、稳定型心绞痛、高血压病、高脂血症-高胆固醇血症。
治疗经过入选后，继续服用寿比山2.5mg/日，洛丁新10mg/日，阿司匹林40mgBid，加用本发明的果糖二磷酸钠口服溶液1g(10ml)Bid。治疗4周后，未再发作心绞痛，再次骑自行车40分钟未出现疼痛。ECG(图2)明显改善示ST由-1.0mm恢复至正常，T V4、V5-2mm变低平直立。患者要求继续口服果糖二磷酸钠口服溶液，治疗8周后，ECG(图3、图4)，ST-T完全恢复正常，自觉运动耐受力明显增加，骑自行车1小时也未再发作心前区憋痛。
2、梁新国 男 69岁病例号302021 积水潭医院半年来反复发作心前区疼痛，于3天前无明显诱因突发心前区压榨感，伴胸闷、憋气、出汗，服速效救心丸后40分钟后自行缓解。此后，服用德脉宁、消心痛等药物治疗后症状减轻。既往史无高血压、心脏疾患、糖尿病等病史。为进一步确诊而于98年8月17日入院。
查体一般好，神清，血压135/75mmHg，心率72次/分，律整，未闻杂音。腹软无压痛，肝脾未及。心电图(图5、6)示STII、III aVF，V4～V6水平下移，其中，STV3V5V6＞0.075mv。
动态心电图窦性心律，偶发房性早搏，短阵房性心动过速，ST-T改变。负荷心肌核素扫描示注射潘生丁出现心前区疼痛，10分钟后缓解，左室下侧壁心肌缺血性改变。UCG左室顺应性减低。主要生化检验肝肾功能均正常。APOB1.18G/L(0.55～1.05)；纤维蛋白原520mgdL，全血粘度18mpa.s。
诊断冠心病，不稳定心绞痛。
治疗经过于8月26日服用巴米尔100mg，每日1次，消心痛10mg Bid，加服果糖二磷酸钠口服溶液1g Bid。治疗4周后，发作次数减少，活动后发作心前区疼痛减轻。于9月28日复查心电图(图7)示ECG缺血改变明显好转，表现STII、III avF恢复至水平线。用药过程中未见不良反应，各项化验指标无明显变化。
权利要求
1.一种果糖二磷酸钠口服溶液，其特征在于含有果糖二磷酸钠50～800克/1000毫升，及防腐剂山梨酸及其钾盐0.5～2.0克/1000毫升或羟苯乙酯0.2～1.0克/1000毫升，或苯甲酸1.0～2.0克/1000毫升，及矫味剂阿司巴坦0.5～10克/1000毫升，或蛋白糖FTL50 0.2～10克/1000毫升。
2.如权利要求1所述的果糖二磷酸钠口服溶液，其特征在于其中的果糖二磷酸钠的含量为100～600克/毫升。
3.如权利要求1或2所述的果糖二磷酸钠口服溶液，其可采用通常的口服溶液制备方法。
4.如权利要求1或2所述的果糖二磷酸钠口服溶液，其特征在于还含有附加剂香精。
5.如权利要求1或2所述的果糖二磷酸钠口服溶液，其特征在于其中的香精为桔子香精。
6.如权利要求5所述的果糖二磷酸钠口服溶液，其特征在于其由100克/1000毫升的果糖二磷酸钠、0.5克/1000毫升的羟苯乙酯、3克/1000毫升的蛋白糖FTL50及适量的桔子香精组成。
7.如权利要求6所述的果糖二磷酸钠口服溶液，其特征在于其中的桔子香精为2毫升/1000毫升。
8.如权利要求3所述的果糖二磷酸钠口服溶液的制备方法，其特征在于其制备方法包括下列步骤(1)将已去除氯离子的果糖二磷酸钠的适量的水溶液作为溶液①；(2)将防腐剂溶于适量水中，加热溶解后再加入矫味剂搅拌溶解作为溶液②；(3)将溶液②加入溶液①中，搅拌溶解；(4)用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至3.5--5.0；(5)加入香精搅拌均匀后加水至足量；(6)经0.22μ--0.45μ的微孔滤膜过滤；(7)分装。
8.如权利要求7所述的果糖二磷酸钠口服溶液的制备方法，其特征在于制备方法的步骤为①取蒸馏水适量，加热至70℃左右，加入防腐剂搅拌使溶解，再加入矫味剂，搅拌使溶解作为溶液①。②将10％果糖二磷酸钠溶液，在38℃以下，经旋转蒸发或反渗透浓缩至12％以上。③将溶液①冷却到38℃以下，加入溶液②中，搅拌均匀，用NaOH或HCl调pH至3.5-5.0，加入香精适量，加水至1000ml。经0.22μ-0.45μ滤膜除菌过滤。④滤液分装于10ml或60ml口服溶液瓶中(事先将玻璃瓶冼净，并经干热灭菌)，压盖，经检验合格后包装。
9.如权利要求8所述的果糖二磷酸钠口服溶液的制备方法，其特征在于制备方法的步骤为①取蒸馏水适量，加热至70℃左右，加入羟苯乙酯搅拌使溶解，再加入蛋白糖FTL50，搅拌使溶解。②将10％果糖二磷酸钠溶液，在38℃以下，经旋转蒸发浓缩至24～26％作为溶液②。③将溶液①冷却到38℃以下，加入溶液②中，搅拌均匀，用NaOH或HCl调pH至3.8-4.2，加入2毫升桔子香精适量，加水至1000ml。经0.22μ滤膜除菌过滤。④滤液分装于10ml口服溶液瓶中。
10.如权利要求1所述的果糖二磷酸钠口服溶液可用于作为心肌缺血辅助治疗药。
全文摘要
本发明涉及一种果糖二磷酸钠口服溶液及其制备方法,该口服溶液含有果糖二磷酸钠50～800克/1000毫升,及防腐剂山梨酸及其钾盐0.5～2.0克/1000毫升或羟苯乙酯0.2～1.0克/1000毫升,或苯甲酸1.0～2.0克/1000毫升,及矫味剂蛋白糖FTL50 0.2～1.0克/1000毫升。其制备方法独特,避免了通常口服溶液制备方法由于加热而影响其稳定性的缺点。该果糖二磷酸钠口服溶液可用于作为心肌缺血辅助治疗药。其优点是疗效确定、吸收快,服用方便,适用于绝大多数类型的患者。
文档编号A61P9/10GK1270031SQ00100449
公开日2000年10月18日 申请日期2000年1月28日 优先权日2000年1月28日
发明者宋国芳, 孙晋涛 申请人:北京华靳制药有限公司