专利名称：具有预防或改善脑功能降低引起的症状或疾病的作用的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及将花生四烯酸和/或以花生四烯酸作为构成脂肪酸的化合物作为有效成分的、具有预防或改善脑功能降低引起的症状或疾病的作用的组合物及其制备方法。更详细地说，涉及将选自花生四烯酸、花生四烯酸的醇酯以及构成脂肪酸的一部分或全部是花生四烯酸的甘油三酯、磷脂和糖脂中的至少1种作为有效成分的记忆·学习能力的降低、认知能力的降低、情感障碍(例如忧郁病)、智力障碍(例如痴呆，具体地说阿耳茨海默型痴呆、脑血管性痴呆)的预防或改善剂，进一步涉及具有预防或改善作用的组合物及其制备方法。
背景技术：
近年来，随着医疗的进步，趋向急剧的高龄化社会。随之而来的老年性痴呆人数也在增加。根据“平成12年度版厚生白书”和“痴呆性老人对策研究报告书”，2000年度的痴呆老人是150～160万人，65岁或其以上的痴呆患者达到每14人中有1人。而且，预测2030年每10人中有1人，患者数着实增加。老年性痴呆一旦发生的话，会引起智力功能或感情上的障碍，在日常生活或社会生活上造成不便。老年性痴呆患者的原因不同，分为脑血管性痴呆、阿耳茨海默型痴呆、它们的混合型，对这些脑疾病的治疗有效的药剂(脑循环·代谢改善药、抗痴呆药)的研究·开发不断进行，但遗憾的是，现状是没有有效的治疗药。随着人上年纪，虽然脑梗塞在一定程度上发病，但痴呆的发病可以通过使用脑来预防。由此，不仅可以治疗，而且也可以充分开发以预防为目标的药剂。但是，从婴幼儿到老年人都能够方便饮用且安全、抑制脑功能的降低、预防脑功能的降低引起的症状或者疾病、进而具有改善效果的药剂到目前为止几乎没有开发出来。
迄今为止，改善脑功能的方法研究了以下几种，即，使脑细胞有效吸收营养从而活化细胞的功能的改善脑能量的代谢的方法(例如提高脑内葡萄糖水平等)、使脑血液循环良好从而将必要的营养和氧充分供给到脑细胞中的改善脑循环的方法(例如增加脑血流)、进一步通过神经递质，使在突触间隙进行的神经传导活化的方法(供给神经递质的前体(例如胆碱、乙酰CoA的补充等)、抑制放出的神经递质的改变(例如抑制乙酰胆碱酯酶等)、增加神经递质放出(例如增加乙酰胆碱、谷氨酸的放出等)、活化神经递质受体等)，以及保护神经细胞膜(例如抗氧化、补充膜成分、预防动脉硬化等)等等。
在这样的过去的研究中，虽然发现了预防脑功能降低引起的症状或者疾病、进而具有改善效果的成分，但现状是其效果值得怀疑，在药物方面也没有发现有效的药剂。而且，考虑应用到食品中的场合，还具有所谓受到来自天然物的成分的限定的困难。
脑是脂质块之类的组织，例如在白质中1/3，在灰白质中1/4被磷脂占有。构成脑细胞的各种细胞膜的磷脂中的高度不饱和脂肪酸主要是花生四烯酸和二十二碳六烯酸。但是，这些花生四烯酸和二十二碳六烯酸在动物体内不能够从头合成(de novo合成)，需要直接或间接地(成为花生四烯酸、二十二碳六烯酸的前体的亚油酸、α-亚麻酸)从饮食中摄取。因此，二十二碳六烯酸提高学习记忆能力、预防、恢复老年性痴呆症正受到关注。但是，脑的磷脂的主要脂肪酸不仅是二十二碳六烯酸，花生四烯酸也是重要的脂肪酸，其占有率大致相同。Sonderdegr等明确了海马磷脂中所占的花生四烯酸的比例在正常人中为12.4质量％，而在阿耳茨海默氏病患者中显著减少至8.1质量％(Lipids26，421-425(1991))。这样，虽然暗示了花生四烯酸可能对维持脑的功能起重要的作用，但是花生四烯酸没有充分的供给源，因此没有进行具体的证实。
已公开了几个在维持脑功能上利用花生四烯酸的发明。特开平6-256179号公报记载的“学习能力提高剂”是以1，2-二酰基-sn-甘油衍生物为有效成分的发明，罗列了在2位结合的各种高度不饱和脂肪酸，其中之一公开了花生四烯酸。但是，在实施例中具体公开的只是结合了二十二碳六烯酸的1，2-二酰基-sn-甘油衍生物，只不过是罗列了花生四烯酸，其效果完全没有被证实。在特开平10-101568号公报记载“脑功能改善和营养组合物”中，公开了将神经节苷脂和花生四烯酸组合作为提供新的脑功能改善剂和含有该改善剂的营养组合物的手段。但是，虽然公开了用自然老化的大鼠的实验作为试验例，但是试验月龄仅仅是13个月龄，对于人类只达到相当于33岁的年龄(大鼠的1天相当于人类的1个月)，不能说是老化模型的试验。另外，脑磷脂中所占的花生四烯酸的比例或者花生四烯酸的量在该月龄通常不会显示出改变，而且，由于是不能确认老年化引起的脑功能的降低的月龄，因此一般认为不能产生花生四烯酸的效果。实际上在试验例中，没有评价花生四烯酸单独的效果，只不过公开了花生四烯酸会提高神经节苷脂的效果。
在特开平6-279311号公报记载的“蛋白激酶C同功酶的活化剂”中，公开了活化在细胞内信息传导方面起重要作用的蛋白激酶C，并作为随之而来的效果，公开了老年性痴呆症治疗药。但是，活性成分是以高度不饱和脂肪酸为构成脂肪酸的磷脂酰丝氨酸衍生物，其高度不饱和脂肪酸之一是花生四烯酸。但是，在实施例中，花生四烯酸的效果与结合了亚油酸、α-亚麻酸的磷脂酰丝氨酸衍生物在活性上没有显著的差别，以花生四烯酸为构成脂肪酸的磷脂酰丝氨酸衍生物没有优先性，花生四烯酸的效果没有被证实。另外，评价仅取决于酶活性的测定，脑功能的降低引起的症状或者疾病的预防或者改善效果一点也不明了。这样，虽然公开了几个在维持脑功能上利用了花生四烯酸的发明，但是花生四烯酸和以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物不能以充分的供给量存在，因此用动物实验等不能明确真正的效果，只不过记载了作为脂肪酸之一的花生四烯酸，实际上不能说是真正的发明。
伴随脑的器质性病变的病态的记忆障碍，短期和长期的记忆障碍是形成痴呆的核心的症状。但是，用另外的词语表达记忆障碍的是健忘，健忘是在老年人中看到最多的诉苦之一，在各种研究中都曾指出随着生理的老龄化，人的学习·记忆力降低(Katzman，R.and Terry，R.，The Neurologyof Aging，F.A.Davis，Philadelphia，pp.15-50)。
从形成记忆的时间的经过来看，分为感觉记忆(sensory memory)、1次记忆(primary memory)和2次记忆(secondary memory)。1次记忆也称为即时记忆(immediate memory)，2次记忆称为长期记忆(long-term memory)。短期记忆(short-term memory)包括指1次记忆的场合和指长达2次记忆的学习能力的场合。尽管一旦有持续约50毫秒的视觉输入就会形成感觉记忆，但因其极不稳定，仅仅在250～500毫秒内就会消失。1次记忆在信息处理期间通常有意识地被保持，具有作为工作记忆(working memory)的作用。受到处理的信息作为1次记忆向2次记忆传送并长期保持后，经再次记忆而回想起来。因为1次记忆的容量很少，除非反复想起、修正，否则在20～30秒就会消失。2次记忆由经1次记忆处理的信息的传送(transfer)和统合强化(consolidation)、其半永久性贮存(storage)、其进一步恢复(retrieval)的各阶段构成。该2次记忆随着年龄增加而显著受到阻碍。该2次记忆的降低主要取决于直到记忆的贮存的阶段的障碍，和从年轻时贮存的记忆的恢复能力有关，几乎没有看到减退。但是，痴呆患者的该记忆常常受到侵害。
作为电生理的分析，花生四烯酸的效果之一变得明确了。已知对脑海马给与高频率刺激时，突触兴奋，之后突触应答将高水平持续。将该现象称为海马LTP(长期增强)，基于突触可逆性的现象，成为脑功能评价的指标之一。BM Mcgahon等用对照饲料或者花生四烯酸配合饲料(10mg/大鼠/日)饲养22个月龄的老龄大鼠8周，测定大鼠海马的LTP(NeurobiolAging 20，643(1999))。与4个月龄的幼龄大鼠相比较，显示出老龄大鼠的海马LTP明显降低，通过施用花生四烯酸，恢复到幼龄大鼠的水平。但是，海马LTP的增强从记忆的机理来说，其表示1次记忆的活化，从记忆的固定所需的1次记忆向2次记忆的移动没有活化。因而，记忆的固定除非通过行为药理试验弄清楚，否则就不能证实效果。这样，虽然公开了通过电生理的指标评价花生四烯酸的效果的例子，但是花生四烯酸和/或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物对本发明的预防或改善脑功能降低引起的症状或者疾病是否有效没有明确。
因而，强烈希望开发预防脑功能降低引起的症状或者疾病、进而显示出改善效果、应用到药物乃至食品中优良的更安全的化合物。
发明的公开因此，本发明要提供将花生四烯酸和/或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物作为有效成分的脑功能降低引起的症状或者疾病的预防或改善剂，以及具有预防或改善脑功能降低引起的症状或者疾病的饮食品及其制备方法。更详细地说，要提供将选自花生四烯酸、花生四烯酸的醇酯以及构成脂肪酸的一部分或全部是花生四烯酸的甘油三酯、磷脂和糖脂中的至少1种作为有效成分的记忆·学习能力的降低、认知能力的降低、感情障碍(例如忧郁病)、智力障碍(例如痴呆，具体地说阿耳茨海默型痴呆、脑血管性痴呆)的预防或改善剂，进一步提供具有预防或改善作用的饮食品及其制备方法。
本发明人等为了弄清楚花生四烯酸的或者以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物对脑功能降低引起的症状或者疾病的预防或改善效果，进行了深入研究，结果令人惊奇地是，将超过20个月龄的老龄大鼠提供给Morris型水迷宫试验，通过行为药理学分析弄清楚了花生四烯酸或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物的效果。
而且，本发明人等利用微生物成功地工业化生产了含有20质量％或其以上的花生四烯酸的甘油三酯，可以提供给本发明的效果试验，从而弄清楚了该甘油三酯的效果。
进而，本发明人等用酶法成功地制备了含有在1，3-位结合了中链脂肪酸且在2-位结合了花生四烯酸的甘油三酯的油脂，可以提供给本发明的效果试验，从而弄清楚了该甘油三酯的效果。
因而，本发明提供将花生四烯酸和/或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物作为有效成分的脑功能降低引起的症状或者疾病的预防或改善剂，以及具有预防或改善脑功能降低引起的症状或者疾病作用的饮食品及其制备方法。更详细地说，提供将选自花生四烯酸、花生四烯酸的醇酯以及构成脂肪酸的一部分或全部是花生四烯酸的甘油三酯、磷脂和糖脂中的至少1种作为有效成分的记忆·学习能力的降低、认知能力的降低、感情障碍(例如忧郁病)、智力障碍(例如痴呆，具体地说阿耳茨海默型痴呆、脑血管性痴呆)的预防或改善剂，进一步提供具有预防或改善作用的饮食品及其制备方法。
通过本发明，可以提供将花生四烯酸或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物作为有效成分的脑功能降低引起的症状或者疾病的预防或改善剂，以及具有预防或改善脑功能降低引起的症状或者疾病作用的饮食品及其制备方法，对趋向于高龄化社会的人类特别有用。
附图的简单说明
图1表示在Morris型水迷宫试验中使用的装置的概述图。
图2说明学习的获得(Hit％)。
图3是表示大鼠对尝试次数的学习获得(Hit％)的图。
图4是表示在用于计量学习获得的情况的探针试验中，大鼠游泳60秒的轨迹的图。
图5是表示用于计量学习获得的情况的探针试验的结果的图。
图6是表示求得学习参数和脑海马中的花生四烯酸量的相关性的结果的图。
实施发明的最佳方式本发明涉及将花生四烯酸和/或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物作为有效成分的脑功能降低引起的症状或者疾病的预防或改善剂，以及具有预防或改善脑功能降低引起的症状或者疾病作用的饮食品及其制备方法。
本发明的组合物由于具有预防或改善脑功能降低引起的症状或者疾病的作用，因此作为在以预防或改善(或者治疗)例如记忆·学习能力的降低、认知能力的降低、感情障碍(例如忧郁病)、智力障碍(例如痴呆，具体地说阿耳茨海默型痴呆、脑血管性痴呆)等为目的的饮食品、药品、保健品等是有用的。
更具体地说，本发明的组合物由于具有预防或改善随年龄增加而来的脑功能降低引起的症状或者疾病的作用，因此作为在以预防或改善(或者治疗)记忆·学习能力的降低、认知能力的降低、感情障碍(例如忧郁病)、智力障碍(例如痴呆，具体地说阿耳茨海默型痴呆、脑血管性痴呆)等为目的的饮食品、药品、保健品、进一步作为以预防健忘、预防痴呆、维持·提高记忆力、维持·提高集中能力、维持·提高注意力、使头脑清醒、头脑清楚、变得年轻等为目的的饮食品、健康食品、功能性食品、特定保健用食品、老人用食品等是有用的。
作为本发明的有效成分，除游离的花生四烯酸之外，也可以利用以花生四烯酸为构成脂肪酸的所有化合物。以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物可以举出花生四烯酸盐，例如钙盐、钠盐等。另外，花生四烯酸的醇酯可以举出例如，花生四烯酸甲酯、花生四烯酸乙酯等。还可以利用构成脂肪酸的一部分或全部是花生四烯酸的甘油三酯、磷脂以及糖脂等。
考虑应用到食品中的场合，优选花生四烯酸为甘油三酯或磷脂的形式，特别是甘油三酯的形式。含有花生四烯酸的甘油三酯(与含有构成脂肪酸的一部分或全部是花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯的含义一样)在自然界的来源几乎不存在，但通过本发明人等，使其可在工业上利用含有花生四烯酸的甘油三酯，而且通过将超过20个月龄的大鼠提供给Morris型水迷宫试验，以行为药理学分析，初次弄清楚了本发明的有效成分的效果，明确了具有预防或改善脑功能的降低引起的症状或者疾病的效果。
因而，在本发明中，可以使用含有作为本发明有效成分的构成脂肪酸的一部分或者全部是花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯(含有花生四烯酸的甘油三酯)。作为含有花生四烯酸的甘油三酯，在构成甘油三酯的全部脂肪酸中，花生四烯酸的比例是20质量(W/W)％或其以上，优选为30质量％或其以上，更优选为40质量％或其以上的油脂(甘油三酯)应用到食品中的场合是最好的方式。因而，在本发明中，只要是通过培养具有生产含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)的能力的微生物得到的，均可使用。
作为具有生产含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)能力的微生物，可以举出属于被孢霉(Mortierella)属、耳霉(Conidiobolus)属、腐霉(Pythium)属、疫霉(Phytophthora)属、青霉(Penicillium)属、枝孢(Cladosporium)属、毛霉(Mucor)属、镰孢(Fusarium)属、曲霉(Aspergillus)属、红酵母(Rhodotorula)属、虫霉(Entomophthora)属、刺孢囊霉(Echinosporangium)属、水霉(Saprolegnia)属的微生物。属于被孢霉(Mortierella)属的被孢霉(Mortierella)亚种的微生物可以举出长孢被孢霉(Mortierellaelongata)、微小被胞霉(Mortierellaexigua)、喜湿被孢霉(Mortierellahygrophila)、高山被孢霉(Mortierella alpina)等。具体地说，可以举出长孢被孢霉(Mortierellaelongata)IF08570、微小被孢霉(Mortierellaexigua)IF08571、喜湿被孢霉(Mortierellahygrophila)IF05941、高山被孢霉(Mortierella alpina)IF08568，ATCC16266、ATCC32221、ATCC42430、CBS219.35、CBS224.37、CBS250.53、CBS343.66、CBS527.72、CBS529.72、CBS608.70、CBS754.68等菌株。
这些菌株均可从大阪市财团法人发酵研究所(IFO)和美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)以及真菌菌种保藏中心(CBS)，没有任何限制地得到。另外，也可以使用本发明的研究组从土壤中分离的菌株长孢被孢霉SAM0219(微工研菌保藏第8703号)(微工研条保藏第1239号)。
为了培养在本发明中使用的菌株，将该菌株的孢子、菌丝或者预先培养得到的预培养液接种到液体培养基或者固体培养基上进行培养。在液体培养基的场合，作为碳源，通常使用的葡萄糖、果糖、木糖、蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉、糖蜜、甘油、甘露糖醇等均可使用，对此没有限定。作为氮源，除胨、酵母浸膏、麦芽浸膏、肉浸膏、酪蛋白氨酸、玉米浆、大豆蛋白、脱脂大豆、棉籽渣等天然氮源外，还可使用尿素等有机氮源以及硝酸钠、硝酸铵、硫酸铵等无机氮源。除此之外，根据需要，磷酸盐、硫酸镁、硫酸铁、硫酸铜等无机盐和维生素等也可作为微量营养源使用。这些培养基成分只要是不损害微生物的生长的浓度即可，对此没有特别的限定。实际使用时，通常碳源为0.1～40质量(W/V)％，优选1～25质量(W/V)％的浓度比较好。开始的氮源添加量为0.1～10质量(W/V)％，优选0.1～6质量(W/V)％，在培养过程中注入氮源也无妨。
而且，通过控制培养基碳源浓度，也可以将含有45质量％或其以上花生四烯酸的油脂(甘油三酯)作为本发明的有效成分。培养直至第2～4天，为菌体的增殖期，培养第2～4天后为油脂积累期。开始的碳源浓度为1～8质量％，优选为1～4质量％的浓度，仅在菌体增殖期和油脂积累期初期的期间逐次添加碳源，逐次添加的碳源的总和为2～20质量％，优选为5～15质量％。另外，在菌体增殖期和油脂积累期初期期间碳源的逐次添加量根据开始的氮源浓度来添加，在培养第7天后，优选在培养第6天后，更优选在培养第4天后，使培养基中的碳源浓度为0，由此可以得到含有45质量％或其以上花生四烯酸的油脂(甘油三酯)，可以作为本发明的有效成分。
产花生四烯酸菌的培养温度因使用的微生物不同而不同，为5～40℃，优选为20～30℃，或者在20～30℃培养使菌体增殖后，在5～20℃继续培养，也可以生产不饱和脂肪酸。通过这种温度管理，也可以使生成的脂肪酸中的高度不饱和脂肪酸的比例上升。培养基的pH为4～10，优选为5～9，进行通气搅拌培养、振荡培养或者静置培养。培养通常进行2～30天，优选5～20天，更优选进行5～15天。
而且，作为提高含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)中的花生四烯酸的比例的手段，除了控制培养基碳源浓度之外，选择性水解含有花生四烯酸的油脂，也可以得到高含量含花生四烯酸的油脂。在该选择性水解中使用的脂肪酶没有甘油三酯的位置特异性，水解活性与双键数呈比例降低，所以高度不饱和脂肪酸以外的脂肪酸的酯键被水解。此外，产生的PUFA部分在甘油酯间发生酯交换反应，得到高度不饱和脂肪酸得以增加的甘油三酯(“Enhancement of ArchidonicSelective Hydrolysis of a Single-CellOil fromMortierellawithCandida cylindraceaLipase”J.Am.Oil Chem.Soc.，72，1323-1327(1998))。这样，可以将选择性水解含有花生四烯酸的油脂得到的高含量含花生四烯酸的油脂(甘油三酯)作为本发明的有效成分。为了排除其它脂肪酸的影响，花生四烯酸对本发明的含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)的全部脂肪酸比例最好高，但并非限定为高比例，实际上在应用到食品中的场合，花生四烯酸的绝对量有时也成为问题，即使是含有10质量％或其以上的花生四烯酸的油脂(甘油三酯)，实际上也可以使用。
而且，在本发明中，作为构成脂肪酸的一部分或者全部是花生四烯酸的甘油三酯，可以使用1，3-位结合了中链脂肪酸且2-位结合了花生四烯酸的甘油三酯。还可以使用含有5摩尔％或其以上，优选10摩尔％或其以上，更优选20摩尔％或其以上，最优选30摩尔％或其以上的1，3-位结合了中链脂肪酸且2-位结合了花生四烯酸的油脂(甘油三酯)。上述甘油三酯在1，3-位结合的中链脂肪酸可以使用选自具有碳原子数6～12个的脂肪酸。作为具有碳原子数6～12个的脂肪酸，可以举出例如，辛酸或者癸酸等，特别优选1，3-辛酰基-2-花生四烯酰基-甘油(以后也称为“8A8”)。
这些1，3-位结合了中链脂肪酸且2-位结合了花生四烯酸的甘油三酯以高龄者为对象的场合，成为最佳的油脂(甘油三酯)。通常摄取的油脂(甘油三酯)一旦进入小肠，就会被胰脂肪酶水解，但该胰脂肪酶是1，3-位特异性的，甘油三酯的1，3-位断开，可以得到2分子的游离脂肪酸，同时生成1分子的2-单酰甘油(以后称为“2-MG”)。该2-MG的胆汁酸溶解性非常高且吸收性良好，因此可以说一般2-位结合了脂肪酸的吸收性良好。另外，2-MG一旦溶解在胆汁酸中，就会起表面活性剂的作用，起到提高游离脂肪酸的吸收性的作用。其次，游离脂肪酸和2-MG与胆固醇或者磷脂等一起生物合成胆汁酸复合分子团，吸收到小肠上皮细胞中，发生三酰基甘油的再合成，最终作为乳糜微粒放出到淋巴中去。可是，该胰脂肪酶的脂肪酸特性是对于饱和脂肪酸高，这使得花生四烯酸具有难于断开的特征。而且问题是胰脂肪酶活性随着年龄增加而降低，所以对于易于患脑功能的降低引起的症状和疾病的高龄者，1，3-位结合了中链脂肪酸且2-位结合了花生四烯酸的甘油三酯成为最佳的油脂(甘油三酯)。
作为1，3-位结合了中链脂肪酸和2-位结合了花生四烯酸的甘油三酯的具体的制备方法之一，可以在含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)和中链脂肪酸的存在下，通过使对甘油三酯的1，3-位结合了酯键特异性起作用的脂肪酶发挥作用来制备。
作为原料的油脂(甘油三酯)是以花生四烯酸为构成脂肪酸的甘油三酯，花生四烯酸对构成甘油三酯的全部脂肪酸的比例高的场合，为了防止未反应油脂(原料甘油三酯以及1，3-位中只有一个脂肪酸成为中链脂肪酸的甘油三酯)的增加引起的反应收率的降低，通常的酶反应温度比20～30℃高，为30～50℃，优选为40～50℃。
作为对甘油三酯的1，3-位酯键特异性起作用的脂肪酶，可以举出根霉(Rhizopus)属、根毛霉(Rhizomucer)属、曲霉(Aspergillus)属等微生物产生的脂肪酶、猪胰腺脂肪酶等。对于这种脂肪酶，可以使用市售的脂肪酶。可以举出德列马根酶(Rhizopus delemar)的脂肪酶(田边制药(株)制，タリパ-ゼ)、リゾムコ-ル·ミ-ハイ(Rhizomucermiehei)的脂肪酶(ノボ·ノルデイスク(株)制，リボザイムIM)、黑色曲霉(Apergillus niger)的脂肪酶(天野制药(株)制，脂肪酶A)等，但并限定于这些酶，只要是1，3-位特异性脂肪酶均可使用。
为了提高反应效率，使反应温度为30℃或其以上，优选为40℃或其以上，所以上述脂肪酶的使用形式，优选使用为了附加酶的耐热性而固定在固定化载体上的脂肪酶。作为固定化载体，是多孔质(high porous)树脂，可以举出具有约100埃或其以上的孔径的离子交换树脂载体，例如DowexMARATHON WBA(商标，ダウケミカル)等。
相对于1份固定化载体，将其悬浮在1，3-位特异性脂肪酶的水溶液0.5～20倍(质量)中，在搅拌下往悬浮液中缓慢加入2～5倍量的冷丙酮(例如-80℃)，形成沉淀。可在减压下干燥该沉淀物来制备固定化酶。更简单的方法可以相对于1份固定化载体，将0.05～0.4倍量的1，3-特异性脂肪酶溶解在最少量的水中，在搅拌下与固定化载体混合，在减压下干燥来制备固定化酶。通过该操作，使约90％的脂肪酶固定在载体上，但在此之前，完全没有显示出酯交换活性，在加入了1～10质量(w/v)％水的基质(原料油脂和中链脂肪酸)中，优选在加入了1～3质量％水的基质中，通过预处理，可以最有效地活化固定化酶，可用于制备。
根据酶的种类，加入到本反应系统中的水分量是极其重要的，在不含水的场合，酯交换难于进行，而在水分量多的场合，发生水解，甘油酯的回收率降低(如果水解，就会生成甘油二酯、单酸甘油酯)。但是，此时，通过使用经预处理活化的固定化酶，加入到本反应系统中的水分量变得不重要，即使在完全不含水的系统中，也可以有效地发生酯交换反应。而且通过选择酶剂的种类，也可以省略预处理。
这样，通过使用具有耐热性的固定化酶和提高酶反应温度，即使对于含有1，3-位特异性脂肪酶的反应性低的花生四烯酸的油脂(甘油三酯)，反应效率也不会降低，可以有效地制备1，3-位结合了中链脂肪酸且2-位结合了花生四烯酸的甘油三酯。
具有预防或改善脑功能的降低引起的症状或者疾病作用的饮食品的制备方法是，可将花生四烯酸和/或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物单独或者与实质上不含有花生四烯酸或者即使含有也仅微量的饮食品原料一起混合。这里，所谓微量意指即使饮食品原料中含有花生四烯酸，人摄取了配合了花生四烯酸的食品组合物，也达不到后述的本发明每天的花生四烯酸的摄取量。
特别是在构成脂肪酸的一部分或者全部是花生四烯酸的甘油三酯的场合，关于油脂(甘油三酯)的用途，具有无限的可能性，可用作食品、饮料、药品、保健品的原料以及添加剂。而且，其使用目的、使用量不受任何限制。
例如，作为食品组合物，除通常的食品之外，还可以举出特定保健用食品、营养辅助食品、新生儿用调制乳、婴儿用调制乳、婴幼儿用食品、妊产妇食品或者老人用食品等。作为含有油脂的食品的例子，可以举出肉、鱼或者坚果等本来含有油脂的天然食品、调理汤等时加入油脂的食品、油炸圈饼等使用油脂作为热介质的食品、黄油等油脂食品、曲奇饼干等在加工时加入油脂的加工食品或者硬饼干等在最后加工时喷涂或者涂布油脂的食品等。进而，可添加到不含油脂的农产品、发酵食品、畜产品、水产品或者饮料中。而且，即使是功能性食品、药品、保健品的形式也无妨，例如可以是经肠营养剂、粉末、颗粒、片剂、胶囊、口含片、内服液、悬浮液、乳浊液、糖浆等加工形式。
另外，本发明的组合物除本发明的有效成分之外，也可以含有在通常的饮食品、药品或者保健品中使用的各种载体、添加剂。特别是为了防止本发明的有效成分的氧化劣化，最好含有抗氧化剂。作为抗氧化剂，可以举出生育酚类、黄酮衍生物、甜茶内酯类、曲酸、没食子酸衍生物、儿茶酸类、フキ酸、棉籽酚、吡嗪衍生物、芝麻酚、愈创木酚、愈创木脂、对-香豆酸、去甲二氢愈创木酸、甾醇类、萜烯类、核酸碱基类、类胡萝卜素类、木酚素类等之类的天然抗氧化剂和以抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、丁羟基苯甲醚(BHA)、丁羟基甲苯(BHT)、单-叔-丁基氢醌(TBHQ)、4-羟甲基-2，6-二-叔-丁基苯酚(HMBP)为代表的合成抗氧化剂。生育酚类可以举出α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚，δ-生育酚、ε-生育酚、ξ-生育酚、η-生育酚和生育酚酯(醋酸生育酚酯)等。进一步类胡萝卜素类可以举出β-胡萝卜素、角黄素、虾青素等。
本发明的组合物除了本发明的有效成分之外，作为载体，可以举出各种载体、填料剂、稀释剂、增量剂、分散剂、赋形剂、粘合剂溶剂(例如水、乙醇、植物油)、溶解助剂、缓冲剂、溶解促进剂、凝胶化剂、悬浮化剂、小麦粉、米粉、淀粉、玉米淀粉、多糖、乳蛋白、胶原、米糠油、卵磷脂等。作为添加剂，可以举出维生素类、甜味料、有机酸、香料、防潮剂、纤维素、电解质、矿物质、营养素、抗氧化剂、防腐剂、芳香剂、湿润剂、天然的食物提取物、蔬菜提取物等，但并非限于这些。
花生四烯酸和以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物的主药效成分在于花生四烯酸。有报道，从每天的饮食中摄取花生四烯酸的量在关东地区为0.14g，在关西地区为0.19～0.20g(脂质营养学4，73-82，1995)，从高龄者的油脂的摄取量降低的观点、胰脂肪酶活性降低的观点等来看，需要摄取相当量甚至超过该量的花生四烯酸。因而，成人(例如以体重60kg计)每天的本发明的花生四烯酸和以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物的摄取量以花生四烯酸量换算计，为0.001g～20g，优选0.01g～10g，更优选0.05g～5g，最优选0.1g～2g。
将本发明的有效成分实际应用到饮食品中的场合，在食品中配合的花生四烯酸的绝对量也变得重要。但是，在饮食品中配合的绝对量也因配合的饮食品的摄取量而改变，因此食品中配合的甘油三酯为含有构成脂肪酸的一部分或者全部是花生四烯酸的甘油三酯的场合，进行配合以使花生四烯酸达到0.0003质量％或其以上，优选0.003质量％或其以上，更优选0.03质量％或其以上。而且，在饮食品中配合的甘油三酯为含有1，3-位结合了中链脂肪酸和2-位结合了花生四烯酸结合的甘油三酯的场合，进行配合以使1，3-位结合了中链脂肪酸和2-位结合了花生四烯酸结合的甘油三酯达到0.001质量％或其以上，优选0.01质量％或其以上，更优选0.1质量％或其以上。
使用本发明的组合物作为药物的场合，可按照制剂技术领域中惯用方法，例如日本药典中记载的方法或者基于它的方法来制备。
使用本发明的组合物作为药物的场合，组合物中的有效成分的配合量只要能达到本发明的目的，则对此没有限定，可以以适当的配合比例使用。
使用本发明的组合物作为药物的场合，最好以给单位形式给药，特别优选口服给药。本发明的组合物的给药量因年龄、体重、症状、给药次数等而异，例如，以花生四烯酸换算计，成人(约60kg计)每天给药本发明的花生四烯酸和以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物通常约0.001g～20g，优选约0.01g～10g，更优选约0.05g～5g，最优选约0.1g～2g，每天可分成1～3次给药。
脑的磷脂膜的主要的脂肪酸是花生四烯酸和二十二碳六烯酸，考虑平衡的场合，本发明的组合物最好将二十二碳六烯酸和花生四烯酸组合。另外，由于脑的磷脂膜中的二十碳五烯酸的比例非常低，所以本发明的组合物中最好几乎不含有二十碳五烯酸。而且，更优选几乎不含有二十碳五烯酸且含有花生四烯酸和二十二碳六烯酸的组合物。而且，在花生四烯酸和二十二碳六烯酸的组合物中，花生四烯酸/二十二碳六烯酸比(质量)在0.1～15的范围内，最好在0.25～10的范围内。另外，优选配合了不超过花生四烯酸的1/5(质量比)的二十碳五烯酸的饮食品。
下面通过实施例更具体地说明本发明。但是，本发明不受下述实施例的限定。
另外，饮食品、健康食品、功能性食品、特定保健用食品、老人用食品等本发明的食品组合物也包括该食品组合物和/或该食品组合物中的成分具有预防或改善脑功能的降低引起的症状或者疾病的作用，更具体地说具有预防或改善随年龄增加而来的脑功能降低引起的症状或者疾病的作用、预防·改善记忆·学习能力的降低、认知能力的降低、感情障碍(例如忧郁病)、智力障碍(例如痴呆，具体地说阿耳茨海默型痴呆、脑血管性痴呆)、预防健忘、预防痴呆、维持·提高记忆力、维持·提高集中能力、维持·提高注意力、使头脑清醒、头脑清楚、变得年轻等作用的将所述作用记载或显示在该食品组合物的包装用容器和/或为促进该食品组合物的销售的工具(例如小册子等)上而销售的食品组合物。
实施例1(含有花生四烯酸的甘油三酯的制备方法)使用高山被孢酶(Mortierellaalpina)CBS754.68作为产花生四烯酸菌。在10kL培养槽中制备含有葡萄糖1.8％、脱脂大豆粉3.1％、大豆油0.1％、KH2PO40.3％、Na2SO40.1％、CaCl2·2H2O0.05％和MgCl2·6H2O0.05％的培养基6kL，将初始pH调节到6.0。接种预培养液30L，在温度26℃，通气量360m3/小时，槽内压200kPa的条件下，进行8天的通气搅拌培养。另外，调整搅拌数以使溶解的氧浓度维持在10～15ppm。进而，在到第4天时通过流加法使培养基中的葡萄糖浓度为1～2.5％的范围，这之后将葡萄糖浓度维持在0.5～1％(上述的％意指质量(w/v)％)。培养结束后，通过过滤、干燥，回收含有含花生四烯酸的甘油三酯的菌体，从所得菌体用己烷提取油脂，经食用油脂的精练工序(脱胶、脱酸、脱臭、脱色)，得到含有花生四烯酸的甘油三酯(花生四烯酸在甘油三酯的任意位置结合)150kg。将所得油脂(甘油三酯)甲酯化，用气相色谱分析所得脂肪酸甲酯后，花生四烯酸占全部脂肪酸的比例是40.84质量％。另外，棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、γ-亚麻酸、二高-γ-亚麻酸等分别是11.63、7.45、7.73、9.14、2.23、3.27质量％。进一步，将上述含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)乙酯化，从含有40质量％花生四烯酸乙酯的脂肪酸乙酯混合物，通过通用的高速液相色谱法，分离·精制99质量％花生四烯酸乙酯。
实施例2(含有5摩尔％或其以上8A8的甘油三酯的制备)将离子交换树脂载体(Dowex MARATHON WBAダウケミカル，商标)100g悬浮在德列马根霉(Rhizopusdeleniar)脂肪酶12.5％水溶液(タリパ-ゼ粉末田边制药(株))80mL中，在减压下干燥，得到固定化脂肪酶。
接着，将实施例1得到的含有40质量％花生四烯酸的甘油三酯(TGA40S)80g、辛酸160g、上述固定化脂肪酶12g、水4.8ml在30℃搅拌(130rpm)下反应48小时。反应结束后，去除反应液，得到活化的固定化脂肪酶。
然后，将固定化脂肪酶(德列马根霉(Rhizopusdelemar)脂肪酶，载体Dowex MARATHON WBA，商标)10g填充到带有套筒的玻璃柱(1.8×12.5cm，容量31.8ml)中，将实施例1得到的TGA40S和辛酸混合为1∶2的混合油脂以一定的流速(4ml/h)流到柱中，实施连续反应，得到反应油脂400g。另外，柱温为40～41℃。从所得反应油脂通过分子蒸馏除去未反应的辛酸和游离脂肪酸，得到含有8A8的油脂(甘油三酯)。而且，通过气相色谱法和高速液体色谱法，研究得到的含有8A8的油脂(甘油三酯)中的8A8的比例，为31.6摩尔％(另外，8P8、8O8、8L8、8G8、8D8的比例分别为0.6、7.9、15.1、5.2、4.8摩尔％。在甘油三酯的2-位结合的脂肪酸P、O、L、G、D分别表示棕榈酸、油酸、亚油酸、γ-亚麻酸、二高-γ-亚麻酸，8P8称为1，3-辛酰基-2-棕榈酰基-甘油，8O8称为1，3-辛酰基-2-油酰基-甘油，8L8称为1，3-辛酰基-2-亚油酰基-甘油，8G8表示1，3-辛酰基-2-γ-亚麻油酰基-甘油，8D8称为1，3-辛酰基-2-二高-γ-亚麻油酰基-甘油)。另外，从得到的含有8A8的油脂(甘油三酯)通过通用的高速液相色谱法分离精制了96摩尔％8A8。
实施例3(根据Morris型水迷宫试验的TGA40S的学习能力评价)作为老龄大鼠的实验组，将18个月龄雄性Fischer系大鼠16只分为对照饲料组(8只，OC组)和TGA40S配合饲料组(8只OA组)2组，对各组给予表1所示的对照饲料和SUNTGA40S配合饲料。而且，作为幼龄大鼠的对照组(YC组)，对4个月龄雄性Fischer系大鼠8只给予表1所示的对照饲料(YC组)。另外，在TGA40S配合饲料中使用的TGA40S使用实施例1得到的TGA40S。
表1实验食物对照饲料TGA40S配合饲料(g) (g)酪蛋白200 200DL-甲硫氨酸 33玉米淀粉 150 150蔗糖 500 500纤维素粉 50 50玉米油50 45矿物质类AIN-7635 35维生素类AIN-7610 10重酒石酸胆碱 22维生素E 0.05 0.05TGA40S05每只大鼠每天的摄食量约20g，所以每只大鼠每天的TGA40S摄取量为0.1g。在TGA40S中结合的全部脂肪酸内，由于40质量％是花生四烯酸，所以每只大鼠每天的花生四烯酸的摄取量为40mg(甘油骨架部分的质量，方便起见不计算在内)。该40mg如果换算为人的摄取量，相当于133mg/60kg/日)。
在饲养第3个月(老龄大鼠的场合为21个月龄，幼龄大鼠的场合为7个月龄)的前后，实施Morris型水迷宫学习试验。Morris型水迷宫试验是往水槽(直径120cm，高度35cm)中加入用墨汁弄黑浊的水(液面的高度20cm)，事先装入了大鼠大致勉强能竖起大小的逃避台(直径11.5cm，高度19cm)(逃避台位于水面下，对于在水槽内游泳的大鼠，不能看见逃避台)，从该水槽所确定的位置(出发点)放入进行学习的大鼠，通过在游至逃避台的空间认识的学习试验，证实与掌管记忆的脑海马的关联，该试验在欧美广泛使用。在Morris型水迷宫试验中使用的装置的概述图示于图1中。如果经过一定次数，大鼠就会逐渐学习逃避台的位置。大鼠的学习如下进行。即，从Morris型水迷宫试验装置的出发点放开大鼠，即使经过60秒，在大鼠不能到达逃避台的场合，通过将大鼠放在逃避台之上，使其学习不能看见的逃避台的位置。该学习每天2次，连续进行2周。从出发点放开大鼠，将游过从出发点朝着逃避台±15℃的角度的范围的时间对于整个游泳时间的比例(Hit％，参见图2)作为学习的指标。与幼龄大鼠比较，老龄大鼠的学习的获得率明显降低，但通过给予TAG40S即花生四烯酸，改善为近似于幼龄大鼠的水平(图3)。在图3中，横轴为试行4次，即以2天为一个刻度表示。
接着，为了计量学习获得的情况，在前述2周学习的第二天即第15天实施探针试验。获得学习后，如果拿走逃避台，大鼠就会围绕以前逃避台所在的场所游泳。记忆这样的逃避台的位置，以围绕所在场所游戏的时间(将水槽分为4个区域，用在逃避台所在的区域(1/4)的时间(秒)进行评价)，可以评价学习获得的情况。显示出YC组、OA组和OC组的No.1和No.2大鼠的游泳的轨迹(图4)。另外，由于根据个体来改变出发点使大鼠学习，图4中的出发点(S)和逃避台所在的区域因大鼠的个体而异。另外，在图5中，目标四分之一圆表示逃避台所在的区域(1/4)。OC组的大鼠OC-1显然已迷失方向，其在逃避台所在区域仅停留2.4秒。探针试验的结果汇集在表2中。
表2探针试验的结果实验组 记忆逃避台的场所，在 平均±标准偏差标本标准偏差 t值 p值[根据t(f；p)表1所在场所游泳的时间 (SD)(S)自由度f＝n-1＝7OA组28.6，36.6，14.8，22.2 23.20±7.54ab7.063.07 P＜0.0522.2，26.2，13.0，21.8OC组2.4，30.2，23.4，17.419.78±10.79b10.09 1.25 -5.0，23.0，30.4，26.4YC组27.8，34.8，30.6，33.4 28.43±5.59a5.236.79 P＜0.00120.8，23.4，34.0，22.6*a，b在不同的文字间有显著差别(p＜0.05)
在表2中，t=X‾-μSn-1]]>其中，X表示平均(各组的平均)，μ表示总体平均(15秒)，S表示标本标准偏差，SD表示平均±标准偏差，n表示数据数(各组的数据数)，S表示S=Σi=ln(Xi-X‾)n]]>SD表示SD=Σi=ln(Xi-X‾)n-1]]>如果用图表示表2(图5)，可以看出，对于对老龄大鼠给予TGA40S的OA组，逃避台所在区域的逗留时间(记忆逃避台的场所，在所在场所游泳的时间)显著地长。由于让大鼠自由行动60秒并测定逗留时间，所以偶然性水平的15秒表示偶然性逗留的可能性。棒图显示出大鼠在逃避台所在区域的平均逗留时间。
接着，从提供给Morris型水迷宫试验的大鼠摘出脑海马，用Folch法提取全部脂质。然后，通过薄层色谱法将脂质分级，刮取磷脂级分，通过与乙醇共沸除去水后，用10％盐酸-甲醇制成脂肪酸甲酯后，通过气相色谱法进行分析。基于最小平方法，通过一次近似曲线，求出水迷宫学习的参数(“到达逃避台的时间(越短越好)”，“朝逃避台游过去的比例(Hit％越大越好)”)和脑海马中的花生四烯酸量的关系的结果(图6)，被证实到达逃避台的时间与海马花生四烯酸量负相关(相关系数R＝-0.38)，但与游泳轨迹的Hit％正相关(相关系数R＝0.32)。在图6中，纵轴表示相当于海马组织1g的花生四烯酸的mg。这样，通过给予TGA40S，初次弄清楚了学习能力或者认知能力的改善，初次证明了其效果取决于花生四烯酸。
实施例4
(Morris型水迷宫试验的8A8的学习能力评价)作为老龄大鼠的实验组，将18个月龄雄性Fischer系大鼠20只分为对照饲料组(6只OC组)、TGA40S配合饲料组(6只OA组)和8A8配合饲料组(8只8A8组)3组，对各个组给予表3所示的对照饲料、TGA40S配合饲料和8A8配合饲料。此外，作为幼龄大鼠的对照组(YC组)，对4个月龄雄性Fischer系大鼠8只给予表3所示的对照饲料。另外，在8A8配合饲料中使用的8A8使用实施例2得到的96摩尔％8A8。
表3实验食物对照饲料 TGA40S配合饲料8A8配合饲料(g) (g) (g)酪蛋白 200 200 200DL-甲硫氨酸 3 3 3玉米淀粉 150 150 150蔗糖 500 500 500纤维素粉 505050玉米油 504545.8矿物质类AIN-76 353535维生素类AIN-76 101010重酒石酸胆碱 2 2 2维生素E 0.05 0.05 0.05TGA40S 0 5 08A8 0 0 4.2由于大鼠每天的摄食量约20g，所以每只大鼠每天TGA40S的摄取量为0.1g。在TGA40S中结合的全部脂肪酸内，由于40质量％是花生四烯酸，所以每只大鼠每天的花生四烯酸的摄取量为40mg(甘油骨架部分的质量，方便起见不计算在内)。TGA40S的分子量为928.5(从平均脂肪酸分子量算出)，8A8的分子量为628.7，所以设计实验食物以使8A8配合饲料组的每只大鼠的每天的花生四烯酸的摄取量也达到40mg。
在饲养第3个月(老龄大鼠的场合为21个月龄，幼龄大鼠的场合为7个月龄)的前后，实施Morris型水迷宫学习试验。
实施探针试验的结果，记忆逃避台的位置，在所在场所游泳的时间(水槽分为4个区域，以在逃避台所在的区域(1/4)的时间(秒)进行评价)在YC组、OC组、OA组和8A8组中，分别为28.59±5.44a、13.27±7.89b、22.02±5.35c和27.18±5.10ac(数值平均值±标准偏差，a、b、c在不同文字间存在显著差别(P＜0.5)。因此，通过给予以花生四烯酸为构成脂肪酸的甘油三酯，随着年龄增加而降低的学习的获得的程度趋向幼龄大鼠的水平，显著改善。此外，TGA40S和8A8的比较表明8A8组的学习获得的程度有显示高的倾向。OA组、8A8组大鼠的花生四烯酸摄取量均相同，因此8A8组显示出易于被吸收，证实了对因年龄增加而活性降低的胰脂肪酶是有效的。
实施例5(通过Morris型水迷宫试验对含有5％或其以上8A8的甘油三酯的学习能力进行评价)作为老龄大鼠的实验组，将18个月龄雄性Fischer系大鼠20只分为对照饲料组(6只OC组)、8A8配合饲料组(6只8A8组)和含有8A8的油脂配合饲料组(8只8A8组(32摩尔％)组)3组，对各个组给予表4所示的对照饲料、8A8配合饲料和含有8A8的油脂配合饲料。此外，作为幼龄大鼠的对照组，对4个月龄雄性Fischer系大鼠8只给予表4所示的对照饲料(YC组)。另外，在8A8配合饲料中使用的8A8使用实施例2得到的96摩尔％8A8，在含有8A8的油脂配合饲料中使用的含有8A8的油脂(甘油三酯)使用实施例2得到的含有31.6摩尔％8A8的油脂(甘油三酯)。
表4实验食物对照饲料 8A8配合饲料含有8A8的油脂配合饲料(g)(g)(g)酪蛋白 200200200DL-甲硫氨酸 3 3 3玉米淀粉150150150蔗糖500500500纤维素粉50 50 50玉米油 50 45.8 45.8矿物质类AIN-76 35 35 35维生素类AIN-76 10 10 10重酒石酸胆碱2 2 2维生素E 0.05 0.05 0.058A8 0 4.20含有8A8的油脂 0 0 4.28A8配合饲料和实施例4一样，每只大鼠每天的花生四烯酸的摄取量为40mg。含有8A8的油脂(甘油三酯)配合饲料的场合，大鼠每天的花生四烯酸的摄取量为13.2mg。
在培养第3个月(老龄大鼠的场合为21个月龄，幼龄大鼠的场合为7个月龄)的前后实施Morris型水迷宫学习试验。
实施探针试验的结果，记忆逃避台的位置，在所在场所游泳的时间(水槽分为4个区域，以在逃避台所在的区域(1/4)的时间(秒)进行评价)在YC组、OC组、8A8组和8A8(32摩尔％)组中，分别为27.91±5.93a、13.75±7.74b、27.00±4.65a和21.18±4.89c(数值平均值±标准偏差，a、b、c在不同文字间存在显著差别(P＜0.5))。因而，通过给予含有5摩尔％或其以上8A8的油脂(甘油三酯)，随着年龄增加而降低的学习的获得的程度趋向幼龄大鼠的水平，显著改善。但是，根据8A8配合饲料组，获得的程度显然是低值，证实了依赖于8A8的浓度，进一步依赖于花生四烯酸的浓度。
实施例6(配合含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)的胶囊的制备)将水加入到明胶100质量份和食品添加剂用甘油35质量份中，在50～60℃溶解，制备粘度2000cp的明胶被膜。接着，将维生素E油0.05质量％与实施例1得到的含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)混合，制备内容物1。将维生素E油0.05质量％与含有32摩尔％实施例2得到的8A8的油脂(甘油三酯)配合，制备内容物2。将实施例1得到的含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)50质量％和鱼油(金枪鱼在所有脂肪酸中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸所占的比例分别为5.1质量％和26.5质量％)50质量％混合，再与维生素E油0.05质量％混合，制备内容物3。将实施例1得到的含有花生四烯酸的油脂(甘油三酯)80％和鱼油(金枪鱼在所有脂肪酸中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸所占的比例分别为5.1质量％和26.5质量％)20质量％混合，再与维生素E油0.05质量％混合，制备内容物4。使用这些内容物1-4，按照常规方法进行胶囊成形和干燥，制备每1粒含有180mg内容物的软胶囊。
实施例7(在脂肪输液剂中的使用)加入含有32摩尔％实施例2得到的8A8的油脂(甘油三酯)40g、精制蛋黄卵磷脂48g、油酸20g、甘油100g和0.1N苛性钠40ml，用均质机分散后，加入注射用蒸馏水成为4升。在高压喷雾式乳化机中将其乳化，制备脂质乳液。将该脂质乳液每200ml注入到塑料袋中后，在121℃进行高压蒸汽灭菌处理20分钟，制成脂肪输液剂。
实施例8(在汁中的使用)将β-环糊精2g添加到20％乙醇水溶液20ml中，在搅拌机搅拌下往其中加入实施例1得到的含有花生四烯酸的甘油三酯(配合0.05质量％维生素E)100mg，在50℃孵育2小时。室温冷却后(约1小时)，在进一步继续搅拌下在4℃孵育10小时。通过离心分离回收生成的沉淀，用正己烷洗涤后，进行冷冻干燥，得到含有含花生四烯酸的甘油三酯的环糊精包接的化合物1.8g。使该粉末1g与汁10L均匀混合，制备含有含花生四烯酸的甘油三酯的汁。
权利要求
1.一种具有预防或者改善脑功能的降低引起的症状或者疾病的作用的组合物，其含有花生四烯酸和/或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物。
2.权利要求1所述的组合物，以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物是花生四烯酸的醇酯或者构成脂肪酸的一部分或者全部为花生四烯酸的甘油三酯、磷脂或者糖脂。
3.权利要求2所述的组合物，构成脂肪酸的一部分或者全部是花生四烯酸的甘油三酯是1，3-位结合了中链脂肪酸且2-位结合了花生四烯酸的甘油三酯。
4.权利要求3所述的组合物，中链脂肪酸是选自具有碳原子数6～12个的脂肪酸。
5.权利要求4所述的组合物，中链脂肪酸选自具有碳原子数8个的脂肪酸。
6.一种具有预防或者改善脑功能的降低引起的症状或者疾病的作用的组合物，其含有含构成脂肪酸的一部分或者全部是花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯。
7.权利要求6所述的组合物，其特征在于，含有构成脂肪酸的一部分或者全部是花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯中花生四烯酸的比例相对于构成甘油三酯的全部脂肪酸为10质量％或其以上。
8.权利要求6或7所述的组合物，含有构成脂肪酸的一部分或者全部是花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯是从属于被孢霉(Mortierella)属的微生物中提取的。
9.权利要求6～8任一项所述的组合物，含有构成脂肪酸的一部分或者全部是花生四烯酸的甘油三酯的甘油三酯是几乎不含有二十碳五烯酸的甘油三酯。
10.一种具有预防或者改善脑功能的降低引起的症状或者疾病的作用的组合物，其含有甘油三酯，该甘油三酯含有5摩尔％或其以上1，3-位结合了中链脂肪酸且2-位结合了花生四烯酸结合的甘油三酯。
11.权利要求10所述的组合物，中链脂肪酸选自具有碳原子数6～12个的脂肪酸。
12.权利要求11所述的组合物，中链脂肪酸选自具有碳原子数8个的脂肪酸。
13.权利要求1～12任一项所述的组合物，脑功能降低引起的症状是记忆·学习能力的降低。
14.权利要求1～12任一项所述的组合物，脑功能降低引起的症状是认知能力的降低。
15.权利要求1～12任一项所述的组合物，脑功能降低引起的症状是感情障碍或者智力障碍。
16.权利要求1～12任一项所述的组合物，脑功能降低引起的疾病是忧郁病或者痴呆。
17.权利要求16所述的组合物，痴呆是阿耳茨海默型痴呆或者脑血管性痴呆。
18.权利要求1～17任一项所述的组合物，组合物是食品组合物或者药物组合物。
19.一种食品组合物，含有花生四烯酸和/或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物，以使成人每天的摄取量换算为花生四烯酸量为0.001～20g。
20.权利要求19所述的食品组合物，以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物是花生四烯酸的醇酯或者构成脂肪酸的一部分或者全部是花生四烯酸的甘油三酯、磷脂或者糖脂。
21.权利要求20所述的食品组合物，构成脂肪酸的一部分或者全部是花生四烯酸的甘油三酯是1，3-位结合了中链脂肪酸且2-位结合了花生四烯酸的甘油三酯。
22.权利要求21所述的食品组合物，中链脂肪酸选自具有碳原子数6～12个的脂肪酸。
23.权利要求22所述的食品组合物，中链脂肪酸选自具有碳原子数8个的脂肪酸。
24.一种食品组合物，其特征在于组合物含有0.001质量％或其以上1，3-位结合了中链脂肪酸且2-位结合了花生四烯酸的甘油三酯。
25.权利要求24所述的食品组合物，其特征在于中链脂肪酸选自具有碳原子数6～12个的脂肪酸。
26.权利要求25所述的食品组合物，中链脂肪酸选自具有碳原子数8个的脂肪酸。
27.权利要求18～26任一项所述的组合物，食品组合物是功能性食品、营养辅助食品、特定保健用食品或者老人用食品。
28.权利要求1～27任一项所述的组合物，进一步含有以二十二六烯酸和/或二十二碳六烯酸为构成脂肪酸的化合物。
29.权利要求28所述的组合物，以二十二碳六烯酸为构成脂肪酸的化合物是二十二碳六烯酸的醇酯或者构成脂肪酸的一部分或者全部是二十二碳六烯酸的甘油三酯、磷脂或者糖脂。
30.权利要求28或29所述的组合物，其特征在于在上述花生四烯酸和二十二碳六烯酸的组合中，花生四烯酸/二十二碳六烯酸比(质量)在0.1～15的范围。
31.权利要求1～30任一项所述的组合物，其特征在于进一步相对于组合物中的花生四烯酸，组合物中的二十碳五烯酸是不超过1/5的量。
32.一种食品组合物的制备方法，是具有预防或者改善脑功能的降低引起的症状或者疾病的作用的食品组合物的制备方法，其特征在于单独配合或者与实质上不含有花生四烯酸或者即使含有也是微量的饮食品原料一起配合花生四烯酸和/或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物。
33.一种具有预防或者改善脑功能的降低引起的症状或者疾病的作用的食品组合物的销售方法，是含有花生四烯酸和/或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物的具有预防或者改善脑功能的降低引起的症状或者疾病的作用的食品组合物的销售方法，其特征在于使用显示该食品组合物和/或该食品组合物中的成分具有预防或者改善脑功能的降低引起的症状或者疾病的作用的包装用容器和/或销售促进用工具进行销售。
34.一种具有预防或者改善脑功能的降低引起的症状或者疾病的作用的食品组合物，是含有花生四烯酸和/或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物的食品组合物，其特征在于该食品组合物和/或该食品组合物中的成分具有预防或者改善脑功能的降低引起的症状或者疾病的作用，将这一事实显示在该食品组合物的包装用容器和/或销售促进用工具上。
全文摘要
本发明以提供具有预防或者改善脑功能的降低引起的症状或者疾病的作用的组合物为目的，前述组合物含有花生四烯酸和/或以花生四烯酸为构成脂肪酸的化合物，特别是含有花生四烯酸的醇酯、构成脂肪酸的一部分或者全部是花生四烯酸的甘油三酯、磷脂或者糖脂作为有效成分。
文档编号A61K31/232GK1561206SQ0281921
公开日2005年1月5日 申请日期2002年1月29日 优先权日2001年8月2日
发明者秋元健吾, 河岛洋, 小野佳子, 冈市广成, 冈市洋子 申请人:三得利株式会社