专利名称：丙谷胺的新生物活性的制作方法
技术领域：
本发明涉及已知药物的新用途，更具体地说是丙谷胺及其生理可接受的盐的免疫促进剂用于肿瘤及感染等疾病的预防、治疗及辅助治疗。
丙谷胺(proglumide)及它的生理可接受的盐为已知化合物，它的化学名称为(±)-5-二丙基氨基-4-苯甲酰基-5-氧代-戊酸。它的化学结构如下 丙谷胺是一种抗胃泌素作用的药物。胃泌素是由胃幽的G细胞分泌的一种激素，具有广泛的生理作用，对胃肠道的分泌、运动、吸收以及代谢活动都有影响。在溃疡病发生中，胃泌素是一种重要物质。胃泌素是由胃粘膜分泌的一种含有17肽的激素，它可激发胃液的分泌，对胃壁平滑肌运动(胃的蠕动)具有促进作用。胃泌素对胃粘膜虽有营养作用，但是，它引起胃酸的过分分泌，常可导致溃疡的发生。人体内的胃泌素只有与胃泌素受体结合才能发生生物效应。丙谷胺的化学结构与体内的胃泌素的化学结构非常相似。口服丙谷胺进入人体后，它可与胃泌素发生竞争作用，并与胃粘膜腺细胞上的胃泌素受体结合，使体内自然存在的胃泌素不能与胃泌素受体结合，而失去活性，且丙谷胺不会引起胃酸分泌。因此人体服用丙谷胺后，就能阻断胃泌素的作用，从而抑制了胃酸和胃蛋白酶的分泌，使得胃酸对胃粘膜的腐蚀作用明显减退，胃蛋白酶对粘膜的自身消化明显减退，保护了胃粘膜，促进溃疡愈合。另外，丙谷胺还有较强的利胆作用，对胆汁的分泌有明显的促进作用。所以胃或十二指肠溃疡，慢性胃炎等疾病伴有慢性胆囊炎，胆石症的病人适合选用丙谷胺治疗。
口服，每日3-4次，每次0.4克，饭前15分钟服药，连服1-2个月。另有一种复方丙谷胺片，叫胃丙胺，每片含丙谷胺0.1克，加入适量的甘草、白芍、冰片，有加强制酸止痛，促进溃疡愈合作用。疗效较单用丙谷胺要好，口服，每次3片，每日3-4次，饭前及睡前嚼碎服。
本品在临床上作为胃泌素拮抗药治疗消化性溃疡，或与非甾体抗炎药合并应用，以对抗其胃肠道刺激作用。该化合物已列入Merck Index及2000年版中国药典。
八十年代后，药理试验证明丙谷胺是缩胆囊(cholecystokinin，CCK)受体拮抗剂。由于其化学结构与胃泌素及缩胆囊素两种肽的终末端结构相似，对多种刺激因素引起的胃酸分泌均有较强的抑制作用，有保护粘膜，促进溃疡愈合及解痉作用。
本发明的目的是根据该化合物化学结构的特点及现有的药理作用对其进行实验寻找出具有促进免疫作用的新生物活性从而开发成新的免疫促进剂。
人体中有T细胞和B细胞是两类重要的免疫活细胞，前者主要是中介细胞免疫功能，后者主要负责抗体生成。使T细胞和B细胞增殖能力加强的药物可用于免疫功能低下的疾病，如肿瘤、艾滋病及衰老等。
本发明通过体外筛选，发现丙谷胺可显著刺激T淋巴细胞的分化增殖。经体内进一步试验，证明了其具有免疫促进作用。本发明实验方法是采用清洁级纯系ICR小鼠(合格证沪动合格字158号)，体重20±2g，由中国科学院实验中心提供。实验分对照组及丙谷胺不同剂量组，每组8-10只鼠。丙谷胺由腹腔及灌胃给药7天后解剖，取脾脏作成细胞悬液，分别用conA及LPS刺激T、B淋巴细胞增殖，用MTT法检测丙谷胺的促增殖作用。于解剖前5天，各鼠腹腔注射羊红细胞(SRBC)2×108/0.2ml免疫小鼠，解剖时用脾细胞溶血分光度法(QHS)检测对抗体生成的影响，并用免疫单位扩散法测定小鼠血清免疫球蛋白IgG及补体C3含量。解剖时还称取小鼠胸腺及脾的重量。丙谷胺对正常小鼠免疫功能的影响见表1。表1结果说明丙谷胺无论注射或口服给药均能显著促进小鼠抗体生成及T、B淋巴细胞增殖。对血清IgG及C3无明显影响。对小鼠体重及免疫器官亦无明显影响。
丙谷胺对抗免疫抑制剂泼尼松龙丙谷胺灌胃给药过程中，每隔一天各鼠腹腔注射泼尼松龙50mg/kg，观察其有无对抗免疫抑制作用。结果见表1。
表1丙谷胺对小鼠免疫功能的影响(X±S)
与对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001；与泼尼松龙组比较##P＜0.01；###P＜0.001
泼尼松龙小鼠体重小降，脾脏及胸腺萎缩，抗体生成能力及T、B淋巴细胞增殖强度均明显降低，丙谷胺口服50，100及200mg/kg均可显著对抗以上的免疫抑制作用。
本发明具有如下优点1、丙谷胺具有明显的对免疫功能促进作用，T、B淋巴细胞增殖，对血清IgG及C3无明显影响。
2、丙谷胺能对抗免疫抑制剂泼尼松龙。
3、丙谷胺化学结构简单有望进一步开发为新药。
下面结构实验例对本发明进一步详细描述但不限制本发明。
实施例1采用清洁极纯系ICR小鼠(合格证沪动合格字158号)，体重20±2g，由中国科学院实验动物中心提供。实验分对照组及丙谷胺不同剂量组，每组8-10只鼠。丙谷胺由腹腔及灌胃给药7天后解剖，取脾脏作成细胞悬液，分别用ConA及LPS刺激T、B淋巴细胞增殖，用MTT法检测丙谷胺的促增殖作用。于解剖前5天，各鼠腹腔注射羊红细胞(SRBC)2×108/0.2ml免疫小鼠，解剖时用脾细胞溶血分光度法(QHS)检测对抗体生成的影响，并用免疫单扩散法测定小鼠血清免疫球蛋白IgG及补体C3含量。解剖时还称取小鼠胸腺及脾的重量。详细实验方法如下一.T、B淋巴细胞的增殖反应1、无菌条件下取出小鼠脾脏，置RPMI 1640培养液中。
2、在100目不锈钢网上研磨小鼠脾脏，制成脾细胞悬液。
3、用双蒸水破坏红细胞后，洗涤三次。
4、用台盼兰染色、并计数(活细胞在95％以上，细胞数为2×106细胞/ml)。
5、将脾细胞加入培养板孔中，每孔100μl，每个样品重复3-4孔。刺激T细胞增殖时加入ConA(5-10μl/ml)或PHA(25-50μg/ml)。刺激B细胞增殖时加入LPS(5-10μg/ml)。
6、筛选样品配成4-5种浓度加入细胞培养液中。
7、置CO2培养箱中培养72小时。
8、在终止培养前16小时加入3H-TdR(9.25kBq/孔)。
10、用微量多头细胞收集器收获细胞于滤纸上。
11、置80℃烘箱内干燥30分钟。
12、将烘干的滤纸放入盛有闪烁液的测试管中，用液闪测定每分钟衰变数(dpm).
13、计算相对有效率(实验管÷dpm对照管dpmX100)。
二、脾细胞抗体生成实验(定量溶血分光光度法，QHS)1.新鲜SRBC经pH7.4 PBS洗涤三次，按1∶20稀释细胞细胞压积，每管加入1ml。
2.新鲜豚鼠血清1∶10稀释，加入实验管，每管加入1ml。
3.取1ml 2×107ml小鼠脾细胞悬液，分别加入实验管和对照管。混匀后37度温育1小时后，离心，取上清测定OD520值。
三、血清免疫球蛋白IgG检测(单向免疫扩散法)1.将1％琼脂糖融化，56℃水浴中保温。
2.加入适量兔抗小鼠IgG血清(按抗血清效价决定稀释倍数)，充分混匀后铺于玻璃板上。
3.将凝胶凝固后打孔(直径3mm)。
4.将系列稀释的标准抗原IgG和待测抗原分别加到凝胶孔中，每孔5μl。
5.将凝胶板置于湿盒内，室温放置24小时后测量沉淀环直径。
6.绘制标准曲线，算出样品中相应抗原含量。
四、血清补体C3含量测定(单向免疫扩散法)以兔抗小鼠C3血清代替上述抗IgG血清，其余步骤同上。
一.丙谷胺对正常小鼠免疫功能的影响见表1表1结果说明丙谷胺无论注射或口服给药均能显著促进小鼠抗体生成及T、B淋巴细胞增殖。对血清IgG及C3无明显影响，对小鼠体重及免疫器官亦无明显影响。
二.丙谷胺对抗免疫抑制剂泼尼松龙丙谷胺灌胃给药过程中，每隔一天各鼠腹腔注射泼尼松龙50mg/kg，观察其有无对抗免疫抑制作用。结果见表1。泼尼松龙使小鼠体重下降，脾脏及胸腺萎缩，抗体生成能力及T、B淋巴细胞增殖强度均明显降低，丙谷胺口服50，100及200mg/kg均可显著对抗以上的免疫抑制作用。
权利要求
1.一种化学结构如下的胃泌素拮抗药丙谷胺及其生理可接受的盐，其特征在于它在制备免疫促进剂中应用
2.根据权利要求1所述的胃泌素拮抗药丙谷胺，其特在于免疫促进剂在肿瘤、艾滋病、感染性疾病及衰老的预防、治疗、辅助治疗中应用。
全文摘要
本发明提供了丙谷胺及它的生理可接受的盐的新生物活性,经药理等试验证明它有明显的免疫促进作用,进而可在肿瘤、艾滋病、感染性疾病及衰老的预防、治疗和辅助治疗中应用。
文档编号A61P37/00GK1371684SQ0110548
公开日2002年10月2日 申请日期2001年2月28日 优先权日2001年2月28日
发明者李晓玉, 赵维民, 刘建生, 秦国伟, 徐任生, 许建一 申请人:中国科学院上海药物研究所