专利名称：低骨矿质密度的治疗的制作方法
技术领域：
本发明一般涉及通过脱氢表雄酮(DHEA)和降血钙素给药而进行骨丢失治疗。
背景技术：
参考文献引用以下文献作为本发明的相关背景，或者提供实施本明的指导。
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骨质疏松症是一种“以低骨质和骨组织微细结构退化为特征的系统性骨骼疾病，其结果是增加骨脆性和容易骨折”。它是骨形成(合成代谢)和骨吸收之间失衡的结果，其中后者占优势。
在头三个月的胎儿发育之后，骨生长迅速。多种因子可能调节子宫内经胎盘的钙转运和子宫内的骨形成，包括但不限于维生素D、降血钙素、甲状旁腺素和各种生长因子。在人类，骨质在大约生命的第二个十年的末期达到最高峰，然后下降。造成从生命早期的骨形成占主导地位到生命的后期骨吸收占主导地位的转变的原因尚不知道。
NIH声称“骨质疏松症是一个重要和潜在增长的公众健康问题，其中，弱化的骨容易骨折。每年1.3百万次以上的髋骨、脊柱骨和腰骨骨折是由于骨质疏松症。低骨密度是骨折的主要原因。来自国家卫生和营养调查的数据，采用了世界卫生组织提出的骨质疏松症的定义，确定50岁以上的白人妇女中至多20％患有骨质疏松症，而至多50％患有低骨质。非白人妇女和男人具有较低的骨质疏松症发病率，但每年有至多25％的骨折(Looker)。年长者任何部立的弱外伤性骨折主要归因于低骨质。髋骨骨折是最具破坏性和昂贵的骨质疏松骨折。”(NIH出版社发表，1998)。
虽然骨质稀少和骨质疏松症通常与年老有关，但它们还可能继之与多种疾病和/或与这些疾病有关的治疗相关。除了绝经后和与年龄相关的骨质疏松症以外，骨质疏松症可能是可遗传的，内分泌物调节的，饮食相关的，药物诱发，停用或疾病相关的，或者自发性的(没有可辩认的原因)。在与骨质疏松症相关的药物类中，采用外源性糖皮质激素进行治疗是最相关的，而外源性糖皮质激素的名声不好，因为它即使在低剂量下也造成快速骨丢失发生和最终的骨质稀少/骨质疏松症。
几乎所有目前可用于预防骨质稀少/骨质疏松症进展的治疗剂包含主要的抗吸收药物，包括雄激素、双磷酸盐和降血钙素(鲑鱼或人)。其它的治疗剂包括钙补充剂、孕酮或孕酮类似物和维生素D及其类似物。
降血钙素和降血钙素基因相关肽特别有用。二者均为在胎儿循环中大量分泌的蛋白，并且认为是胎儿的骨生长所必需的。二者的浓度在出生不久下降，然后保持低水平。虽然不清楚各自在成人期中的生理作用，但已知鲑鱼和人降血钙素抑制骨吸收并作为骨质疏松症、骨的佩吉特氏病、高血钙和其它疾病的治疗剂应用。
虽然降血钙素用可用于治疗骨质疏松症已有多年，但关于其在未来骨密度研究中的疗效的报告是变化的，其中，许多研究表明在用此药物的慢性治疗期间，骨密度没有或几乎没有改善。在16项研究分析中，脊柱骨矿质密度(BMD)的平均增长据报道为1.97％(Cardona)。
阿仑膦酸盐，一种双磷酸盐，可能是目前用于治疗骨丢失疾病的最常用的处方治疗剂。在目前进行评价降血钙素与阿仑膦酸盐的效力的大量研究中，在绝经后妇女身上用降血钙素进行至多1年的治疗期间，仅在整个股骨和腰椎上观察到BMD的适当增加(Rosen)。设计此研究以比较在阿仑膦酸盐与降血钙素对于治疗绝经后妇女的骨质疏松症的效力。
在此研究中，将275名低骨质(低BMD)的绝经后妇女(在腰椎(LS)或股骨颈(FN)为-2.0标准偏差(SD)，在其它部位为-1.0SD)在9个美国地方随机分组，双盲法接受每天10mg的阿仑膦酸盐或配合安慰剂或200IU开放标签的降血钙素。所有的患者每天接受包括饮食和补充剂以及每天400IU的维生素D和1000mg的钙。在基线、6和12个月处测定LS、FN和髋转子(HT)BMD。
作者发现降血钙素在长期使用中没有改善骨矿质密度，并作出如下结论“在6和12个月的LS和HT处(p＜0.001)和在12个月的FN处(p＝0.003)，用阿仑膦酸盐治疗对BMD的增加明显地大于降血钙素对BMD的增加。采用降血钙素的BMD变化在6或12个月的LS，HT或FN处，在统计学上并没有不同于安慰剂组。阿仑膦酸盐和降血钙素之间类似的不良事件由于开放标签药物而难以解释降血钙素。在患有低骨质的绝经后妇女中，在第一年的腰椎和髋部，阿仑膦酸盐对BMD的增加明显大于鼻降血钙素对BMD的增长”。
在第二个大型多中心研究中，观察到采用降血钙素的骨质增加是短期存在的(Downs)。Downs研究比较了目前美国处方剂量的阿仑膦酸盐和降血钙素的效力。将患有骨质疏松症的绝经后妇女(n＝299)在24个美国地方随机分组，双盲法接受每天10mg的阿仑膦酸盐或相配的安慰剂或200IU开放标签的降血钙素。所有的患者接受包括饮食和补充剂的1000mg每天的钙和400IU每天的维生素D。在基线、第6和12个月测定腰椎(LS)、股颈(FN)和髋转子(HT)BMD。
在6和12个月的LS和HT处(p＜0.001)和在12个月的FN处(p＝0.001)，采用阿仑膦酸盐治疗对BMD的增加明显地大于降血钙素对BMD的增加。在6个(p＝0.003)和12个月(p＝0.008)的FN处，采用降血钙素治疗的BMD变化在统计学上不同于安慰剂组，但在6或12个月的LS或CT处没有显著差异。而且，可以看出，与安慰剂相比，降血钙素对骨密度的效果只是轻微的。
DHEA(脱氢表雄酮)是由胎儿肾上腺分泌的主要类固醇，其浓度明显高于循环类固醇。它在胎儿生理学中的作用没有被充分认识，但认为它用作其它类固醇的前体，产生雄激素和雌激素类固醇。已报道，DHEA可以用于治疗骨质疏松症/骨质稀少。美国专利5,776,923表明将DHEA给予切除卵巢的大鼠导致骨密度增加。但是，将DHEA给予人以防止骨丢失或增加骨密度，并没有被医学团体认识到是一种用于骨质疏松症/骨质稀少的治疗。采用200mg日给药剂量的DHEA治疗的系统性红斑狼疮(SLE)患者的大量临床试验数据表明，单独接受DHEA，或与强的松联合的患者的BMD仅有轻微的改善。
因此，不断要求更为有效的用于以下疾病中低常BMD的治疗如骨质疏松症，类固醇诱发的骨质疏松症、免疫抑制剂诱发的骨质疏松症、骨质稀少、佩吉特氏病、牙周病和高钙血症。
发明概述一方面，本发明包括一种治疗个体以增加个体骨矿质密度(BMD)的方法。该个体优选为患有低常BMD的人类患者。该方法包括将降血钙素样试剂给予该个体，并在降血钙素样试剂给药期间给予脱氢表雄酮(DHEA)样试剂。降血钙素和DHEA样试剂的给药量，共同作用以有效增加BMD，其中，降血钙素和DHEA样试剂的共同给药加强了任何由单独的降血钙素样试剂给药量实现的BMD的增加。优选的治疗剂用量为约50-200IU降血钙素日平均剂量，肠道外或口服给药；和每天约50-200mg DHEA，口服给药。治疗优选持续至少约25周。
在用免疫抑制剂，如趋于降低BMD的物质，例如皮质类固醇或甲氨蝶呤对个体进行治疗时，可以在降血钙素样和DHEA样试剂的给药期间继续免疫抑制剂治疗。具体而言，当个体患有系统性红斑狼疮(SLE)，并用皮质类固醇如强的松对其治疗时，优选在降血钙素样和DHEA样试剂的给药期间继续该皮质类固醇治疗。
在第二方面，本发明包括加强降血钙素样试剂对个体，优选患有低常BMD的人患者的BMD治疗效果的方法。该方法包括在降血钙素治疗期间，将DHEA样试剂以至少约50mg/天的量给予个体。在优选的实施方案中所述的个体用日平均剂量约为50-200IU的降血钙素治疗，肠道外或口服给药；而DHEA以大约50-200mg/天的量口服给药，优选给药至少约25周。
关于本发明的第一方面，在用免疫抑制剂，如趋于降低BMD的物质，例如皮质类固醇或甲氨蝶呤对个体进行治疗时，可以在降血钙素样和DHEA样试剂给药期间继续该免疫抑制剂治疗。具体来说，当用皮质类固醇如强的松治疗患有系统性红斑狼疮(SLE)的个体时，优选在降血钙素样和DHEA样试剂给药期间继续皮质类固醇治疗。
在第三方面，本发明包括一种增加接受DHEA样试剂的日给药来治疗系统性红斑狼疮(SLE)的个体BMD的方法。该方法包括将降血钙素样试剂以至少约50IU每天的平均日剂量给予患者。该个体优选为患有低常BMD的人患者。在优选的实施方案中，治疗采用以大约50-200mg/天的日剂量口服DHEA；和以大约50-200IU降血钙素的平均日剂量肠道外或口服给予降血钙素，优选持续至少25周。
在第四方面，本发明包括一种用于抑制需要治疗的患者骨丢失的方法，所述方法采用将治疗有效量的DHEA样试剂和抗再吸收剂，如降血钙素样试剂或双磷酸盐给予该个体。
本发明还提供了一种用于抑制个体骨丢失的药剂所述的药剂包含治疗有效量的脱氢表雄酮(DHEA)样试剂和药学有效量的选自降血钙素样试剂或双磷酸盐的抗再吸收剂。
本发明的方法和制剂优选使用具有理想生物利用度的DHEA组合物。具体而言，至少约85％，优选至少约95％的DHEA作为I型多晶型物、II型多晶型物或其组合的组合物存在。
发明详述骨矿质密度(BMD)丢失常见于绝经后妇女，严重不活动如卧床不起之人，和接受化合物如皮质类固醇和甲氨蝶呤的许多免疫抑制或抗炎治疗的患者。在所有这些情况下，重要的是将BMD恢复到不使患者易患低应力骨折或其它与低BMD有关的骨病状。具体而言，在接受导致骨密度丢失的化合物治疗的患者中，重要的是在不削减或停止治疗的情况下恢复骨密度。
本发明提供新的方法和制剂，用于BMD的增加、维持和/或抑制丢失，这些方法和制剂提供了突出于现有技术方法的优点(i)这些新方法和制剂可以在1-2年治疗期间导致BMD以15-30％条等级的戏剧性增长；(ii)两种优选的治疗化合物--降血钙素和DHEA--为天然的人激素，因此被人患者良好地耐受，和(iii)即使在接受可能导致骨质减少的并行药物治疗的患者身上也可以成功地进行治疗。
I.定义除非另指，本文以下的术语具有以下含义。
患者的“低常骨矿质密度(BMD)”指可能将患者归类为患有骨质稀少、骨质疏松症或确定性骨质疏松症的水平，这些水平如以下基于T分值的世界卫生组织分类所定义正常年轻成人的平均值以下，标准偏差(SD)不大于1的BMD值(T＞-1.0)；骨质稀少年轻成人的平均数以下，SD在1和2.5之间的BMD(-1.0＞T＞-2.5)；骨质疏松症年轻成人的平均值以下，SD大于2.5的BMD值(T＜-2.5)；确定性骨质疏松症存在一种或多种脆性骨折，年轻成人的平均值以下，SD大于2.5的BMD值(T＜-2.5)。
BMD标准偏差一般根据人群标准计算，用于采用双X射线吸收测定术(DEXA)测定与正常年龄相关股骨和脊柱的骨密度。将个体患者身上的BMD结果与得到的用于健康参照人群的值进行比较(如在任何特定制造者的机器上测量的，通常健康受试者年龄为25-35岁，且与性别和种族相符)。将T值计算为测量的BMD减去年青成人平均BMD/年青成人标准偏差(SD)。
术语“治疗(treatment)”指治疗(therapy)，它缓解了现存疾病的症状(通过影响综合症和/或通过影响疾病的成因)或者预防或减少疾病的发展。本文所用的术语“治疗(treatment)”还包括预防，即减少疾病进展的风险。
如果两种药物的联合治疗效果大于药物单独给药时的药物的单独效果之和，则一种药物如降血钙素的药效被另一种药物如DHEA“加强”。
术语“DHEA”或“脱氢表雄酮”包括药学上的活性酸、盐和酯形式的DHEA，如DHEA硫酸盐(如Heinz)。
“DHEA代谢物”包括类固醇，而DHEA是它的正常人体前体，包括DHEA的中间代谢产物、7-α-羟基-DHEA、5-雄甾烯-3β、17β-二醇(Morfin)和4-雄甾烯二醇(Bird)，并进一步转变成许多其它的C19-类固醇，包括C19-类固醇硫酸盐(Bird)，包括多种雄性和雌性类固醇(Labrie，1991，1995，1997；Young)。
“DHEA样试剂”包括“DHEA”和“DHEA代谢物”。
“降血钙素”指在维护血清钙水平方面起重要作用的32-氨基酸残基肽激素(Epand)。此术语包括来自鲑鱼(Epand)或各种哺乳动物，如人(Katahara)、猪、鼠科动物或大鼠的降血钙素。术语“降血钙素”还包括活性肽类似物(如Uda，Suva，Stroop，Cerovsky，Pozvek，和Jablonski)，和模仿物，如在美国专利5,719,122，5,175,146，和5,698,6721中所述。
“降血钙素超家族”由降血钙素、降血钙素基因相关肽(CGRP)和糊精(Wimalawansa)组成。降血钙素和CGRP来自人的CT/CGRP基因。任选的主要RNA转录的接合导致以组织特异性的方式翻译CGRP和CT肽。CGRP(一种37-氨基酸神经肽)及其受体广泛分布在体内。糊精(37-氨基酸肽)产生于位于染色体12的基因(认为是染色体11的改进复制)并与CGRP共享46％氨基酸序列同源性，与人降血钙素共享20％同源性。
术语“降血钙素基因相关肽”或“CGRP”包括天然CGRP，优选人CGRP及其活性类似物(如Boulanger，Hakala)。已知CGRP在骨形成中具有多种作用(Ballica，Wimalawansa，Vignery)。
术语“糊精”包括一般来源于人的天然糊精，及其药学上的活性类似物(Borm)。已知此激素通过多种机制诱导骨质形成(Romero，Cornish，1995，1998)。
“降血钙素样试剂”包括“降血钙素”、“CGRP”和“糊精”。
用于指示药物的日平均剂量的“平均量”指在给定的天数内的给药量除以天数。
因此，在5天内以1,000IU的总剂量给予的降血钙素，如来自储存-释放装置的降血钙素代表了200IU/天的平均日剂量的化合物。
“治疗有效”量是足以治疗(如上述)疾病的数量。
II.临床试验数据用DHEA(脱氢表雄酮，普拉睾酮)200mg/天将系统性红斑狼疮(SLE)雌性患者治疗至多2年。患者在进行此研究之前已用强的松(或其它糖皮质激素)治疗至少6个月，并接受基线(用DHEA治疗前)和1年处的腰椎(L1-L4)和非优势性邻面股骨(颈，沃德氏三角，转子和转子间区域))))的DEXA评价。一些患者还设计进行到2年。用同一仪器上对基线、1和2年进行扫描。要求中心进行质量控制，包括扫描幻象以检测精密度。所有的DEXA扫描和精密度数据在中心设备监测以进行质量控制。
如DEXA所测，两名用鲑鱼降血钙素和DHEA治疗的患者具有临床意义的骨密度增加。从各种对文献中报道的降血钙素反应，和这些患者同时用强的松，一种已知导致骨丢失的有效的类固醇治疗以控制其狼疮疾病活性的事实来看，这些发现是意外的。一名患者还用高剂量的甲氨蝶呤，15mg/周治疗，以控制其狼疮疾病活性。已报道甲氨蝶呤与强的松共同促进了骨质疏松症(Buckley 1997)。
具体而言患者A用DHEA 200mg/天治疗2年，还在进入此项研究时接受5mg/天的强的松。研究期间，可以将她的强的松剂量减少到0mg/天。患者B在用200mg/天的DHEA进行一年的治疗期间，用高剂量甲氨蝶呤，15mg/周，和10mg/天的强的松进行治疗。她接受200IU每天的降血钙素和钙补充剂。结果如下表1所示。
表1
可以看出，患者A和B在接受DHEA、降血钙素和多种其它治疗剂，包括钙补充剂和维生素D的治疗时，表现出临床上有意义的骨密度改善。患者A的髋骨密度和脊柱骨密度的改善在15％-30％的范围内；相对于通常在单独用降血钙素治疗，或DHEA治疗的情况下可见的BMD的非常小的百分率变化而言，这是一种显著的改善。
虽然患者B的改善没有A那么大，但从她在参加2年的研究时接受高剂量类固醇和高剂量甲氨蝶呤的事实来看，患者B能够改善其骨密度的事实是明显的。已发现类固醇与甲氨蝶呤的联合特别破坏骨(Buckley 1997)，在这种情况下任何程度的改善是非常有意义的。
临床试验数据表明在患有低常BMD的患者身上，降血钙素对BMD的治疗效果，可以由于在继续降血钙素治疗时给予患者DHEA而被加强。具体而言，将DHEA与降血钙素联合使用产生的BMD增加大于预期的单独用一种药物对患者进行治疗引起的BMD增加的总和。
III.治疗方法A.一般情况本发明提供了利用降血钙素样试剂和脱氢表雄甾酮(DHEA)样试剂共同给药以强化由单独降血钙素样试剂给药获得的任何骨矿质密度(BMD)增加的方法。在一种方法中，将降血钙素样试剂给予个体，并在降血钙素样试剂给药期间还将脱氢表雄酮(DHEA)样试剂给予该个体。降血钙素和DHEA样试剂的联合给药量有效地增加了BMD，且降血钙素和DHEA样试剂的共同给药强化了由单独降血钙素样试剂给药量获得的任何BMD增加。
第二种治疗方法涉及强化降血钙素样试剂对个体BMD的治疗效果。在该方法中，在降血钙素样试剂治疗期间将DHEA给予该个体。在该方法的优选的实施方案中，DHEA剂量至少约为50mg/天。
第三种治疗方法涉及增加接受系统性红斑狼疮(SLE)治疗的个体的BMD。该方法需要将降血钙素样试剂给予接受一定日剂量的DHEA样试剂的个体。在优选的实施方案中，将降血钙素样试剂以设计提供至少约50IU每天的平均日剂量的剂量给药。
在第四种治疗方法中，将治疗有效量的脱氢表雄酮(DHEA)样试剂和选自降血钙素样试剂和双磷酸盐的抗再吸收剂给予个体以抑制骨丢失(即帮助维持或增加BMD)。
本领域技术人员容易认识到，降血钙素样试剂和DHEA样试剂的给药期间在本发明的治疗方法中无需作完全同等延长。该方法包括足以增加BMD的这些试剂共同给药的任何期间。一般来说，共同给药的期间至少约为4周，优选至少约25周，更优选至少约1或2年或更长。共同给药通常持续至观察到BMD的改善。
治疗的个体可以是任何动物，但通常为哺乳动物，优选为人患者。在优选的实施方案中所述的个体患有低常BMD。
B.降血钙素样试剂本发明的治疗方法可以使用任何降血钙素样试剂，一般与生理学上可接受的载体、赋形剂或在使用的剂量处对接受者无毒的稳定剂结合。
降血钙素，或其肽类物存在多种来源。一种优选的化合物为重组鲑鱼降血钙素，例如，从Novartis得到。人降血钙素也是合适的，多种合成类似物也如此(参见以上定义“降血钙素”的参考资料，包括美国专利5,175,146)。
降血钙素可以肠道外给药，例如，通过静脉内、肌内、或皮下注射；透壁、透皮、鼻腔内给药，或通过肺吸入。还可获得口服形式的降血钙素，例如美国专利5,912,014，5,726,154，和5,441,933。
例如，美国专利5,912,014描述了一种设计用于减少胃蛋白酶和肠或胰腺蛋白酶对降血钙素蛋白水解降解的口服降血钙素制剂。简言之，在肠衣或其它适宜的赋形剂的保护下将降血钙素转运到胃，以基本上防止降血钙素和能降解它的胃蛋白酶发生接触。当该制剂到达肠区时，其中碱性至中性PH占优势，且其中的蛋白酶趋于具有碱性至中性PH最适条件，则肠衣和其它赋形剂释放降血钙素和降PH试剂(彼此紧密相邻)。结果PH的降低减小了肠蛋白酶的蛋白水解活性，从而保护降血钙素不被降解。该制剂还包含加速将降血钙素从肠转运到血液的吸收增强剂，从而使基本吸收在以降低蛋白水解活性的条件为主的情况下发生。
当该制剂的活性组分一起释放时，这些口服降血钙素制剂的生物利用度得到加强。为此目的，肠衣的容量优选尽可能地低，以提供对抗胃蛋白酶的保护。通常，优选加入的肠衣小于药剂剩余物(即在肠包衣前)重量的20％。
优选以提供约50-200IU/天的平均日剂量的数量对降血钙素进行给药，即患者接受平均50-200IU/天。这可以通过每日给药或使用延时释放装置，如透皮贴片或可植入释放装置来实现。
其它降血钙素样试剂，如CGRP和糊精，可以由已知的方法得到或合成，并如关于降血钙素所述进行转运。
可以用口服释放钙和/或维生素D来加强降血钙素治疗。
C.DHEA样试剂本发明的治疗方法可以使用任何DHEA样试剂，一般与生理学上可接受的载体、赋形剂或在使用的剂量处对接受者无毒的稳定剂结合。可以将DHEA分成6种不同的多形态类型，如在共同所有的PCT申请PCT/US/00/06987(国际专利申请WO 00/54763)中所述。通过分析技术如X射线衍射、红外(IR)光谱和差异扫描式量热法(DSC)，已知DHEA存在于多种不同的水合和脱水晶体形式。脱水型包括I、II、III、IV和V型，虽然后两种类型仅由DSC瞬间观察到。水合物(溶剂化物)包括S1(1/4水合物)、S2(一水合物)、S3(一水合物)和S4(1/2甲醇化物)型。PCT专利申请PCT/US/00/06987描述了另外一种类型，VI型，它仅可以通过固态NMR检测。
在本发明的优选的实施方案中，所用的DHEA规定了生物利用度和药代动力学性质，采用含有提供期望性质的多晶型物的制剂获得以上性质。
一方面，本发明的治疗方法使用含至少约85％，优选至少约90％，更优选至少约95％，和最优选至少约99％I型的DHEA制剂。I型多晶型物具有以下特征(1)X-射线粉末衍射独特的峰在15.0(s)，16.8(w)，18.0(m)，18.7(m)，19.1(w)，19.3(w)，20.2(w)，24.8(w)25.0(w)，25.2(w)(度数2θ给出峰位置；s＝强，m＝中等，w＝弱)；和(2)固态13C-NMR峰14.8，14.1ppm碳号18，120.4，118.9ppm碳号6，其中这些特征如在PCT申请PCT/US/00/06987中所述进行测定。
含DHEA I型的制剂表现为在口服时被胃肠道良好地摄取，表现出良好的治疗活性，和在外周条件下的高稳定性。
另一方面，DHEA制剂含至少约85％，优选至少约90％，更优选至少约95％，和最优选至少约99％的II型。II型多晶型物具有以下特征(1)X-射线粉末衍射独特的峰在8.6(w)，17.3(w)，20.9(m)，22.0(w)，22.2(w)，27.1(w)(度数2θ给出峰位置；s＝强，m＝中等，w＝弱)；和(2)固态13C-NMR峰13.1ppm碳号18，119.9ppm碳号6，其中这些特征如在PCT申请PCT/US/00/06987中所述进行测定。
含DHEA II型的制剂表现为在口服时被胃肠道良好地摄取，快速的吸收率(大于I型多晶型物)，和良好的治疗活性，同时在外周条件下是稳定的。
此外，用于该治疗方法的DHEA制剂可以含有I型和II多晶型物的混合物。一般来说，混合的I型和II多晶型物占该制剂中的DHEA的至少约85％，优选至少约90％，更优选至少约95％，和最优选至少约99％。本文所述的富含I型和/或II型的制剂比具有随机多晶型物组成的制剂提供了更为可预测的药代动力学曲线。
这些制剂，包括DHEA和前体如DHEA乙酸盐，可以从各种来源商购得到(如Sigma化学公司，St.Louis，MO；Aldrich化学有限公司；Diosynth，Inc.；Pfaltz & Bauer，Inc.；Schering AG)。
富含所选择的多晶型物的DHEA制剂可以通过在适宜的冷却或蒸发条件下，在所选择的溶剂中结晶商购的DHEA而得到。
在优选的方法中，纯I型通过以下方法制备(a)在室温的氮气流下，从无水2-丙醇(或可选择的丙酮或乙腈)中结晶DHEA约2天，产生含有主要的I型和一定量的IV型的结晶沉淀物，然后(b)将此沉淀物悬浮在乙酸乙酯(大约100mL/30g DHEA)，并在室温下将所得的浆搅拌大约1周，然后过滤。室温下将滤饼干燥过夜。13C-SSNMR分析(以下讨论)表明这种方法制得的产物由纯或几乎纯的(＞99％)I型组成；通过13C-SSNMR没有检测到其它类型。
极富含II型的DHEA可以从四氢呋喃、二噁烷、氯仿或氯仿和THF的混合物中快速结晶得到。PCT申请PCT/US/00/06987的实施例1提供了用于从THF中结晶的特定方法，所述方法产生的产物由X射线粉末衍射表明为纯II型。
可以各种方式给予DHEA，包括肠道外给药，如通过静脉内、肌内或皮下注射；透壁、透皮、鼻腔内给药，或通过肺吸入，虽然一般优选口服给药。
根据加入的方式，可以多种方式制备DHEA。可以将DHEA制成各种药剂，如颗粒剂、片剂、胶囊、栓剂、散剂、控释制剂、悬浮剂、乳剂、乳膏、软膏、油膏、洗剂或气溶胶等。
优选地，以固体剂型使用DHEA制剂，固体剂型适于简单，优选口服给予精确剂量。用于口服的固体剂型优选为片剂、胶囊等等。
用于本发明的DHEA制剂可以包括一种或多种药学等级有机或无机载体、赋形剂和/或稀释剂，特别是适于口服的或局部应用的物质。这些载体包括生育酚、二甲亚砜等等。对于口服给药，适宜的赋形剂包括乳糖、甘露醇、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、凝胶、蔗糖、碳酸镁等等。
为了制备口服释放的片剂，将DHEA与至少一种药学赋形剂混合，并根据已知方法将该固体制剂压制成片剂，以释放至胃肠道。一般将片剂组合物与添加剂配制，所述的添加剂例如糖类或纤维素载体，粘合剂如淀粉糊或甲基纤维素，填充剂，崩解剂，或在药剂制备中常用的其它添加剂。为了制备口服释放的胶囊，将DHEA与至少一种药学赋形剂混合，并将固体制剂置于适于释放到胃肠道的胶囊容器中。
现有技术中已知的稀释剂包括例如植物和动物油和脂肪。可以在DHEA制剂中使用稳定剂、湿润剂和乳化剂，用于改变渗透压的盐、用于保证充足PH值的缓冲剂，和/或皮肤渗透增强剂作为辅助剂。用于制备各种常规剂型的方法是已知的，或者对于本领域技术人员是显而易见的；例如，参考Remington’s PharmaceuticalSciences(Remington药剂学)(19th Ed.，Williams & Wilkins，1995)。
药学活性DHEA与载体和/或其它物质的比例可以从大约0.5变化到大约100wt.％(重量百分比)。对于口服应用所述的药剂学配方一般含约5-100％重量的活性物质。对于其它应用所述的制剂一般含有约0.5-50wt.％的活性物质。
用于本发明的DHEA制剂在对个体给药时提供了有效量的DHEA。上下文所用的DHEA的“有效量”是有效地缓解SLE症状的数量。这种效果一般在开始给予有效量的DHEA后大约4-6周内观察到。
优选以使DHEA的血液水平增加至少约10％，更优选至少约25％的量对该受试制剂进行每日给药，但这并非必须。一般地，总日剂量至少约为50mg，优选至少约为100mg，更优选至少约200mg，且优选不超过500mg每天，口服给药，例如在4粒胶囊或片剂中，每一粒含50mg DHEA。用于口服释放的胶囊或片剂一般含有至多全日口服剂量，如200mg或更多。当采用口服以外的途径给药时，可以在更长的时期，如3-10天内释放DHEA，给药量有效地产生至少如50mg的日剂量。
D.降血钙素和DHEA的共同给药本发明治疗方法的优选的实施方案中，将降血钙素与DHEA共同给药。一般来说，以至少约50IU每天的平均量给予降血钙素，并以至少约50mg每天的量口服给予DHEA。优选地，以至少约100IU每天的平均量给予降血钙素，并以至少约100mg每天的量口服给予DHEA。更优选地，以至少约200IU每天的平均量给予降血钙素，并以至少约200mg每天的量口服给予DHEA。
E.其它药物的给药本发明的方法在用导致BMD损失的药物治疗个体的情况下特别有用。例如，使用普遍用于许多自体免疫疾病和抑制移植后排斥的皮质类固醇(通常糖皮质激素)，与骨丢失和骨折发病率明显增长有关。纵向研究表明在类固醇使用期间发生早期快速骨丢失。一项研究报道，患有类风湿性关节炎并用类固醇治疗6个月的患者的腰椎中，发生8％的小粱骨质丢失(Laah)。目前据报道，即使小剂量的，认为是“生理学替代剂量”的皮质类固醇也与骨折发病率的显著增加有关。发现低至强的松2.5-7.5mg/天的剂量与髋骨骨折的相对风险1.77(95％置信区间1.55-2.02)有关，而7.5mg以上的剂量与髋骨骨折的相对风险2.27(1.94-2.66)有关(van Staa)。已报道免疫抑制剂，如用于治疗白血病、类风湿性关节炎、SLE和许多其它疾病的甲氨蝶呤增加骨丢失。
因此，对于接受已知造成或促进BMD损失的强的松、甲氨蝶呤或其它免疫抑制剂或抗炎剂的个体而言，可以在继续免疫抑制剂或反义炎性治疗时与降血钙素样试剂和DHEA样试剂的结合治疗。当患者接受DHEA治疗时，例如，在系统性红斑狼疮(SLE)的治疗中，尤其是与已知造成或促进骨吸收的免疫抑制剂或抗炎剂，如皮质类固醇(如强的松)联合治疗时，可以将降血钙素加到SLE治疗方案中。
在特别优选的实施方案中，还用降血钙素和DHEA治疗每天接受至少约7.5mg的皮质类固醇以治疗SLE的SLE患者，以增加BMD。
IV.药剂本发明还提供了一种用于抑制个体骨丢失的药剂，所述药剂包含治疗有效量的脱氢表雄酮(DHEA)样试剂和治疗有效量的选自降血钙素样试剂和双磷酸盐的抗吸收剂。本文将这些试剂称为“活性试剂”。DHEA样试剂优选DHEA、7-α-羟基-DHEA、5-雄甾烯-3-β、17-β-二醇或4雄甾烯二醇。降血钙素样试剂优选降血钙素、降血钙素基因相关肽(CGRP)和/或糊精。任何用于抑制骨丢失的双磷酸盐，如阿仑膦酸盐，可以用于这种制剂的配方。在特别优选的实施方案中所述的制剂包括与DHEA组合的降钙素。
如上所述，DHEA I和II型多晶型物优选用于本发明。因此，优选的制剂是至少约85％，更优选至少约95％的DHEA作为I型多晶型物、II型多晶型物或其组合而存在。
含有降血钙素样试剂和DHEA样试剂的药剂适于通过多种途径给药，如通过口服、肠道外例如静脉内，肌内，或皮下注射；透壁，透皮，鼻腔内给药，或者通过肺吸入，根据标准制剂技术和本文的指导设计该制剂。口服制剂由于给药容易而被优选。
一般而言，本发明的药剂提供的DHEA样试剂的日剂量至少约为50mg，优选至少约100mg，更优选至少约200mg。这种制剂提供的降血钙素样试剂的平均数一般为至少约50IU每天，优选至少约100IU每天，更优选至少约200IU每天。
如上述，降血钙素样试剂和/或DHEA样试剂的制剂可以包含生理学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。除了上述的物质以外，这些组分的实例包括缓冲剂(如磷酸盐缓冲剂、柠檬酸缓冲剂和由其它有机酸制得的缓冲剂)，抗氧化剂(如抗坏血酸)，低分子量(小于约10个残基)多肽，蛋白(如血清白蛋白、明胶和免疫球蛋白)，亲水聚合物(如聚乙烯吡咯烷酮)，氨基酸(如甘氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、精氨酸和赖氨酸)，单糖，二糖和其它糖类(包括葡萄糖、甘露糖和糊精)，螯合剂(如乙二胺甲乙酸[EDTA])，糖醇(如甘露糖醇和山梨醇)，成盐抗衡离子(如钠)，和/或阴离子表面活性剂(如Tween，Pluronics，和PEG)。
在一个实施方案中，本发明提供持续释放的药剂。例举性的持续释放制剂含有固体疏水聚合物半透基质，本发明活性试剂结合于该基质上，或者该活性试剂被包裹在该基质内。适宜聚合物的实例包括聚酯，水凝胶，聚交酯，L-谷氨酸和T-乙基-L-谷氨酸酶的共聚物，不可降解的乙烯-乙烯基乙酸酯，可降解的乳酸-糖醇酸共聚物，和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。这种基质的形态为定形颗粒，如薄膜或微胶囊。
例如，持续释放制剂的例子包括结合到聚亚烷基醇(如聚乙二醇[PEG])上的活性试剂。PEG与蛋白的结合是一种已知的减小致免疫原性和在体内延长多肽的半衰期的方法(例如，参见Abuchowski，J.，等人(1977)J.Biol.Chem.2523582-86)。如果“pegylated”制剂保持其药学活性，则可以使用任何常规的“pegylation”方法。
在另一个实施方案中，持续释放制剂包括脂质体捕获的活性试剂。脂质体是含有各种类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂的小载体。这些组分一般以双层结构排列，类似于生物膜的脂质排列。通过已知方法制备含有活性试剂的脂质体，例如在Epstein，等人(1985)PNAS USA 823688-92，和Hwang，等人，(1980)PNAS USA，774030-34中所述的方法。通常，这些制剂中的脂质体为小(大约200-800埃)的单层类型，其中，脂质含量大于约30mol％的胆固醇，调节具体的百分数以提供最佳治疗。可以由反相蒸发法，利用包括磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质体配方成产生有用的脂质体。如果需要，通过规定的孔大小的过滤器挤出脂质体，以得到特定直径的脂质体。
药剂还可以包括吸附在可植入膜如硅橡胶膜上的活性试剂，如国际专利申请WO 91/04014所示。
可以任何常规形式储存本发明的药剂，包括水溶液或冻干饼状物。这些制剂在给予受试者前一般为无菌。通过无菌过滤膜的过滤而容易地实现对水溶液的消毒。如以冻干形式储存该制剂，则该制剂可以在冻干和重组之前和之后过滤。
本发明还提供包括这种制剂和相关的试剂盒的制品。本发明包含任何类型的包括本发明的制剂的制品，但制品一般为一个容器，优选具有标明其中所含制剂的标签。该容器可以由任何不与所包含的制剂反应，并可能具有任何形状或其它有利于制剂进行目标应用的材料组成。
本发明的试剂盒一般包括一种或多种这样的制品，并优选包括使用说明。可以将说明书固定到包装材料或作为包装内插物包入。虽然说明书一般包括书写或打印的材料，但它们并不限于这些。本发明可考虑任何能够储存这种说明并使与最终用户交流的介质。这些介质包括，但不限于，电子储存介质(如磁盘、磁带、盒式磁带机、芯片)，光介质(如CD ROM)等等。本发明所用的术语“说明书”包括可以提供这些说明的因特网站点的地址。
***本文引用本说明书中引述的所有出版物和专利作为参考，如同具体而分别引用各个单独的出版物或专利申请，以合并作为参考。
虽然通过例举和实施例的方式，较详细地描述了上述的发明以使其清楚地理解，但根据本发明的教义，本领域技术人员将容易地看出在不违背所附的权利要求的保护范围的情况下，可以作某些改动或修正。
权利要求
1.一种治疗个体以增加个体的骨矿质密度(BMD)的方法，所述方法包括a)将降血钙素样试剂给予个体；和b)在降血钙素样试剂给药期间，给予脱氢表雄酮(DHEA)样试剂，其中，降血钙素和DHEA样试剂的给药量共同有效地增加BMD，且其中，降血钙素和DHEA样试剂的共同给药强化了任何单独给予该数量的降血钙素样试剂而获得的BMD增加。
2.根据权利要求1所述所述的方法，其中所述的个体为患有低常BMD的人患者。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述的降血钙素样试剂包括降血钙素，而DHEA样试剂包括DHEA。
4.根据权利要求3所述的方法，其中至少约85％的给药DHEA作为I型多晶型物，II型多晶型物，或其组合而存在。
5.根据权利要求4所述的方法，其中至少约95％的给药DHEA作为I型多晶型物，II型多晶型物，或其组合而存在。
6.根据权利要求5所述的方法，其中至少约95％的给药DHEA作为I型多晶型物存在。
7.根据权利要求5所述的方法，其中至少约95％的给药DHEA作为II型多晶型物存在。
8.根据权利要求3所述的方法，其中所述的降血钙素以至少约50IU每天的平均量给药至少约25周的时间，而DHEA以至少约50mg每天的量口服给药。
9.根据权利要求9所述的方法，其中，降血钙素以至少约100IU每天的平均量给药，而DHEA以至少约100mg每天的量口服给药。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，降血钙素以至少约200IU每天的平均量给药，而DHEA以至少约200mg每天的量口服给药。
11.根据权利要求3所述的方法，其中所述的患者在降血钙素和DHEA给药之前用免疫抑制剂治疗，且在降血钙素和DHEA给药期间继续免疫抑制剂治疗。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述的免疫抑制剂包括皮质类固醇或甲氨蝶呤。
13.根据权利要求11所述的方法，其中所述的患者患有系统性红斑狼疮(SLE)，用皮质类固醇治疗该患者的SLE，且在降血钙素和DHEA给药期继续该皮质类固醇治疗。
14.一种强化降血钙素样试剂对个体骨矿质密度(BMD)的治疗效果的方法，它包括在降血钙素样试剂治疗期间，将脱氢表雄酮(DHEA)以至少约50mg/天的量给予个体。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述的个体为患有低常BMD的人患者。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述的降血钙素样试剂包括降血钙素，而DHEA样试剂包括DHEA。
17.根据权利要求16所述的方法，其中至少约85％的给药DHEA作为I型多晶型物，II型多晶型物，或其组合而存在。
18.根据权利要求17所述的方法，其中至少约95％的给药DHEA作为I型多晶型物，II型多晶型物，或其组合而存在。
19.根据权利要求18所述的方法，其中，至少约95％的给药DHEA作为I型多晶型物存在。
20.根据权利要求18所述的方法，其中，至少约95％的给药DHEA作为II型多晶型物存在。
21.根据权利要求16所述的方法，其中，用降血钙素以至少约50IU每天的平均量对所述的患者治疗至少约25周，而DHEA以至少约50mg/天的量口服给药。
22.根据权利要求21所述的方法，其中，用降血钙素以至少约100IU每天的平均量治疗该患者，且该给药包括以至少约100mg/天的量口服给予DHEA。
23.根据权利要求22所述的方法，其中，用至少约200IU每天的平均量的降血钙素治疗所述的患者，且所述的给药包括以至少约200mg/天的量口服给予DHEA。
24.根据权利要求16所述的方法，其中，在降血钙素和DHEA给药之前，用免疫抑制剂治疗患者，且在降血钙素和DHEA给药期间继续免疫抑制剂治疗。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述的患者患有系统性红斑狼疮(SLE)，用皮质类固醇治疗该患者的SLE，并在降血钙素和DHEA给药期间继续该皮质类固醇治疗。
26.一种增加接受每日给予脱氢表雄酮(DHEA)样试剂而治疗系统性红斑狼疮(SLE)的个体的骨矿质密度的方法，所述方法包括将降血钙素样试剂以至少约50IU每天的平均量给予个体。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述的个体为患有低常骨矿质密度(BMD)的人患者。
28.根据权利要求26所述的方法，其中所述的降血钙素样试剂包括降血钙素，而DHEA样试剂包括DHEA。
29.根据权利要求28所述的方法，其中，至少约85％的给药DHEA作为I型多晶型物，II型多晶型物，或其组合而存在。
30.根据权利要求29所述的方法，其中，至少约95％的给药DHEA作为I型多晶型物，II型多晶型物，或其组合而存在。
31.根据权利要求30所述的方法，其中，至少约95％的给药DHEA作为I型多晶型物存在。
32.根据权利要求30所述的方法，其中，至少约95％的给药DHEA作为II型多晶型物存在。
33.根据权利要求27所述的方法，其中所述的患者每天接受至少约100mg DHEA，用于治疗SLE，降血钙素的平均给药量至少约100IU每天。
34.根据权利要求28所述的方法，其中所述的患者每天还接受至少约7.5mg皮质类固醇，用于治疗SLE。
35.一种用于抑制需要治疗的个体骨丢失的方法，所述方法包括给予所述的个体治疗有效量的脱氢表雄酮(DHEA)样试剂，和选自降血钙素样试剂与双磷酸盐的抗再吸收试剂。
36.一种用于抑制个体骨丢失的药剂，所述药剂包括治疗有效量的脱氢表雄酮(DHEA)样试剂，和治疗有效量的选自降血钙素样试剂与双磷酸盐的抗再吸收试剂。
37.根据权利要求36所述的药剂，其中所述的降血钙素样试剂包括选自降血钙素、降血钙素基因相关肽(CGRP)和糊精的试剂。
38.根据权利要求36所述的药剂，其中所述的DHEA样试剂包括选自DHEA、7-α-羟基-DHEA、5-雄甾烯-3β，17-β-二醇和4-雄甾烯二醇的试剂。
39.根据权利要求38所述的药剂，其中所述的DHEA样试剂包括DHEA。
40.根据权利要求39所述的药剂，其中，至少约85％的DHEA作为I型多晶型物，II型多晶型物，或其组合而存在。
41.根据权利要求40所述的药剂，其中，至少约95％的DHEA作为I型多晶型物，II型多晶型物，或其组合而存在。
42.根据权利要求41所述的药剂，其中，至少约95％的DHEA作为I型多晶型物存在。
43.根据权利要求41所述的药剂，其中，至少约95％的DHEA作为II型多晶型物存在。
44.根据权利要求36所述的药剂，其中所述的药剂适于口服给药。
45.根据权利要求44所述的药剂，其中所述的脱氢表雄酮(DHEA)样试剂的所述的治疗有效量约为50mg每天。
46.根据权利要求45所述的药剂，其中所述的脱氢表雄酮(DHEA)样试剂的所述的治疗有效量约为100mg每天。
47.根据权利要求46所述的药剂，其中所述的脱氢表雄酮(DHEA)样试剂的所述的治疗有效量约为200mg每天。
全文摘要
本发明公开了一种治疗个体以增加个体的骨矿质密度(BMD)的方法。所述方法包括共同给予降血钙素样试剂和DHEA样试剂。本发明还公开了强化降血钙素样试剂对BMD的治疗效果，和增加接受DHEA治疗的个体的BMD的方法，例如用于治疗系统性红斑狼疮(SLE)。
文档编号A61K31/573GK1411386SQ00817384
公开日2003年4月16日 申请日期2000年11月13日 优先权日1999年11月12日
发明者K·E·施瓦茨 申请人:基因实验室技术有限公司