专利名称：1,4－苯并硫氮杂∴衍生物作为抗癌药抗性克服用药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及1，4-苯并硫氮杂衍生物作为抗癌药抗性克服用药物或抗癌药效果增强用药物的用途。详细地说，本发明涉及含有1，4-苯并硫氮杂衍生物的、用于包括人类在内的哺乳动物的抗癌药抗性克服用药物组合物和抗癌药效果增强用药物组合物。本发明也涉及对于治疗癌有用的、特别是对于治疗已对抗癌药形成抗性的癌有用的药物组合物，以及用于治疗癌的药物试剂盒。本发明还涉及包括将抗癌药抗性克服药物或抗癌药效果增强药物与抗癌药进行联合投药的治疗癌的方法。
背景技术：
众所周知，将抗癌药投药给癌症患者时，效果随着不断投药而减小。由于生物体内出现对抗癌药具有抗性的癌细胞，致使癌的化学疗法变得困难。这样的药物抗性分为自然抗性和获得抗性。用抗癌药对癌进行治疗时，感受性高的细胞将消失，感受性低的细胞则存留下来。即使是同一种癌，也是对抗癌药具有高感受性和低感受性的细胞混合存在。对抗癌药具有高感受性的癌细胞通过与抗癌药接触而带有获得抗性。从临床来看，也可以分为对抗癌药感受性较高的小细胞癌、卵巢癌、乳癌等；和对抗癌药感受性较低的非小细胞癌、胃癌、大肠癌等。
已经认识到在对抗癌药具有抗性的细胞中①由于细胞膜发生变化，对药物的摄入降低；②由于P-糖蛋白、多药剂抗性关联蛋白(MRP)等而加速药物排出；
③P-450等药物活性化酶的活性降低；④谷胱甘肽S-转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、DT-黄递酶、UDP-葡糖苷酸转移酶、金属硫蛋白等解毒酶的活性上升；⑤与许多抗癌药解毒相关的还原型谷胱甘肽(GSH)的浓度上升；⑥DNA修复活性(拓扑异构酶)的上升等。
在对抗癌药具有抗性的细胞中，获得了对某种抗癌药的抗性的细胞也会表现出对其它抗癌药的抗性。这被称为多药剂抗性(multidrugresistance；MDR)。已知在获得了多药剂抗性的细胞中，大量出现分子量为170KD的P糖蛋白。P糖蛋白也存在于大量的正常细胞中，它与排泄机构有关。对于抗癌药，P糖蛋白具有利用ATP的能量将各种抗癌药排出细胞外的泵作用，使抗癌药的细胞内浓度降低，使细胞对抗癌药形成抗性。P糖蛋白的排出作用对抗癌药的选择性低，可以将数种抗癌药排出细胞外。因此，认为出现过剩P糖蛋白的细胞将获得多药剂抗性。至于癌的种类，有P糖蛋白加速出现的大肠癌、肝癌、胰腺癌、肾癌，在复发的同时P糖蛋白加速出现的急性白血病、恶性淋巴瘤、成神经细胞瘤等，以及P糖蛋白少量出现的乳癌、头颈部癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌、黑素瘤等。
1981年，发现钙拮抗剂维拉帕米可以克服多药剂抗性[Cancer Res.，41，1967-1972，(1981)]。之后，知道了一些钙拮抗药、钙调蛋白拮抗药等也具有抗性克服作用。此外，知道了免疫抑制剂环孢菌素A也具有抗性克服作用。推测维拉帕米、环孢菌素A在P糖蛋白和抗癌药结合的部位与P糖蛋白竞争阻碍它的作用，从而克服抗性。也暗示了环孢菌素A具有对以细胞色素P-450为代表的药物代谢酶产生影响，从而使效果增强的可能性。环孢菌素A与依托泊苷联合用药的效果得到了临床确认。据报道环孢菌素A与标准化疗药物联合用药，对急性骨髓性白血病和骨髓瘤具有突出效果。但是，因为这些钙拮抗剂、免疫抑制剂具有严重的由该制剂本来所具有的钙拮抗作用、免疫抑制作用而引起的副作用，所以在临床应用上存在问题。
作为钙拮抗作用较弱的多药剂抗性克服剂，已知有MS-209[Cancer Chemother.Pharmacol.，35，271-277(1995)、CancerChemother.Pharmacol.，36，361-367(1995)] 认为MS-209与P糖蛋白直接结合，阻碍P糖蛋白与抗癌药的结合，从而克服抗性。
如果大量使用激素药他莫昔芬，则可通过抑制蛋白激酶C从而抑制P糖蛋白的机能，并且也将他莫昔芬和托瑞米芬作为抗性调节剂在进行研究。据报道，这些药物与癌细胞的雌激素受体的存在与否无关，而是取决于抗癌药物的种类，对长春碱、多柔比星、依托泊苷有效，而对顺铂、美法仑无效。
另一方面，发现了见不到P糖蛋白的过剩出现、而对以长春花碱为首的抗癌药显现出多药剂抗性的细胞株。1992年，コ-ル(Cole)等在未出现P糖蛋白的肺小细胞癌细胞株H69的多柔比星抗性株H69AR中，分离出了与过剩出现的mRNA相对应的cDNA。发现了由上述cDNA编码的1,531个氨基酸形成的蛋白质，将其建议为MRP(与多药剂抗性相关的蛋白质)[Science，258，1650-1654，(1992)]。MRP为190KD的膜蛋白质，属于ABC(ATP结合盒)总科，与P糖蛋白一样，具有排出抗癌药的泵的机能。MRP大量存在于非小细胞肺癌、甲状腺癌、神经胶质瘤、成神经细胞瘤等细胞株中。这些癌被指出对于化学疗法反应很差。也有报道说慢性淋巴性白血病亦频繁地发现有MRP大量出现。MRP与P糖蛋白一样，可将没有构造类似性的许多抗癌药排出，但是当细胞内的谷胱甘肽浓度降低后MRP的抗性水平降低。此外，由于白三烯等、谷胱甘肽结合体是通过MRP输送的，因此抗癌药也可能在接受代谢、修饰之后，作为亲水性化合物被排出。除谷胱甘肽结合体之外，MRP也能将葡糖醛酸、硫酸结合体作为基质进行识别。认为MRP也输送带有多价负电荷的基质、接受了同样的修饰的重金属。维拉帕米、环孢菌素A等是克服了与P糖蛋白相关的多药剂抗性的药物，据报道也部分克服了与MRP相关的多药剂抗性，但是现在没有对于与MRP相关的多药剂抗性特效的药物。
最近，除MRP外，发现了谷胱甘肽结合体排出泵。从人体鼻咽细胞癌KB细胞分离的顺铂抗性细胞KCP-4细胞，显示出相对于顺铂约为63倍的抗性。KCP-4细胞内的顺铂浓度降低，出现了依赖于ATP的顺铂排出泵[Jpn.J.Cancer Res.，85，423-433，(1994)]。该细胞内的谷胱甘肽浓度比亲代细胞株约高4.7倍，若用谷胱甘肽合成酶抑制剂将谷胱甘肽浓度降低至低于或等于亲代细胞株的浓度，则对顺铂的抗性水平将降低大约一半。在KCP-4细胞中，由于在蛋白质、mRNA中都没有出现MRP，所以认为存在不同于MRP的谷胱甘肽结合体排出泵[BBRC，226，158-165，(1996)]。从KCP-4细胞分离的cMOAT基因具有与MRP的相同性，KCP-4、PC5、T24三种顺铂抗性细胞与亲代细胞株相比，cMOAT中mRNA的出现分别约高4-6倍，从而认为cMOAT是与顺铂抗性相关的蛋白质。
通过抗癌药的解毒可以知道抗性机理。谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase；GST)是一种药物解毒酶，大量存在于肝脏中，但也广泛分布于其它脏器中，主要在细胞质中作为二聚物存在。许多分子种类是已知的，除谷胱甘肽(GSH)结合活性(GST活性)外，与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性，白三烯、前列腺素的代谢相关的分子种类也是已知的。氮芥等烷基化试剂接受GSH结合(GSHconjugation)而被解毒的物质很多。顺铂可通过GSH进行螯合，VP-16可被GSH结合，两者都可以被解毒[Biochem.Soc.Transact.，15，728-730，(1987)]。
由金属硫蛋白产生的药物抗性也是已知的。金属硫蛋白是在马的肾脏中以镉结合蛋白质的形式被发现的，它是分子量为6000的较小的蛋白质，具有特征如下的结构构成氨基酸的大约三分之一为半胱氨酸，而且没有一个S-S键。1981年，Bakka等发现含有高浓度金属硫蛋白的镉抗性细胞对于顺铂具有抗性，显示出金属硫蛋白可能作为相对于顺铂的细胞毒性的抗性因子发挥作用[Toxicol.Appl.Pharmacol.，61，215-226，(1981)]。另外，作出了金属硫蛋白基因缺损的小鼠，证实从该小鼠分离的细胞对于顺铂具有高感受性[Cancer Res.，55，2021-2023，(1995)]。在用有癌的小鼠进行的研究中，将锌投给小鼠，使癌组织中的金属硫蛋白浓度上升至约2倍，确认不仅显著降低了顺铂的抗癌效果，也显著降低了多柔比星、博来霉素、环磷酰胺和美法仑的抗癌效果。认为由于金属硫蛋白浓度上升，有可能获得对于多种抗癌药的抗性。虽然正在对抑制金属硫蛋白合成的氨基酸衍生物炔丙基甘氨酸进行研究，但是由于其毒性强，临床应用存在问题。
拓扑异构酶是对改变DNA的拓扑结构起作用的酶，I型和II型为已知的，多柔比星、依托泊苷抑制拓扑II型，喜树碱抑制拓扑I型。已知在对喜树碱产生了抗性的癌细胞中，拓扑异构酶的结构经受了点突变。
特开平8-92218号公报中记载了一种作为药物抗性克服剂的、由下述通式所表示的化合物 (X、Y表示氢原子或卤素原子；n表示1-4的整数；R1表示卤素原子、碳原子数为1-4的烷基、碳原子数为1-4的烷氧基、可被硝基取代的能够含有氮原子的单环或双环芳香环。)。
特开平8-509223号公报(国际公开WO94/24107号说明书、美国专利5643909号说明书、美国专利5654304号说明书、欧洲专利695293号说明书)中记载了一种由下述通式所表示的化合物 [A为-CH2-CH2-、-CH2-CHRa-CH2-、或-CH2-CHRa-CHRb-CH2-(Ra或Rb中的一个为H、OH、低级烷氧基，另一个为H。)；R1、R2为H、F、Cl或Br；R3为杂芳基或根据需要被选自F、Cl、Br、CF3、CN、NO2和OCHF2的取代基所取代的苯基]。特开平10-7660号公报(美国专利5700826号说明书、欧洲专利812829号说明书)中记载了一种由下述通式所表示的化合物 (R1表示取代烷基、取代链烯基等；R2、R3表示芳基等；R4表示氢、取代烷基、取代链烯基等)。但是上述任何专利中都没有记载与本发明相关的1，4-苯并硫氮杂衍生物。
至于与本发明相关的化合物，特开平4-230681号公报(国际公开WO92/12148号、欧洲专利565721号、美国专利5416066号)中记载了由下述通式所表示的1，4-苯并硫氮杂衍生物或其药学上可接受的盐，并且也记载了这些化合物的制备方法。 [式中R表示氢原子或碳原子数为1-3的低级烷氧基；R1表示氢原子、碳原子数为1-3的低级烷氧基、取代苯基(其中取代基为羟基或碳原子数为1-3的低级烷氧基。)、 (这里R2是碳原子数为1-3的酰基)；X表示氧原子或H2；n表示1或2；Ph表示苯基。]特开平4-230681号公报记载了了心肌梗塞患者的心肌中有两种坏死形态[Static cell death(SD)和Kinetic cell death(KD)]，造成人体心肌梗塞主要的细胞死亡是KD形态。该发明化合物由于具有KD抑制作用，因而记载了其作为心肌梗塞的预防和治疗药物是有用的。但是，关于对抗癌药抗性的克服却没有任何记载。另外，本申请发明的发明者之一金子报道了化合物 具有阻滞细胞内钙的作用[Drug Dev.Res.，33，429-438(1994)]，以及该化合物作为钙离子通道活性抑制剂是有效的[J.Mol.Biol.，274，16-20(1997)]，但是该文献未曾言及任何与本发明主题，即抗癌药抗性克服作用相关的内容。
已经知道过去已知的维拉帕米等钙拮抗药可以抑制P糖蛋白[Cancer Res.，49，5002-5006(1989)]。另一方面，据报道[Cancer Res.，49，2844-2850(1989)]，在使用B16细胞的黑素缺乏性细胞B16a细胞及其顺铂抗性变异株B16a-Pt细胞的实验中，钙拮抗剂硝苯地平虽然增强了顺铂的抗肿瘤效果，但是维拉帕米、地尔硫、尼莫地平、尼卡地平以及钙调蛋白拮抗药三氟拉嗪和calmidazilium没有显著的抗肿瘤效果增强作用。另据报道[J.Neurosurg.，82，4469-474(1995)]，在使用人体成胶质细胞瘤细胞GB-1细胞和U87-GM细胞的实验中，维拉帕米、地尔硫、尼莫地平、尼卡地平、贝尼地平、尼伐地平、尼索地平没有显著的顺铂抗肿瘤效果增强作用。
在Drug Dev.Res.，33，429-438(1994)中记载了地尔硫为1，5-苯并硫氮杂化合物，化合物 为1，4-苯并硫氮杂化合物，两者相似，但是地尔硫没有显著的顺铂抗肿瘤效果增强作用，从上述报道可以推测本申请发明所涉及的化合物不具备顺铂抗性克服作用。但是，从随后的实施例可知，本申请发明所涉及的由通式[I]表示的化合物对以顺铂为首的铂络合物具有极强的抗性克服作用。
肿瘤细胞通过下述机构获得对顺铂等铂络合物的抗性铂络合物向细胞中的积聚降低、由谷胱甘肽、金属硫蛋白等引起的解毒、受到伤害的DNA的修复功能的提高等[Jpn.J.Cancer Res.，79，301-304(1988)、J.Biol.Chem.，265，4296-4301(1990)、Jpn.J.Cancer Res.，81，527-535(1990)、Br.J.Cancer，67，1171-1176(1993)、Cancer Res.，53，5225-5232(1993)、Cancer Res.，53，3694-3699(1993)、Pharmacol.Ther.，52，385-406(1991)]。由此可知仅仅通过抑制P糖蛋白来克服对顺铂的抗性是困难的。所以，虽然现在还不明白本发明所涉及的由通式[I]表示的化合物的详细机构，但是可以推测它是通过与过去的钙拮抗药不同的机构来克服抗性的。此外，令人吃惊的是，本发明所涉及的由通式[I]表示的化合物对于他克唑和多柔比星等抗癌药也具有很强的抗性克服作用。
发明的公开本发明的目的是提供用于以人为首的哺乳动物的抗癌药抗性克服药和抗癌药效果增强药。另外，本发明也提供用于治疗包括人在内的哺乳动物的癌有用的药物组合物和药物试剂盒。本发明的目的特别是提供对于已对抗癌药具有抗性的癌的治疗有用的抗癌药抗性克服剂、抗癌药效果增强剂、药物组合物和药物试剂盒。本发明进一步的目的是提供对于已对抗癌药具有抗性的癌也有效的癌症治疗方法。
本发明者们为了解决上述课题进行了深入的研究，结果令人吃惊地发现，由下述通式[I]表示的化合物具有优异的抗癌药抗性克服作用和抗癌药效果增强作用，而且毒性低，从而完成了本发明。
过去的抗性克服剂和P糖蛋白、与多药剂抗性相关的蛋白(MRP)有关，是对于所谓的MDR的抗性克服剂。至于钙拮抗剂，据报道维拉帕米的抗性克服也与MDR有关，对顺铂的抗性在动物实验中无效。此外，也有进行了对于MDR的用幼儿进行的临床试验，但是由于血压降低(心搏徐缓)而中止了试验的报道。认为对顺铂的抗性的机理与MDR不同，初次知道由下述通式[I]表示的本申请发明所涉及的化合物可以克服顺铂抗性，这是令人吃惊的。
本发明涉及以由下述通式[I]表示的化合物作为有效成分的抗癌药抗性克服用药物组合物或抗癌药效果增强用药物组合物。更详细的介绍如下述(1)-(27)所示。
(1)抗癌药抗性克服用药物组合物，所述组合物含有下述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体，以及药学上可接受的载体。 [式中R1表示氢原子或低级烷氧基；R2表示氢原子、低级烷氧基、苯基(该苯基可被1-3个选自羟基、低级烷氧基的取代基所取代)、 (此处R3表示酰基)；X表示-CO-或-CH2-；n表示1或2。](2)上述(1)的药物组合物，其中所述化合物为4-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙酰基]-7-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并硫氮杂或其盐或其药物前体。
(3)上述(1)或(2)的药物组合物，其中所述抗癌药为铂络合物、来自植物的抗肿瘤性物质或者抗肿瘤性抗生物质。
(4)上述(3)的药物组合物，其中所述抗癌药为顺铂、卡铂、奈达铂、多柔比星或他克唑。
(5)抗癌药效果增强用药物组合物，所述组合物含有上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体，以及药学上可接受的载体。
(6)上述(5)的药物组合物，其中所述化合物为4-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙酰基]-7-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并硫氮杂或其盐或其药物前体。
(7)上述(5)或(6)的药物组合物，其中所述抗癌药为铂络合物、来自植物的抗肿瘤性物质或者抗肿瘤性抗生物质。
(8)上述(7)的药物组合物，其中所述抗癌药为顺铂、卡铂、奈达铂、多柔比星或他克唑。
(9)用于使癌对抗癌药的抗性降低的药物组合物，所述组合物含有上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体，以及药学上可接受的载体。
(10)用于使癌对抗癌药的感受性增强的药物组合物，所述组合物含有上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体，以及药学上可接受的载体。
(11)药物组合物，所述组合物含有上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体，以及抗癌药。
(12)克服抗癌药抗性的方法，所述方法包括将上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体以有效量进行投药。
(13)增强抗癌药效果的方法，所述方法包括将上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体以有效量进行投药。
(14)使癌对抗癌药的抗性降低的方法，所述方法包括将上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体以有效量进行投药。
(15)使癌对抗癌药的感受性增强的方法，所述方法包括将上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体以有效量进行投药。
(16)治疗癌的方法，所述方法包括将有效量的上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体与有效量的抗癌药进行联合投药。
(17)治疗对抗癌药具有抗性的癌的方法，所述方法包括将有效量的上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体与有效量的抗癌药进行联合投药。
(18)上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体在生产抗癌药抗性克服用药物中的应用。
(19)上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体在生产抗癌药效果增强用药物中的应用。
(20)上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体在生产使癌对抗癌药的抗性降低的药物中的应用。
(21)上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体在生产使癌对抗癌药的感受性增强的药物中的应用。
(22)商业包装，所述包装包括上述(1)-(4)中任一项的药物组合物以及关于该药物组合物的说明书，该说明书记载了该药物组合物可以或应当用于克服对抗癌药的抗性。
(23)商业包装，所述包装包括上述(5)-(8)中任一项的药物组合物以及关于该药物组合物的说明书，该说明书记载了该药物组合物可以或应当用于增强抗癌药的效果。
(24)商业包装，所述包装包括上述(1)-(4)中任一项的药物组合物以及关于该药物组合物的说明书，该说明书记载了该药物组合物可以或应当用于降低癌对抗癌药的抗性。
(25)商业包装，所述包装包括上述(1)-(4)中任一项的药物组合物以及关于该药物组合物的说明书，该说明书记载了该药物组合物可以或应当用于增强癌对抗癌药的感受性。
(26)用于治疗癌的药物试剂盒，所述药物试剂盒包含2种药物，第一种药物为含有上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体的抗癌药抗性克服药物，第二种药物为抗癌药。
(27)用于治疗癌的药物试剂盒，所述药物试剂盒包含2种药物，第一种药物为含有上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体的抗癌药效果增强药物，第二种药物为抗癌药。
通式[I]所表示的化合物优选4-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙酰基]-7-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并硫氮杂。
抗癌药优选铂络合物、来自植物的抗肿瘤性物质或抗肿瘤性抗生物质，更优选顺铂、卡铂、奈达铂、多柔比星或他克唑。
发明详述为了说明本发明在本说明书中所使用的用语定义如下。
“抗癌药抗性克服药”或“抗癌药抗性克服用药物组合物”是指虽然其自身没有抗癌活性，但是具有使癌细胞对抗癌药的抗性降低的作用的药物。即，具有使获得了抗癌药抗性的癌细胞对抗癌药的感受性增加的作用的药物。在这种情况下，感受性的增加不仅是指将抗癌药对抗癌药抗性细胞的作用效果提高至其对抗癌药感受性细胞的作用效果或更高，还包括将抗癌药对抗癌药抗性细胞的作用效果和其对抗癌药感受性细胞的作用效果提高到大致同等的程度。此外，“抗性克服”的同义词可包括“抗性抑制”、“抗性解除”、“抵抗性解除”、“感受性增强”等。
“抗癌药效果增强药”或“抗癌药效果增强用药物组合物”是指虽然其自身没有抗癌活性，但是通过与抗癌药结合使用可以增强抗癌药活性的药物，换句话说，是指可以增强抗癌药自身具有的抗癌效果的药物。在这种情况下，增强不仅是指将抗癌药对抗癌药抗性细胞的作用效果提高至其对抗癌药感受性细胞的作用效果或更高，还包括提高未产生抗性的癌细胞对抗癌药的感受性。
因此，使用本发明所涉及的抗癌药抗性克服药、抗癌药效果增强药，不仅可以增加获得了抗性的癌细胞对抗癌药的感受性，而且可以减少抗癌药的投药量，或者延长抗癌药的投药时间间隔。
“克服抗癌药抗性的方法”是指使癌细胞对抗癌药的抗性降低的方法，即，使获得了抗癌药抗性的癌细胞对抗癌药的感受性增加的方法。
“增强抗癌药效果的方法”是指增强抗癌药活性的方法，换句话说，是增强抗癌药自身具有的抗癌效果的方法。
“低级烷氧基”是指碳原子数为1-6的直链或支链烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、叔戊氧基或己氧基，优选碳原子数为1-3的甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基，特别优选甲氧基。
“酰基”是碳原子数为1的甲酰基；碳原子数为2-6的烷酰基，如乙酰基、丙酰基、丁酰基或新戊酰基等；或者芳基上可以有1-3个取代基的苯甲酰基等芳酰基。优选甲酰基、乙酰基、新戊酰基或苯甲酰基。
通式[I]所示化合物的“盐”为药学上可接受的盐，优选为药学上可接受的酸加成盐，包括例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐或硝酸盐等无机酸加成盐；乙酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、乙醇酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、草酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐或抗坏血酸盐等有机酸加成盐；天冬氨酸盐或谷氨酸盐等氨基酸加成盐，但是不限于这些物质。此外，根据情况不同，也可以是含水物或水合物。
通式[I]所示化合物的“药物前体”为具有能够化学或代谢分解的基团、由于水解或溶剂解或在生理条件下分解而显示出药学上的活性的本发明化合物的衍生物。
“抗癌药”包括但不限于下列物质白消安、卡波醌、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、氮芥、塞替派、乌拉莫司汀、卡莫司汀(BCNU)、盐酸尼莫司汀(ACNU)、磷酸雌莫司汀等烷基化剂；硫唑嘌呤、安西他滨、卡莫氟、去氧氟尿苷、氟尿嘧啶(5-FU)、巯嘌呤(6-MP)、巯嘌呤苷、替加氟、阿糖胞苷(Ara-C)、甲氨蝶呤(MTX)、羟基脲、阿糖胞苷オクホスフア-ト(ocfosfate)、喷司他丁等代谢拮抗药；放线菌素D、丝裂霉素C(MMC)、博来霉素(BLM)、柔红霉素、多柔比星、新制癌素(NCS)、盐酸伊达比星等抗肿瘤性抗生物质；依托泊苷(VP-16)、替尼泊苷、长春地辛、长春新碱、长春碱、他克唑(紫杉醇)、盐酸伊立替康等来自植物的抗肿瘤性物质；顺铂(CDDP)、卡铂(CBDCA)、奈达铂(NDP)等铂络合物；泼尼松、泼尼松龙、睾酮、雌莫司汀、炔诺酮、醋酸戈舍瑞林、醋酸亮丙瑞林、柠檬酸托瑞米芬、盐酸法倔唑、他莫昔芬等激素类药；米托蒽醌(MXT)等アントラサイクリン(anthracyclinic)类化合物。优选抗癌药为顺铂、卡铂、奈达铂等铂络合物；放线菌素D、丝裂霉素C、博来霉素、柔红霉素、多柔比星、新制癌素、盐酸伊达比星等抗肿瘤性抗生物质；依托泊苷、替尼泊苷、长春地辛、长春新碱、长春碱、他克唑、盐酸伊立替康等来自植物的抗肿瘤性物质，更优选顺铂、卡铂、奈达铂、多柔比星、他克唑等，特别优选顺铂。
抗癌药种类最优选铂络合物，其次优选来自植物的抗肿瘤性物质。
在本发明的通式[I]所示化合物中，R1优选碳原子数为1-3的低级烷氧基，特别优选甲氧基。R2优选碳原子数为1-3的低级烷氧基或氢原子，特别优选氢原子。X优选为-CO-。n优选为2。
本发明的抗癌药抗性克服药、抗癌药效果增强药以及药物组合物中的有效成分优选使用通式[I]所示化合物或其盐。
可以依照特开平4-230681号公报(国际公开WO92/12148号、欧洲专利565721号、美国专利5416066号)中所记载的方法生产本发明中通式[I]所示化合物。
本发明的通式[I]所示化合物具有优良的抗癌药抗性克服作用和抗癌药效果增强作用。即，通过将本发明的抗癌药抗性克服药或抗癌药效果增强药与抗癌药联合投药，可以使抗癌药对已形成抗性的癌发挥抗癌作用。当将本发明化合物用作抗癌药抗性克服药或抗癌药效果增强药时，通常对全身或局部采用经口或非经口的途径进行投药。非经口投药包括静脉内投药(包括滴注)、动脉内投药、肌肉内投药、皮下投药、腹腔内投药、胸腔内投药、膀胱内投药、脊柱内投药、经皮投药、经粘膜投药、直肠内投药、肿瘤内投药等。可以将本发明的抗癌药抗性克服药或抗癌药效果增强药与抗癌药同时进行投药，也可以在抗癌药投药前或投药后进行投药，或者也可以在抗癌药的停药期间进行投药。抗癌药抗性克服药或抗癌药效果增强药与抗癌药的投药途径可以相同，也可以不同。
通过将本发明的抗癌药抗性克服药或抗癌药效果增强药与抗癌药联合投药，可以用于治疗包括人在内的哺乳动物的肺癌(非小细胞肺癌、小细胞肺癌)、大肠癌(直肠癌、结肠癌)、小肠癌、胃癌、食道癌、肝癌、胰腺癌、恶性黑素瘤、肾癌、膀胱癌、子宫癌(子宫颈癌、子宫体癌)、卵巢癌、乳癌、骨肉瘤、恶性淋巴瘤、前列腺癌、白血病(急性白血病、慢性白血病)、骨髓瘤、成神经细胞瘤、头颈部癌、皮肤癌、睾丸肿瘤等癌(恶性肿瘤)。
在本发明中，“联合投药”是指将2种药物同时、连续或间隔一定时间进行投药。2种药物可以混合在一起投药，也可以作为各自的制剂进行投药。当作为各自的制剂进行投药时，各自的投药途径可以相同，也可以不同。
通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体的投药量随年龄、体重、症状、治疗效果、投药方法、处理时间等不同而不同，但是通常以成人每人0.01mg-1g的范围、1日1次至1日数次经口或非经口进行投药。
进行联合投药的抗癌药的投药量可以是通常用于治疗癌的投药量，也可以是比该量少的投药量。进行联合投药的抗癌药的投药途径可以与通常用于治疗癌的投药途径相同。
此外，也可以以含有通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体和抗癌药的药物组合物的形式进行投药。组合物中，通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体与抗癌药的重量比可以在1∶100-100∶1的范围内，但不限定于该范围。
本发明提供含有2种药物的治疗癌症用药物试剂盒。在本发明的癌症治疗用药物试剂盒中，第一种药物为含有上述通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体的抗癌药抗性克服药或抗癌药效果增强药，第二种药物为抗癌药。通过将这2种药物进行联合投药，可以用于治疗癌，特别是用于治疗已对抗癌药形成抗性的癌。抗癌药抗性克服药或抗癌药效果增强药可以与抗癌药同时投药，也可以在抗癌药投药前或投药后进行投药，根据情况不同，也可以在抗癌药的停药期间进行投药。所述抗癌药抗性克服药或抗癌药效果增强药的投药途径与抗癌药的投药途径可以相同，也可以不同。
当将本发明的化合物制成用于经口投药的固体组合物时，可以是片剂、丸剂、粉末、颗粒等剂型。在这种固体组合物中，将1种或1种以上的活性物质与至少1种下述非活性的稀释剂、分散剂或吸附剂等混合例如乳糖、甘露醇、葡萄糖、羟丙基纤维素、微晶纤维素、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、硅酸铝酸镁或硅酸酐粉末等。而且，可以通过常规方法，将组合物与稀释剂以外的添加剂混合。
当制成片剂或丸剂时，根据需要，可以用蔗糖、明胶、羟丙基纤维素或邻苯二甲酸羟甲基纤维素等胃溶性或者肠溶性物质的薄膜对其进行包衣，也可以用两层或以上的薄膜进行包衣。此外，也可以将其装入明胶或乙基纤维素之类的物质的胶囊。
当制成用于经口投药的液体组合物时，可以是药学上可接受的乳浊液、溶解液、悬浮液、糖浆等剂型。所用稀释剂为例如精制水、乙醇、植物油或乳化剂等。而且，可以将本组合物与稀释剂以外的致湿剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、芳香剂或防腐剂等辅助剂混合。
当制成用于非经口投药的注射剂时，使用无菌的水性或非水性溶液、加溶剂、悬浮剂或乳化剂。水性的溶液、加溶剂、悬浮剂有例如注射用水、注射用蒸馏水、生理盐水、环糊精及其衍生物、三乙醇胺、二乙醇胺、一乙醇胺、三乙胺等有机胺类或者无机碱溶液等。
当制成水溶性溶液时，可以使用例如丙二醇、聚乙二醇或橄榄油之类的植物油、乙醇之类的醇类等。加溶剂可以使用例如聚氧乙烯硬化蓖麻油、蔗糖脂肪酸酯等表面活性剂(形成混合胶粒)、或者卵磷脂或氢化卵磷脂(形成脂质体)等。此外，也可以制成由植物油等非水溶性溶解剂和卵磷脂、聚氧乙烯硬化蓖麻油或聚氧乙烯-聚氧丙烯二醇等形成的乳剂。
当制成用于非经口投药的其它组合物时，可以包含1种或1种以上的活性物质，可以通过本身已知的方法制成外用洗液、软膏之类的搽剂、栓剂或阴道栓等。
实施例接下来，对本发明化合物的制剂例进行具体说明。
使用4-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙酰基]-7-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并硫氮杂(以下称为化合物1)作为制剂化合物。
加入注射用水，使体积达到20.0ml。
将D-山梨醇和柠檬酸溶解在足量的注射用水中。再将化合物1溶解在所得溶液中，用氢氧化钠将pH调节至3.2-3.3。边搅拌边加入剩下的注射用水。将该溶液过滤，封装入20.0ml的安瓿内。接着将安瓿中的内容物通过高压灭菌器进行灭菌。
实施例2制备含有下述2种药物的癌症治疗用药物试剂盒。
第一种药物 实施例1中制备的注射制剂第二种药物 顺铂注射制剂20.0ml(0.5mg/ml)接下来，对本发明化合物的抗癌药抗性克服效果进行具体说明。将化合物1用作受验化合物。
实施例3受验化合物在顺铂抗性非小细胞肺癌细胞株中的抗癌药感受性增强作用使用人体非小细胞肺癌细胞株PC-14和顺铂抗性细胞株PC-14/CDDP，研究对顺铂、卡铂、奈达铂和他克唑的抗性的克服作用。在RPMI 1640培养基中，通过胰蛋白酶处理或用刮器使PC-14和PC-14/CDDP成为单细胞，制备成100个细胞/15μl的细胞悬浮液。将溶解在二甲基亚砜中的化合物1加入该细胞悬浮液中，使最终浓度达到10μM，再将所得悬浮液加入96孔板的孔中，使每孔中有150μL。将抗癌药溶解在灭菌蒸馏水中，向第一列的各孔中加入150μl，依次向第二列至以后各列的孔中转移150μl，以形成2倍稀释行。制备未加入细胞的组作为阴性对照，并制备未加入抗癌药和化合物1的组作为阳性对照。在37℃、5％二氧化碳浓度、饱和水蒸气的条件下，培养96小时，之后加入20μl以5mg/ml的浓度溶解于D-PBS(-)中的MTT[溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑]试剂，在37℃再培养4小时。培养结束后，将各个板离心，舍弃上清液。加入200μl二甲基亚砜，使由于细胞内线粒体的酶活性而生成的甲晶体溶解，用多板读取器(multiplate reader)测定了562-630nm的吸光度。将阴性对照的平均生长率定为0％、阳性对照的平均生长率定为10％，画出用量生长曲线，算出50％细胞生长抑制浓度(IC50)。结果如表1所示。
表1
(n＝3，平均值±SE，*n＝1)括号内表示亲代细胞株(PC-14)在无化合物1的情况下相对于IC50值的抗性度。
从上述结果可以看出，化合物1显示出降低顺铂抗性肺癌细胞株(PC-14/CDDP)对于顺铂、卡铂、奈达铂和他克唑的抗性，增加对于这些抗癌药的感受性的作用。
实施例4受验化合物在多柔比星抗性人体白血病细胞株中的抗癌药感受性增强作用用人体前髓性白血病细胞株K562及其多柔比星抗性细胞株K562/ADM，研究了对多柔比星的抗性克服作用。除癌细胞采用K562和K562/ADM、抗癌药采用多柔比星外，用与实施例3相同的方法进行操作，算出50％细胞生长抑制浓度(IC50)。结果如表2所示。
表2
(n＝1)括号内表示亲代细胞株(K562)在无化合物1的情况下相对于IC50值的抗性度。
从上述结果可以看出，化合物1显示出降低多柔比星抗性白血病细胞株(K562/ADM)对于多柔比星的抗性，增加对于多柔比星的感受性的作用。
实施例5在患癌裸鼠的模型中，对顺铂的肿瘤生长抑制效果的增强作用将悬浮在生理盐水中的2×107个PC-14/CDDP细胞和亲代细胞株PC-14细胞从背部皮下植入雌性裸鼠BALB/c nu/nu(6周大)，观察其生长过程。在移植后第7天确认肿瘤的状态，选出可以进行实验的个体，为了不发生偏差，将个体随机分成对照组和受验组。用(肿瘤短径)2×(肿瘤长径)确定各裸鼠的肿瘤体积后，从第7天开始投药。
使用化合物1作为受验化合物，将1.2mg该化合物溶解在0.05ml二甲基亚砜中，加入0.95ml的5％山梨醇-0.2％柠檬酸1水合物溶液(pH3.3)，使其成为均一溶液。
使用顺铂作为抗癌药，用蒸馏水制成1.6mg/ml的溶液。
投药方法是在肿瘤移植后的第7天、第11天、第15天，一天一次，将0.05ml受验化合物溶液和0.05ml抗癌药溶液同时通过静脉注射投药。对于对照组，则将0.1ml生理盐水通过静脉注射进行投药；对于抗癌药单独投药组，则将0.05ml抗癌药溶液和0.05ml生理盐水通过静脉注射投药。受验化合物的用量为一次3mg/kg，抗癌药的用量为一次4mg/kg。投药期间，观察鼠的全身状态，测定体重和肿瘤的长短径。分别通过下述计算式算出肿瘤生长率(GR)和抗肿瘤效果(最小T/C)。结果如表3所示。
表3
在患癌裸鼠模型的实验中，通过将化合物1与顺铂结合使用，显示出对于顺铂抗性癌细胞株(PC-14/CDDP)的肿瘤生长抑制效果。这表明化合物1具有使癌细胞对顺铂的抗性降低、对顺铂的感受性增加的作用。
从上述实施例可以看出，本发明所涉及的由通式[I]表示的化合物不仅具有克服各种抗癌药的抗性的作用，还具有增强各种抗癌药对抗癌药感受性细胞的效果的作用。因此，对已具有抗性的细胞自不必说，对感受性细胞也具有卓越的效果，特别是在治疗已对抗癌药形成抗性的癌症时，有望成为极其有效的药物。这样，含有通式[I]所示化合物和抗癌药的本发明药物组合物对于癌的治疗，特别是已对抗癌药形成抗性的癌的治疗是有效的。此外，本发明的药物试剂盒适用于抗癌药抗性克服药或抗癌药效果增强药与抗癌药的联合投药，对于已对抗癌药形成抗性的癌的治疗尤其有用。根据本发明的治疗癌的方法，通过将通式[I]所示化合物和抗癌药进行联合投药，可发挥出对已具有抗性的癌的卓越抗癌作用。
本申请以在日本申请的平成11年专利申请第139196号为基础，其内容全部包括在本说明书中。
权利要求
1.一种抗癌药抗性克服用药物组合物，所述组合物含有通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体，以及药学上可接受的载体， [式中R1表示氢原子或低级烷氧基；R2表示氢原子、低级烷氧基、苯基(该苯基可被1-3个选自羟基、低级烷氧基的取代基所取代)、 (此处R3表示酰基)；X表示-CO-或-CH2-；n表示1或2]。
2.权利要求1的药物组合物，其中所述化合物为4-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙酰基]-7-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并硫氮杂或其盐或其药物前体。
3.权利要求1或2的药物组合物，其中所述抗癌药为铂络合物、来自植物的抗肿瘤性物质或者抗肿瘤性抗生物质。
4.权利要求3的药物组合物，其中所述抗癌药为顺铂、卡铂、奈达铂、多柔比星或他克唑。
5.一种抗癌药效果增强用药物组合物，所述组合物含有通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体，以及药学上可接受的载体， [式中R1表示氢原子或低级烷氧基；R2表示氢原子、低级烷氧基、苯基(该苯基可被1-3个选自羟基、低级烷氧基的取代基所取代)、 (此处R3表示酰基)；X表示-CO-或-CH2-；n表示1或2]。
6.权利要求5的药物组合物，其中所述化合物为4-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙酰基]-7-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并硫氮杂或其盐或其药物前体。
7.权利要求5或6的药物组合物，其中所述抗癌药为铂络合物、来自植物的抗肿瘤性物质或者抗肿瘤性抗生物质。
8.权利要求7的药物组合物，其中所述抗癌药为顺铂、卡铂、奈达铂、多柔比星或他克唑。
9.一种用于降低癌对抗癌药的抗性的药物组合物，所述组合物含有权利要求1的通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体，以及药学上可接受的载体。
10.一种用于增加癌对抗癌药的感受性的药物组合物，所述组合物含有权利要求1的通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体，以及药学上可接受的载体。
11.一种药物组合物，所述组合物含有通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体，以及抗癌药， [式中R1表示氢原子或低级烷氧基；R2表示氢原子、低级烷氧基、苯基(该苯基可被1-3个选自羟基和低级烷氧基的取代基所取代)、 (此处R3表示酰基)；X表示-CO-或-CH2-；n表示1或2]。
12.权利要求11的药物组合物，其中所述化合物为4-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙酰基]-7-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并硫氮杂或其盐或其药物前体。
13.权利要求11或12的药物组合物，其中所述抗癌药为铂络合物、来自植物的抗肿瘤性物质或者抗肿瘤性抗生物质。
14.权利要求13的药物组合物，其中所述抗癌药为顺铂、卡铂、奈达铂、多柔比星或他克唑。
15.一种克服抗癌药抗性的方法，所述方法包括将通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体以有效量进行投药， [式中R1表示氢原子或低级烷氧基；R2表示氢原子、低级烷氧基、苯基(该苯基可被1-3个选自羟基和低级烷氧基的取代基所取代)、 (此处R3表示酰基)；X表示-CO-或-CH2-；n表示1或2]。
16.一种增强抗癌药效果的方法，所述方法包括将通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体以有效量进行投药， [式中R1表示氢原子或低级烷氧基；R2表示氢原子、低级烷氧基、苯基(该苯基可被1-3个选自羟基和低级烷氧基的取代基所取代)、 (此处R3表示酰基)；X表示-CO-或-CH2-；n表示1或2]。
17.一种降低癌对抗癌药的抗性的方法，所述方法包括将权利要求15的通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体以有效量进行投药。
18.一种增加癌对抗癌药的感受性的方法，所述方法包括将权利要求15的通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体以有效量进行投药。
19.一种治疗癌的方法，所述方法包括将有效量的权利要求15的通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体与有效量的抗癌药进行联合投药。
20.一种治疗对抗癌药具有抗性的癌的方法，所述方法包括将有效量的权利要求15的通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体与有效量的抗癌药进行联合投药。
21.权利要求15-20中任一项的方法，其中所述化合物为4-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙酰基]-7-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并硫氮杂或其盐或其药物前体。
22.权利要求15-21中任一项的方法，其中所述抗癌药为铂络合物、来自植物的抗肿瘤性物质或者抗肿瘤性抗生物质。
23.权利要求22的方法，其中所述抗癌药为顺铂、卡铂、奈达铂、多柔比星或他克唑。
24.通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体在生产抗癌药抗性克服用药物中的应用， [式中R1表示氢原子或低级烷氧基；R2表示氢原子、低级烷氧基、苯基(该苯基可被1-3个选自羟基和低级烷氧基的取代基所取代)、 (此处R3表示酰基)；X表示-CO-或-CH2-；n表示1或2]。
25.权利要求24的应用，其中所述化合物为4-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙酰基]-7-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并硫氮杂或其盐或其药物前体。
26.权利要求24或25的应用，其中所述抗癌药为铂络合物、来自植物的抗肿瘤性物质或者抗肿瘤性抗生物质。
27.权利要求26的应用，其中所述抗癌药为顺铂、卡铂、奈达铂、多柔比星或他克唑。
28.通式[I]所表示的化合物或其盐或其药物前体在生产抗癌药效果增强用药物中的应用， [式中R1表示氢原子或低级烷氧基；R2表示氢原子、低级烷氧基、苯基(该苯基可被1-3个选自羟基和低级烷氧基的取代基所取代)、 (此处R3表示酰基)；X表示-CO-或-CH2-；n表示1或2]。
29.权利要求28的应用，其中所述化合物为4-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙酰基]-7-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并硫氮杂或其盐或其药物前体。
30.权利要求28或29的应用，其中所述抗癌药为铂络合物、来自植物的抗肿瘤性物质或者抗肿瘤性抗生物质。
31.权利要求30的应用，其中所述抗癌药为顺铂、卡铂、奈达铂、多柔比星或他克唑。
32.权利要求24的通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体在生产降低癌对抗癌药的抗性的药物中的应用。
33.权利要求24的通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体在生产增加癌对抗癌药的感受性的药物中的应用。
34.一种商业包装，所述包装包括权利要求1-4中任一项的药物组合物以及关于该药物组合物的说明书，该说明书记载了该药物组合物可以或应当用于克服抗癌药抗性。
35.一种商业包装，所述包装包括权利要求5-8中任一项的药物组合物以及关于该药物组合物的说明书，该说明书记载了该药物组合物可以或应当用于增强抗癌药的效果。
36.一种商业包装，所述包装包括权利要求1-4中任一项的药物组合物以及关于该药物组合物的说明书，该说明书记载了该药物组合物可以或应当用于降低癌对抗癌药的抗性。
37.一种商业包装，所述包装包括权利要求1-4中任一项的药物组合物以及关于该药物组合物的说明书，该说明书记载了该药物组合物可以或应当用于增加癌对抗癌药的感受性。
38.一种用于治疗癌的药物试剂盒，所述药物试剂盒包含2种药物，第一种药物为含有权利要求1的通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体的抗癌药抗性克服药，第二种药物为抗癌药。
39.一种用于治疗癌的药物试剂盒，所述药物试剂盒包含2种药物，第一种药物为含有权利要求1的通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体的抗癌药效果增强药，第二种药物为抗癌药。
全文摘要
本发明涉及通式[I]所示化合物或其盐或其药物前体作为抗癌药抗性克服用药物或抗癌药效果增强用药物的用途,式[I]中R
文档编号A61K31/554GK1361693SQ00810363
公开日2002年7月31日 申请日期2000年5月19日 优先权日1999年5月19日
发明者金子升, 西尾和人, 中村贵 申请人:金子升