专利名称：用作ip拮抗剂的烷氧基羰基氨基杂芳基羧酸衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及通式I的烷氧基羰基氨基-杂芳基羧酸衍生物或其单个的异构体、异构体的外消旋或非外消旋混合物或其可药用盐或溶剂化物 其中G1选自基团a和b； 和 A选自苯基、吡啶基、嘧啶基和噻吩基，所有这些基团均任选地被低级烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、氰基、硝基、-SO2R′、-NSO2R′、-SO2NR′R″、-NR′R″或-COR′取代；R′和R″彼此独立地是氢或低级烷基；G2选自由式c、d、e、f、g、h、i和j表示的基团； 和
R1和R2在每次出现时彼此独立地选自氢、低级烷基、卤素、卤代烷基、硝基、-NR′R″、-OR′、-SO2R′、-NSO2R′、-COR′、氰基、硝基、未取代的或被卤素、烷基、氰基或烷氧基取代的苯基；或未取代的或被卤素、烷基、氰基或烷氧基取代的杂芳基；或者R1和R2如果彼此相邻，也可以与它们所连接的碳原子一起形成未取代的或被一个或两个选自低级烷基、卤素、氰基或低级烷氧基的取代基取代的芳环。
现已惊奇地发现，式I化合物是前列腺素IP(“PGI2选择性(PGI2-preferring)”)受体拮抗剂。
前列腺素或前列腺素类(PG)是一组由膜磷脂得到的生物活性化合物，其由含有3、4或5个双键的20个碳的必需脂肪酸和一个环戊烷环组成。它们分为用字母D、E、F、G、H或I表示的几个大类，它们的区别在于环戊烷环上的取代情况。这些大类又通过下标1、2或3进一步细分，这些下标反应了它们的脂肪酸前体。因此，PGI2具有双环结构，下标2表示它与花生四烯酸有关。
已知前列腺素可由于生理刺激(例如逼尿平滑肌舒张、膀胱粘膜损伤和神经刺激)而在膀胱局部产生(K.Anderson，Pharmacological Reviews1993，45(3)，253-308)。PGI2(也称为前列环素)是由人类膀胱所释放的主要的前列腺素。有人提出，前列腺素可能是由膀胱充满所产生的逼尿肌舒张和由膀胱膨胀导致的C传入纤维激活之间的联系物。已有人提出，前列腺素可能与膀胱疾病的病理生理学有关。因此，预期前列腺素IP受体的拮抗剂可用于治疗膀胱疾病，例如膀胱出口阻塞、尿失禁、膀胱容量减小、排尿频繁、紧迫性失禁、压力性失禁、膀胱反应过度、良性前列腺增生(BPH)、前列腺炎、逼尿肌反射亢进、尿频、夜尿、尿急、膀胱活动过度、骨盆过敏、尿道炎、骨盆疼痛综合征、前列腺痛、膀胱炎、特发性膀胱过敏等。
PGI2还可作用于血小板和血管以抑制血小板凝集和引起血管扩张，据信这对于血管内环境稳定是非常重要的。曾有人提出PGI2可能与完整血管壁的抗血栓形成特性有关。PGI2还被认为是血管紧张的生理调节剂，其作用是对抗血管收缩剂的作用。由于PGI2在与脓毒性休克有关的低血压中起作用，使得这些血管作用的重要性受到了重视。尽管前列腺素似乎不会直接影响血管的通透性，但PGI2可以通过促进炎症部位的血流而显著增加水肿的形成和白细胞浸润。因此，IP受体拮抗剂可以预防与过度出血有关的病症，例如但不限于血友病和出血，可以减轻与脓毒性休克有关的低血压，并且可减轻水肿的形成。
对啮齿动物的许多体内镇痛研究表明，PGI2在诱导痛觉过敏中起重要作用。同样，体外研究提供了实质性的证据，表明“PGI2选择性”(IP)受体是感觉神经元功能的重要调节剂(K.Bley等，Trends in PharmacologicalSciences 1998，19(4)，141-147)。由于感觉神经元中的IP受体与腺苷酸环化酶和磷脂酶C的激活有关，并因此与cAMP-依赖型蛋白激酶和蛋白激酶C的激活有关，这些受体可以对离子通道活性和神经递质的释放产生很强的影响。根据最近对缺乏IP受体的转基因小鼠的研究，获得了IP受体在炎性疼痛中起显著作用的证据(T.Murata等人，Nature 1997，388，678-682)。
预期IP受体拮抗剂还可用于呼吸道过敏(其中，由于对过敏原的应答而产生PGI2)或呼吸道病症例如哮喘。
关于前列腺素及其受体的其它资料记载于Goodman & Gillman′s，ThePharmacological Basis of Therapeutics，第9版，McGraw-Hill，纽约，1996，第26章，601-616页。
因此需要可以通过作用于IP受体而选择性地治疗上述病症的拮抗剂。
下述文献描述了与本发明的式I化合物有关的化合物转让给F.Hoffmann-La Roche AG的国际专利申请WO 01/68591涉及某些作为IP拮抗剂的羧酸衍生物。转让给Syntex LLC的US 6,184,242涉及某些作为IP拮抗剂的咪唑啉衍生物。转让给Merck & Co的US 5,908,842公开了可用作一氧化氮合酶抑制剂的某些取代的酰氨基吡啶化合物。
Bley等人在Trends in Pharmacological Sciences 1998，19(4)，141-147中提出了IP前列腺素类受体在炎性疼痛中的作用。Smith等人在BritishJournal of Pharmacology 1998，124(3)，513-523中提到了在大鼠感觉神经元中由前列腺素类受体引起的反应的特征。在Murata等，Nature 1997，388(6643)，678-682中描述了在缺乏前列环素受体的小鼠中疼痛感受和炎症反应的改变。在Anderson等，Pharmacological Reviews 1993，45(3)，253-308中综述了下泌尿道平滑肌和阴茎勃起组织的药理学。Coleman等人在Pharmacological Review 1994，46(2)，205-229中提到了前列腺素类受体及其亚型的特性、分布和结构。
本文中所引用的所有出版物、专利和专利申请，无论是上文中所提到的，还是将要在下文中提到的，均全文引入本文作为参考。
本发明涉及式I的烷氧基羰基氨基-杂芳基羧酸衍生物或其单个的异构体、异构体的外消旋或非外消旋混合物或其可药用盐或溶剂化物。本发明还涉及有关的药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的式I化合物和与其混合的至少一种可药用载体，本发明还涉及式I化合物作为前列腺素IP(I2或PGI2)拮抗剂的用途及其制备方法。
另一方面，本发明涉及式I化合物用于对患有可通过用IP受体拮抗剂治疗而缓解之疾病的个体进行治疗的用途，所述治疗包括向该个体施用治疗有效量的至少一种式I化合物。在一个优选的实施方案中，所述个体患有与泌尿道、疼痛、炎症、呼吸状态、水肿形成或低血压血管疾病有关的疾病。
另一方面，本发明涉及一种制备方法，该方法包括用光气酰化通式2、3、4、5、6、7、8或9的酯 和
其中R是低级烷基或三甲基硅烷基乙基，并且R1和R2如文中所定义，然后与通式1的化合物反应 其中G1如文中所定义；然后水解；得到通式I的化合物 其中G1和G2如文中所定义。
若无另外说明，在本申请、包括说明书和权利要求书中使用的如下术语具有以下给出的定义。必需注意，若在上下文中没有明确的相反指示，在说明书和所附权利要求中使用单数形式也包括复数。
“低级烷基”是指含有1至6个碳原子的一价直链或支链的饱和烃基，除非另有说明。低级烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、1-乙基丙基、仲丁基、叔丁基、正丁基、正戊基、正己基等。
“烷氧基”是指基团-O-R，其中R是本文所定义的低级烷基。烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、异丙氧基等。
“芳基”是指由一个单独的环、或其中至少有一个环是芳香性的一个或多个稠合的环组成的一价碳环基团，其可以任选地被一个或多个、优选一个或两个取代基所取代。芳基的例子包括但不限于苯基、萘基、4-氟苯基等。
“卤素”、“卤代”或“卤化物”是指基团氟、溴、氯和/或碘。
“卤代烷基”是指在任何位置被一个或多个本文所定义的卤素原子所取代的本文所定义的低级烷基。卤代烷基的例子包括但不限于1，2-二氟丙基、1，2-二氯丙基、三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、2，2，2-三氯乙基等。
“杂芳基”是指具有一个或多个环，优选1-3个环、每个环具有4-8个原子并且在环中含有一个或多个杂原子，优选一个或两个杂原子(选自氮、氧或硫)的一价芳环基团，其可任选地被一个或多个，优选一个或两个取代基所取代。杂芳基的例子包括但不限于咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、吡嗪基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、萘啶基等。
“任选取代的”是指一个基团可以被一个或多个、优选一个或两个彼此独立地选自指定基团的取代基所取代也可以不被取代。例如，任选地被低级烷基、烷氧基、卤素或氰基取代的苯基是指苯基可以在任何位置被一个或多个、优选一个或两个彼此独立地选自低级烷基、烷氧基、卤素和氰基的取代基所取代或不被取代。
“离去基”是指具有合成有机化学中的常规含义的基团，即，可被亲核试剂置换的原子或基团。离去基的例子包括但不限于卤素、烷基-或芳基磺酰氧基，例如甲磺酰氧基、乙磺酰氧基、甲硫基、苯磺酰氧基、甲苯磺酰氧基和噻吩基氧基、二卤代膦酰氧基(dihalophosphinoyloxy)、任选取代的苄氧基、异丙氧基、酰氧基等。
“异构现象”是指具有相同的分子式但性质或其原子的连接顺序或其原子的空间排列不同的化合物。其原子的空间排列不同的异构体称为“立体异构体”。彼此不互为镜像的立体异构体称为“非对映体”，是不可重叠的镜像的立体异构体称为“对映体”，或有时称为光学异构体。与四个不同的取代基结合的碳原子称为“手性中心”。
“手性化合物”是指有一个手性中心的化合物。它有两个具有相反手性的对映体形式，并且可以以单个对映体或对映体混合物的形式存在。含有等量具有相反手性的单个对映体形式的混合物称为“外消旋混合物”。含有一个以上手性中心的化合物具有2n-1个对映体对，其中n是手性中心的数量。含有一个以上手性中心的化合物可以以单个的非对映体或非对映体混合物的形式存在，称为“非对映体混合物”。当存在一个手性中心时，可将立体异构体用该手性中心的绝对构型(R或S)来表征。绝对构型是指与手性中心相连的取代基的空间排列。与所述手性中心相连的取代基按照Sequence Rule of Cahn，Ingold和Prelog.(Cahn等，Angew.Chem.Inter.Edit.1966，5，385；勘误表511；Cahn等，Angew.Chem.1966，78，413；Cahn和Ingold，J.Chem.Soc.(London)1951，612；Cahn等，Experientia1956，12，81；Cahn，J.Chem.Educ.1964，41，116)排序。
“基本上纯的”是指至少存在约80mol％、更优选至少约90mol％、最优选至少约95mol％所需的对映体或立体异构体。
“可药用的”是指可用于制备通常是安全、无毒并且在生物学或其它方面均没有不利影响的药物组合物，包括可兽药用的以及可人药用的。
化合物的“可药用盐”是指具有母体化合物的所需药理学活性的可药用的(如上所定义)盐。所述的盐包括(1)与无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成盐；或与有机酸例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基萘酸、2-羟基乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘康酸、2-萘磺酸、丙酸、水杨酸、琥珀酸、二苯甲酰基-L-酒石酸、酒石酸、对甲苯磺酸、三甲基乙酸、2，2，2-三氟乙酸等形成的酸加成盐；或者(2)当母体化合物中所存在的酸性质子被金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子代替时所形成的盐；或与有机或无机碱的络合物。可接受的有机碱包括二乙醇胺、乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺、氨丁三醇等。可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠和氢氧化钠。
应当理解，所有关于可药用盐的描述均包括本文所定义的同一酸加成盐的溶剂加成形式(溶剂化物)或结晶形式(多晶型)。
“溶剂化物”是指含有化学计算量或非化学计算量的溶剂的溶剂加成形式。某些化合物具有在结晶固体状态捕获固定摩尔比的溶剂分子的倾向，从而形成溶剂化物。如果溶剂是水，则形成的溶剂化物是水合物，当溶剂是醇时，形成的溶剂化物是醇化物。
“前药”是指化合物的药理学上无活性的形式，其在给药后必需由个体在体内代谢、例如通过生物学液体或酶代谢成化合物的药理学活性形式，以产生所需的药理学作用。前药可以在吸收前、吸收过程中、吸收后或在特定的位点代谢。虽然许多化合物的代谢主要是在肝脏中进行，但几乎所有的其它组织和器官、特别是肺，均可以进行不同程度的代谢。化合物的前药形式可用于例如改善生物利用度、改善个体的可接受性(例如，通过掩盖或降低令人不愉快的特性例如苦味或胃肠刺激性)、改变溶解度(例如用于静脉内应用)、提供延时或持续的释放或递送、使配制更为容易或用于位点特异性地递送化合物。本文中关于化合物的描述包括化合物的前药形式。前药描述于The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action，Richard B.Silverman，Academic Press，San Diego，1992，第8章“前药和药物递送系统”，352-401页；Design of Prodrugs，H.Bundgaard编，ElsevierScience，Amsterdam，1985；Design of Biopharmaceutical Properties throughProdrugs and Analogs，E.B.Roche编，American PharmaceuticalAssociation，Washington，1977；和Drug Delivery Svstems，R.L.Juliano编，Oxford Univ.Press，Oxford，1980。
“个体”是指哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物是指哺乳类中的任何成员，包括但不限于人类、非人的灵长类例如黑猩猩和其它猿和猴类；牲畜，例如牛、马、绵羊、山羊和猪；家养动物例如兔子、狗和猫；实验室动物，包括啮齿动物，例如大鼠、小鼠和豚鼠等。非哺乳动物的例子包括但不限于鸟、爬虫类等。
“治疗有效量”是指当向个体给药以治疗疾病状态时，足以完成所述对疾病状态的治疗的化合物的量。“治疗有效量”会随着化合物、所治疗的疾病状态、所治疗疾病的严重程度、个体的年龄和相对健康情况、给药途径和给药形式、主治医生或兽医的判断以及其它因素而改变。
本文中所用的“药理学作用”包括在个体中产生的达到预定治疗目的的作用。在一个优选的实施方案中，药理学作用是指所治疗个体的主要的指征得到预防、缓解或减轻。例如，药理学作用可以是导致所治疗个体的主要指征得到预防、缓解或减轻的作用。在另一个优选的实施方案中，药理学作用是指所治疗个体的主要指征的病症或症状得到预防、缓解或减轻。例如，药理学作用可以是导致所治疗个体的主要指征得到预防或减轻的作用。
“疾病状态”是指任何疾病、病症、症状或指征。
疾病状态的“治疗”包括(1)预防疾病状态，即，使可能患病或易患疾病状态但还未经历或显示出疾病症状的个体不出现疾病状态的临床症状。
(2)抑制疾病状态，即阻止疾病状态或其临床症状的发展，或(3)缓解疾病状态，即引起疾病状态或其临床症状的暂时性或永久性的消退。
“拮抗剂”是指可以减弱或阻止另一种分子或受体位点的作用的分子，例如化合物、药物、酶抑制剂或激素。
“膀胱疾病”包括但不仅限于，膀胱出口阻塞、尿失禁、膀胱容量减小、排尿频繁、紧迫性失禁、压力性失禁、膀胱反应过度、良性前列腺增生(BPH)、前列腺炎、逼尿肌反射亢进、尿频、夜尿、尿急、膀胱活动过度、骨盆过敏、尿道炎、骨盆疼痛综合征、前列腺痛、膀胱炎或特发性膀胱过敏。
“膀胱出口阻塞”包括但不限于良性前列腺增生(BPH)、尿道狭窄疾病、肿瘤等。其在症状上通常表现为阻塞性(低流速、排尿开始困难等)和刺激性的(尿急、耻骨上疼痛等)。
“出口关闭不全”包括但不限于尿道高运动性、内因性括约肌功能不全或混合型失禁。其在症状上通常表现为压力性尿失禁。
“骨盆过敏”包括但不限于骨盆疼痛、间质性(细胞)膀胱炎、前列腺痛、前列腺炎、外阴痛、尿道炎、睾丸痛等。其在症状上表现为涉及骨盆区域的疼痛、炎症或不适，通常包括膀胱活动过度的症状。
“疼痛”是指或多或少地局部化的不适、痛苦或剧痛的感觉，是由于刺激特定的神经末梢引起的。可以有许多种类型的疼痛，包括但不限于闪痛、幻肢痛(phantompain)、闪电样痛、急性疼痛、炎性疼痛、神经病性疼痛、复合的局部疼痛、神经痛、神经病等(Dorland′s Illustrated MedicalDictiontary，第28版，W.B.Saunders Company，Philadelphia，Pa.)。治疗疼痛的目标是减轻治疗对象所感受到的疼痛的严重程度。
在整个申请中使用如下缩写，其具有如下含义BINAP 2，2’-二(二苯基膦基)1，1-联萘DMAP4-二甲基氨基吡啶DMF N，N-二甲基甲酰胺DMSO二甲亚砜EtOAc 乙酸乙酯THF 四氢呋喃命名法总的来说，本专利申请中所用的命名法是基于AUTONOMTM4.0版，一种用于产生IUPAC系统命名的Beilstein Institute计算机系统。例如，其中G1为式a的基团，A为苯基，G2为式c的基团并且R1为苯基的式I化合物命名为2-苯基-5-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-嘧啶-4-甲酸。
在本发明化合物中，优选某些式I化合物或其单个的异构体、异构体的外消旋或非外消旋混合物或其可药用盐或溶剂化物例如，优选的式I化合物包括其中的G1选自基团a和b，更优选选自基团a的那些化合物。
其它优选的式I化合物包括如下化合物其中A优选地选自苯基、吡啶基、嘧啶基和噻吩基，更优选苯基、吡啶基和噻吩基，所有的基团都可以如上所述任选地被取代。特别优选的是其中A为苯基的式I化合物。
优选的式I化合物还包括其中的G2选自基团c、d、e、f、g、h、i和j，更优选选自基团c、d和g的化合物。
优选的式I化合物包括如下化合物其中R1和R2优选为氢、低级烷基、卤素、卤代烷基、-NR′R″、-OR′、-SO2R′、-NSO2R′、-COR′、氰基、硝基、未取代的或取代的苯基或未取代的或取代的杂芳基，并且如果相邻的话，R1和R2可以与它们所连接的碳原子一起形成未取代的或被一个或两个选自低级烷基、卤素、氰基或低级烷氧基的取代基取代的芳环；更优选R1为氢、低级烷基、卤素、-OR′、-SO2R′、-COR′、硝基或氰基；仍更优选R1为未取代的或取代的苯基。
示例性的特别优选的化合物或其单个的异构体、异构体的外消旋或非外消旋混合物或其可药用盐或溶剂化物包括其中A为任选取代的苯基的化合物。
进一步特别优选的化合物或其单个的异构体、异构体的外消旋或非外消旋混合物或其可药用盐或溶剂化物包括其中G1为式a的基团的化合物。尤其优选的是其中G1为式a的基团并且G2为式c的基团的式I化合物。更优选的是其中G1为式a的基团、G2为式c的基团并且A为任选取代的苯基的式I化合物。优选的小组是其中G1为式a的基团、G2为式c的基团、A为任选取代的苯基并且R1为苯基的化合物。还优选其中G1为式a的基团、G2为式c的基团、A为任选取代的苯基并且R1选自氢、低级烷基、卤素、-OR′、-SO2R′、-COR′、硝基和氰基的化合物小组。另一组优选的式I化合物是其中G1为式a的基团、G2为式c的基团并且A为任选取代的噻吩基的化合物。
示例性的其中G1为式a的基团、G2为式c的基团并且A为任选取代的苯基的优选的式I化合物包括2-苯基-5-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-嘧啶-4-甲酸和5-[5-(4-氟-苯基)-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基]-2-苯基-嘧啶-4-甲酸。
其中G1为式a的基团、G2为式c的基团并且A为任选取代的噻吩基的化合物的例子是2-苯基-5-(5-噻吩-3-基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-嘧啶-4-甲酸。
另外优选的式I化合物是其中G1为式a的基团并且G2为式d的基团的化合物。更优选的式I化合物是其中G1为式a的基团、G2为式d的基团开且R1为任选取代的苯基的化合物。1-苯基-3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-1H-吡唑-4-甲酸是该化合物的一个例子。
另一组优选的式I化合物是其中G1为式a的基团并且G2为式g、h、i或j的基团的化合物。更优选的式I化合物是其中G1为式a的基团并且G2为式g的基团的化合物。尤其优选的式I化合物是其中G1为式a的基团、G2为式g的基团并且R1为任选取代的苯基的化合物。优选的化合物小组是其中G1为式a的基团、G2为式g的基团、A为任选取代的苯基并且R1是苯基的化合物。
还优选的化合物小组是其中G1为式a的基团、G2为式g的基团、A为任选取代的苯基并且R1选自氢、低级烷基、卤素、-OR′、-SO2R′、-COR′、硝基和氰基的化合物。3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-异烟酸是该化合物的一个例子。
其中G1为式a的基团、G2为式g的基团、A为任选取代的苯基的另一个优选的化合物小组是其中R1和R2(如果相邻的话)也可以与它们所连接的碳原子一起形成任选地被一个或两个选自低级烷基、卤素、氰基或低级烷氧基的取代基取代的芳环的化合物。
其它特别优选的化合物或其单个的异构体、异构体的外消旋或非消旋混合物或其可药用盐或溶剂化物包括其中G1为式b的基团的化合物。尤其优选的式I化合物是其中G1为式b的基团、G2为式c的基团并且A为任选取代的苯基的化合物。仍更优选的式I化合物是其中G1为式b的基团、G2为式c的基团、A为任选取代的苯基并且R1为任选取代的苯基的化合物。该化合物的一个例子是5-(联苯-4-基甲氧基羰基氨基)-2-苯基-嘧啶-4-甲酸。
本发明的式I化合物可以通过以下所示和描述的示例性合成反应方案中所描述的方法来制备。
在制备这些化合物中所用的原料和试剂通常可以从商业途径例如Aldrich Chemical Co.获得，或者可以通过本领域技术人员已知的方法、按照参考文献例如Fieser and Fieser′s Reagents for Organic Synthesis；Wiley& SonsNewYork，1991，第1-15卷；Rodd′s Chemistry of CarbonCompounds，Elsevier Science Publishers，1989，第1-5卷和增刊以及Organic Reactions，Wiley & Sons纽约，1991，第1-40卷中所描述的方法制得。以下合成反应方案仅仅是对可以合成本发明化合物的某些方法的举例说明，参照本申请所公开的内容，本领域的技术人员可以对这些合成反应方案进行各种改变或提出改变方案。
如果需要，合成反应方案的原料和中间体可以用常规的技术进行分离和纯化，这些技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱法等。这些物质可以用常规的方法进行鉴定，包括物理常数和光谱数据。
若无相反指示，本文中所描述的反应优选在常压下、在约-78℃至约150℃、更优选约0℃至约125℃的温度范围内、并且最优选且最方便地是在室温(或周围温度)、例如约20℃下进行。
方案1式I化合物的制备下列方案描述了制备其中G1和G2如上所定义的式I化合物的方法。
通常，其中Het是如上G2基团中所定义的杂芳基并且R是保护基如低级烷基或三甲基硅烷基乙基的2-氨基杂芳基羧酸酯可在惰性溶剂中用光气酰化得到异氰酸酯，随后可将其与通式1的2-羟基甲基衍生物反应得到氨基甲酸酯-羧基酯衍生物，水解羧基酯基团后可得到式I的苯甲酸。用光气酰化详细地描述于例如Ozaki，Chem.Rev.1972，72，457-496中。异氰酸酯与通式1的2-羟基甲基衍生物的缩合可在碱，例如三乙胺或二甲基氨基吡啶(DMAP)的存在下完成。酯基的水解可利用本领域技术人员公知的方法，例如用碱金属氢氧化物如氢氧化钠、氢氧化锂或氢氧化钾在低级链烷醇溶液中进行以便制备式Ia的酸。
方案2式1化合物的制备 通常，其中G1是a的式1化合物可在催化剂，优选四-三苯基膦-钯和碱如碳酸钠、碳酸钾或磷酸钾的存在下，使5-溴-苯并呋喃-2-甲酸酯和适宜的硼酸反应，然后将酸在适宜的溶剂如THF、乙醚或1，2-二甲氧基乙烷中，用例如氢化锂铝或硼氢化物还原来制备。5-溴-苯并呋喃-2-甲酸酯的合成可在碱如碳酸钾的存在下，由5-溴水杨醛和溴代丙二酸二乙酯来完成。
方案2a 或者，其中G1是由式b表示的基团的式1化合物可通过商业渠道获得或者通过将4-卤代-苯甲醛与适宜的硼烷衍生物反应，然后例如用硼氢化钠将醛基氢化或还原得到适宜的苯基甲醇衍生物(方案2a)来制备。所述方法详细描述于例如Zhang等人(1999)，Tetrahedron Lett.，40，32，5813-5816中。
方案3通式2、3、4、5、6、7、8和9的胺的制备某些其中R1和R2如上所定义并且R是保护基的式2、3、4、5、6、7、8和9的胺可通过商业渠道获得或者通过本领域技术人员公知的方法制备。
例如，其中的杂芳基是嘧啶基并且R1和R2如本发明所定义的通式2的胺可由其中X是卤素的式n的5-卤代-嘧啶甲酸制备。例如，适宜的原料可以是可按照Kunekell等人，Chem.Ber.1902，35，3164所述制备的5-溴-2-苯基嘧啶甲酸。卤化物-甲酸n向胺-甲酸o的转化可通过本领域公知的方法，例如，如Grant等人；Can.J.Chem.1956，34；1444所述用氨水来完成。通式o酸可进行酯化得到通式2的5-氨基-2-苯基嘧啶甲酸酯，其中R是保护基如低级烷基或三甲基硅烷基乙基。
方案3a 其中的杂芳基是吡唑基，R1是苯基并且R2是氢的式3化合物的制备可如Massa S等人，J.Heterocycl.Chem.1990，27(6)，1805-1809(方案3a)中所述，由通式p的氰基乙酸酯和苯甲醛苯腙q来完成。
其中的杂芳基是吡嗪基并且R1和R2是氢的式4化合物可如Ellingson等人，J.Am.Chem.Soc.1945，67，1711中所述，通过将市售的酸衍生物酯化来制备。其中R1和R2如文中所定义的式4化合物也记载于该文献中。
例如，Lang等人，Helv.Chim.Acta 1986，793-802和Thompson等人，J.Org.Chem 1988，2052-2055中描述了3-氨基-6-苯基-吡嗪-2-甲酸甲酯的制备。另外，Thompson描述了例如被呋喃基或甲氧基-苯基取代的化含物的制备。在另一实例中，Ellingson等人，J.Am.Chem.Soc.1949，2798和Russ等人，Arch.Pharm.1992，761-768中描述了3-氨基-6-溴-吡嗪-2-甲酸甲酯的制备。
某些其中的杂芳基是吡啶基并且R1和R2如上所定义的式6、7、8和9的化合物可通过商业渠道获得。其它化合物是本领域已知的。例如，3-氨基-吡啶-2-甲酸乙酯和5-氨基-吡啶-2-甲酸酯描述于Min，R.S.等人，Chem.Heterocycl.Compd.1998，24(8)，885-886中；4-氨基-烟酸甲酯描述于Leroy，F.等人，Synth.Commun.1996，26，12，2257-2272中；2-氨基烟酸甲酯描述于Koller，Chem.Ber.1927，60，408中；4-氨基-喹啉-3-甲酸甲酯和3-氨基-喹啉-4-甲酸甲酯描述于Godard，A.等人，J.Heterocycl.Chem.1980，17，465-473中。
本发明的式I化合物是IP受体拮抗剂。IP受体拮抗剂，例如本发明所描述的那些，优选可用于与膀胱出口阻塞有关的膀胱疾病和尿失禁，例如膀胱出口阻塞、尿失禁、膀胱容量减小、排尿频繁、紧迫性尿失禁、压力性尿失禁、膀胱反应过度、良性前列腺增生(BPH)、前列腺炎、逼尿肌反射亢进、尿频、夜尿、尿急、膀胱活动过度、骨盆过敏、尿道炎、骨盆疼痛综合征、前列腺痛、膀胱炎或特发性膀胱过敏。
优选的化合物还具有体内抗炎和/或镇痛特性。因此，优选的化合物可在哺乳动物、特别是人中用作抗炎剂和/或镇痛剂。它们可用于由各种原因引起的疼痛，包括但不限于炎性疼痛、手术疼痛、内脏疼痛、牙痛、经前期疼痛、中枢疼痛、烧伤引起的疼痛、偏头痛或丛集性头痛、神经损伤、神经炎、神经痛、中毒、局部缺血性损伤、间质性膀胱炎、癌症疼痛、病毒、寄生虫或细菌感染、创伤后损伤(包括骨折和运动损伤)以及与功能性肠疾病例如肠易激综合症有关的疼痛。
优选的化合物还可用于各种原因引起的炎症，包括但不限于细菌、真菌或病毒感染、类风湿性关节炎、骨关节炎、手术、膀胱感染或特发性膀胱炎、过度使用(over-use)、老年或营养不足、前列腺炎和结膜炎。
优选的化合物还可用于治疗低血压性血管疾病，例如与脓毒性休克有关的低血压。
此外，优选的化合物还可用于治疗呼吸疾病，例如过敏和哮喘。
这些以及其它的治疗用途记载于例如Goodman & Gilman′s，ThePharmacological Basis of Therapeutics，第9版，McGraw-Hill，纽约，1996，第26章601-616；和Coleman，R.A.，《药理学评论》，1994，46，205-229。
本发明式I化合物对预定靶点的结合亲和性用实施例11中更详细描述的体外人血小板IP受体结合试验来测定。下表中给出了某些具体的本发明化合物的体外人血小板IP受体结合数据
本发明化合物对膀胱收缩的抑制作用可以通过体内试验例如分别在实施例14和15中更详细描述的对通过等容膀胱膨胀诱导的大鼠膀胱收缩的抑制作用和对体积诱导的(volume-induced)大鼠收缩的抑制作用来测定。本发明化合物的抗炎/镇痛活性通过体内试验，例如分别在实施例12、13和17中更详细描述的大鼠角叉菜胶爪试验、大鼠完全弗氏佐剂诱导的试验和碳酰前列环素(Carbaprostacyclin)诱导的扭动试验来测定。抑制脓毒性休克的活性可以通过体内试验例如在实施例16中更详细描述的在大鼠中逆转由内毒素引起的低血压的试验来测定。
本发明包括含有至少一种本发明的化合物或其单个的异构体、异构体的外消旋或非外消旋混合物或其可药用盐或溶剂化物以及至少一种可药用载体的药物组合物，其中可还任选地含有其它治疗和/或预防成分。
总的来说，本发明的化合物可以通过用于具有类似用途之药物的任何可接受的给药方式以治疗有效量给药。适宜的剂量范围通常为每天1-500mg，优选每天1-100mg，最优选每天1-30mg，这取决于多种因素，例如所治疗疾病的严重程度、个体的年龄和相对健康情况、所用化合物的效力，给药途径和形式、给药所针对的适应症、参与治疗的医生的偏好和经验。治疗所述疾病的普通技术人员不用过多的经验就可以根据其本人的知识和本申请所公开的内容确定出本发明化合物对于给定疾病的治疗有效量。
通常，本发明的化合物以药物制剂的形式给药，包括适于口服(包括颊部和舌下)、直肠、鼻、局部、肺、阴道或胃肠外(包括肌肉内、动脉内、鞘内、皮下和静脉内)给药的形式，或是适于通过吸入或吹入给药的形式。优选的给药方式通常是采用常规每日剂量方案的口服给药，可以根据疾病的程度对该每日剂量方案进行调整。
本发明的化合物，与一种或多种常规的辅剂、载体或稀释剂一起，可以制成药物组合物和单位剂量的形式。药物组合物和单位剂量形式可以含有常规比例的常规成分，可以含或不含另外的活性化合物或活性成分，并且单位剂量形式可以含有与所要采用的预定的每日剂量范围相称的任何适宜有效量的活性成分。药物组合物可以是固体，例如片剂或填充的胶囊、半固体、粉剂、缓释制剂或液体，例如溶液剂、混悬剂、乳剂、酏剂或用于口服的填充胶囊；或是用于直肠或阴道给药的栓剂形式；或是用于胃肠外应用的无菌可注射溶液。因此，每片含有约一(1)毫克活性成分，或更宽地，约0.01-约一百(100)毫克活性成分的制剂是适宜的代表性单位剂量形式。
本发明的化合物可以配制成各种口服给药剂量形式。药物组合物和剂量形式可以含有本发明的化合物或其可药用盐作为活性成分。可药用载体可以是固体或液体。固体形式的制剂包括散剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散的颗粒剂。固体载体可以是一种或多种还起稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料作用的物质。在散剂中，载体通常是细分散的固体，它是与细分散的活性成分的混合物。在片剂中，通常将活性成分与适当比例的具有所需粘合能力的载体混合然后压制成所需的形状和大小。散剂和片剂优选含有约百分之一(1)至约七十(70)的活性化合物。适宜的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点的蜡、可可脂等。术语“制剂”还包括活性化合物与用包封材料作为载体的制剂，从而提供活性成分(含或不含载体)被载体包围的胶囊。同样，还包括扁囊剂和锭剂。片剂、散剂、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可以是适于口服给药的固体形式。
其它适于口服给药的形式包括液体形式的制剂，包括乳剂、糖浆、酏剂、含水溶液、含水混悬液或是用于在临用之前转化成液体形式制剂的固体形式的制剂。乳剂可以在溶液中制备，例如在丙二醇的水溶液中制备，或者可以含有乳化剂例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或金合欢胶。含水溶液可以通过将活性成分溶于水并加入适宜的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂来制备。含水悬浮液可以通过将细分散的活性成分分散在含有粘性材料例如天然或和合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它公知的悬浮剂的水中来制备。固体形式的制剂包括溶液剂、混悬液和乳剂，并且除活性成分外，其中还可以含有着色剂、矫味剂、稳定剂、缓冲剂、抗菌剂和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
本发明的化合物可以配制成用于胃肠外给药(例如，通过注射，例如通过快速浓注或连续输注)的形式并以单位剂量的形式存在于安瓿、预填充的注射器、小容积的输注容器或含有防腐剂的多剂量容器中。组合物可以是在油或含水溶媒例如聚乙二醇水溶液中的混悬剂、溶液剂或乳剂的形式。油或非水载体、稀释剂、溶剂或溶媒的例子包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和可注射的有机酯(例如油酸乙酯)，并可含有药物辅剂如防腐剂、湿润剂、乳化剂或助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以是用于在临用前用适宜的溶媒如无菌、无热源的水构建的粉末形式，该形式通过无菌分离无菌固体或通过冻干溶液得到。
可将本发明的化合物配制成软膏、霜剂或洗剂或透皮贴剂的形式用于向表皮局部给药。软膏和霜剂可以用例如水或油基配制并加入适宜的增稠剂和/或胶凝剂。洗剂可以用水和油基配制并通常也含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。适于在口腔内局部给药的组合物包括在矫味基质(通常是蔗糖和金合欢胶或黄蓍胶)中含有活性成分的锭剂；在惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和金合欢胶中含有活性成分的香锭；在适宜的液体载体中含有活性成分的漱口水。
还可将本发明的化合物配制成用于以栓剂给药的形式。首先将低熔点的蜡、例如脂肪酸甘油酯的混合物或可可脂熔融，然后通过例如搅拌将活性成分均匀地分散。然后将熔融的均匀混合物倒入适宜大小的模具中，使其冷却固化。
还可将本发明的化合物配制成用于阴道给药的形式。适宜的形式包括含有活性成分和本领域已知的载体的阴道栓、棉塞、霜剂、凝胶、糊剂、泡沫剂或喷雾剂。
本发明的化合物还可配制成用于经鼻给药的形式。将溶液或混悬液通过常规方法例如滴管、吸管或喷雾器直接施用到鼻腔内。该制剂可以是单剂量或多剂量的形式。在后一种的滴管或吸管的情况下，可以通过患者自己施用适宜的、预定体积的溶液或混悬液来完成。在喷雾剂的情况下，可以通过例如计量雾化喷雾泵来实现。
本发明的化合物还可以配制成用于气雾剂给药的形式，特别是向呼吸道、包括鼻内给药。化合物通常应具有较小的粒度，例如五(5)微米或更小。这样的粒度可以通过本领域已知的方法来达到，例如通过微粉化。将活性化合物置于含有适宜的抛射剂例如氯氟化碳(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷或二氧化碳或其它适宜气体的预先加压的包装内。气雾剂还可以含有表面活性剂例如卵磷脂。药物的剂量可以通过计量阀来控制。或者，可将活性成分以干粉、例如化合物在适宜的粉末基质例如乳糖、淀粉、淀粉衍生物例如羟丙甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)中的混合物的形式来提供。粉末载体可以在鼻腔内形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂量形式例如明胶胶囊或药筒或凸泡包装的形式提供，可以借助吸入器通过这些形式施用粉末。
当需要时，制剂可用适用于缓释或控释给药活性组分的肠溶包衣制备。例如，本发明化合物可以配制成经皮或皮下给药装置。当需要缓释化合物以及当患者对治疗方案的依从性非常重要时，这种给药系统非常有利。经皮给药系统中的化合物通常粘附在皮肤粘性的固体载体上。还可将所用化合物与透皮促进剂例如氮酮(1-十二烷基氮杂环庚-2-酮)合用。可以通过手术或注射将缓释给药系统经皮下插入到皮下层。皮下植入物将化合物包在脂溶性的膜例如硅橡胶或生物可降解的聚合物例如聚乳酸中。
药物制剂优选单位剂量形式。在这些形式中，制剂被进一步分成含有适宜量活性成分的单位剂量。单位剂量形式可以是包装的制剂、含有不连续量的制剂的包装，例如小袋装的片剂、胶囊和在小瓶或安瓿内的粉末。此外，单位剂量形式还可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者可以是适宜数量的任何这些包装形式。
其它适宜的药物载体及其制剂记载于RemingtonThe Science andPractice of Pharmacy 1995，E.W.Martin编，Mack Publishing Company，第19版，Easton，Pennsylvania。在实施例4-10中描述了含有本发明化合物的代表性药物制剂。
实施例给出如下制备方法和实施例是为了使本领域的技术人员能够更清楚地理解和实践本发明。不应将其看作是对本发明范围的限定，它们仅仅是对本发明的举例说明和本发明的代表性例子。
制备例1(5-苯基-苯并呋喃-2-基)-甲醇1 步骤15-溴-苯并呋喃-2-甲酸乙酯将5-溴水杨醛(10g，50mmol)、溴代丙二酸二乙酯(13.1g，55mmol)、碳酸钾(6.9g，50mmol)和2-丁酮(80ml)的混合物在90℃下搅拌16小时。在45℃下减压除去溶剂，残余物用1M HCl酸化，萃取，洗涤，干燥并蒸发。残余物通过色谱法纯化得到约3.6g 5-溴-苯并呋喃-2-甲酸乙酯，mp.59-60℃。
步骤25-苯基-苯并呋喃-2-甲酸将5-溴-苯并呋喃-2-甲酸乙酯(2.5g，9.3mmol)、苯硼酸(1.25g，10.2mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(118mg)、碳酸钠(3.25g，30.6mmol)在水(25ml)和二噁烷(25ml)中的混合物在氩环境下搅拌并加热至100℃16小时。将白色多相的物质用1M HCl酸化，萃取，洗涤，干燥并蒸发得到约2.2g 5-苯基-苯并呋喃-2-甲酸，mp.218-220℃。
步骤3(5-苯基-苯并呋喃-2-基)-甲醇1
将溶解在THF(50ml)中的5-苯基-苯并呋喃-2-甲酸(2.1g，8.8mmol)的溶液在冰浴中冷却至5℃，分次加入LiAlH4(0.67g，17.6mmol)并在室温下搅拌1.5小时。通过加入1M HCl分解过量的试剂，将酸化的混合物用乙酸乙酯萃取，洗涤，干燥并蒸发。残余物通过色谱法纯化得到约1.22g(5-苯基-苯并呋喃-2-基)-甲醇1，mp.134-135℃。
类似地，按照该方法，但将苯硼酸用适宜的杂芳基硼烷衍生物代替制得下列通式1的化合物(5-吡啶-3-基苯并呋喃-2-基)甲醇；(5-噻吩-3-基苯并呋喃-2-基)甲醇；和(5-嘧啶-2-基苯并呋喃-2-基)甲醇。
实施例12-苯基-5-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-嘧啶-4-甲酸 步骤15-氨基-2-苯基-嘧啶-4-甲酸向8.75g(0.0314mol)5-溴-2-苯基-嘧啶-4-甲酸的浓氢氧化铵(69ml)悬浮液中加入0.39g硫酸铜(II)的水(1.6ml)溶液。将该混合物密封并加热至80℃6天。冷却至室温并过滤后，将固体加入100ml沸水中，过滤，冷却并用乙酸酸化。过滤并干燥得到4.40g褐色固体状的5-氨基-2-苯基-嘧啶-4-甲酸，mp.199-202℃。
步骤25-氨基-2-苯基-嘧啶-4-甲酸甲酯向4.0g(0.0186mol)在冰浴中的5-氨基-2-苯基-嘧啶-4-甲酸中缓慢地加入48ml三氟乙酸酐并将该混合物加热至50℃5小时。将反应混合物过滤，用少量三氟乙酸酐洗涤并干燥。向所得到的产物的甲醇(50ml)悬浮液中加入0.1ml 0.5M甲醇钠的甲醇溶液。将该混合物回流15分钟，冷却至室温，并通入HCl气泡1小时。冷却并过滤后，将固体用200ml 1N NaOH和200ml乙醚处理。有机层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发得到2.43g黄色固体状的5-氨基-2-苯基-嘧啶-4-甲酸甲酯。
步骤32-苯基-5-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-嘧啶-4-甲酸甲酯在氮环境下，向5-氨基-2-苯基-嘧啶-4-甲酸甲酯(1.5g，6.54mmol)的甲苯(15ml)和吡啶(2.1ml，26.2mmol)溶液中加入20％光气的甲苯溶液(5.9ml，11.1mmol)。将该混合物在90℃下加热1小时，冷却至25℃并过滤。将滤液浓缩至干。在氮环境下，将THF(30ml)、(5-苯基-苯并呋喃-2-基)-甲醇(0.55g，2.45mmol)和三乙胺(0.99g，9.8mmol)加到残余物中。将反应混合物在50℃下加热10小时，然后浓缩至干。通过色谱法纯化，然后结晶得到1.05g 2-苯基-5-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基-羰基氨基)-嘧啶-4-甲酸甲酯。
步骤42-苯基-5-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-嘧啶-4-甲酸向2-苯基-5-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基-羰基氨基)-嘧啶-4-甲酸甲酯(0.956g，1.99mmol)的THF(20ml)溶液中加入氢氧化锂一水合物(0.167g，3.99mmol)的水(4ml)溶液。将该混合物在5℃下搅拌2小时，并加入1N HCl调节pH至2。真空除去溶剂并过滤所得到的悬浮液。将白色粗品固体重结晶得到0.82g 2-苯基-5-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-嘧啶-4-甲酸，mp.184-185℃。
类似地，按照实施例1的方法，但在步骤4中，用适宜的苯并呋喃-2-基-甲醇衍生物代替(5-苯基-苯并呋喃-2-基)-甲醇制得下列化合物
5-[5-(4-氟-苯基)-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基]-2-苯基-嘧啶-4-甲酸，mp.181.5-181.8℃；或2-苯基-5-(5-噻吩-3-基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-嘧啶-4-甲酸，mp.191.9-192.2℃。
类似地，按照实施例1的方法并在步骤4中用联苯-4-甲醇代替(5-苯基-苯并呋喃-2-基)-甲醇得到5-(联苯-4-基甲氧基羰基氨基)-2-苯基-嘧啶-4-甲酸，mp.172.7-173.1℃。
实施例21-苯基-3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-1H-吡唑-4-甲酸 步骤12-(三甲基硅烷基)乙基氰基乙酸酯向氰基乙酸(17.0g，200mmol)、2-(三甲基硅烷基)乙醇(26.0g，220mmol)和DMAP(2.44g，20mmol)的混合物中小心地加入二环己基碳二亚胺(45.4g，220mmol)。立即析出白色沉淀物N，N-二氯尿烷，将该混合物在室温下搅拌过夜。
将混合物过滤除去N，N-二氯尿烷并将滤液蒸发至干。将残余物溶解在乙醚中，用水、5％乙酸水溶液、饱和NaHCO3溶液、饱和盐水洗涤并用MgSO4干燥。蒸发乙醚得到得到粗产物，将其在高真空下分馏。收集在102-104℃下沸腾的馏分得到30.41g无色液体状2-(三甲基硅烷基)乙基氰基乙酸酯。
步骤22-(三甲基硅烷基)乙基3-氨基-1-苯基吡唑-4-甲酸酯将2-(三甲基硅烷基)乙基氰基乙酸酯(30.0g，167mmol)、原甲酸三乙酯(23.8g，160mmol)和34.1g(334mmol)乙酸酐在N2下混合并加热回流24小时。将反应混合物冷却至室温，然后在高真空下分馏。收集在大约143℃下沸腾的馏分得到28.3g(73％)产物。NMR显示该物质含大约70％的2-(三甲基硅烷基)乙基2-乙氧基亚甲基-氰基乙酸酯和大约30％的2-(三甲基硅烷基)乙基氰基乙酸酯(原料)。不必进一步纯化。
步骤32-(三甲基硅烷基)乙基3-(N′-亚苄基-N-苯基肼基)-2-氰基丙烯酸酯将2-(三甲基硅烷基)乙基2-乙氧基亚甲基氰基乙酸酯(10.0g，41.4mmol)和苯甲醛-苯腙(8.13g，41.4mmol)在N2下，在50ml二甲苯中混合并加热回流5小时，冷却至室温，然后用己烷(50ml)处理并搅拌过夜。滤出沉淀物，用己烷洗涤并干燥得到5.46g粗产物。
通过色谱法纯化得到2.69g(16％)2-(三甲基硅烷基)乙基3-(N′-亚苄基-N-苯基肼基)-2-氰基丙烯酸酯，为白色固体。
步骤42-(三甲基硅烷基)乙基3-氨基-1-苯基吡唑-4-甲酸酯向2-(三甲基硅烷基)乙基3-(N′-亚苄基-N-苯基肼基)-2-氰基丙烯酸酯(2.69g，6.87mmol)的乙醇(10ml)溶液中加入2.1ml浓HCl溶液并将该混合物在氮气下加热回流2小时。减压蒸发乙醇。将残余物溶解在乙酸乙酯中，缓慢地用30ml冷的1N NaOH溶液处理。分离乙酸乙酯层，用饱和盐水洗涤并用MgSO4干燥。蒸发溶剂得到1.68g粗品，将粗品通过色谱法纯化得到976mg(47％)2-(三甲基硅烷基)乙基3-氨基-1-苯基吡唑-4-甲酸酯，为淡黄色固体。
步骤51-苯基-3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-1H-吡唑-4-甲酸三甲基硅烷基乙酯在氮气下，向2-(三甲基硅烷基)乙基3-氨基-1-苯基吡唑-4-甲酸酯(967mg，3.1mmol)的无水甲苯(11ml)和吡啶(504mg，0.52ml，6.3mmol)溶液中加入光气溶液(2.4ml 1.93M的甲苯溶液，4.62mmol)。立即形成白色沉淀，将该混合物在90℃下加热30分钟。将反应混合物冷却至室温并过滤。将滤液蒸发至干。在氮气下，将(5-苯基-苯并呋喃-2-基)-甲醇1(556mg，2.48mmol)和DMAP(40mg，0.33mmol)的甲苯(15ml)溶液加到该残余物中。将反应混合物在75℃下加热4小时，然后浓缩至干。通过色谱法纯化得到1.28g 1-苯基-3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-1H-吡唑-4-甲酸三甲基硅烷基乙酯，为淡黄色固体。
步骤61-苯基-3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-1H-吡唑-4-甲酸在N2下，向1-苯基-3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基-氨基)-1H-吡唑-4-甲酸三甲基硅烷基乙酯(1.27g，2.29mmol)的DMF(10ml)溶液中加入氟化四正丁铵(2.75ml 1M THF溶液，2.75mmol)。将该混合物在室温下搅拌2小时。在高真空下蒸除溶剂(最高60℃)。加入水并萃取该混合物。加入4ml 1N HCl后，析出白色沉淀物并过滤。将该物质在10ml沸腾的EtOH中研制得到684mg白色固体状1-苯基-3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-1H-吡唑-4-甲酸，mp 220.6-220.8℃。
实施例33-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-异烟酸
步骤13-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-异烟酸乙酯在室温、氩环境下，向3-氨基吡啶-4-甲酸乙酯盐酸盐(1.0g，4.93mmol)和吡啶(1.2ml，14.8mmol)的甲苯(10ml)溶液中加入20％光气的甲苯溶液(3.7ml，7.15mmol)并将该混合物在90℃下加热1小时。将该混合物过滤，将滤液浓缩至干。将粗品溶解在甲苯(10ml)中，加入(5-苯基-苯并呋喃-2-基)-甲醇(0.922g，4.11mmol)和DMAP(0.05g，0.411mmol)并将该混合物在90℃下加热18小时。将溶剂蒸发至干。通过色谱法纯化得到0.538g白色固体状3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-异烟酸乙酯。
步骤23-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-异烟酸在室温下，向3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-异烟酸乙酯(0.150g，0.36mmol)的THF(3ml)溶液中加入1.0M LiOH(0.72ml，0.72mmol)并将该混合物搅拌3小时。蒸发溶剂，加入水，然后加入2N HCl调节pH至1-2，产物用EtOAc萃取。萃取液用水、盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩至干。通过结晶纯化得到0.072g白色固体状3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-异烟酸，mp 235.7-238.9℃。
实施例4用于口服的组合物
将各成分混合然后分装到胶囊中，每粒胶囊含有约100mg；一粒胶囊接近一个总的日剂量。
实施例5用于口服的组合物
将各成分混合然后用溶剂例如甲醇制粒。然后将配料干燥并用适宜的压片机制成片剂(含有约20mg活性化合物)。
实施例6用于口服的组合物
将各成分混合形成用于口服的混悬液。
实施例7胃肠外制剂(IV)
将活性成分溶于一部分注射用水。然后在搅拌下加入足够量的氯化钠将溶液调至等渗。用剩余的注射用水使溶液达到重量，用0.2微米的膜滤器过滤，然后在无菌条件下包装。
实施例8栓剂制剂
将各成分在蒸汽浴上熔融并混合在一起，然后倒入容量为2.5g总重量的模具中。
实施例9局部制剂
将除水之外的所有成分混合并在搅拌下加热至约60℃。然后在剧烈搅拌下加入足够量的约60℃的水使各成分乳化，然后加入适量的水至约100g。
实施例10鼻喷雾制剂制备多种含有约0.025-0.5％活性化合物的含水混悬液作为鼻喷雾制剂。这些制剂任选地含有非活性成分，例如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、葡萄糖等。可以加入盐酸来调节pH值。可将鼻喷雾制剂通过每次操作时通常可以递送约50-100微升制剂的鼻喷雾计量泵来给药。一般的给药方案是每4-12小时喷雾2-4次。
实施例11体外人血小板IP受体放射性配体结合试验体外入血小板IP受体结合试验用于测定潜在的药物对其预定靶点的结合亲和性的强度。
对于测试的每一药物，用迭代曲线拟合方法测定对结合产生50％抑制的浓度(IC50)和Hill斜率。如果放射性配体的Kd是已知的，则按照Cheng& Prusoff(1973)的方法测定各药物的抑制解离常数(Ki)。对于该受体，使用前述实验条件时的典型Kd为1E-8M。通常给出Ki的负对数(pKi)。
实验设计用可以获得的最纯水制备如下缓冲液。
溶解缓冲液10mM Tris-HCl，1.0mM EDTA(二钠) pH7.5，4℃试验缓冲液20mM Tris-HCl，5.0mM MgCl2pH7.4，25℃洗涤缓冲液20mM Tris-HCl，5.0mM MgCl2pH7.4，4℃
1.膜制备将250ml血小板富集的血浆转移到250ml离心管中，然后在20℃下以6000g旋转10分钟。然后将血小板重新悬浮在IP溶解缓冲液中并用polytron匀浆化(设置7，1×20秒，暴发式的)，使最终体积达到180ml，然后于4℃下以40000g离心15分钟。然后将沉积物重新悬浮在IP试验缓冲液中，通过BCA法(Pierce)测定蛋白质密度，然后在2.0ml的小瓶中于-80℃下保存以用于随后的试验。
为了获得至少80％的特异性结合，在竞争性实验中使用50μg蛋白/试验试管。最终的放射性配体浓度为1-3E-8M。
2.竞争试验将膜于室温下融化，然后在试验缓冲液中稀释至适宜的浓度。向试验试管中首先加入缓冲液、药物、放射性配体，最后加入膜。将试验试管于25℃保温60分钟。将试验试管用Packard Top Count 96孔细胞收集器过滤到用0.3％PEI预处理的玻璃纤维滤垫(GF/B)上。将试管用冰冷的20mMTris-HCl，5mM MgCl2，pH＝7.4冲洗3次(3×0.5ml/样品)。通过液体闪烁计数测定结合的放射性。
实施例12角叉菜胶诱导的机械痛觉过敏试验通过角叉菜胶诱导的机械痛觉过敏试验，通过测定对角叉菜胶诱导的大鼠爪痛觉过敏的抑制作用，使用L.O.Randall和J.J.Selitto，Archives ofInternational Pharmacodynamics，1957，11，409-419和Vinegar等，Journalof Pharmacology and Experimental Therapeutics，1969，166，96-103所描述的方法的改良形式来测定本发明化合物的抗炎/镇痛活性。
将雄性Sprague-Dawley大鼠(130-150g)称重然后随机分到治疗组(n＝10)中。为了诱导机械痛觉过敏，将大鼠用氟烷轻度麻醉然后在左后爪的趾面上施用1％角叉菜胶或载体1(100μl)。在试验前1小时对大鼠施用载体(10ml/kg，口服或1ml/kg，静脉内)或本发明的化合物(1、3、10、30和100mg/kg，口服)或(0.3、1.0、3.0和10mg/kg，静脉内)。用Analgesy计(UGO BASILE，Biological Research Apparatus，Comerio，意大利)测定机械痛觉过敏。将用载体或角叉菜胶处理过的后爪置于仪器的圆顶上，趾面朝下。然后向爪的背侧面施加不断增加的力。将大鼠撤回爪子、挣扎或发出叫声时的力看作是终点。
用单向方差分析对爪撤回力(RESP)在各治疗组之间进行比较。用Fisher′s LSD策略和Dunn′s法进行药物治疗组与载体组的成对比较。计算各动物的机械痛觉过敏的抑制百分比，用如下S型模型评估平均ID50值％抑制＝100/(1+exp((ID50-剂量)/N))其中ID50是抑制最大响应(即，该模型中的100％)的一半所需要的化合物的剂量，N是曲率参数。
本发明的化合物在该试验中具有活性。
实施例13完全弗氏佐剂诱导的机械痛觉过敏试验还可以用佐剂诱导的大鼠关节炎疼痛模型来测定本发明化合物的抗炎/镇痛活性，其中用J.Hylden等，Pain 1989，37，229-243所描述的方法的改良形式，通过动物对于对发炎爪子的挤压的反应对疼痛进行评估。所述的改良包括评估的是痛觉过敏而不是脊髓神经元活性的改变。
简单地讲，将大鼠称重然后随机分到治疗组中。为了诱导机械痛觉过敏，将大鼠用氟烷轻度麻醉然后在左后爪的趾面内施用100μl完全弗氏佐剂或盐水。24小时后，向大鼠口服给药水(载体)或本发明的化合物，1小时后进行试验。用Analgesy计(UGO BASILE，Biological ResearchApparatus，Comerio，意大利)测定机械痛觉过敏。将用盐水或角叉菜胶处理过的后爪置于仪器的圆顶上，趾面朝下。然后向爪的背侧面施加不断增加的力。将大鼠撤回爪子、挣扎或发出叫声时的力看作是终点。用单向方差分析对爪撤回力在各治疗组之间进行比较。用如下公式对各动物计算抑制百分比100×((c/d-c/v)÷(s/v-c/v))
其中c/d是在施用药物的动物中用角叉菜胶处理的爪子的爪撤回力；c/v是在施用载体的动物中用角叉菜胶处理的爪子的爪撤回力；s/v是在施用载体的动物中用盐水处理的爪子的爪撤回力。用学生t检验测定显著性。
本发明的化合物在该试验中具有活性。
实施例14对通过等容膀胱膨胀诱导的大鼠膀胱收缩的抑制作用采用C.A.Maggi等，J.Pharm and Exper.Therapeutics，1984，230，500-513所描述的方法的改良形式来测定对膀胱收缩的抑制作用。
简单地讲，将雄性Sprague-Dawley大鼠(200-250g)称重然后随机分到治疗组中。通过尿道向膀胱内插入导管以诱导膀胱收缩，然后输入温热的盐水(5ml)。在约30％的动物中产生了有节奏的收缩。将本发明的化合物(0.1、0.3或1mg/kg)在开始规律性节奏收缩时通过静脉内给药。然后测定对节奏性收缩的影响。
本发明的化合物在该试验中具有活性。
实施例15对体积诱导的大鼠收缩的抑制作用采用S.S.Hegde等，Proceedings of the 26th Annual Meeting of theInternational Continence Society(8月27-30日)1996，摘要126所描述的方法的改良形式来测定对膀胱收缩的抑制作用。
将雌性Sprague-Dawley大鼠用尿烷麻醉然后装配用于静脉内给药以及在某些情况下用于测定动脉压、心率和膀胱内压力的仪器。在另一组动物中测定试验化合物对体积诱导的膀胱收缩的影响。通过将膀胱内充满盐水来诱导体积诱导的反射性膀胱收缩。将试验化合物以累积的方式以10分钟为间隔进行静脉内给药。在研究结束时给药阿托品(0.3mg/kg，静脉内)作为阳性对照。
本发明的化合物在该试验中具有活性。
实施例16在大鼠中逆转由内毒素引起的低血压脓毒性休克，有时称为内毒素性休克，是由于在血流中存在感染性物质、特别是细菌性内毒素所引起的，其特征是低血压和器官功能障碍。许多脓毒性休克的症状、特别是低血压，可以通过施用细菌性内毒素在大鼠中引发。因此，化合物抑制由内毒素引起的低血压的能力可以预示该化合物在治疗脓毒性或内毒素性休克中的用途。
本发明化合物在治疗脓毒性或内毒素性休克中的活性通过用M.Giral等，British Journal of Pharmacology，1969，118，1223-1231所描述的方法的改良形式测定在大鼠中逆转由内毒素引起的低血压来确定。
简单地讲，将成年大鼠(＞200g)用吸入麻醉剂麻醉然后对股动脉和股静脉进行插管，分别用于插入血压传感器和给药管。在仍处于麻醉剂的影响下时，将其置于Mayo限制器内。在从麻醉中恢复过来并且在心率和血压稳定后(通常需要约30分钟)，静脉内给药内毒素(50mg/kg大肠杆菌(E.Coli)和25mg/kg沙门氏菌(Salmonella))。监测血压和心率的变化。1小时后，静脉内给药本发明的化合物或载体，然后对心血管参数继续监测3小时。将反应用恢复到起始舒张血压的百分比表示。用学生t检验测定显著性。
本发明的化合物在该试验中具有活性。
实施例17碳酰前列环素(Carbaprostacyclin)诱导的扭动试验用碳酰前列环素诱导的扭动试验来研究这些化合物的镇痛特性。将大鼠(100-130g)称重然后随机分到治疗组(n＝8)中。以研究主管确定的剂量和给药体积向各动物给药载体、参考物质或试验物质。在给药后的适宜时间(试验化合物作用的峰值时间)，给药碳酰前列环素(30μg/kg，2ml/kg，腹膜内)。在给药碳酰前列环素后，将大鼠置于单个的有机玻璃笼子内。从给药碳酰前列环素5分钟后开始，对扭动计数15分钟的时间。扭动包括背屈或同时伴有伸展的腹部肌肉系统的强烈收缩。
组比较用单向方差分析对治疗组和阴性对照(载体+诱导剂)进行比较。用Fisher′s LSD试验进行阴性对照和各治疗组之间的成对比较，如果总的差异没有显著性，进行Bonferroni′s调整。在分析中采用分等级的数据。将阳性对照组与阴性对照组用Wilcoxon秩和检验进行比较以分析验证。
ID50的估算以公式100*(1-(扭动的次数/载体组的平均扭动))来计算各动物的％抑制。用如下S型模型来估算ID50％抑制＝100/(1+(ID50/剂量)N)，其中ID50是在剂量响应曲线中达到最大响应的一半(50％)时化合物的剂量，N是曲率参数。在该模型中，将最大响应假定为100％。
虽然参照具体的实施方案对本发明进行了描述，但本领域技术人员应当理解，可以进行各种改变和等同物的替换而不超出本发明的实质和范围。此外，可以进行多种改变以使特定的情况、材料、组合物、方法、工艺步骤与本发明的实质和范围相适应。所有这些改变均包括在所附权利要求所定义的范围内。
权利要求
1.具有如下通式的化合物，或其单个的异构体、异构体的外消旋或非外消旋混合物或其可药用盐或溶剂化物 其中G1选自基团a和b； 和 A选自苯基、吡啶基、嘧啶基和噻吩基，所有这些基团均任选地被低级烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、氰基、硝基、-SO2R′、-NSO2R′、-SO2NR′R″、-NR′R″或-COR′取代；R′和R″彼此独立地是氢或低级烷基；G2选自由式c、d、e、f、g、h、i和j表示的基团； 和 R1和R2在每次出现时彼此独立地选自氢、低级烷基、卤素、卤代烷基、硝基、-NR′R″、-OR′、-SO2R′、-NSO2R′、-COR′、氰基、硝基、未取代的或被卤素、烷基、氰基或烷氧基取代的苯基；或未取代的或被卤素、烷基、氰基或烷氧基取代的杂芳基；或者R1和R2如果彼此相邻，也可以与它们所连接的碳原子一起形成未取代的或被一个或两个选自低级烷基、卤素、氰基或低级烷氧基的取代基取代的芳环。
2.权利要求1的化合物，其中A为任选取代的苯基。
3.权利要求1的化合物，其中G1为式a的基团。
4.权利要求3的化合物，其中G2为式c的基团。
5.权利要求4的化合物，其中A为任选取代的苯基。
6.权利要求5的化合物，其中的化合物选自2-苯基-5-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-嘧啶-4-甲酸，和5-[5-(4-氟-苯基)-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基]-2-苯基-嘧啶-4-甲酸。
7.权利要求4的化合物，其中A为任选取代的噻吩基。
8.权利要求7的化合物，其中所述化合物是2-苯基-5-(5-噻吩-3-基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-嘧啶-4-甲酸。
9.权利要求3的化合物，其中G2为式d的基团。
10.权利要求9的化合物，其中所述化合物为1-苯基-3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-1H-吡唑-4-甲酸。
11.权利要求3的化合物，其中G2为选自g、h、i和j的基团。
12.权利要求11的化合物，其中所述化合物为3-(5-苯基-苯并呋喃-2-基甲氧基羰基氨基)-异烟酸。
13.权利要求1的化合物，其中G1为基团b。
14.权利要求13的化合物，其中G2为基团c。
15.权利要求14的化合物，其中所述化合物是5-(联苯-4-基甲氧基羰基氨基)-2-苯基-嘧啶-4-甲酸。
16.一种药物组合物，其含有与至少一种可药用载体相混合的治疗有效量的权利要求1至15中任何一项所述的化合物。
17.权利要求16所述的药物组合物，用于对患有可以通过用IP拮抗剂治疗而缓解的疾病的个体给药。
18.权利要求1至15中任何一项所述的式I化合物用于治疗和预防疾病。
19.权利要求1至15中任何一项所述的式I化合物在生产用于对患有可以通过用IP拮抗剂治疗而缓解的疾病状态的个体进行治疗的药物中的用途。
20.根据权利要求19所述的用途，其中的疾病状态包括尿道疾病、疼痛、炎症、呼吸疾病如过敏和哮喘、水肿形成或低血压血管疾病。
21.权利要求1-15中任何一项所述的化合物的制备方法，该方法包括用光气酰化通式2、3、4、5、6、7、8或9的酯 和 其中R是低级烷基或三甲基硅烷基乙基，并且R1和R2如权利要求1所定义，然后与通式1的化合物反应 其中G1如权利要求1所定义；然后水解得到通式I的化合物 其中G1和G2如权利要求1所定义。
22.上文所述的本发明。
全文摘要
本发明涉及通式(I)所示的IP受体拮抗剂化合物或其单个的异构体、异构体的外消旋或非外消旋混合物或其可药用盐或溶剂化物，其中G
文档编号A61P11/06GK1494544SQ02805869
公开日2004年5月5日 申请日期2002年2月25日 优先权日2001年3月2日
发明者F·J·洛佩斯-塔比亚, D·尼灿, C·欧阳, F J 洛佩斯-塔比亚 申请人:弗·哈夫曼-拉罗切有限公司, 弗 哈夫曼-拉罗切有限公司