专利名称：新的糖脂及其作为有效成分的用于自体免疫疾病的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的糖脂及其作为有效成分的用于自体免疫疾病的药物。
背景技术：
活体具有预防和抑制自体免疫疾病发生的功能，且这种功能称为“免疫调节功能”。NKT细胞近来作为一种具有“免疫调节功能”的淋巴细胞引起关注(Saishin Igaku Vol.55，No.4，pp.858-863)。本发明的发明人已致力于开发作用于NKT细胞的药物(适宜地刺激NKT细胞并有效地表达它们的免疫调节功能的药物)。
自体免疫疾病的常规治疗方法主要集中在涉及糖皮质激素和免疫抑制剂的“非特异性免疫抑制治疗”。“非特异性免疫抑制治疗”指抑制免疫细胞的多种生物功能且没有特定的选择性和差别的治疗方法。因此，这些治疗方法抑制诱导和加重疾病的生物反应，但它们也抑制活体所需的生物反应(副作用)。因此，特异性免疫抑制剂(仅抑制诱导和加重疾病的生物反应的药物试剂)的开发是迫切需要的。近来意在实现此目标地测定了自体抗原肽治疗。但是，由于肽表现为具有个体差异的主要组织相容性基因复合体(MHC)分子，因此效力上的差别随个体变化而发生巨大变化，而且变态反应也造成问题。
α-半乳糖神经酰胺已被其它研究者鉴定为一种能够刺激NKT细胞的物质[Science，Vol.278，pp.1626-1629(1997)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol.95，pp.5690-5693(1998)，J.Med.Chem.1995，38，pp.2176-2187，特开平5-9193，特开平5-59081，特许第3088461号和美国专利5936076]。本发明的发明人将这些出版物所述的α-半乳糖神经酰胺给予如多发性硬化、实验性自体免疫脑脊髓炎(EAE)和胶原诱导的关节炎的动物模型、类风湿性关节炎动物模型以治疗自体免疫疾病。但是，这种α-半乳糖神经酰胺诱导IL-4，一种抑制自体免疫疾病的细胞因子，和IFN-γ，一种加重自体免疫疾病的细胞因子。因此，发现这种α-半乳糖神经酰胺对自体免疫疾病的抑制或治疗完全无效。(American Immunology Society Journal，the Journal of Immunology，2001年1月1日，第166卷，第662-669页)。也就是说，常规的α-半乳糖神经酰胺不是一种适宜的用于自体免疫疾病的药物，因为它诱导同时表现出NKT细胞的冲突功能(抑制疾病的功能和加重疾病的功能)。
本发明要解决的问题本发明的目的是提供用于治疗自体免疫疾病的糖脂。虽然以前为这种目的的研究中清楚地确认α-半乳糖神经酰胺具有刺激NKT细胞的能力，但它的作用是非特异性的，且它还加重自体免疫疾病。因此，它作为这样一种药物是非常不令人满意的。但是，本发明的糖脂诱导抑制自体免疫疾病的特异性细胞因子，且不诱导其它加重自体免疫疾病的因子。因此，它们极有效地治疗自体免疫疾病。
解决问题的手段本发明合成了多种糖脂，它们是常规α-半乳糖神经酰胺的衍生物，并测定了它们的生物活性。结果是，本发明的发明人发现，通过修饰这些糖脂以缩短鞘氨醇碱基中碳链的长度而获得的物质表现出仅诱导用于抑制自体免疫疾病的功能(产生IL-4)的能力，它与NKT细胞所具有的能力相同。给予该衍生物以治疗EAE，多发性硬化的动物模型，并证明其对EAE具有预防和治疗作用。
也就是说，本发明提供一种由以下所示的式(I)代表的糖脂。
在此式中，R1为吡喃醛糖基。作为这种吡喃醛糖基，可以提及α-D-糖基、α-D-半乳糖基、α-D-甘露糖基、β-D-葡糖基、3-D-半乳糖基、β-D-甘露糖基、2-去氧-2-氨基-α-D-半乳糖基、2-去氧-2-氨基-β-D-半乳糖基、2-去氧-2-乙酰氨基-α-D-半乳糖基、2-去氧-2-乙酰氨基-β-D-半乳糖基、β-D-阿洛吡喃糖基、β-D-altropyranosyl、β-D-艾杜糖基等等，而α-异构体更有效地作为本发明的糖脂。其中，下式代表的α-D-吡喃半乳糖基优选作为R1。
R2代表氢原子或羟基，并优选氢原子。
R3代表-CH2-、-CH(OH)-CH2-或-CH＝CH-，优选-CH2-或-CH(OH)-CH2-，最优选-CH(OH)-CH2-。
R4代表氢原子或CH3，优选氢原子。
x为0-35，优选0-26，更优选11-26，进一步更优选11-23，最优选18-23。
y和z代表满足y+z＝0-3的整数。这里，-(CH2)y(CH(CH3))z-不意指(CH2)和(CH(CH3))以此顺序排列，而仅指简单的数量关系。例如，-(CH2)y(CH(CH3))z-代表-CH(CH3)CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-或-CH2CH2CH(CH3)-中的一种，其中y＝2和z＝1。此外，y和z优选z＝0而y＝0-3，更优选z＝0而y＝1-3。
本发明提供包含这些糖脂作为有效成分的用于治疗自体免疫疾病的药物。此外，它提供包含这些糖脂作为有效成分的用于治疗Th1/Th2免疫平衡偏向Th1的疾病或Th1细胞加重病症的疾病的药物。而且，本发明提供包含这些糖脂作为有效成分的选择性IL-4产生诱导剂。
附图的简要说明
图1和2显示本发明的糖脂[式(I)]的制备方法的一个实例。在此图中，R1代表吡喃醛糖基，R2代表氢原子或羟基，R3代表-CH2-、-CH(OH)-CH2-或-CH＝CH-，R4代表氢原子或甲基，x代表0-35的整数，y+z为0-3的整数，R5代表氢原子、甲基或-(CH2)y’(CH(CH3))z’-CH(R4)2(其中y’+z’为0-2的整数)，R6代表氢原子或甲基，而R7代表吡喃醛糖，其中的官能基如羟基和氨基被适宜地保护。
图3为表示实验性自体免疫脑脊髓炎(EAE)抑制研究的结果的图。
图4为表示胶原诱导的关节炎(CIA)抑制研究的结果的图。
图5表示NOD小鼠的糖尿病发作抑制试验结果。
图6为表示血清细胞因子测定结果的图。
图7为表示脾细胞增殖反应测定结果的图。
图8为表示脾细胞细胞因子产生测定结果的图。柱形图的右坐标轴代表IL-4，而左坐标轴代表IFN-γ。
图9表示脾细胞增殖反应测定和细胞因子测定的结果。
图10为表示血清抗MOG抗体测定结果的图。该图的右坐标轴代表IgG1，而左坐标轴代表IgG2a。
发明的详细描述自体免疫疾病可以分成全身自体免疫疾病和器官特异性自体免疫疾病。其中器官特异性自体免疫疾病导致特定器官或组织(脑、肝、眼和关节)的慢性炎症，其原因归结于对各器官特异性的针对自身抗原的免疫反应(自体免疫反应)。多发性硬化(影响脑和脊索)和类风湿性关节炎(影响关节)是典型的该疾病的实例。这些疾病具有许多共同的特征，虽然受影响的器官不同，且其治疗方法也包含基本共同特性。在它们中的许多中，产生IFN-γ的T细胞起重要的作用。
NKT细胞是具有NK和T细胞性质的淋巴细胞，并识别通过T细胞抗原受体结合于CD1d分子的糖脂。
NKT细胞表达生理功能，如(a)抗肿瘤活性(肿瘤细胞消除作用)，(b)IFN-γ产生和(c)IL-4产生，以及(d)加强NK细胞活性的功能，和(e)活化巨噬细胞的功能。(d)和(e)均由产生的IFN-γ诱导。也就是说，(a)、(b)和(c)是NKT细胞的直接作用，而(d)和(e)是通过(b)诱导的间接作用。
常规的α-半乳糖神经酰胺是非常有力的活化NKT细胞并诱导所有作用(a)至(e)的免疫刺激剂。这里，常规的α-半乳糖神经酰胺指其鞘氨醇碱基中具有比本发明的糖脂更长的碳链的物质。例如，它指在后面所述的实施例中用作对比的糖脂以及在以下文献中所述的糖脂Science，Vol.278，pp.1626-1629(1 997)，Proc.National AcademyScience USA Vol.95，pp.5690-5693(1998)，特开平5-9193，特开平5-59081和美国专利5936076。在所诱导的性质中，(c)IL-4产生有效地抑制自体免疫疾病，但(b)IFN-γ产生加重自体免疫疾病，因而彼此抵消并使之对自体免疫疾病的治疗无效。此外，对应的由常规α-半乳糖神经酰胺刺激的NKT细胞的数目通过细胞凋亡而立即消失。相反，本发明的糖脂具有比常规的α-半乳糖神经酰胺更弱的免疫活性化作用，并选择性诱导NKT细胞功能的(c)IL-4产生。由于避免了IFN-γ衍生，本发明的糖脂可以产生抑制和治疗器官特异性自体免疫疾病的作用。此外，本发明的糖脂的优越之处是它们不诱导NKT细胞凋亡。
近年来正进行关于NKT细胞抗原受体、糖脂和CD1d分子之间的相互作用的研究。(参见Immunological Review Journal，1999，Vol.172，pp.285-296)。目前，认为由糖脂的鞘氨醇碱基和脂肪酸衍生的两个疏水碳链片段深深地钻入CD1d分子中的两个沟(袋)内以建立连接，且认为亲水糖基片段与NKT细胞抗原受体结合。本发明的糖脂的鞘氨醇碱基中的碳链比常规的α-半乳糖神经酰胺的碳链短，且与CD1d分子的结合更弱。结果是，糖基片段稳定性降低，而传递至抗原受体的信号的性质改变。另一个诱导的结果是选择性IL-4产生。本发明的糖脂的作用不对应于任何剂量的α-半乳糖神经酰胺的作用，且推断它们是实质上不同的配体。[参考后文中所述的实施例和公开的论文(Nature，Vol.413，No.6855，pp.531-534(2001)]本发明的糖脂由上式(I)代表。例如可以提及(1)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-三十烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇、(2)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十九烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇、(3)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十八烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇、(4)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十七烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇、(5)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十六烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇、(6)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十五烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇、(7)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十四烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇、(8)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十三烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇、(9)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十二烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇、(10)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十一烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇、(11)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇、(12)(2S，3S，4R)-1-0-(α-D-半乳糖基)-2-(N-十九烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇、(13)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-三十烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇、(14)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十九烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇、(15)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十八烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇、(16)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十七烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇、(17)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十六烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇、(18)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十五烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇、(19)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十四烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇、(20)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十三烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇、(21)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十二烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇、(22)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十一烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇、(23)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇、(24)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-十九烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇、(25)(2S，3 S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-三十烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇、(26)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十九烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇、(27)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十八烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇、(28)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十七烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇、(29)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十六烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇、(30)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十五烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇、(31)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十四烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇、(32)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十三烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇、(33)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十二烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇、(34)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十一烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇、(35)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇、(36)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-十九烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇、(37)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-三十烷酰氨基)-1，3，4-己烷三醇、(38)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十九烷酰氨基)-1，3，4-己烷三醇、(39)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十八烷酰氨基)-1，3，4-己烷三醇、(40)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十七烷酰氨基)-1，3，4-己烷三醇、(41)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十六烷酰氨基)-1，3，4-己烷三醇、(42)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十五烷酰氨基)-1，3，4-己烷三醇、(43)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十四烷酰氨基)-1，3，4-己烷三醇、(44)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十三烷酰氨基)-1，3，4-己烷三醇、(45)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十二烷酰氨基)-1，3，4-己烷三醇、(46)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十一烷酰氨基)-1，3，4-己烷三醇、(47)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十烷酰氨基)-1，3，4-己烷三醇和(48)(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-十九烷酰氨基)-1，3，4-己烷三醇。其中优选(3)-(9)、(15)-(21)、(27)-(33)和(39)-(45)。
本发明的糖脂可以使用各种方法制备，但它们可以根据诸如下述的方法制备。制备方法如图1和2所示。也就是说，化合物(IIa)、(IIb)和(IIc)根据出版物(M.Morita等人，J.Med.Chem.，1995，38，2176等等)中公开的方法获得，而将(IIa)和(IIb)的双键部分还原以将它们转化成化合物(IIIa)和(IIIb)。在将化合物(IIIa)、(IIIb)和(IIc)的仲羟基甲磺酰化或甲苯磺酰化之后，在将它们转化成叠氮基时得到化合物(IV)，并通过将叠氮基选择性还原成氨基然后进行酰胺形成反应而获得化合物(V)。通过同时将化合物(V)中存在的作为仲羟基的保护基的苄基转化成酰基如苯甲酰基和乙酰基，并从伯羟基中除去保护而获得化合物(VI)。将化合物(VI)糖基化得到化合物(VII)，并可以通过除去残留的保护基而获得目标化合物(I)。
本发明的糖脂可以用作用于自体免疫疾病的药物、用于Th1/Th2免疫平衡偏向Th1的疾病的药物，或用于Th1细胞加重病症的疾病的药物、还作为选择性IL-4产生诱导剂。这里自体免疫疾病意指多发性硬化、类风湿性关节炎、银屑病、克罗恩氏病、寻常性白斑、白塞病、胶原病、I型糖尿病、葡萄膜炎、干燥综合征、自体免疫型心肌炎、自体免疫肝病、自体免疫胃炎、天疱疮、吉-巴综合征、HTLV-1相关的脊髓病等等。此外、Th1/Th2免疫平衡偏向Th1的疾病指自体免疫疾病如多发性硬化、类风湿性关节炎、银屑病、I型糖尿病、葡萄膜炎、干燥综合征等以及与细胞免疫有关的疾病如急性肝炎、移植排斥、由细胞内感染性病体导致的感染等。
本发明的糖脂[(式(I)]具有低毒性。例如10组5周龄大的小鼠全部存活，这些小鼠在四个月的实验中每周接受两次300μg/kg化合物25的腹膜内给药。本发明的糖脂(I)可以单独给药，但如果需要的话它们可以与配方中的通常药理学上耐受的己知的载体一起给药，其目的是改善和治疗由自体免疫疾病或Th1/Th2免疫平衡偏向Th1的疾病或Th1细胞加重病症的疾病的症状。例如，有效成分本身可以口服或非口服给药，或者在适宜地形成胶囊、片剂或注射剂时与常用的赋形剂一起给药。例如，通过将原料粉末与赋形剂如乳糖、淀粉或其衍生物、纤维素衍生物等混合并装入明胶胶囊中而制备胶囊。除了上述赋形剂之外，将粘合剂如羧甲基纤维素钠盐、海藻酸、阿拉伯胶等和水加到有效成分中，捏合混合物并在需要时制粒，然后加入润滑剂如滑石和硬脂酸，并使用常规的冲压机形成片剂。对于注射剂，当应用注射的非口服给药时，将有效成分与溶解助剂一起溶于无菌蒸馏水或无菌的生理盐水溶液中，并密封在安瓿中以得到注射配方。如果需要的话可以存在稳定剂和缓冲物质。
本发明的医药、自体免疫疾病或Th1/Th2免疫平衡偏向Th1的疾病的改善、药物和IL-4诱导剂的剂量取决于多种因素，例如患者的症状和年龄、给药途径、配方类型和给药次数。但是，通常0.001mg-5000mg/日/人是合适的，优选0.01mg-500mg/日/人，更优选0.5mg-100mg/日/人。
发明效果本发明的糖脂是通过有效地刺激NKT细胞的免疫调节能力而治疗自体免疫疾病的第一种药物。此外，本发明的糖脂是证明具有自体免疫疾病抑制作用的第一种糖脂。而且，本发明的糖脂由于它们仅选择性诱导NKT细胞的自体免疫疾病治疗功能，因而是极具革命性的药物。
本发明的糖脂可以即时用作用于可以通过IL-4水平抑制的自体免疫疾病的药物。此外，IL-4用于促进抗体产生，并可以用作在疫苗治疗中的助剂。而且，认为本发明的糖脂在与例如肝炎病毒疫苗一起给予在升高它们的抗体水平方面有困难的患者时是有效的。本发明的糖脂还可以用于NKT细胞功能受到抑制的疾病。
使用以下所示的实施例例示本发明，但这些实施例不意在限制本发明。
参考例1合成(2R，3S，4R)-1，3，4-三-O-苄基-5-辛烯-1，2，3，4-三醇(化合物1 )0℃下将NaIO4(760mg)加到在乙醇/水(4/1，12.5ml)中的3，4，6-三-O-苄基-D-半乳糖(0.99g)的溶液中。将所得的混合物在室温下搅拌6小时。用二氯甲烷稀释混合物，并加入水以分离溶液。用二氯甲烷将水层萃取两次。用MgSO4干燥有机层，并在减压下除去溶剂。在-10℃下将在THF(6ml)中的粗油的溶液滴加到分别制备的在THF-己烷(11.2ml)中的亚丙基(三苯基)正膦(5毫摩尔)的溶液中，并在室温下将所得的混合物搅拌22小时。加入MeOH/H2O(4/1，50ml)的混合溶剂，并用己烷萃取4次，用Na2SO4干燥有机相，并在减压下除去溶剂。用硅胶柱纯化所得的油，得到270mg标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.92(t，J＝8Hz，3H)，1.85-2.05(m，2H)，2.97(d，J＝5Hz，1H)，3.51(d，J＝6Hz，2H)，3.55-3.60(m，1H)，4.05-4.10(m，1H)，4.35(d，J＝12Hz，1H)，4.40-4.50(m，1H)，4.50-4.55(m，3H)，4.60(d，J＝12Hz，1H)，4.69(d，J＝12Hz，1H)，5.44(t，J＝10Hz，1H)，5.70-5.80(m，1H)，7.2-7.4(m，15H)。
参考例2合成(2R，3S，4R)-1，3，4-三-O-苄基-5-庚烯-1，2，3，4-三醇(化合物2)在合成化合物1的相同方法中使用3，4，6-三-O-苄基-D-半乳糖和亚乙基(三苯基)正膦获得标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)1.57(dd，J＝7Hz和2Hz，3H)，2.95(d，J＝5Hz，1H)，3.52(d，J＝6Hz，2H)，3.55-3.60(m，1H)，4.05-4.10(m，1H)，4.35(d，J＝12Hz，1H)，4.40-4.55(m，3H)，4.60(d，J＝12Hz，1H)，4.69(d，J＝12Hz，1H)，5.51(t，J＝10Hz，1H)，5.80-5.90(m，1H)，7.2-7.4(m，15H)。
参考例3合成(2R，3S，4R)-1，3，4-三-O-苄基-5-壬烯-1，2，3，4-三醇(化合物3)在用于合成化合物1的相同方法中使用3，4，6-三-O-苄基-D-半乳糖和亚丁基(三苯基)正膦获得标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.90(t，J＝7Hz，3H)，1.35-1.42(m，2H)，1.87-2.04(m，2H)，3.05(d，J＝5Hz，1H)，3.55(d，J＝6Hz，2H)，3.60-3.62(m，1H)，4.10-4.12(m，1H)，4.38(d，J＝12Hz，1H)，4.45-4.56(m，4H)，4.64(d，J＝12Hz，1H)，4.72(d，J＝12Hz，1H)，5.51(t，J＝10Hz)，7.26-7.36(m，15H)。
参考例4合成(2R，3S，4R)-1，3，4-三-O-苄基-1，2，3，4-辛烷四醇(化合物4)往在THF(3ml)中的化合物1(270mg)的溶液中加入10％Pd-C(30mg)，并将所得的混合物于室温和氢气氛下搅拌1小时。通过过滤除去催化剂并除去溶剂而得到标题化合物(262mg)。
1H-NMR(CDCl3)0.88(t，J＝3Hz，3H)，1.25-1.75(m，6H)，3.15(d，J＝5Hz，1H)，3.5-3.7(m，4H)，4.05-4.10(m，1H)，4.50-4.75(m，6H)，7.25-7.40(m，15H)。
参考例5合成(2S，3S，4R)-2-叠氮化物-1，3，4-三-O-苄基-1，3，4-辛烷四醇(化合物5)室温下将三乙胺(240μl)和甲磺酰氯(108μl)连续加到在吡啶中的化合物4(262mg)的溶液中，然后将混合物于室温下搅拌1小时。用乙醚萃取混合物，在用饱和硫酸氢钾、水、碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤有机层后用无水硫酸钠干燥。在减压下蒸发溶剂，得到282mg残余物。将残余物溶于DMF(2ml)中，并加入NaN3(0.3g)。将混合物于100℃下搅拌24小时，并用乙酸乙酯稀释。用水洗涤有机层，并用无水硫酸钠干燥。蒸发溶剂，并用闪蒸色谱法(己烷/乙酸乙酯＝100/0-90/10)将残余物纯化得到200mg标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.89(t，J＝7Hz，3H)，1.25-1.80(m，6H)，3.60-3.85(m，5H)，4.45-4.75(m，6H)，7.25-7.40(m，15H)。
参考例6合成(2S，3S，4R)-2-叠氮化物-1，3，4-三-O-苄基-1，3，4-庚烷四醇(化合物6)在将化合物2用于与合成化合物4相同的方法之后，随后在与合成化合物5相同的方法中得到标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.90(t，J＝7Hz，3H)，1.30-1.75(m，4H)，3.60-3.85(m，5H)，4.50-4.75(m，6H)，7.25-7.40(m，15H)。
参考例7合成(2S，3S，4R)-2-叠氮化物-1，3，4-三-O-苄基-1，3，4-壬烷四醇(化合物7)在将化合物3用于与合成化合物4相同的方法之后，随后在与合成化合物5相同的方法中得到标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.88(t，J＝7Hz，3H)，1.20-1.72(m，8H)，3.59-3.72(m，5H)，4.50-4.80(m，6H)，7.27-7.36(m，15H)。
参考例8合成(2S，3S，4R)-2-(N-二十四烷酰氨基)-1，3，4-三-O-苄基-1，3，4-辛烷三醇(化合物8)往在THF(7ml)中的化合物5(200mg)的溶液中加入10％Pd-C(20mg)。将所得的混合物于室温和氢气氛下搅拌14小时。用膜滤器过滤催化剂，并在减压下除去溶剂。将残余物溶于二氯甲烷(5ml)中，并连续地加入二十四烷酸、1-甲基2-氯吡啶鎓碘化物(252mg)和三丁胺(136μl)。将所得的混合物搅拌2.5小时同时加热。在将乙酸乙酯加到反应混合物中之后，用5％硫代硫酸钠水溶液和饱和硫酸氢钾水溶液洗涤混合物。用硫酸钠干燥有机层，然后用闪蒸色谱法(丙酮/己烷＝4/96-1/4)纯化以得到213mg标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.80(m，6H)，1.20-1.75(m，48H)，2.0-2.1(m，2H)，3.45-3.55(m，2H)，3.75-3.85(m，2H)，4.20-4.30(m，1H)，4.44(s，2H)，4.45-4.60(m，3H)，4.82(d，J＝11Hz，1H)，5.78(d，J＝9Hz，1H)，7.25-7.40(m，15H)。
参考例9合成(2S，3S，4R)-2(N-二十四烷酰氨基)-1，3，4-三-O-苄基-1，3，4-庚烷三醇(化合物9)将化合物6用于与合成化合物8相同的方法之后，得到标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.85-0.95(m，6H)，1.20-1.75(m，46H)，2.0-2.1(m，2H)，3.50-3.55(m，2H)，3.80-3.85(m，2H)，4.20-4.30(m，1H)，4.46(s，2H)，4.50-4.65(m，3H)，4.83(d，J＝11Hz，1H)，5.77(d，J＝9Hz，1H)，7.25-7.40(m，15H)。
参考例10合成(2S，3S，4R)-2-(N-二十四烷酰氨基)-1，3，4-三-O-苄基-1，3，4-庚烷三醇(化合物10)将化合物7用于与合成化合物8相同的方法，得到标题化合物。1H-NMR(CDCl3)0.85-0.95(m，6H)，1.26-1.70(m，50H)，2.00-2.05(m，2H)，3.49-3.54(m，2H)，3.79-3.83(m，2H)，4.22-4.28(m，2H)，4.45(s，1H)，4.49-4.54(m，2H)，4.59(d，J＝12Hz，1H)，4.82(d，J＝12Hz，1H)，5.76(d，J＝9Hz，1H)，7.26-7.34(m，15H)。
参考例11合成(2S，3S，4R)-2-(N-二十四烷酰氨基)-3，4-二-O-苯甲酰基-1-O-三苯基甲基-1，3，4-辛烷三醇(化合物11)将在乙酸乙酯(10ml)中的化合物8(210mg)、Pd-C(10％，60mg)和PdCl2(30mg)的混合物于室温和氢气氛下搅拌30分钟。加入THF-EtOH(1/1；25ml)，并在除去催化剂后蒸发溶剂。将三苯基甲基氯(587mg)和二甲基氨基吡啶(20mg)加到在吡啶(1.7ml)中的残余物中，并将混合物于40℃下搅拌9小时。在减压下除去吡啶，并通过闪蒸色谱法(二氯甲烷/丙酮＝100/0-50/1)纯化残余物得到含有二醇的部分。除去溶剂并往残余物中加入吡啶(2ml)、二甲基氨基吡啶(25mg)和苯甲酰氯(200μl)。将混合物于40℃下搅拌66小时。在减压下除去溶剂，并通过闪蒸色谱法(己烷/乙酸乙酯＝98/2-80/20)纯化残余物得到128mg标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.80-0.95(m，6H)，1.20-1.45(m，44H)，1.5-2.0(m，4H)，2.1-2.3(m，2H)，3.25-3.35(m，2H)，4.5-4.65(m，1H)，5.30-5.35(m，1H)，5.79(dd，J＝2Hz和9Hz，1H)，5.99(d，J＝9Hz，1H)，7.05-7.35(m，15H)，7.35-7.60(m，6H)，7.88(d，J＝7Hz，2H)，7.95-8.0(m，2H)。
参考例12合成(2S，3S，4R)-2-(N-二十四烷酰氨基)-3，4-二-O-苯甲酰基-1-O-三苯基甲基-1，3，4-庚烷三醇(化合物12)将化合物9用于与合成化合物11相同的方法，得到标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.85-0.95(m，6H)，1.20-1.50(m，42H)，1.55-1.75(m，2H)，1.80-1.95(m，2H)，2.1-2.3(m，2H)，3.30-3.40(m，2H)，4.55-4.65(m，1H)，5.35-5.40(m，1H)，5.82(dd，J＝2Hz和9Hz，1H)，6.13(d，J＝9Hz，1H)，7.05-7.65(m，21H)，7.89(d，J＝8Hz，2H)，7.89(d，J＝8Hz，2H)，7.96(d，J＝8Hz，2H)。
参考例13合成(2S，3S，4R)-2-(N-二十四烷酰氨基)-3，4-二-O-苯甲酰基-1-O-三苯基甲基-1，3，4-壬烷三醇(化合物13)将化合物10用于与合成化合物11相同的方法，得到标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.82-0.90(m，6H)，1.26-1.41(m，46H)，1.60-1.65(m，2H)，1.74-1.89(m，2H)，2.14-2.24(m，2H)，3.27-3.35(m，2H)，4.56-4.60(m，1H)，5.34-5.40(m，1H)，5.79(dd，J＝3Hz和9Hz，1H)，5.99(d，J＝9Hz，1H)，7.11-7.69(m，21H)，7.89(d，J＝8Hz，2H)，7.96(d，J＝7Hz，2H)。
参考例14合成(2S，3S，4R)-2-(N-二十四烷酰氨基)-3，4-二-O-苯甲酰基-1，3，4-辛烷三醇(化合物14)将对甲苯磺酸一水合物(14mg)加到在二氯甲烷/甲醇(2/1)(1.8ml)中的化合物11(128mg)的溶液中，并将所得的混合物在30℃下搅拌2小时。在减压下除去溶剂，并通过闪蒸色谱法(己烷/乙酸乙酯＝85/15-50/50)纯化残余物，以得到54mg标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.85-0.95(m，6H)，1.20-1.50(m，44H)，1.60-1.75(m，2H)，1.95-2.10(m，2H)，2.29(t，J＝8Hz，2H)2.70-2.75(m，1H)，3.6-3.7(m，2H)，4.35-4.45(m，1H)，5.35-5.45(m，2H)，6.33(d，J＝9Hz，1H)，7.38(t，J＝8Hz，2H)，7.50-7.60(m，3H)，7.64(t，J＝7Hz，1H)，7.95-8.00(m，2H)，8.05-8.10(m，2H)。
参考例15合成(2S，3S，4R)-2-(N-二十四烷酰氨基)-3，4-二-O-苯甲酰基-1，3，4-庚烷三醇(化合物15)将化合物12用于与合成化合物14相同的方法，得到标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.88(t，J＝7Hz，3H)，0.97(t，J＝7Hz，3H)，1.20-1.75(m，44H)，2.0-2.1(m，2H)，2.30(t，J＝8Hz，2H)，3.6-3.7(m，2H)，4.35-4.45(m，1H)，5.35-5.45(m，2H)，6.38(d，J＝9Hz，1H)，7.38(t，J＝8Hz，2H)，7.45-7.70(m，3H)，7.95(d，J＝7Hz，2H)，8.05-8.10(m，2H)。
参考例16合成(2S，3S，4R)-2-(N-二十四烷酰氨基)-3，4-二-O-苯甲酰基-1，3，4-壬烷三醇(化合物16)将化合物13用于与合成化合物14相同的方法，得到标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.85-0.90(m，6H)，1.26-1.48(m，46H)，1.65-1.72(m，2H)，1.89-2.10(m，2H)，2.29(t，J＝8 Hz，2H)，2.74-2.77(m，1H)，3.58-3.68(m，2H)，4.36-4.41(m，1H)，5.36-5.43(m，2H)， 6.34(d，J＝9Hz，1H)，7.38(t，J＝7Hz，2H)，7.48-7.55(m，3H)，7.64(t，J＝7Hz，1H)，7.95(d，J＝7Hz，2H)，8.06(d，J＝7Hz，2H)。
参考例17合成(2S，3S，4R)-2-(N-二十四烷酰氨基)-3，4-二-O-苯甲酰基-1-O-(2，3，4，6-四-O-苄基-α-D-半乳糖基)-1，3，4-辛烷三醇(化合物17)将在THF(2ml)中的化合物14(54mg)、氯化锡(38mg)、高氯酸银(46mg)和分子筛(4A，270mg)的混合物于室温下搅拌1小时。将四-O-苄基半乳糖基氟化物(70mg)加到混合物中，并将所得的混合物搅拌2.5小时。将乙酸乙酯和盐水加到反应混合物中，并分离溶液层。用无水硫酸钠干燥有机层。在减压下蒸发溶剂，并通过闪蒸色谱法(己烷/乙酸乙酯＝95/5-75/25)纯化残余物，以得到45mg标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.75-0.90(m，6H)，1.15-1.45(m，44H)，1.55-1.70(m，2H)，1.80-1.85(m，2H)，2.16(t，J＝7Hz，2H)，3.30-3.35(m，1H)，3.50-3.55(m，1H)，3.6-3.65(m，1H)，3.8-4.1(m，5H)，4.40-4.90(m，10H)，5.35-5.45(m，1H)，5.70(dd，J＝10Hz和3Hz，1H)，7.01(d，J＝9Hz，1H)，7.15-7.60(m，26H)，7.90-7.95(m，2H)，8.00-8.05(m，2H)。
参考例18合成(2S，3S，4R)-2-(N-二十四烷酰氨基)-3，4-二-O-苯甲酰基-1-O-(2，3，4，6-四-O-苄基-α-D-半乳糖基)-1，3，4-庚烷三醇(化合物18)将化合物15用于与合成化合物17相同的方法，得到标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.85-0.90(m，6H)，1.15-1.50(m，42H)，1.55-1.70(m，2H)，1.80-1.90(m，2H)，2.15(t，J＝7Hz，2H)，3.30-3.35(m，1H)，3.50-3.55(m，1H)，3.6-3.65(m，1H)，3.8-3.9(m，2H)，3.95-4.05(m，2H)，4.05-4.15(m，1H)，4.40-4.90(m，10H)，5.40-5.45(m，1H)，5.69(dd，J＝10Hz和3Hz，1H)，6.93(d，J＝9Hz，1H)，7.15-7.65(m，26H)，7.92(d，J＝7Hz，2H)，8.03(d，J＝7Hz，2H)。
参考例19合成(2S，3S，4R)-2-(N-二十四烷酰氨基)-3，4-二-O-苯甲酰基-1-O-(2，3，4，6-四-O-苄基-α-D-半乳糖基)-1，3，4-壬烷三醇(化合物19)将化合物16用于与合成化合物17相同的方法，得到标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.87-0.90(m，6H)，1.25-1.37(m，46H)，1.61-1.64(m，2H)，1.78-1.91(m，2H)，2.16(t，J＝7Hz，2H)，3.30-3.35(m，1H)，3.45-3.54(m，1H)，3.60-3.64(m，1H)，3.82-3.87(m，2H)，3.94-4.10(m，3H)，4.35-4.93(m，10H)，5.39-5.43(m，1H)，5.70(dd，J＝9Hz和3Hz，1H)，7.01(d，J＝9Hz，1H)，7.16-7.38(m，22H)，7.45(t，J＝7Hz，2H)，7.52(t，J＝7Hz，1H)，7.60(t，J＝7Hz，1H)，7.93(d，J＝7Hz，2H)，8.03(d，J＝7Hz，2H)。
参考例20合成(2S，3S，4R)-3，4-二-O-苯甲酰基-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十四烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇(化合物20)将在乙酸乙酯(3ml)中的化合物17(45mg)、Pd-C(10％，12mg)和PdCl2(12mg)的混合物于室温和氢气氛下搅拌1.5小时。过滤催化剂，并在减压下除去溶剂。通过闪蒸色谱法(丙酮/己烷＝2/3)纯化残余物，得到24mg标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.80-0.90(m，6H)，1.20-1.50(m，44H)，1.60-1.75(m，2H)，1.90-2.00(m，2H)，2.25-2.35(m，3H)，2.68(s，1H)，2.88(s，1H)，3.43(br t，1H)，3.65-4.05(m，8H)，4.60(br t，，1H)，4.79(d，J＝4Hz，1H)，5.20-5.25(m，1H)，5.77(dd，J＝10Hz和3Hz，1H)，7.35-7.65(m，7H)，7.90-7.95(m，2H)，8.00-8.05(m，2H)。
参考例21合成(2S，3S，4R)-3，4-二-O-苯甲酰基-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十四烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇(化合物21)将化合物18用于与合成化合物20相同的方法，得到标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.88(t，J＝7Hz，3H)，0.93(t，J＝7Hz，3H)，1.20-1.40(m，41H)，1.4-1.55(m，1H)，1.60-1.75(m，2H)，1.85-2.00(m，2H)，2.11(d，J＝10Hz，1H)，2.32(t，J＝8Hz，2H)，2.52(s，1H)，2.64(s，1H)，3.44(br t，1H)，3.65-4.05(m，8H)，4.60(br t，1H)，4.80(d，J＝4Hz，1H)，5.25-5.30(m，1H)，5.77(dd，J＝10Hz和3Hz，1H)，7.35-7.65(m，7H)，7.90-7.95(m，2H)，8.00-8.05(m，2H)。
参考例22合成(2S，3S，4R)-3，4-二-O-苯甲酰基-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十四烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇(化合物22)将化合物19用于与合成化合物20相同的方法，得到标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)0.88-0.90(m，6H)，1.25-1.32(m，46H)，1.68-1.73(m，2H)，2.27-2.47(m，3H)，2.67(s，1H)，2.87(s，1H)，3.43(t，J＝7Hz，1H)，3.66-4.01(m，8H)，4.59(t，J＝10Hz，1H)，4.79(d，J＝4Hz，1H)，5.21-5.25(m，1H)，5.77(dd，J＝3Hz和10Hz，1H)，7.37-7.65(m，7H)，7.91(d，J＝7Hz，1H)，8.01(d，J＝7Hz，1H)。
实施例1合成(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(二十四烷酰氨基)-1，3，4-辛烷三醇(化合物23)室温下将在甲醇溶液(250μl)中的1M甲醇钠加到在MeOH-THF(1/1，1.8ml)中的化合物20的溶液中，并将所得的混合物搅拌30分钟。将AG 50Wx8(H+型)(430mg)加到混合物中，并将所得的混合物搅拌10分钟，然后过滤树脂。除去溶剂，用少量的MeOH洗涤残余物。将氮气流用于干燥产物以得到15mg标题化合物。
1H-NMR(吡啶-d5)0.80-0.90(m，6H)，1.15-1.45(m，42H)，1.55-1.70(m，1H)，1.75-1.90(m，4H)，2.20-2.30(m，1H)，2.42(t，J＝7Hz，2H)，3.20(br t，1H)，4.30(brs，1H)，4.35-4.50(m，4H)，4.50-4.60(m，2H)，4.60-4.70(m，2H)，5.20-5.30(m，1H)，5.57(d，J＝4Hz 1H)，6.00-6.10(m，1H)，6.3(brs，1H)，6.4(bfd，1H)，6.55(brs，1H)，6.65(br s，1H)，6.95(brs，1H)，8.43(d，J＝8Hz，1H)；MS(ESI)m/z690.5(M+H+)。
实施例2合成(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(二十四烷酰氨基)-1，3，4-庚烷三醇(化合物24)使用化合物21和与合成化合物23相同的方法，得到标题化合物。
1H-NMR(吡啶-d5)0.87(t，J＝7Hz，3H)，0.95(t，J＝7Hz，3H)，1.15-1.40(m，40H)，1.57-1.75(m，1H)，1.75-1.90(m，4H)，2.15-2.25(m，1H)，2.42(t，J＝7Hz，2H)，4.30(brs，2H)，4.35-4.45(m，4H)，4.45-4.57(m，2H)，4.57-4.70(m，2H)，5.20-5.30(m，1H)，5.56(d，J＝4Hz 1H)，6.00-6.05(m，1H)，6.25(brs，1H)，6.4(bfd，1H)，6.5(br s，1H)，6.6(br s，1H)，6.9(br s，1H)，8.38(d，J＝8Hz，1H)；MS(ESI)m/z676.4(M+H+)。
实施例3合成(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(二十四烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇(化合物25)使用化合物22和与合成化合物23相同的方法，得到化合物25(由以下的结构式表示)。
TLCRf＝0.54(CHCl3∶MeOH＝3∶1)；1H-NMR(吡啶-d5)0.80(t，J＝7Hz，3H)，0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.22-1.31(m，44H)，1.58-1.69(m，1H)，1.79-1.84(m，4H)，2.20-2.30(m，1H)，2.43(t，J＝7Hz，2H)，4.29(br s，2H)，4.36-4.45(m，4H)，4.50-4.55(m，2H)，4.62-4.69(m，2H)，5.26(d，J＝5Hz 1H)，5.57(d，J＝4Hz，1H)，6.04(br s，1H)，6.29(br s，1H)，6.39(d，J＝5Hz，1H)，6.51(br s，1H)，6.60(br s，1H)，6.93(br s，1H)，8.43(d，J＝9Hz，1H)；MS(ESI)m/z704.5(M+H+)。
实施例4合成(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十九烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇(化合物26)使用化合物7和二十九烷酸，通过与合成化合物8、14、17、20和23相同的方法得到标题化合物。
TLCRf＝0.24(CH2Cl2∶MeOH＝3∶1)；1H-NMR(CDCl3∶CD3OD＝3∶1)7.34(br s，1H)，4.91(d，1H，J＝3.5Hz)，4.17(m，1H)，3.95-3.88(m，2H)，3.80-3.68(m，6H)，3.67-3.55(m，2H)，2.21(t，2H，J＝7Hz)，1.67-1.26(m，60H)，0.91-0.87(m，6H)；MS(FAB)m/z774(M+)。实施例5合成(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十八烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇(化合物27)使用化合物7和二十八烷酸，通过与合成化合物8、14、17、20和23相同的方法得到标题化合物。
TLCRf＝0.24(CH2Cl2∶MeOH＝3∶1)；1H-NMR(CDCl3∶CD3OD＝3∶1)4.92(d，1H，J＝3.7Hz)，4.20-4.19(m，1H)，3.96-3.88(m，2H)，3.81-3.67(m，6H)，3.56-3.50(m，2H)，2.20(t，2H，J＝7Hz)，1.67-1.26(m，58H)，0.91-0.86(m，6H)；MS(FAB)m/z760(M+)。
实施例6合成(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十七烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇(化合物28)使用化合物7和二十七烷酸，通过与合成化合物8、14、17、20和23相同的方法得到标题化合物。
TLCRf＝0.25(CH2Cl2∶MeOH＝10∶1)；1H-NMR(吡啶-d5)8.43(d，1H，J＝8.5Hz)，5.56(d，1H，J＝3.7Hz)，5.25(m，1H)，4.7-4.6(m，2H)，4.54(d，1H，J＝3.0Hz)，4.50(t，1H，J＝6.0Hz)，4.45-4.3(m，4H)，4.3-4.2(m，2H)，2.42(t，2H，J＝7.4Hz)，2.3-2.15(m，1H)，1.9-1.75(m，4H)，1.7-1.55(m，1H)，1.4-1.15(m，56H)，0.85(t，3H，J＝6.7Hz)，0.78(t，3H，J＝7.1Hz)；MS(FAB)m/z747(M+H+)。
实施例7合成(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十六烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇(化合物29)使用化合物7和蜡酸，通过与合成化合物8、14、17、20和23相同的方法得到标题化合物。
TLCRf＝0.20(CH2Cl2∶MeOH＝6∶1)；1H-NMR(吡啶-d5)8.44(d，1H，J＝8.4Hz)，5.56(d，1H，J＝3.7Hz)，5.50-5.19(m，1H)，4.69-4.61(m，2H)，4.54(d，1H，J＝3.1H)，4.52-4.47(m，1H)，4.45-4.34(m，4H)，4.31-4.23(m，2H)，2.43(t，2H，J＝7.4Hz)，2.28-2.17(m，1H)，1.92-1.73(m，4H)，1.70-1.53(m，1H)，1.38-1.15(m，54H)，0.85(t，3H，J＝6.7Hz)，0.73(t，3H，J＝7.0Hz)；MS(FAB)m/z732(M+)。
实施例8合成(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十五烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇(化合物30)使用化合物7和二十五烷酸，通过与合成化合物8、14、17、20和23相同的方法得到标题化合物。
TLCRf＝0.53(CH2Cl2∶MeOH＝6∶1)；1H-NMR(CDCl3∶CD3OD＝3∶1)4.92(d，1H，J＝3.3Hz)，4.20-4.15(m，1H)，3.96-3.93(m，1H)，3.92-3.85(m，1H)，3.82-3.65(m，6H)，3.60-3.52(m，2H)，2.21(t，2H，J＝7.6Hz)，1.62-1.26(m，52H)，0.90-0.85(m，6H)；MS(FAB)m/z719(M+H+)。
实施例9合成(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十三烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇(化合物31)使用化合物7和二十三烷酸，通过与合成化合物8、14、17、20和23相同的方法得到标题化合物。
TLCRf＝0.51(CHCl3∶MeOH＝4∶1)；1H-NMR(CDCl3∶CD3OD＝3∶1)4.91(d，1H，J＝3.1Hz)，4.23-4.15(m，1H)，3.95-3.85(m，2H)，3.81-3.63(m，6H)，3.59-3.51(m，2H)，2.21(t，2H，J＝7.5Hz)，1.61-1.25(m，48H)，0.90-0.85(m，6H)；MS(FAB)m/z690(M+)。
实施例10合成(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十二烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇(化合物32)使用化合物7和二十二烷酸，通过与合成化合物8、14、17、20和23相同的方法得到标题化合物。
TLCRf＝0.47(CH2Cl2∶MeOH＝5∶1)；1H-NMR(CDCl3∶CD3OD＝3∶1)4.90(d，1H，J＝3.0Hz)，4.27-4.20(m，1H)，3.96-3.92(m，1H)，3.91(dd，1H，J＝10.5Hz和4.0Hz)，3.82-3.65(m，6H)，3.58-3.51(m，2H)，2.22(t，2H，J＝7.6Hz)，1.70-1.21(m，46H)，0.90-0.85(m，6H)；MS(FAB)m/z676(M+)。
实施例11合成(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十一烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇(化合物33)使用化合物7和二十一烷酸，通过与合成化合物8、14、17、20和23相同的方法得到标题化合物。
TLCRf＝0.33(CH2Cl2∶MeOH＝6∶1)；1H-NMR(CDCl3∶CD3OD＝3∶1)8.05(d，1H，J＝7.9Hz)，4.92(d，1H，J＝3.3Hz)，4.22(m，1H)，3.96(m，1H)，3.90(dd，1H，J＝10.5Hz和4.1Hz)，3.81-3.69(m，6H)，3.55(m，2H)，2.22(t，2H，J＝7.6Hz)，1.68-1.62(m，4H)，1.31-1.27(m，40H)，0.90-0.87(m，6H)；MS(FAB)m/z662(M+H+)。
实施例12合成(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十烷酰氨基)-1，3，4-壬烷三醇(化合物34)使用化合物7和花生四烯酸，通过与合成化合物8、14、17、20和23相同的方法得到标题化合物。
TLCRf＝0.33(CH2Cl2∶MeOH＝6∶1)；1H-NMR(CDCl3∶CD3OD＝3∶1)4.86(d，1H，J＝3.4Hz)，4.16(m，1H)，3.90(m，1H)，3.85(dd，1H，J＝10.5Hz和4.6Hz)，3.74-3.61(m，6H)，3.50(m，2H)，2.17(t，2H，J＝7.9Hz)，1.62-1.56(m，4H)，1.25-1.21(m，38H)，0.85-0.81(m，6H)；MS(FAB)m/z648(M+H+)。
此外，根据实施例中所述的合成方法合成α-半乳糖神经酰胺(α-GC)、NH和3，4D，将它们用作生物活性评价比较的参比物质。这里α-GC指(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十六烷酰氨基)-1，3，4-十八烷三醇，NH指(2S，3S，4R)-1-O-(2-氨基-2-去氧-α-D-半乳糖基)-2-(N-二十六烷酰氨基)-1，3，4-十八烷三醇，而3，4D指(2S)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十四烷酰氨基)-1-十八醇。这些化合物的结构式和光谱数据如以下所示。
比较例1(2S，3S，4R)-1-O-(2-去氧-2-氨基-2-去氧-α-D-半乳糖基)-2-(N-二十六烷酰氨基)-1，3，4-十八烷三醇(化合物35NH)TLCRf＝0.67(t-BuOH∶CH3OH∶H2O＝4∶1∶1)；1H-NMR(CDCl3∶CD3OD∶D2O＝3∶1∶0.1)5.10(d，1H，J＝3.5Hz)，3.47-3.94(m，11H)，2.24(t，2H，J＝7.3Hz)，1.26-1.54(m，72H)，0.88(m，6H)；MS(ESI)m/z857.7(M+H+)。
比较例2(2S，3S，4R)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十六烷酰氨基)-1，3，4-十八烷三醇(化合物36α-GC)TLCRf＝0.75(CHCl3∶MeOH＝3∶1)；1H-NMR(CDCl3∶CD3OD＝3∶1)4.90(d，1H，J＝3.6Hz)，3.56-3.90(m，11H)，2.21(t，2H，J＝7.4Hz)，1.27-1.61(m，72H)，0.89(m，6H)；MS(ESI)m/z880.7(M+H+)。
比较例3(2S)-1-O-(α-D-半乳糖基)-2-(N-二十四烷酰氨基)-1，3，4-十八醇(化合物373，4D)TLCRf＝0.48(CHCl3∶MeOH＝7∶1)；1H-NMR(CDCl3∶CD3OD＝3∶1)4.90(d，1H，J＝3.3Hz)，3.42-3.95(m，9H)，2.19(t，2H，J＝7.6Hz)，1.27-1.62(m，72H)，0.89(m，6H)；MS(MALDI)m/z820.74(M+Na+)。
生物活性评价使用下述的方法评价如上述合成的化合物的生物活性。
首先，使用合成的糖脂[化合物25和α-GC(化合物36)]，并进行实验性自体免疫脑脊髓炎(EAE)的抑制研究。
在6-8周龄的雌性C57BL6J(B6)小鼠尾根部使用100μg对应于髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的35-55氨基酸残基的肽(序列号1)与被杀死的肺结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(H37Ra)的乳液免疫之。在同一日通过尾静脉给予200ng百日咳毒素，并在接种48小时后腹膜内给予200ng百日咳毒素以诱导EAE。进行临床观察和病理学研究。口服给予合成糖脂(400ng/kg)。将DMSO(二甲亚砜)单独给予对照组。
结果如表1所示。将下述的临床和病理得分用于评价中。
临床得分0正常，1尾紧张性降低，2尾下垂和步行不稳定，3中度后肢无力，4后肢完全无力，5四肢麻痹，6死亡。
病理得分0正常，1柔脑脊膜和相邻软膜下细胞浸润，2中度血管周围细胞浸润，3高度血管周围细胞浸润，4脑实质细胞浸润。
表1A)B6小鼠，第0天口服给药最大得分 发作 发病率 总得分 病理得分DMSO2.75±0.38 12.00±0.9112/12 25.19±4.031.92±0.24α-Gc 2.41±0.37 14.27±0.9812/12 20.32±4.071.79±0.38化合物251.42±0.33 14.80±1.2210/12 10.71±3.231.00±0.13B)B6小鼠，第8天口服给药最大得分 发作 发病率 总得分DMSO3.30±0.26 12.60±1.837/722.70±3.12α-GC 3.00±0.29 13.86±0.997/717.50±2.74化合物252.25±0.51 16.43±1.956/710.94±3.40C)NKT剔除小鼠，第0天口服给药最大得分发作 发病率 总得分DMSO 4.00±0.11 11.29±0.976/635.79±4.73α-GC 3.67±0.42 13.33±1.416/632.25±6.66化合物25 3.64±0.28 12.43±0.536/634.36±4.15在用化合物25治疗的组中观察到EAE抑制作用，但在α-GC治疗的组中没有观察到抑制作用。在化合物25治疗的组中即使在病理试验中也观察到抑制作用。由于化合物25导致的EAE抑制作用不可能在NKT剔除小鼠(TCR J alpha 281剔除小鼠)中观察到，因此认为在此作用中涉及NKT细胞。
接着，使用上述自体免疫脑脊髓炎(EAE)抑制试验中所述的方法诱导EAE，并研究化合物25(100(g/kg)的腹膜内给药的EAE抑制作用。结果如图3所示。该结果表明腹膜内给药具有与口服治疗类似的EAE抑制作用。
接着，将合成糖脂(化合物25和α-GC)和DMSO用于研究实验性自体免疫脑脊髓炎(EAE)抑制的机理。
使用上述的方法诱导EAE，并研究IL-4在与化合物25给药相关的EAE抑制作用中的作用。同时腹膜内给予抗IL-4抗体(1mg/ml)。结果如表2所示。
表2最大得分发作 发病率 总得分抗-IL-4(-)DMSO3.78±0.24 9.67±0.9710/10 39.94±3.65α-GC 4.00±0.25 9.10±0.8410/10 45.00±3.87化合物252.75±0.37 11.00±0.78 9/10 26.05±4.16抗-IL-4(+)DMSO4.00±0.29 8.57±0.8410/10 42.50±3.40α-GC 3.79±0.29 11.29±1.58 10/10 37.00±5.02化合物253.50±0.15 9.43±0.9010/10 38.79±2.94当给予抗IL-4抗体时化合物25给药所实现的EAE抑制作用消失，表明IL-4在EAE抑制中是重要的。
接着，进行胶原关节炎(CIA)抑制试验。结果如图4所示。
A)在6-8周龄的雄性C57BL6小鼠尾根部使用100μg tri II型胶原与被杀死的肺结核分枝杆菌(H37Ra)的乳液免疫之。在第21天，使用相同的乳液追加免疫小鼠并观察临床症状。从追加免疫之时起每周两次腹膜内给予合成的糖脂(500μg/kg)。对照组仅接受DMSO。
临床得分0无症状，1在一个小关节如指关节处观察到肿胀和发红，2在至少两个小关节或相对大的关节如腕和踝处观察到肿胀和发红，3在一整只手或足中观察到肿胀和发红，4一整只手或足的最大肿胀。得分代表双手和双足的总分。在有胶原诱导的关节炎的B6小鼠中在给予化合物25时观察到抑制作用。
B)在6-8周龄雄性SJL小鼠的尾根部使用200μg牛II型胶原与被杀死的肺结核分枝杆菌(H37Ra)的乳液免疫之。在第21天，使用相同的乳液追加免疫小鼠并观察临床症状。从追加免疫之时起每周两次腹膜内给予合成的糖脂(500μg/kg)。对照组仅接受DMSO。在给予化合物25时有效地抑制SJL小鼠的胶原诱导的关节炎。
C)在6-8周龄雄性SJL小鼠的尾根部使用200μg牛II型胶原与被杀死的肺结核分枝杆菌(H37Ra)的乳液免疫之。在第21天，使用相同的乳液追加免疫小鼠并观察临床症状。从追加免疫之时起或从症状出现第28天起每周两次腹膜内给予合成的糖脂(500μg/kg)。对照组仅接受DMSO。在症状出现后给予化合物25时有效地抑制胶原诱导的关节炎。
接着，使用NOD小鼠进行糖尿病发病率的抑制试验。结果如图5所示。观察到通过两次腹膜内给予4周龄的NOD小鼠化合物25(100μg/kg)显著地抑制糖尿病的发病率。
接着，测定血液中的细胞因子，结果如图6所示。已知在NKT细胞受到刺激时大量的细胞因子在短时间内释放进入血液中。因此，在将合成糖脂给予小鼠时使用ELISA方法测定随时间消逝的血清INF-γ和IL-4水平。如前面报道，α-GC给药时主要形成INF-γ，但在化合物25给药时主要形成IL-4。
接着，测定脾细胞增殖反应，结果如图7所示。分离鼠脾细胞，并使用引入细胞内的胸苷作为指示剂测定合成糖脂的增殖反应。脾细胞对化合物25表现出显著的增殖反应。
接着，进行脾细胞细胞因子测定，其结果如图8所示。分离鼠脾细胞，并使用ELISA法测定由合成糖脂导致的INF-γ和IL-4形成的水平。在治疗的小鼠中观察到，在给予α-GC时主要形成INF-γ，但在给予化合物25时主要形成IL-4。
接着进行脾细胞增殖反应和细胞因子测定，结果如图9所示。分离鼠脾细胞，并使用引入细胞内的胸苷作为指示剂测定合成糖脂的增殖反应。化合物23、24和25表现出显著的脾细胞增殖反应。分离鼠脾细胞，并使用ELISA法测定由合成糖脂导致的INF-γ和IL-4形成的水平。在给予α-GC时主要形成INF-γ，但在给予化合物23、24和25时I主要形成L-4。
接着进行血清抗-MOG抗体测定，其结果如图10所示。在使用合成糖脂治疗的组中用ELISA法测定抗MOG抗体和它的同型的水平。使用化合物25治疗的组的抗MOG抗体水平升高。就同型而言，IgG1水平显著升高，表明与MOG的反应偏向Th2。
序列表<110>独立行政法人 科学技术振兴机构<120>新的糖脂及其作为有效成分的用于自体免疫疾病的药物<130>FS02-278PCT<160>1<210>1<211>21<212>PRT<213>人工序列<400>1Met Glu Val Gly Trp Tyr Arg Ser Pro Phe Ser Arg Val Val His Leu1 5 10 15Tyr Arg Asn Gly Lys20
权利要求
1.下式(I)代表的糖脂 式中，R1为吡喃醛糖基，R2为氢原子或羟基，R3为-CH2-、-CH(OH)-CH2-或-CH＝CH-，R4为氢原子或CH3，x为0-35，y和z代表满足y+z＝0-3的整数。
2.如权利要求1的糖脂，其中R1为α-D-吡喃半乳糖基。
3.如权利要求2的糖脂，其中R3为-CH2-或-CH(OH)-CH2-，而x为10-32。
4.如权利要求3的糖脂，其中R3为-CH(OH)-CH2-。
5.如权利要求1-4之任一项的糖脂，其中R2和R4为氢原子，x为11-23，而z为0。
6.用于自体免疫疾病的药物，所述药物含有作为有效成分的如权利要求1-5之任一项的糖脂。
7.用于Th1/Th2免疫平衡偏向Th1的疾病或Th1细胞加重病症的疾病的药物，所述药物含有作为有效成分的权利要求1-5之任一项的糖脂。
8.含有作为有效成分的权利要求1-5之任一项的糖脂的选择性IL-4产生诱导剂。
全文摘要
本发明的目的是提供用于治疗自体免疫疾病的糖脂及其作为有效成分的用于自体免疫疾病的药物。也就是说，本发明提供下式(I)代表的糖脂(见式1)在该式中，R
文档编号A61P37/06GK1568328SQ0282036
公开日2005年1月19日 申请日期2002年8月14日 优先权日2001年8月16日
发明者山村隆, 三宅幸子 申请人:第一三德利制药株式会社, 国立精神·神经中心总长代表的日本国