专利名称：双链核糖核酸用于治疗正(+)链rna病毒感染的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及利用双链核糖核酸治疗正(+)链RNA病毒感染的用途，和利用该核糖核酸制备药物的用途，抑制正(+)链RNA病毒复制的药物和方法。
从DE 101 00 586 C1中获知一种抑制细胞中靶基因表达的方法，其中具有双链结构的寡核糖核苷酸被引入细胞。该双链结构的一条链在此与靶基因互补。
作为遗传信息的载体，正(+)链RNA病毒具有RNA，蛋白质合成可直接发生在细胞内的RNA处。这使得转录成为不是必要的。除了不翻译的3’-和5’-区域，病毒基因组的全长被翻译成多蛋白。个别的，通过切割，可从多蛋白得到功能活性结构和非结构蛋白。在病毒基因组中，非结构蛋白质序列位于结构蛋白质序列之后。非结构的NS3蛋白质是带有丝氨酸蛋白酶结构域并显示NTP酶和解旋酶活性的多功能酶。以前用于治疗正(+)链RNA病毒感染的手段很少成功，并且多数感染患者的疾病状态并不能得到持续的改善。
本发明的任务是克服现有技术中的这些缺陷。特别的，得到治疗正(+)链RNA病毒感染的有效方法。进一步的，得到用于治疗正(+)链RNA病毒感染的药物以及制备该药物的用途。进一步的，得到抑制正(+)链RNA病毒复制的方法。
该任务通过权利要求1，2，16，30和41中的特征描述而解决。优选的实施方式得自权利要求3-15，17-29，31-40和42-53的特征描述。
根据本发明的目的是利用双链核糖核酸(dsRNA)治疗正(+)链RNA病毒感染，其中dsRNA的S1链显示至少部分地与病毒基因组的可翻译区的区段互补的区域。进一步的，本发明涉及利用该dsRNA制备治疗正(+)链RNA病毒感染的药物。
哪些是病毒基因组可翻译区的部分并不重要。令人惊奇的，尽管病毒基因组编码众多蛋白质，当使用带有与病毒基因组可翻译区的任意区段互补的S1链的dsRNA时，足够抑制正(+)链RNA病毒的复制。这种dsRNA可通过RNA干扰的方式永久破坏病毒RNA基因组的完整性。因此，它是理想的适合于治疗该病毒感染的。该治疗导致疾病状态的持续改善。
正(+)链RNA病毒可以是丙型肝炎病毒(HCV)。该领域中的有效治疗将是特别重要的，因为目前为止还不可能生产抗丙型肝炎病毒的有效疫苗。在人类，HCV-感染可导致严重的疾病，特别是经慢性肝炎转成肝硬化和肝癌。
在感染的细胞中，dsRNA促使正(+)链RNA病毒的正(+)链RNA在上述的区段的区域中被酶切割。在切割位点前的沿病毒RNA阅读方向的区域仍然能够翻译，并且至少部分地能够导致功能蛋白质的产生。这些蛋白的表达不必受到抑制。在该方法的有利实施方案中，dsRNA能够抑制编码自病毒基因组的多蛋白的表达。随后也可以发生部分抑制，即，使得全部多蛋白中只有部分被表达，或使得表达的多蛋白的总量减少。
DsRNA优选能够抑制编码自病毒基因组的功能蛋白酶或解旋酶，特别是HCV-NS3解旋酶的表达。因此，与dsRNA的S1链互补的片段可按病毒RNA的阅读方向置于病毒基因组中编码解旋酶的区域中或之前。令人惊奇的，病毒解旋酶表达的抑制是特别有利的。本发明者已经发现病毒解旋酶的存在减少了dsRNA的复制抑制作用。由于解旋酶表达的抑制，dsRNA的作用强于在其他病毒蛋白质表达受抑制的情况中的作用。
DsRNA的互补区可按照递升的优选顺序具有少于25、19-24、20-24、21-23个和特别是具有22或23个核苷酸。具有该结构的dsRNA在治疗病毒感染尤其在抑制病毒复制中特别有效。DsRNA的S1链可按照递升的优选顺序具有少于30、少于25、21-24和特别是具有23个核苷酸。这些核苷酸的数目也是dsRNA中可能的碱基对的最大数目。这种dsRNA在细胞中是特别稳定的。
DsRNA优选在dsRNA的至少一个末端具有由1-4，优选2或3个核苷酸组成的单链突出端。单链突出端降低dsRNA在血液、血清和细胞中的稳定性，同时增加dsRNA的复制抑制作用。当dsRNA只在一个末端，特别是在显示S1链的3’-端的末端具有突出端时，是特别有利的。当具有两个末端的dsRNA的一端是突出端时，则另一个末端是平末端，即缺少突出端。令人惊奇的，已经显示出为了增加dsRNA对复制的抑制作用，dsRNA的一个末端的突出端已经足够，且不会把稳定性降低到两个突出端所降低的程度。只带有一个突出端的dsRNA已显示出其在多种细胞培养基以及血液、血清和细胞中的足够的稳定性和特别的有效性。当突出端定位在S1链的3’-末端时，对病毒复制的抑制是特别有效的。
优选的，dsRNA除了具有S1链外还具有S2链，即包含两个单独的链。当S1链(反义链)是23个核苷酸长，S2链是21个核苷酸长，且S1链的3’-末端具有由2个核苷酸组成的单链突出端时，dsRNA是特别有效的。在此，定位于S1链的5’-末端的dsRNA末端是平末端。
dsRNA可以存在于适于口服，或通过吸入、注入或注射，特别是静脉或腹膜内注入或注射方式给药的制剂中。该制剂可由特别是只由dsRNA和生理可耐受的溶剂，优选生理盐水溶液或生理可耐受的缓冲液组成。该生理上可耐受的缓冲液可以是磷酸盐缓冲的盐水溶液。令人惊奇的，已经显示出在这种溶剂或这种缓冲液中简单溶解并且服用的dsRNA不必被包装在特殊载体中即能够被细胞吸收并且抑制靶基因的表达或病毒的复制。
优选的，dsRNA存在于生理上可耐受的溶液中，特别是生理上可耐受的缓冲液或生理盐水溶液中，或被胶束结构，优选脂质体、病毒衣壳、类衣壳体或聚合物纳胶囊或微胶囊包裹，或与聚合物纳胶囊或微胶囊结合。该生理上可耐受的缓冲液可以是磷酸盐缓冲的盐水溶液。胶束结构，病毒衣壳、类衣壳体或聚合物纳胶囊或微胶囊能够促进感染细胞中dsRNA的吸收。聚合物纳胶囊或微胶囊由至少一种生物可降解的聚合物如聚丁基氰基丙烯酸酯组成。聚合物纳胶囊或微胶囊可将其中含有或与之结合的dsRNA转运和释放到机体内。DsRNA可口服或通过吸入、注入或注射，特别是静脉或腹膜内注入或注射的方式服用。
优选的，dsRNA以每天每kg体重-按照递升的优选顺序排列的-最大5mg、2.5mg、200μg、100μg、50μg和最适最大25μg的剂量使用。已显示即使是这种剂量的dsRNA在正(+)链RNA病毒感染的治疗中仍显示突出的有效性。
进一步的，本发明涉及治疗正(+)链RNA病毒感染的药物，其中该药物包含双链核糖核酸(dsRNA)，其中dsRNA的S1链具有至少部分地与病毒基因组的可翻译区的区段互补的区域。优选的，该药物以包含至少一个含有一定量的dsRNA的剂量存在，使得按照递升的优选顺序排列的最大剂量可以为5mg、2.5mg、200μg、100μg、50μg和最适为25μg。该剂量单位可以被配制成用于每日服用或摄取一剂。在这种情况下，全部的每日剂量包含在一个单独的剂量单位内。如果该剂量单位被配制成每日服用或摄取几次，则每剂中含有的dsRNA的量相应地减小以达到每日的总剂量。该剂量单位也可以被配制成为几天服用或摄取一次的例如使得dsRNA在几天里被释放。该剂量单位则相应地含有多倍的每日剂量。
进一步的，本发明的目的是一种抑制细胞中正(+)链RNA病毒复制的方法，其中至少一种双链核糖核酸(dsRNA)被引入细胞，并且其中dsRNA的S1链具有至少部分地与病毒基因组的可翻译区的区段互补的区域。本发明进一步涉及dsRNA，其中dsRNA的S1链具有与正(+)链RNA病毒基因组的可翻译区的区段互补的区域。
关于根据本发明的药物、方法和dsRNA的进一步有利的实施方案，可参见前面的评述。随后，将利用图解对本发明作示范性说明。
图1显示在通过NS3-特异性dsRNA的转染，使HCV复制子模型中HCV-RNA减少的图解表示。
HCV具有约9600个核苷酸的基因组。它编码结构蛋白质C、E1和E2，以及非结构蛋白质NS2、NS3、NS4a、NS4b、NS5a和NS5b。由于在细胞培养物中HCV的分子生物学分析是很困难的，所以利用非致病取代系统研究了dsRNA对病毒基因序列的作用。为此，新霉素-抗性-介导的新霉素盒取代了编码结构蛋白质C、E1和E2的病毒基因组的一部分。该修饰过的病毒基因组在国家生物技术信息中心(NCBI)，国家医学图书馆，38A楼，Bethesda，MD 20894，美国，以基因登记号No.AJ242654注册。将它转染到HuH-7肝细胞(JCRB0403，日本生物来源细胞库研究保存中心，国家健康科学院，Kamiyoga，1-18-1，Setagaya-ku，东京158，日本)中。它在新霉素类似物G418存在的条件下在细胞中复制，而不会形成感染颗粒。使得修饰过的HCV基因组的稳定复制成为可能的该系统(Lohmann等人，科学Science 285，，第110页)也被指定为丙型肝炎病毒的“复制子模型”。
使用的RNA具有被指定为序列表中的序列1至序列4的下列序列dsRNA1相应于编码NS3的区域的序列
S25’-AGA CAG UCG ACU UCA GCC UGG-3’ (序列1)S13’-GG UCU GUC AGC UGA AGU CGG A-5’(序列2)dsRNA2作为负调节与NS3序列无关，相应于NCBI，登记号No.U55763的pEGFP-C1载体的核苷酸886-909的序列S25’-CUA CGU CCA GGA GCG CAC CA UC-3’ (序列3)S13’-CC GAU GCA GGU CCU CGC GUG GU AG-5’(序列4)在每种情况中，S2代表正义链而S1代表反义链，即S2链的序列与来自HCV的相应序列是相同的。
将HuH7细胞在有1mg/ml的抗生素G418存在下在含有20％胎牛血清的Dulbecco’s修饰过的Eagle’s培养基中培养。对于转染，在六孔板的每孔(3.5cm直径)中，把80,000个细胞接种在2ml培养基中。使用“Fugene 6”(目录号No.1814443)(Roche诊断股份有限公司，Sandhofer Str.116，68305，曼海姆，德国)，根据附带的用法说明来辅助转染。为此，把100μl无血清的培养基(SFM)混合到有5μlFugene 6试剂的试剂容器中，并于室温孵育5分钟。将3μg dsRNA2(相应于约0.1μmol/l终浓度的dsRNA2)，3μg dsRNA1(相应于约0.1μmol/l终浓度的dsRNA1)，1.5μg dsRNA1加1.5μg dsRNA2(相应于约0.05μmol/l终浓度的dsRNA1)，或300ng dsRNA1加2.7μg dsRNA2(相应于约0.01μmol/l终浓度的dsRNA1)每个配备在另外的试剂容器中。在每种情况中，dsRNA1和dsRNA2的贮藏浓度等于20μM(相应于约300ng/μl)。将由Fugene 6和SFM组成的混合物逐滴加入至核酸，用移液枪的枪头小心混合，并于室温孵育15分钟。为了转染，将反应制备物逐滴加入至细胞。每个转染至少做两次，并在至少2个独立的实验中证实。
DsRNA对于经过修饰的HCV基因组的复制的作用通过定量PCR的方式得到确定。转染后约36小时，破裂细胞，对其中含有的RNA根据生产者的指令用PeqGold RNA纯化试剂盒(PEQLAB生物技术股份有限公司，Carl-Thiersch-Str.2b，91052，Erlangen，德国，订购号No.30-1010)进行分离。
随后，使用相同量的RNA(100-1000ng)利用Superscript II(Invitrogen股份有限公司，Karlsruhe技术园，Emmy-Noether-Str.10，76131，Karlsruhe，德国，目录号18064-014)进行逆转录。100pmololigo-dT引物或50pmol随机引物被用作引物。将10μl RNA(100-1000ng)、0.5μl oligo-dT引物(100pmol)和1μl随机引物(50pmol)于70℃孵育10分钟，再在冰上短时间存放。然后加入7μl逆转录酶混合物(4μl 5×缓冲液；2μl 0.1mol/l DTT；各1μl每个10mmol/ldNTP)，1μl Superscript II和1μl核糖核酸酶抑制剂RNAsin(Promega股份有限公司，Schildkrotstr.15，68199曼海姆，德国)。将混合物置于25℃10分钟，42℃1小时，最终70℃15分钟。
特定的cDNA的量是以按照生产者的指示根据“TaqMan”方法(PerkinElmer，Fredinand-Porsche-Ring 17，63110 Rodgau-Jugesheim，德国)利用光循环以快速起始DNA模板杂交探针试剂盒(Roche诊断股份有限公司)在“光循环仪”(Roche诊断股份有限公司)中形成的相同体积的cDNA来进行定量的。检测是通过5’-末端用荧光团6’-FAM(羧基荧光素)标记和在3’-末端用淬灭剂分子TAMRA(羧基-四-甲基-罗丹明)标记的探针进行的。荧光团受到激发而将激发能量传递给紧邻的3’侧的淬灭剂分子。在PCR反应的每个延伸期中，Taq DNA聚合酶的5’-3’外切核酸酶活性导致探针的水解，伴随荧光团与淬灭剂分子在空间上的分离。6’-FAM的荧光的淬灭逐渐减少。因此，荧光增加并被定量地测定。
下列是用于HCV NS3-cDNA定量的NS3探针5’-CAT TGT CGT AGC AAC GGA CGC TCT AAT GAC-3’(序列5)NS3引物5’-CCT TGA TGT ATC CGT CAT ACC AAC TAG-3’(序列6)NS3反向引物5’-TGA GTC GAA ATC GCC GGT AA-3’(序列7)进一步的，β2-微球蛋白cDNA被定量作为标准。β2微球蛋白(β2-MG)是以稳定的量结构表达的蛋白质。下列是用于定量的β2-微球蛋白探针5’-AAC CGT CAC CTG GGA CCG AGA CAT GTA-3’(序列8)β2-微球蛋白引物5’-CCG ATG TAT ATG CTT GCA GAG TTA A-3’(序列9)β2-微球蛋白反向引物5’-CAG ATG ATT CAG AGC TCC ATA GA-3’(序列10)NS3探针和β2-微球蛋白探针分别显示FAM标记于5’-末端和TAMRA标记于3’-末端。
HCV NS3 cDNA的量以与β2-MG cDNA的量的比率的形式测定并在图1中用图解表示。“pEGFP”表示通过只用dsRNA2(对照)转染测定的值，“HCV 0.1μmol/l，”“HCV 0.05μmol/l，”和“HCV 0.01μmol/l”表示通过分别用0.1μmol/l、0.05μmol/l和0.01μmol/l的NS3特异的dsRNA1转染确定的值。
在培养基中在0.1μmol/l、0.05μmol/l和0.01μmol/l的终浓度下用dsRNA1转染比用非特异性的对照dsRNA2转染产生的抑制高大约60倍。
序列表<110>Ribopharma AG<120>双链核糖核酸用于治疗正链(+)RNA病毒感染的用途<130>422328EH<140>
<141>
<160>10<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>21<212>RNA<213>丙型肝炎病毒<400>1agacagucga cuucagccug g 21<210>2<211>21<212>RNA<213>丙型肝炎病毒<400>2aggcugaagu cgacugucug g 21<210>3<211>22<212>RNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的说明载体<400>3cuacguccag gagcgcacca uc22
<210>4<211>24<212>RNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的说明载体<400>4gauggugcgc uccuggacgu agcc 24<210>5<211>30<212>DNA<213>丙型肝炎病毒<400>5cattgtcgta gcaacggacg ctctaatgac 30<210>6<211>27<212>DNA<213>丙型肝炎病毒<400>6ccttgatgta tccgtcatac caactag 27<210>7<211>20<212>DNA<213>丙型肝炎病毒<400>7tgagtcgaaa tcgccggtaa 20<210>8<211>27<212>DNA
<213>人<400>8aaccgtcacc tgggaccgag acatgta 27<210>9<211>25<212>DNA<213>人<400>9ccgatgtata tgcttgcaga gttaa25<210>10<211>23<212>DNA<213>人<400>10cagatgattc agagctccat aga 2权利要求
1.双链核糖核酸(dsRNA)用于治疗正(+)链RNA病毒感染的用途，其中dsRNA的S1链具有至少部分地与病毒基因组的可翻译区的区段互补的区域。
2.双链核糖核酸(dsRNA)用于制备治疗正(+)链RNA病毒感染的药物的用途，其中dsRNA的S1链具有至少部分地与病毒基因组的可翻译区的区段互补的区域。
3.根据权利要求1或2的用途，其中所述正(+)链RNA病毒是丙型肝炎病毒(HCV)。
4.根据上述权利要求之一的用途，其中所述dsRNA能够抑制病毒基因组编码的多蛋白的表达。
5.根据上述权利要求之一的用途，其中所述dsRNA能够抑制病毒基因组编码的功能性蛋白酶或解旋酶，特别是HCV-NS3解旋酶的表达。
6.根据上述权利要求之一的用途，其中所述病毒RNA的沿阅读方向的区段被置于编码解旋酶，特别是HCV-NS3解旋酶的病毒基因组的区域之中或之前。
7.根据上述权利要求之一的用途，其中所述的互补区域按照递升的优选顺序具有少于25、19-24、20-24、21-23和特别是具有22或23个核苷酸。
8.根据上述权利要求之一的用途，其中所述S1链按照递升的优选顺序具有少于30、少于25、21-24和特别是具有23个核苷酸。
9.根据上述权利要求之一的用途，其中所述dsRNA在dsRNA的至少一个末端具有由1-4，优选2或3个核苷酸组成的单链突出端。
10.根据权利要求9的用途，其中所述dsRNA只在一个末端，特别是在S1链显示3’-端的末端处具有突出端。
11.根据上述权利要求之一的用途，其中所述dsRNA除了具有S1链外还具有S2链，并且S1链是23个核苷酸长，S2链是21个核苷酸长，S1链的3’-末端具有由2个核苷酸组成的单链突出端，同时位于S1链的5’-末端的dsRNA末端是平末端。
12.根据上述权利要求之一的用途，其中所述dsRNA存在于适于口服，或通过吸入、注入或注射，特别是静脉或腹膜内注入或注射方式给药的制剂中。
13.根据上述权利要求之一的用途，其中所述制剂特别只由dsRNA和生理上可耐受的溶剂，优选生理盐水溶液或生理上可耐受的缓冲液，特别是磷酸盐缓冲的盐水溶液组成。
14.根据上述权利要求之一的用途，其中所述dsRNA存在于生理上可耐受的溶液中，特别是生理上可耐受的缓冲液或生理盐水溶液中，或被胶束结构，优选脂质体、病毒衣壳体、类衣壳体或聚合物纳胶囊或微胶囊包围，或与聚合物纳胶囊或微胶囊结合。
15.根据上述权利要求之一的用途，其中按照递升的优选顺序，所述dsRNA的最大使用剂量为每天每kg体重5mg、2.5mg、200μg、100μg、50μg和最适为25μg。
16.治疗正(+)链RNA病毒感染的药物，其中所述药物包含双链核糖核酸(dsRNA)，其中所述dsRNA的S1链具有至少部分地与病毒基因组的可翻译区的区段互补的区域。
17.根据权利要求16的药物，其中所述正(+)链RNA病毒是丙型肝炎病毒(HCV)。
18.根据权利要求16或17的药物，其中所述dsRNA能够抑制病毒基因组编码的多蛋白的表达。
19.根据权利要求16至18之一的药物，其中所述dsRNA能够抑制病毒基因组编码的功能性蛋白酶或解旋酶，特别是HCV-NS3解旋酶的表达。
20.根据权利要求16至19之一的药物，其中所述病毒RNA的沿阅读方向的区段置于编码解旋酶，特别是HCV-NS3解旋酶的病毒基因组的区域之中或之前。
21.根据权利要求16至20之一的药物，其中所述的互补区域按照递升的优选顺序具有少于25、19-24、20-24、21-23和特别是具有22或23个核苷酸。
22.根据权利要求16至21之一的药物，其中所述的S1链按照递升的优选顺序具有少于30、少于25、21-24和特别是具有23个核苷酸。
23.根据权利要求16至22之一的药物，其中所述dsDNA在dsRNA的至少一个末端具有一个由1-4，优选2或3个核苷酸组成的单链突出端。
24.根据权利要求23的药物，其中dsRNA只在一个末端，特别是在S1链显示3’-端的末端处具有突出端。
25.根据权利要求16至24之一的药物，其中所述dsRNA除了具有S1链外还具有S2链，并且S1链是23个核苷酸长，S2链是21个核苷酸长，并且S1链的3’-末端具有一个由2个核苷酸组成的单链突出端，同时位于S1链的5’-末端的dsRNA末端是平末端。
26.根据权利要求16至25之一的药物，其中所述dsRNA是适于口服，或通过吸入、注入或注射，特别是静脉或腹膜内注入或注射的方式给药的制剂。
27.根据权利要求26的药物，其中所述制剂特别是只由dsRNA和生理上可耐受的溶剂，优选生理盐水溶液或生理上可耐受的缓冲液，特别是磷酸盐缓冲的盐水溶液组成。
28.根据权利要求16至27之一的药物，其中所述dsRNA存在于药物的溶液中，特别是生理上可耐受的缓冲液或生理盐水溶液中，或被胶束结构，优选脂质体、病毒衣壳、类衣壳体或聚合物纳胶囊或微胶囊包围，或与聚合物纳胶囊或微胶囊结合。
29.根据权利要求16至28之一的药物，其中所述药物以至少一个包含一定量的dsDNA的剂量单位存在，使得按照递升的优选顺序，最大剂量可以为每天每kg体重5mg、2.5mg、200μg、100μg、50μg和最适为25μg。
30.抑制细胞中正(+)链RNA病毒复制的方法，其中将至少一种双链核糖核酸(dsRNA)引入细胞，并且其中dsRNA的S1链具有至少部分地与病毒基因组的可翻译区的区段互补的区域。
31.根据权利要求30的方法，其中正(+)链RNA病毒是丙型肝炎病毒(HCV)。
32.根据权利要求30或31的方法，其中所述病毒基因组编码的多蛋白的表达受到抑制。
33.根据权利要求30至32之一的方法，其中所述病毒基因组编码的功能性蛋白酶或解旋酶，特别是HCV-NS3解旋酶的表达受到抑制。
34.根据权利要求30至33之一的方法，其中所述病毒RNA的沿阅读方向的区段被置于编码解旋酶，特别是HCV-NS3解旋酶的病毒基因组的区域之中或之前。
35.根据权利要求30至34之一的方法，其中所述的互补区域按照递升的优选顺序具有少于25、19-24、20-24、21-23和特别是具有22或23个核苷酸。
36.根据权利要求30至35之一的方法，其中所述的S1链按照递升的优选顺序具有少于30、少于25、21-24和特别是具有23个核苷酸。
37.根据权利要求30至36之一的方法，其中所述dsDNA在dsRNA的至少一个末端具有由1-4个，优选2或3个核苷酸组成的单链突出端。
38.根据权利要求37的方法，其中dsRNA只在一个末端，特别是在S1链显示3’-端的末端处具有突出端。
39.根据权利要求30至38之一的方法，其中所述dsRNA除了具有S1链外还具有S2链，并且S1链是23个核苷酸长，S2链是21个核苷酸长，S1链的3’-末端具有由2个核苷酸组成的单链突出端，同时位于S1链的5’-末端的dsRNA末端是平末端。
40.根据权利要求30至39之一的方法，其中所述dsRNA存在于溶液中，特别是生理上可耐受的缓冲液或生理盐水溶液中，或被胶束结构，优选脂质体、病毒衣壳、类衣壳体或聚合物纳胶囊或微胶囊包围，或与聚合物纳胶囊或微胶囊结合。
41.双链核糖核酸(dsRNA)，其中dsRNA的S1链具有至少部分地与正(+)链RNA病毒基因组的可翻译区的区段互补的区域。
42.根据权利要求41的dsRNA，其中所述正(+)链RNA病毒是丙型肝炎病毒(HCV)。
43.根据权利要求41或42的dsRNA，其中所述dsRNA能够抑制病毒基因组编码的多蛋白的表达。
44.根据权利要求41至43之一的dsRNA，其中所述dsRNA能够抑制病毒基因组编码的功能性蛋白酶或解旋酶，特别是HCV-NS3解旋酶的表达。
45.根据权利要求41至44之一的dsRNA，其中所述病毒RNA的沿阅读方向的区段被置于编码解旋酶，特别是HCV-NS3解旋酶的病毒基因组的区域之中或之前。
46.根据权利要求41至45之一的dsRNA，其中所述的互补区域按照递升的优选顺序具有少于25、19-24、20-24、21-23和特别是具有22或23个核苷酸。
47.根据权利要求41至46之一的dsRNA，其中所述的S1链按照递升的优选顺序具有少于30、少于25、21-24和特别是具有23个核苷酸。
48.根据权利要求41至47之一的dsRNA，其中所述dsDNA在dsRNA的至少一个末端具有由1-4，优选2或3个核苷酸组成的单链突出端。
49.根据权利要求48的dsRNA，其中所述dsRNA只在一个末端，特别是在S1链显示3’-端的末端具有突出端。
50.根据权利要求41至49之一的dsRNA，其中所述dsRNA除了具有S1链外还具有S2链，并且S1链是23个核苷酸长，S2链是21个核苷酸长，S1链的3’-末端具有由2个核苷酸组成的单链突出端，同时位于S1链的5’-末端的dsRNA末端是平末端。
51.根据权利要求41至50之一的dsRNA，其中所述dsRNA存在于适于口服，或通过吸入、注入或注射，特别是静脉或腹膜内注入或注射的方式给药的制剂中。
52.根据权利要求51的dsRNA，其中所述的制剂特别是只由dsRNA和生理上可耐受的溶剂，优选生理盐水溶液或生理上可耐受的缓冲液，特别是磷酸盐缓冲的盐水溶液组成。
53.根据权利要求41至52之一的dsRNA，其中所述的dsRNA存在于溶液中，特别是生理上可耐受的缓冲液或生理盐水溶液中，或被胶束结构，优选脂质体、病毒衣壳、类衣壳体或聚合物纳胶囊或微胶囊包裹，或与聚合物纳胶囊或微胶囊结合。
全文摘要
本发明涉及利用双链核糖核酸(dsRNA)治疗正(+)链RNA病毒感染的用途，其中dsRNA的S1链具有至少部分与病毒基因组的可翻译区的区段互补的区域。
文档编号A61P31/00GK1608133SQ02826181
公开日2005年4月20日 申请日期2002年10月25日 优先权日2001年10月26日
发明者A·克雷布斯, M·约翰, D·舒潘, S·林默, R·克罗伊策尔 申请人:里伯药品公司