生物碱类化合物、镇痛药物及其制备方法

专利名称：生物碱类化合物、镇痛药物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及生物碱类化合物，特别是小分子量生物碱及其制备方法。本发明还涉及镇痛药物，具体地是指含有本发明提供的生物碱的镇痛药物。本发明还涉及该镇痛药物的制备方法，该方法是以安络小皮伞为原料的制备方法。
背景技术：
人类一直受到疾病的困扰。而在许多情况下，疾病除了造成人体机能甚至是生命的丧失外，还造成人肉体的痛苦，例如晚期癌症，外伤等。为了减轻病人的痛苦，人们已经研制了许多镇痛药物。具有较好镇痛效果的药物有吗啡、杜冷丁。这是目前临床应用中最有效的镇痛药物。但是，该药物的最大缺点是不能长期使用，否则，会产生依赖性或成瘾性。在这类镇痛药物之外，我国民间用安络小皮伞菌丝体来治疗跌打刀伤、骨折疼痛。上海中药制药厂将野生小皮伞菌的干菌丝体连同基质的粗提取物制成“安络解痛片”。这些都是粗制剂，技术含量低，成分复杂。中国卫生部部颁药品标准收载了安络小皮伞的四种制剂安络痛片、安络痛胶囊、安络痛酒和安络痛酊，均采用乙醇提取工艺。后有文献报道安络小皮伞中的有效成分，如方圣鼎等人提取的镇痛有效成分为对羟基肉桂酸(《中草药》1989年第20卷第10期)；朱绍雄等人提取的镇痛有效成分为三十烷酸和麦角甾醇(《中草药》1988年第19卷第8期)。
方圣鼎等人的提取方法是将干菌丝体连同培养基质加冷水浸泡洗涤，烘干、磨粉后用乙醇回流提取，醇溶液减压浓缩，滤取析出物。溶液再减压浓缩的糖浆状物，经硅胶柱层析，二氯甲烷中递增甲醇洗脱。从二氯甲烷-甲醇96∶4中分得苜蓿素，95∶5中分得对羟基肉桂酸。
朱绍雄等人提取方法是将安络小皮伞醇浸膏用乙酸乙酯提取，过滤，适当浓缩，5％碳酸钠溶液洗涤两次，再用水洗至中性、干燥，回收溶媒得浸膏，经G柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱依次得到2，3，5，6-四氯-1，4-二甲氧基苯(石油醚重结晶)，三十烷酸(无水结晶)，β-谷甾醇(先硅胶G旋转薄层分离，正己烷-乙酸乙酯洗脱，浓缩得结晶)，5，8-过氧麦角甾醇(乙酸乙酯重结晶)。

发明内容
虽然，现有技术中已经有不少从安络小皮伞中提取镇痛有效成分的报道，但本申请人进一步在其中找到了新的镇痛有效成分，并且不但具有好的镇痛效果，而且不产生依赖性。这也是本发明要解决的技术问题。
本发明提供化合物是 分子式为C7H11NO2。
本发明提供的另一化合物是 分子式为C6H12N2O2。
上述两种化合物均可由化学方法合成。但本发明提供了一种以安络小皮伞为原料的提取制备方法，直接得到两种化合物。其具体方法是(1)以安络小皮伞为原料，用乙醇提取；(2)回收乙醇后得清膏，用水稀释并调PH值为8--9，脱脂后，用氯仿萃取；(3)回收氯仿后得稠膏，上硅胶H柱，用丙酮洗脱；(4)回收丙酮后得稠膏，用醋酸乙酯洗涤，抽滤得结晶；(5)将得到的结晶上硅胶H柱，用丙酮洗脱，第1出峰的为生物碱I，第2出峰的为生物碱II，再用醋酸乙酯-丙酮(2∶1)重结晶，进一步纯化分离得到生物碱I、II。
本申请人通过实验分析了化合物(I)、(II)的化学结构。证明该化合物的结构为上述所示的结构。详细分析和实验数据见后面所附的结构分析部分。
同时本申请人也通过实验证明，此两个化合物均具有良好的镇痛作用。因此可用于制备镇痛药物。
因此本发明提供一种镇痛药物，其中的有效成分是化合物(I)。
优选化合物(I)的含量大于25％。
本发明还提供一种镇痛药物，其中的有效成分是化合物(II)。
优选生物碱(II)的含量大于25％。
本发明提供的镇痛药物是以安络小皮伞为原料制备的。
优选的制备方法是(1)以安络小皮伞为原料，用乙醇提取；(2)回收乙醇后得清膏，用水稀释并调PH值为8--9，脱脂后，用氯仿萃取；(3)回收氯仿后得稠膏，上硅胶H柱，用丙酮洗脱；(4)回收丙酮后得稠膏，用醋酸乙酯洗涤，抽滤得结晶。
由上述方法得到结晶中除含有本发明指明的化合物I、II之外，还含有三萜类化合物。但化合物I、II的总量超过51％，其中单一的主要有效成分占总生物碱量的25％以上。
将上述总生物碱结晶与淀粉、糊精混均后，经过筛制粒即得镇痛药物。要求总生物碱的含量在51％以上。
实验证明上述方法得到的镇痛药物具有良好的镇痛效果。其可能为外周镇痛与中枢镇痛兼有的镇痛药物，杜冷丁则为明显的中枢镇痛药物。
经药效学试验证明，总生物碱有效部位的镇痛有效剂量为640mg/日/人，相当于日服生药量160g(麦麸、谷壳固体发酵培养物)或相当于干菌丝体约53g。
更重要的是本发明提供的镇痛药物不产生依赖性。


图1化合物I紫外吸收光谱图；图2化合物II紫外吸收光谱图；图3化合物I红外吸收光谱图；图4化合物II红外吸收光谱图；图5化合物I质谱图；图6化合物II质谱图；图7、8、9化合物I核磁共振谱图；
图10、11化合物II核磁共振谱图。
实施例1化合物I和化合物II的制备方法将安络小皮伞药材40kg，粉碎成最粗粉，加乙醇回流3次，每次加8倍量提取2小时，滤液合并，减压回收乙醇，得约6kg(相对密度约1.20-1.25，60℃热测)，加10倍量水稀释，加浓氨水调PH8-9，加石油醚5次，回收石油醚，加氯仿5次，回收氯仿，得稠膏约1kg(相对密度1.35-1.38，60℃热测)，加约5kg硅胶H∶硅藻土(2∶1)拌匀，干燥，上硅胶H柱[硅胶H∶硅藻土(2∶1)，丙酮湿法上柱]，加丙酮洗脱，收集丙酮洗脱液至颜色极浅(浸膏量较少)，回收丙酮，得稠膏(约0.5kg，相对密度1.35-1.38，60℃热测)，加醋酸乙酯洗涤，抽滤，不溶物加醋酸乙酯重结晶2-3次，抽滤，70℃以下干燥，得总生物碱结晶干品约160g。
再将得到的结晶上硅胶H柱，用丙酮洗脱，分别收集第1出峰和第2出峰的洗脱液，用醋酸乙酯-丙酮(2∶1)混合溶液重结晶，纯化分离得到生物碱I约30g，化合物II约18g。纯度可达98％以上。
化合物(I)、(II)的结构确认上述得到的化合物(I)和(II)进一步纯化后，经湖南师范大学和湖南大学四大光谱鉴定，为低分子生物碱类化合物，分子中具有明显的对称结构，测定结果如下(本申请中，化合物I和II又称为生物碱I和生物碱II。)(1)溶解度化合物I易溶于氯仿、丙酮、甲醇、乙醇，微溶于醋酸乙酯。
化合物II易溶于氯仿、乙醇、甲醇，溶于丙酮，微溶于醋酸乙酯。
(2)熔点化合物I68～69℃ 化合物 II82～84℃(3)UV图谱化合物I仪器日本岛津PE-λ16型紫外可见分光度计，扫描测定。λmuxMeOH＝201.2nm。测定条件及结果见图1。
化合物II仪器日本岛津PE-λ16型紫外可见分光光度计，扫描测定。λmaxMeOH＝203.3nm。测定条件及结果见图2。
(4)IR图谱化合物I仪器510P型傅里叶变换IR光谱仪，美国尼高力公司。
IRνmaxKBr(cm-1)3534(NH)，2997-2465(脂肪CH，强)，1726，1705(c＝0)，1298，1221 )。测定条件及结果见图3。
化合物II仪器IRνmaxKBr＝(cm-1)3295(NH)、3090-2860(脂肪CH)，1653，1561(c＝0)，1445，1366，1289，1236(CH2)。测定条件及结果见图4。
(5)质谱(MS)化合物I仪器GC-17A，QP-5000气质联用仪，EI源轰击电压70ev，四级杆检测，分子量范围40～500，倍增器电压1.1kv，进样杆升温程序真空MS m/z140(m+)，98(M+-42)83(m+-57)，58(m+-82)，42(100％)。测定条件及结果见图5。
化合物II仪器GC-17A，QP-5000气质联用仪，EI源轰击电压70ev，四级杆检测，分子量范围40～500，倍增器电压1.1kv，进样杆升温程序真MS m/z143(m+)，85(m-58)，73(m+-70)，60(m+-83)，43(m+-1O0)，30(100％)。测定条件及结果见图6(6)核磁共振谱化合物I仪器AC-80MHz核磁共振仪，瑞士布鲁克公司，H-NMR(CDCl3)，δPPm1.72(CH3-)，2.13(-CH2-)，2.77(-CH2-)，9.80(＞NH)。13C-NMRδPPm 28.14(CH3-)，50.84(-CH2-)、60.5(＞C＝O)，88(-C-)。测定条件及结果见图7、8、9。
化合物II仪器AC-80MHz核磁共振仪，瑞士布鲁克公司，H-NMR(CDCl3)δPPm1.78(CH3-)，3.06(-CH2-)，7.77(NH)。13C-NMRδPPm22.59(CH3-)，38.60(-CH2-)，169.40(-C-)。测定条件及结果见图10、11(7)元素分析化合物I仪器PE-2400型，C、H、N元素分析仪，美国PE公司测定结果C53.64％ H13.90％ N6.56％C53.80％ H12.88％ N6.39％化合物II仪器PE-2400型，C、H、N元素分析仪，美国PE公司测定结果C49.45％ H10.59％ N20.20％C49.65％ H10.68％ N20.11％本发明提供的化合物I、II的镇痛效果实验一、实验材料1.药物与试剂安络小皮伞菌丝体的提取成份A、生物碱I，B、生物碱2。实验时各种产物采用拟用临床剂量的1、2、4倍作为低、中、高剂量。
阳性对照药之一，杜冷丁，沈阳制药一厂生产，批号980908。
阳性对照药之二，阿斯匹林，湖南制药厂生产，批号990704-7。
2.动物BALB/C系、ICR清洁级小鼠，体重18-20g，上海西普尔—必凯实验动物有限公司提供。
3.仪器BJ-084J热板镇痛仪，江苏白石医疗器械厂生产。
二、方法与结构1、对醋酸引起扭体反应的影响(1)方法取BALB/C小鼠90只，雌雄各半，随机分成9组，除杜冷丁组外，其余各组按表1剂量灌胃给药1小时，杜冷丁组皮下注射杜冷丁20分后，各鼠腹腔注射0.7％冰醋酸0.1m/10g，记录5-15分内的扭体次数。
表1 生物碱I、II对小鼠扭体反应的影响(X±SD)组别 动物数 剂量 扭体次数(只) (g/kg)空白对照组10 NS 22.6±7.4
杜冷丁组 10 0.020.8±0.8**阿斯匹林组10 0.2017.2±4.2*A低剂量组 10 0.1 15.3±3.6A中剂量组 10 0.2 12.7±3.8**A高剂量组 10 0.4 9.6±2.7**B低剂量组 10 0.2 14.6±3.1*B中剂量组 10 0.4 11.5±2.7**B高剂量组 10 0.8 10.4±2.4**与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01(2)结果表1可见，与空白对照组比较我，A、B低、中、高组小鼠扭体次数有显著性差异，且高、中、代剂量成较明显的量效关系，能明显抑制由醋酸引起的小鼠扭体反应，表明生物碱I和生物碱II结晶均具有较好的镇痛作用，杜冷丁具有极明显的镇痛作用。
2.对小鼠热板痛阈值的影响(1)方法取符合要求(平均痛阈值在30s)的BALB/C系雌性小鼠90只，随机分成9组，除杜冷丁组外，其余各组按表2剂量灌胃给药1小时，杜冷丁组皮下注射杜冷丁20分后，将小鼠放入热板测痛仪，热板温度为55±0.5℃，自小鼠投入热板至出现舔后足的时间为该鼠的痛阈值，隔30分后再测一次，共3次，求出平均痛阈值进行统计。
表2生物碱I、II对小鼠热板痛阈值的影响(X±SD)组别 动物数 剂量平均痛阈值(只) (g/kg) (s)空白对照组10 NS 28.0±5.8杜冷丁组 10 0.0258.4±3.6**阿斯匹林组10 0.2038.4±5.2**A低剂量组 10 0.1 36.9±2.8*A中剂量组 10 0.2 42.2±3.7**A高剂量组 10 0.4 44.6±5.4**B低剂量组 10 0.2 44.2±3.1**B中剂量组 10 0.4 46.5±4.1**B高剂量组 10 0.8 49.1±4.8**
与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01(2)结果与空白对照组比较，A、B低、中、高剂量组平均痛阈值有显著性差异，表明生物碱I和生物碱II结晶均能明显提高小鼠的耐热痛能力，具有较好的镇痛作用。杜冷丁具有极明显的镇痛作用。
实施例2镇痛药物的制备方法将安络小皮伞药材40kg，粉碎成最粗粉，加乙醇回流3次，每次加8倍量提取2小时，滤液合并，减压回收乙醇，得约6kg(相对密度约1.20-1.25，60℃热测)，加10倍量水稀释，加浓氨水调PH8-9，加石油醚5次，回收石油醚，加氯仿5次，回收氯仿，得稠膏约1kg(相对密度1.35-1.38，60℃热测)，加约5kg硅胶H∶硅藻土(2∶1)拌匀，干燥，上硅胶H柱[硅胶H∶硅藻土(2∶1)，丙酮湿法上柱]，收集丙酮洗脱液至颜色极浅(浸膏量较少)，回收丙酮，得稠膏(约0.5kg，相对密度1.35-1.38，60℃热测)，加醋酸乙酯洗涤，抽滤，不溶物加醋酸乙酯重结晶2-3次，抽滤，70℃以下干燥，得总生物碱结晶干品约160g，加入淀粉约50g，糊精约100g，混匀，粉碎成细粉，过100目筛，混匀，加50％乙醇适量制软材，16目筛制粒，60-80℃干燥，16目筛整粒，检验，灌装胶囊，消毒，包装，即得。制成约1000粒。
本发明提供的镇痛药物的镇痛效果实验一、试验材料1、药物与试剂本发明实施例1提供的胶囊原料，规格0.16g(结晶)/粒。
阳性对照药药之一，杜冷丁，湖北荆门市制药厂生产，批号990508阳性对照药之二，阿斯匹林片，广州广济堂制药厂生产，批号990614。
2、动物BALB/C，ICR系清洁级小鼠，体重18-20g，SD系清洁级大鼠，上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。
3、仪器
BJ-084J热板测痛仪，江苏白石医疗器械厂生产。
二、方法与结果本研究采用5个剂量对小鼠镇痛试验进行研究，其剂量分别为0.025、0.05、0.10、0.20、0.40/kg(以小鼠计算)。用杜冷丁作阳性对照药。
1、对醋酸引起的扭体反应的影响(1)方法取BALBC/小鼠70只，雌雄各半，随机分成7组，除杜冷丁组外，其余各组按表3剂量灌胃给药1小时，杜冷丁组皮下注射杜冷丁20分后，各鼠腹腔注射0.7％冰醋酸0.1ml/10g，记录5-15分内的扭体次数。
表3本发明提供的胶囊不同剂量对小鼠扭体反应的影响组别 动物数剂量 扭体次数 抑制率(只)(g/kg) (％)空白对照组10 NS 36.3±13.2-杜冷丁组 10 0.02 2.8±2.2**92.3本发明提供胶囊I 10 0.02534.5±14.05.0II 10 0.05 31.7±11.212.8III 10 0.10 24.4±14.6*32.8IV 10 0.20 18.9±12.2**52.0V 10 0.40 13.7±8.6**62.3与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
(2)结果与空白对照组比较本发明提供的胶囊III、IV、V剂量组小鼠体次数有显著性差异，且成较明显的量效关系，能明显抑制由醋酸引起的小鼠扭体反应，表明本发明提供胶囊具有较好的镇痛作用，其小鼠镇痛有效剂量为0.1g/kg左右。相当于杜冷丁的1/5(按剂量比较)。
2、对小鼠热板痛阈值的影响(1)方法取符合要求(平均痛阈值在30s内)的BALB/C系雌性小鼠70只，随机分成7组，除杜冷丁组外，其余各组按表4剂量灌胃给药1小时，杜冷丁组皮下注射杜冷丁20分后，将小鼠放入热板测痛仪内，热板温度为55±0.5℃，自小鼠投入热板至出现舔后足的时间为该鼠的痛阈值，隔30分后再测一次，共3次，求出平均痛阈值进行统计。
表4本发明提供胶囊不同剂量对小鼠热板痛阈值的影响(X±SD)组别 动物数 剂量 平均痛阈值(只) (g/kg)空白对照组 10 NS 34.7±10.5杜冷丁组 10 0.02 58.8±2.4**本发明提供胶囊I10 0.02537.6±6.9II 10 0.05 39.8±11.0III 10 0.10 43.1±12.3*IV 10 0.20 48.4±14.5**V10 0.40 52.4±15.2**与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
(2)结果与空白对照组比较，本发明提供胶囊III、IV、V剂量组平均痛阈值有显著性差异，且成较明显的量效关系，能明显提高小鼠的耐热痛能力，表明本发明提供的胶囊具有较好的镇痛作用，其小鼠镇痛有效剂量为0.1g/kg左右。相当于杜冷丁的1/5(按剂量比较)。
3、镇痛作用时间的研究采用小鼠有效剂量0.10/kg，给药后分别在0.5、1、2、3、4、5、6小时测定小鼠的镇痛效果。
(1)对醋酸引起扭体反应的影响取BALB/C小鼠90只，雌雄各半，随机分成9组，分别为空白对照组、杜冷丁组、0.5小时组、1小时组、2小时组、3小时组、4小时组、5小时组、6小时组、除杜冷丁组外，其余各组按表5剂量灌胃给药，杜冷丁组皮下注射杜冷，前3组在给药后30分，后5组分别在给药后1、2、3、4、5、6小时，各鼠腹腔注射0.7％冰醋酸0.1ml/10g，记录5-15分内的扭次次数。
表5本发明提供胶囊不同时间对小鼠扭体反应的影响(X±SD)组别动物数 剂量 扭体次数(只)(g/kg)空白对照组 10 NS27.6±7.8杜冷丁组10 0.02 1.8±1.7**0.5小时组 10 0.10 18.5±9.4**1小时组 10 0.10 15.6±11.2**2小时组 10 0.10 18.4±9.0**
3小时组100.1020.7±6.3**4小时组100.1022.8±5.4*5小时组100.1024.6±6.16小时组100.1027.0±9.5与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
结果与空白对照组比较，本发明提供胶囊0.5小时、1小时、2小时、3小时、4小时小鼠扭体次数有显著性差异，且成较明显的时效关系，能明显抑制由醋酸引起的小鼠扭体反应，表明本发明提供的胶囊在药后0.5-4小时内均具有较好的镇痛作用。
(2)对小鼠热板痛阈值的影响取符合要求的(平均痛阈值在30s内)的BALB/C系雌性小鼠90只，随机分成9组，分别为空白对照组、杜冷丁组、0.5小时组、1小时组、2小时组、3小时组、4小时组、5小时组、6小时组。除杜冷丁组外，其余各组按表6剂量灌胃给药，杜冷丁组皮下注射杜冷丁，前3组在给药后30分，后5组分别在给药后1、2、3、4、5、6小时，将各组小鼠放入热板测痛仪内，热板温度为55±0.5℃，自小鼠投入热板至出现舔后足的时间为该鼠的痛阈值，隔30分后再测一次，共3次，求出平均痛阈值进行统计。
表6本发明提供胶囊不同时间对小鼠热板痛阈值的影响(X±SD)组别动物数 剂量扭体次数(只) (g/kg)空白对照组 10 NS 20.8±5.4杜冷丁组10 0.0255.9±2.4**0.5小时组 10 0.1031.5±7.2**1小时组 10 0.1034.9±2.8**2小时组 10 0.1035.2±5.0**3小时组 10 0.1029.0±4.8**4小时组 10 0.1025.6±4.4*5小时组 10 0.1023.2±5.16小时组 10 0.1022.2±5.9与空白对照组比较P＞0.05，***与空白对照组比较P＜0.01。
结果与空白对照组比较，本发明提供的胶囊0.5小时、1小时、2小时、3小时、4小时组小鼠平均痛阈值有显著性差异，且成较明显的时效关系，能明显提高小鼠的耐热痛能力，表明本发明提供胶囊在给药后0.5-4小时内均具有较好的镇痛作用。
4、对镇痛部位的研究方法取SD清洁级大鼠50只，雄性，随机分成5组，于每鼠右后足跖注射20％啤酒酵母混悬液0.1ml，造成无菌性炎症水肿后1小时，除杜冷丁组外，其余各组按表7剂量胃给药1小时，杜冷丁组皮下注射杜冷丁20分后，用尾部压痛装置测定各鼠双后足跖的痛阀值，比较在左右后跖的痛阀值。
表7本发明提供胶囊对大鼠镇痛部位的影响(X±SD)组别 动物数剂量右足跖痛阀 左足跖痛阀(只) (g/kg) (g)(g)空白对照组10NS 4.3±1.925.2±6.9杜冷丁组 100.0221.6±2.5**121.0±21.5**本发明提供胶囊低剂量组100.107.5±4.3*30.5±11.3本发明提供胶囊中剂量组100.208.2±3.7**33.8±12.0*本发明提供胶囊高剂量组100.4010.6±5.8**35.3±17.8*与至白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01 。
与空白对照组比较，本发明提供胶囊癌低、中、高组大鼠右足跖(炎症中跖)的痛阀值显著性提高，升高幅度在70％以上；而左右跖(非炎症足跖)只有中、高剂量的痛阀值显著性升高，升高幅度只有30％，表明本发明提供胶囊可能为外周镇痛与中枢镇痛兼有的镇痛药物，杜冷丁则为明显的中枢镇痛药物。
本发明提供的镇痛药物依赖性实验1、试验材料1.1药物与试剂本发明提供的镇痛胶囊，用时配成13.3mg/ml、26.7mg/ml混悬液美菲康(盐酸吗啡控释片)西南药业股份有限公司，批号980801，用时配成2.9mg/ml、6.67mg/ml。
1.2动物
BALB/C清洁级小鼠，雌雄各半，体重20～24g，由上海西普尔-必凯公司提供。
SD大鼠，雌雄各半，体重200-220g，由上海西普尔-必凯公司提供。
2、试验方法和结果2.1自然戒断试验2.1.小鼠自然戒断试验2.1.1.1方法取小鼠40只，雌雄各半2，随分为为4组，分别给予蒸馏水.盐酸吗啡及高、低二个剂量药物。第1～3天按每日剂量平均分四次给药，第4～7天每日上、下午在固定时间内灌胃一次，连续给药7天，于第7天起，72小时内每隔4小时测一次体重，记录体重变化情况，并观赏动物的精神、活动、饮食等情况，记录停药后动物的变化。见表8。
表8对小鼠自然戒断症状的影响(X±SD)组别 剂量(mg/kg.日) 动物(只) 体重变化空白 10 0.01±0.45盐酸吗啡 20010 1.12±0.6g***药物 40010 0.23±0.49*药物 80010 0.19±0.59**与空白对照组比较，P＞0.05，***与空白对照组比较P＜0.01。
2.1.1.2试验结果动物在头三天给药后，进食减少，活动迟缓，三天后恢复正常，各组动物在停止给药后48小时内，活动无异常情况，各组也未见兴奋状态。由表8可见，在72小时观察期内，空白组动物体重无异常变化，药物市、两个剂量动物体重变化很小，与空白对照组比较无显著性差异，而盐酸吗啡组动物体重出现明显减轻。与空白对照组比较有非常显著性的差异。盐酸吗啡组动物在停药后出现体重下降，在停药第12～24内为体重减轻最明显的。随后，体重逐步恢复。而给药组未出现这种情况。
2.1.2大鼠自然戒断试验将动物随机分为组，分别灌胃给予蒸馏水、盐酸吗啡及高、低二个剂量药物组。第1～3天按每日剂量平均分成四次给药，第4～7天分二次给药，给药时间为800、1100、1400、1 700和800、400。共给药7天。于第7天起，72小时内每隔4小时测一次体重，记录体重变化情况，并观察动物的精神、活动、饮食等情况，详细记录停药后的变化情况。见表9。
表9对大鼠自然戒断症状的影响(X±SD)组别 剂量(mg/kg·日) 动物(只) 体重变化(g)空白10 -0.86±0.98盐酸吗啡 200 10 -8.54±0.63***药物 400 10 -1.24±0.83*药物 800 10 -1.62±0.88**与空白对照组比较，P＞0.05，***与空白组比较P＜0.01。
2.1.2.2试验结果动物在给药初期(头三天左右)，进食减少，活动迟缓，三天后逐渐恢复正常。恢复正常后及停药48小时内，各组动物活动无异常情况，也未见兴奋状态。从表9可见在72小时观察期内，空白组动物体重逐日略有增加，其体重减轻最大值亦只有0.86g，体重变化非常小。药物高、低两个剂量组动物体重最大下降量也很小，与空白对照组比较，无显著差异。盐酸吗啡组动物在停药后48小时的中段体重持续下降，在停药第12～18小时内下降最大，随后，体重小幅回升，至观察期结束，体重仍未恢复正常，而给药组未出现这种体重变化情况。
2.2催促戒断试验2.2.1小鼠催促戒断试验2.2.1.1试验方法取小鼠40只，雌雄各半，按体重随机分为空白、吗啡、小、大剂量药物组4组，后三组按15ml/kg灌胃给药，每日二次，头4吗啡组和药物组剂量分别为60mg/kg、180mg/kg、332mg/kg、665mg/kg；空白对照组给予同体积的生理盐水，连续给药13天，在第14天900至1200之间腹腔注射纳洛酮30mg/kg，立即放入大玻璃容器内测定小鼠20分内的跳跃数，并观察2小时小鼠的行为，测量体重和排便。
2.2.1.2试验结果由表10可见，经注射纳洛酮后，吗啡组动物在2小时观察期内明显比其他几组动物兴奋，表现为跳跃、湿狗样抖动、腹泻、前爪震颤、流泪等。与空白对照组比较，吗啡组小鼠跳跃数，腹泻只数及体重政降均有明显的差异，而镇痛II号胶囊大、小剂量组均无明显差异。见表10。
表10镇痛II号胶囊对小鼠催促戒断的影响组别 平均剂量 N跳跃 体重变化 腹泻(mg/kg·日)(次) (g) (只)空白对照组- 10 0.6±1.20.06±0.18 0吗啡组157 10 22.3±14.8***-0.17±0.32***10***小剂量组 332 10 0.8±0.9*-0.12±0.14*0大剂量组 665 10 0.3±0.5*0.02±1.3*0*与空白对照组比较P＞0.5，***与空白对照组比较P＜0.01。
2.2.2对大鼠催促戒断试验2.2.2.1试验方法取大鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，吗啡组和药物组灌胃给药，每日二次，连续给药14天，空白对照组给予同体积的生理盐水；第14在800末次给药后40分皮下注射纳洛酮4mg/kg，然后立即观察记录1小时内大鼠的戒断反应症状。并于30、60分称体重。
2.2.2.2试验结果由表11可见，经注射纳洛酮后，吗啡动物在观察期明显比其他几组动物兴奋，表现为跳跃、显狗样抖动、腹泻、流泪、咬牙、前爪震颤等。与空白对照组比较，吗啡的大鼠跳跃数，腹泻只数及体重下降均有明显的差异，而本发明提供的镇痛胶囊大、小剂量组各项指示均无明显差异。
表11本发明提供的胶囊对大鼠催促戒断的影响组别 平均剂量 N 跳跃 体重变化(g)腹泻(mg/kg.日) (次) 30min 60min (只)空白对照组 - 10 0.2±0.45 0.48±0.24 0.31±0.18 0吗啡组 15010 19.4±11.2***-4.62±1.64***-4.89±1.76***10***小剂量组 30010 0.0±0.0*0.06±0.86*0.12±0.20*0大剂量组 60010 0.3±0.5*-0.13±0.37*0.02±0.65*0与空白对照组比较***P＜0.01，*P＞0.05。
3讨论经大、小鼠自然戒断和催促戒断试验，本发明提供的镇痛胶囊太、小剂量组各戒断指标与空白对照组比较，均无显著性的差异，而吗啡组则有明显的差异，表现出明显的依赖性。表明本发明提供的镇痛胶囊没有身体依赖性。
权利要求
1.具有式(I)结构的化合物。
2.具有式(II)结构的化合物。
3.制备权利要求1或2所述的化合物的方法，(1)以安络小皮伞为原料，用乙醇提取；(2)回收乙醇后得清膏，用水稀释并调PH值为8--9，脱脂后，用氯仿萃取；(3)回收氯仿后得稠膏，上硅胶H柱，用丙酮洗脱；(4)回收丙酮后得稠膏，用醋酸乙酯洗涤，抽滤得结晶；(5)将得到的结晶上硅胶H柱，用丙酮洗脱，第1出峰的为生物碱I，第2出峰的为生物碱II，再用醋酸乙酯-丙酮(2∶1)重结晶，进一步纯化分离得到生物碱I、II。
4.一种镇痛药物，其特征在于其中的有效成分是权利要求1所述的化合物I。
5.根据权利要求4所述的镇痛药物，其特征在于上述有效成分的含量大于25％。
6.一种镇痛药物，其特征在于其中的有效成分是权利要求2所述的化合物II。
7.根据权利要求4或5所述的镇痛药物，其特征在于还含有化合物II。
8.根据权利要求7所述的镇痛药物，其特征在于化合物II的含量大于25％
9.制备权利要求7或8所述的镇痛药物的方法，其特征在于它是以安络小皮伞为原料提取的。
10.根据权利要求9所述的镇痛药物的方法，其特征在于(1)以安络小皮伞为原料，用乙醇提取；(2)回收乙醇后得清膏，用水稀释并调PH值为8-9，脱脂后，用氯仿萃取；(3)回收氯仿后得稠膏，上硅胶H柱，用丙酮洗脱；(4)回收丙酮后得稠膏，用醋酸乙酯洗涤，抽滤得结晶。
全文摘要
本发明涉及具有镇痛作用的化合物及其药物和该药物的制备方法。现有的镇痛药物在镇痛效果好的条件下，具有依赖性。本发明提供了两种化合物(I)、(II)，该两种化合物均具有良好的镇痛效果，同时还不产生依赖性。本发明还提供了该两种化合物的制备方法，和镇痛药物的制备方法。
文档编号A61K31/445GK1428334SQ0113164
公开日2003年7月9日 申请日期2001年12月27日 优先权日2001年12月27日
发明者高守泉, 谢昭明, 李勇敏, 朱绍雄, 王晓洪, 唐正平 申请人:湖南隆来福生物工程有限公司