作为人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR)激动剂的取代苯基丙酸衍生物的制作方法

专利名称：作为人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR)激动剂的取代苯基丙酸衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及某些新型(2S)-3-(4-{2-[氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸衍生物，制备这类化合物的方法，它们在治疗包括无论是否与胰岛素抵抗相关的脂质异常(血脂异常)和代谢综合征的其它表现在内的临床病症中的用途，其治疗应用的方法以及含有它们的药用组合物。
背景技术：
包括II型糖尿病在内的代谢综合征是指包括伴有下列疾病的胰岛素抵抗的一系列表现高胰岛素血症、可能的II型糖尿病、动脉高血压、向心性(内脏)肥胖症、血脂异常，所述血脂异常是指观察到以VLDL(极低密度脂蛋白)升高、小而密集的LDL颗粒和HDL(高密度脂蛋白)浓度降低以及纤维蛋白溶解活性降低为典型特征的脂蛋白水平异常。
最近的流行病学研究已证明，患有胰岛素抵抗的个体大大增加了心血管疾病的发病率和死亡率、特别是罹患心肌梗塞和中风的危险性。在II型糖尿病中，动脉粥样硬化相关病症导致的死亡高达所有死亡的80％。
在临床医学中，已知需要增加代谢综合征患者的胰岛素敏感性，以此来纠正导致动脉粥样硬化进程加速的血脂异常。然而，目前尚没有普遍可接受的诊断指标以及严格定义的药物治疗学指标。
以下式C化合物的S-对映体
2-乙氧基-3-[4-(2-{4-甲磺酰氧苯基}乙氧基)苯基]丙酸公开于PCT公布号WO 99/62872中。据报道，该化合物是过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR，有关PPAR的综述参见T.M.Willson等，J Med Chem2000，第43卷，527)调节剂，并兼有PPARα/PPARγ激动剂活性(Structure，2001，第9卷，699，P.Cronet等)。该化合物在治疗胰岛素抵抗相关病症中有效。
令人惊讶的是，目前已发现了一系列是高效PPARα调节剂的化合物。

发明内容
本发明提供式I化合物的S对映体及其药学上可接受的盐、溶剂合物、晶形和前体药物， 其中R1代表2，4-二氟苯基或环己基。
本说明书中所用的术语“前体药物”包括羧酸基团衍生物，所述羧酸基团衍生物在哺乳动物、特别是人体内转变为羧酸基团或其盐或共轭物。应该理解，尽管不希望受到理论的束缚，但是相信大多数与所述前体药物相关的活性来自由所述前体药物转化而成的式I化合物的活性。可以通过本领域技术人员已知的常规方法制备前体药物。本领域已知各种不同羧基前体药物。有关这些前体药物衍生物的实例参见a)Design of Prodrugs，H.Bundgaard主编(Elsevier，1985)和Methodsin Enzymology.42309-396，K.Widder等主编(Academic Press，1985)；b)A Textbook of Drug Design and Development，Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard主编，第5章，″Design and Application ofProdrugs″，H.Bundgaard，第113-191页(1991)；c)H.Bundgaard，Advanced Drug Delivery Reviews，81-38(1992)；d)H.Bundgaard等，Journal of Pharmaceutical Sciences，77285(1988)；和e)N.Kakeya等，Chem Pharm Bull，32692(1984)。
以上从a到e的文献通过引用结合到本文中。
体内可切割的酯只是母体分子前体药物的一种类型。一种含有羧基的式(I)化合物的体内可水解(或可切割)的酯是例如在人或动物体内水解产生母体酸的药学上可接受的酯。合适的药学上可接受的羧基酯包括C1-6烷氧基甲基酯，例如甲氧基甲基酯；C1-6烷酰氧基甲基酯，例如新戊酰氧基甲基酯；邻苯二甲酰基酯；C3-8环烷氧基羰基氧基C1-6烷基酯，例如1-环己基羰基氧基乙基酯；1，3-二氧杂环戊烯-2-酮基甲基酯，例如5-甲基-1，3-二氧杂环戊烯-2-酮基甲基酯；和C1-6烷氧基羰基氧基乙基酯，例如1-甲氧基羰基氧基乙基酯；并可以在本发明化合物的任一羧基上形成。
式I化合物具有药物活性。特别是，式I化合物是高效PPARα激动剂。另外，式I化合物也是PPARγ激动剂。本文所用的术语激动剂包括部分激动剂。
本发明的具体化合物是(2S)-3-(4-{2-[(环己基甲基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸；和
(2S)-3-(4-{2-[(2，4-二氟苄基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸；及其药学上可接受的盐、溶剂合物和晶形。
在本说明书中，表达方式“药学上可接受的盐”是用来定义但不限于碱式盐，诸如碱金属盐、碱土金属盐、铵盐、带碱性氨基酸的盐和带有机胺的盐。
也可以理解，本发明某些化合物可以溶剂合物形式(例如水合物)以及非溶剂合物形式存在。可以理解，本发明包括所有这样的溶剂合物形式。本发明的某些化合物可以互变异构体形式存在。可以理解，本发明包括所有这样的互变异构体。
制备方法可以按照以下概述制备本发明的化合物。然而，本发明并不限于这些方法。也可以按照现有技术对结构上相关化合物的描述来制备所述化合物。可以按照标准程序或所述实验部分的描述进行反应。
可以使以下式II化合物的S-对映体与一种脱保护剂反应，制备式I化合物 其中R1如上定义，而R2代表描述于标准教科书″Protective Groupsin Organic Synthesis″，第2版(1991)，Greene和Wuts的羧酸羟基的保护基团。所述保护基团也可以是树脂，诸如Wang树脂或2-氯三苯甲基氯树脂。可以按照本领域技术人员熟知的技术除去保护基团。一种这样的保护基团是其中R2代表C1-6烷氧基或芳基烷氧基，如苄基，因此COR2代表酯。这类酯可以在THF和水的混合物中，在0-100℃的温度范围内，与脱保护剂(如水解剂，例如氢氧化锂)反应，生成式I化合物。
可以在惰性溶剂例如二氯甲烷中，在偶联剂例如碳二亚胺如1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺存在下，任选在催化剂例如碱性催化剂如4-二甲氨基吡啶存在下，在-25℃至150℃的温度范围内，使以下式III化合物的S-对映体 与以下式IV化合物反应，制备式II化合物， 其中R2如上定义，R1如上定义。
可以通过实施例中描述的方法或者通过本领域技术人员已知的类似方法，制备式III化合物和式IV化合物。
式II化合物和式III化合物在制备式I化合物中是有用的中间体，并且认为是新型化合物。式II化合物和式III化合物是本发明要求保护的化合物，作为本发明的另一方面。优选式II化合物和式III化合物的S-对映体。
本发明的化合物可用常规技术从它们的反应混合物中分离出来。
本领域技术人员将会认识到，为了用替代方法和在某些条件下获得本发明化合物，可以按照不同顺序进行更多的常规方法、前述不同方法步骤，和/或可以在整个途径的不同阶段进行不同反应(即当用一个具体反应使不同中间体与前述化合物反应时，可以进行化学转换)。
表达方式“惰性溶剂”是指不与原料、试剂、中间体或产物反应的溶剂，其反应方式会负面影响所需产物的收率。
药用制剂本发明的化合物将以药用制剂的形式，通过口服、胃肠外、静脉内、肌内、皮下或其它注射方式、口腔含化、直肠、阴道、透皮和/或鼻腔途径和/或通过吸入法常规给药，所述药用制剂包含以游离酸或药学上可接受的有机或无机碱加成盐形式的所述活性成分，并呈药学上可接受的剂型。根据待治疗疾病和患者以及给药途径，可以给予不同剂量的所述组合物。
本发明的化合物在治疗性治疗病人时的合适日剂量为约0.0001-100mg/kg体重，优选0.001-10mg/kg体重。
特别优选的口服制剂为片剂或胶囊剂，所述制剂可以按照本领域技术人员已知方法配制，以提供剂量范围为0.5mg-500mg的所述活性化合物剂量，例如1mg、3mg、5mg、10mg、25mg、50mg、100mg和250mg。
根据本发明的另一方面，提供一种药用制剂，所述制剂包含本发明的任何化合物或其药学上可接受的衍生物，以及药学上可接受的辅料、稀释剂和/或载体。
药理学特性本发明的式(I)化合物可用于预防和/或治疗与先天性或诱导性胰岛素敏感性降低(胰岛素抵抗)相关临床病症以及与代谢紊乱(也称为代谢综合征)相关临床病症。这些临床病症包括但不限于以胰岛素抵抗为特征的全身肥胖症、腹部肥胖症、动脉高血压、高胰岛素血症、高血糖症(hyperglycaemia)、II型糖尿病和血脂异常。这种血脂异常(也称为致动脉粥样化脂蛋白分布型)特征为在小而致密的低密度脂蛋白(LDL)颗粒、表型B的存在下，非酯化脂肪酸中度升高、极低密度脂蛋白(VLDL)富含甘油三酯颗粒升高、高水平的Apo B、低水平的高密度脂蛋白(HDL)并伴随低水平的apoAI颗粒和高水平的Apo B。
预期本发明的化合物可用于治疗罹患组合性或混合性高脂血症或不同程度的高甘油三酯血症以及伴有或不伴有其它代谢综合征表现的餐后血脂异常的患者。
用本发明化合物进行治疗，预期能降低与动脉粥样硬化相关的心血管疾病发病率和死亡率，这是因为它们的抗血脂异常和抗炎特性。所述心血管疾病包括各种内脏的大血管病引起的心肌梗塞、充血性心力衰竭、脑血管疾病和下肢周围动脉血管闭锁不全。因为式I化合物的胰岛素敏感性效应，所以也预期式I化合物预防或延迟由代谢综合征发展成II型糖尿病以及妊娠糖尿病。因此，预期能延迟糖尿病中慢性高血糖症相关的长期并发症的发展，所述并发症诸如微血管病引起的肾病、视网膜损伤和下肢周围血管病。此外，所述化合物可用于治疗无论是否与胰岛素抵抗相关的心血管系统外的各种病症，例如多囊性卵巢综合征、肥胖症、癌症和炎性疾病状态，包括神经变性性疾病，诸如轻度认知减退、早老性痴呆(Alzheimer’sdisease)、帕金森病(Parkinson’s disease)和多发性硬化。
预期本发明的化合物可用于控制II型糖尿病患者的葡萄糖水平。
本发明提供一种治疗或预防血脂异常、胰岛素抵抗综合征和/或代谢紊乱(如上定义)的方法，所述方法包括给予有需要的哺乳动物(特别是人)一种式I化合物。
本发明提供一种治疗或预防II型糖尿病的方法，所述方法包括给予有需要的哺乳动物(特别是人)有效量的一种式I化合物。
在本发明的另一方面，提供式I化合物作为药物的用途。
在本发明的另一方面，提供式I化合物在制备用于治疗胰岛素抵抗和/或代谢紊乱的药物中的用途。
联合疗法本发明的化合物可与其它用于治疗与动脉粥样硬化的发展和进程相关的诸如下列疾病的治疗药联合使用高血压、高脂血症、血脂异常、糖尿病和肥胖症。本发明的化合物可与其它用于降低LDL∶HDL比率的治疗药、或者能引起LDL-胆固醇循环水平降低的药物联合使用。在糖尿病患者中，本发明的化合物也可与用于治疗微血管病相关并发症的治疗药联合使用。
本发明的化合物可与其它疗法联合用于治疗代谢综合征或II型糖尿病及其相关并发症，所述其它疗法包括双胍药，例如二甲双胍、苯乙双胍和丁福明，胰岛素(合成胰岛素类似物，支链淀粉)和口服抗高血糖药(它们分为膳食葡萄糖调节剂和α-葡糖苷酶抑制剂)。α-葡糖苷酶抑制剂的实例是阿卡波糖或伏格列波糖或米格列醇。膳食葡萄糖调节剂的实例是瑞格列奈或那格列奈。
在本发明的另一方面，式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物，可与其它PPAR调节剂联合给药。PPAR调节剂包括但不限于PPARα和/或γ激动剂、或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物。合适的PPARα和/或γ激动剂、其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物是本领域众所周知的。它们包括描述于下列文献的化合物WO 01/12187、WO 01/12612、WO 99/62870、WO 99/62872、WO99/62871、WO 98/57941、WO 01/40170、J Med Chem，1996，39，665，Expert Opinion on Therapeutic Patents，10(5)，623-634(特别是描述于所述专利申请的第634页所列化合物)和J Med Chem，2000，43，527，这些文献都通过引用结合到本文中。PPARα和/或γ激动剂特别是指NN622/Ragaglitazar、BMS 298585、WY-14643、氯贝丁酯、非诺贝特、苯扎贝特、吉非贝齐和环丙贝特；GW 9578、环格列酮、曲格列酮、吡格列酮、罗西格列酮、eglitazone、proglitazone、BRL-49634、KRP-297、JTT-501、SB 213068、GW 1929、GW 7845、GW 0207、L-796449、L-165041和GW 2433。PPARα和/或γ激动剂特别是指(S)-2-乙氧基-3-[4-(2-{4-甲磺酰氧基苯基}乙氧基)-苯基]丙酸及其药学上可接受的盐。
另外，本发明的联合给药可用于与磺酰脲联合，例如格列美脲、格列本脲(格列苯脲)、格列齐特、格列吡嗪、格列喹酮、chloropropamide、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、glycopyramide、氨磺丁脲、格列波脲、唑磺脲、格列噻唑、glibuzole、格列己脲、格列嘧啶、格列平脲、苯磺丁脲、甲磺环己脲和妥拉磺脲。优选磺酰脲为格列美脲或格列本脲(格列苯脲)。更优选磺酰脲为格列美脲。因此，本发明包括给予本发明的化合物并结合一种、两种或更多种本段落中描述的现有疗法。其它现有疗法用于治疗II型糖尿病及其相关并发症的剂量将是本领域技术人员已知的，并已由法定机构如FDA批准使用，可见于FDA出版的the Orange Book。另一方面，联合疗法的一个好处是可使用较小剂量。
本发明也包括本发明的化合物与胆固醇降低剂联合使用。本申请中的胆固醇降低剂包括但不限于HMG-CoA还原酶(3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶)抑制剂。合适的HMG-CoA还原酶抑制剂选自下列他汀类阿托伐他汀、柏伐他汀、西立伐他汀、达伐他汀、氟伐他汀、伊伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、nicostatin、nivastatin、普伐他汀和辛伐他汀，或其药学上可接受的盐(特别是钠盐或钙盐)或溶剂合物、或这类盐的溶剂合物。特别的他汀是阿托伐他汀，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物。更特别的他汀是阿托伐他汀钙盐。然而，特别优选的他汀是化学名称为(E)-7-[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-[甲基(甲磺酰基)-氨基]-嘧啶-5-基](3R，5S)-3，5-二羟基庚-6-烯酸，[也称为(E)-7-[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-[N-甲基-N-(甲磺酰基)-氨基]嘧啶-5-基](3R，5S)-3，5-二羟基庚-6-烯酸]的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，或这类盐的溶剂合物。所述化合物(E)-7-[4-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-[甲基-(甲磺酰基)-氨基]-嘧啶-5-基](3R，5S)-3，5-二羟基庚-6-烯酸，及其钙盐和钠盐公开于欧洲专利申请公布号EP-A-0521471和Bioorganic and MedicinalChemistry，(1997)，5(2)，437-444。现在已知这后一种他汀通称为罗苏伐他汀。
在本申请中，术语“胆固醇降低剂”也包括HMG-CoA还原酶抑制剂的化学修饰物，诸如无论是有活性还是无活性的酯、前体药物和代谢物。
本发明也包括本发明的化合物与回肠胆汁酸转运系统抑制剂(IBAT抑制剂)联合使用。
具有IBAT抑制活性的合适化合物已有描述，参见例如下列文献所描述的化合物WO 93/16055、WO 94/18183、WO 94/18184、WO96/05188、WO 96/08484、WO 96/16051、WO 97/33882、WO 98/07449、WO 98/03818、WO 98/38182、WO 99/32478、WO 99/35135、WO98/40375、WO 99/35153、WO 99/64409、WO 99/64410、WO 00/01687、WO 00/47568、WO 00/61568、WO 00/62810、WO 01/68906、DE19825804、WO 00/38725、WO 00/38726、WO 00/38727、WO 00/38728、WO 00/38729、WO 01/68906、WO 01/66533、WO 02/32428、WO02/50051、EP 864582、EP 489423、EP 549967、EP 573848、EP 624593、EP 624594、EP 624595和EP 624596，这些专利申请的内容都通过引用结合到本文中。
一类特别适用于本发明的IBAT抑制剂是苯并硫杂庚英，以及WO 00/01687、WO 96/08484和WO 97/33882的权利要求书、特别是权利要求1中描述的化合物，这些文献都通过引用结合到本文中。其它类的合适IBAT抑制剂是1，2-苯并硫氮杂、1，4-苯并硫氮杂和1，5-苯并硫氮杂。另一类合适的IBAT抑制剂是1，2，5-苯并硫杂二氮杂。
一种特别合适的具有IBAT抑制活性的化合物是(3R，5R)-3-丁基-3-乙基-1，1-二氧化-5-苯基-2，3，4，5-四氢-1，4-苯并硫氮杂-8-基β-D-吡喃葡糖苷酸(EP 864 582)。其它合适的IBAT抑制剂包括下列化合物之一1)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-1′-苯基-1′-[N′-(羧甲基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；2)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(羧甲基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；3)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-1′-苯基-1′-[N′-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；4)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-1′-苯基-1′-[N′-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；5)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；6)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；7)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(2-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；8)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(2-羧乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；9)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(5-羧戊基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；10)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(2-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；11)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{α-[N′-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]-2-氟代苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；12)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(R)-(2-羟基-1-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；13)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(R)-(2-羟基-1-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；14)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-{N-[(R)-α-(N′-{(R)-1-[N″-(R)-(2-羟基-1-羧乙基)氨基甲酰基]-2-羟基乙基}氨基甲酰基)苄基]氨基甲酰基甲氧基}-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；15)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{α-[N′-(羧甲基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；16)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{α-[N′-((乙氧基)(甲基)磷酰基-甲基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；17)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-{N-[(R)-α-(N′-{2-[(羟基)(甲基)磷酰基]乙基}氨基甲酰基)苄基]氨基甲酰基甲氧基}-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；18)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(2-甲硫基-1-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；
19)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-{N-[(R)-α-(N′-{2-[(甲基)(乙基)磷酰基]乙基}氨基甲酰基)-4-羟基苄基]氨基甲酰基甲氧基}-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；20)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-{N-[(R)-α-(N′-{2-[(甲基)(羟基)磷酰基]乙基}氨基甲酰基)-4-羟基苄基]氨基甲酰基甲氧基}-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；21)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[(R)-N′-(2-甲基亚磺酰基-1-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；22)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲氧基-8-[N-{(R)-α-[N′-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基]-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；23)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((R)-1-羧基-2-甲硫基-乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；24)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧基-2-(R)-羟丙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；25)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧基-2-甲基丙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；26)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧丁基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；27)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧丙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；28)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；29)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧基-2-(R)-羟丙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；30)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；31)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；32)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((R)-1-羧基-2-甲硫基乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；33)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-{(S)-1-[N-((S)-2-羟基-1-羧乙基)氨基甲酰基]丙基}氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；34)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧基-2-甲基丙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；35)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧丙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；36)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-[N-((R/S)-α-{N-[1-(R)-2-(S)-1-羟基-1-(3，4-二羟基苯基)丙-2-基]氨基甲酰基}-4-羟基苄基)氨基甲酰基甲氧基]-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；37)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-(2-(S)-3-(R)-4-(R)-5-(R)-2，3，4，5，6-五羟基己基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；和38)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-(2-(S)-3-(R)-4-(R)-5-(R)-2，3，4，5，6-五羟基己基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物。
根据本发明的再一方面，提供一种联合疗法，所述疗法包括给予需要这种治疗性治疗的温血动物(例如人)有效量的任选与药学上可接受的稀释剂或载体相结合的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物，并且同时、序贯或独立给予任选与药学上可接受的稀释剂或载体相结合的一种或多种下列药物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物一种CETP(胆固醇酯转移蛋白)抑制剂，例如WO 00/38725第7页第22行至第10页第17行中参考和介绍的那些抑制剂，所述文献通过引用结合到本文中；一种胆固醇吸收拮抗剂，例如β-丙内酰胺，如SCH 58235以及US 5,767,115中介绍的那些化合物，所述文献通过引用结合到本文中；一种MTP(微粒体转移蛋白)抑制剂，例如在Science，282，751-54，1998中介绍的那些抑制剂，所述文献通过引用结合到本文中；一种烟酸衍生物，包括缓释和组合产品，例如，烟酸(尼克酸)、阿西莫司和戊四烟酯；一种植物甾醇化合物，例如甾烷醇类；普罗布考；一种抗肥胖症化合物，例如奥利司他(EP 129,748)和西布曲明(GB2,184,122和US 4,929,629)；一种抗高血压化合物，例如血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、肾上腺素能阻滞剂、α肾上腺素能阻滞剂、β肾上腺素能阻滞剂、α/β混合肾上腺素能阻滞剂、肾上腺素能兴奋剂、钙通道阻滞剂、AT-1阻滞剂、促尿食盐排泄药、利尿剂或血管舒张剂；一种CB1拮抗剂或反相激动剂，例如在WO 01/70700和EP 65635中介绍的拮抗剂；一种黑素浓缩激素(MCH)拮抗剂；一种PDK抑制剂；或核受体调节剂，例如LXR、FXR、RXR和RORα。
可与式I化合物联合使用的具体的ACE抑制剂或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物(包括活性代谢物)包括但不限于下列化合物阿拉普利、alatriopril、altiopril钙、ancovenin、贝那普利、盐酸贝那普利、贝那普利拉、苯甲酰卡托普利、卡托普利、卡托普利-半胱氨酸、卡托普利-谷胱甘肽、西那普利、ceranopril、西罗普利、西拉普利、西拉普利拉、地拉普利、地拉普利二酸、依那普利、依那普利拉、enapril、epicaptopril、foroxymithine、福辛普利、fosenopril、fosenopril钠、福辛普利、福辛普利钠、福辛普利拉、福辛普利酸、glycopril、hemorphin-4、伊屈普利、咪达普利、吲哚普利、吲哚普利拉、赖苯普利、赖诺普利、lyciumin A、lyciuminB、mixanpril、莫昔普利、莫昔普利拉、莫维普利、胞壁菌素A、胞壁菌素B、胞壁菌素C、喷托普利、培哚普利、培哚普利拉、pivalopril、匹伏普利、喹那普利、盐酸喹那普利、喹普利拉、雷米普利、雷米普利拉、螺普利、盐酸螺普利、螺普利拉、spiropril、盐酸spiropril、替莫普利、盐酸替莫普利、替普罗肽、群多普利、群多普利拉、乌替普利、扎普利、扎普利拉、佐芬普利和佐芬普利拉。优选用于本发明的ACE抑制剂是雷米普利、雷米普利拉、赖诺普利、依那普利和依那普利拉。更优选用于本发明的ACE抑制剂是雷米普利和雷米普利拉。
优选与式I化合物联合使用的血管紧张素II拮抗剂、其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物包括但不限于下列化合物坎地沙坦、坎地沙坦西酯、氯沙坦、缬沙坦、厄贝沙坦、他索沙坦、替米沙坦和依普罗沙坦。本发明使用的特别优选的血管紧张素II拮抗剂或其药学上可接受的衍生物是坎地沙坦和坎地沙坦西酯。
因此，在本发明的另一特征中，提供一种治疗需要这种治疗的温血动物(例如人)的II型糖尿病及其相关并发症的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物，并且同时、序贯或独立给予有效量的一种在所述联合疗法部分所描述的其它化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物。
因此，在本发明的另一特征中，提供一种治疗需要这种治疗的温血动物(例如人)的高脂血症的方法，所述方法包括给予所述动物有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物，并且同时、序贯或独立给予有效量的一种在所述联合疗法部分所描述的其它化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物。
根据本发明的另一方面，提供一种药用组合物，所述组合物包含式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物，以及一种在所述联合疗法部分所描述的其它化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物，以及药学上可接受的稀释剂或载体。
根据本发明的另一方面，提供一种药盒，所述药盒包含式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物，以及一种在联合疗法部分所描述的其它化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物。
根据本发明的另一方面，提供一种药盒，所述药盒包含a)第一单位剂型的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物；b)第二单位剂型的一种在联合疗法部分所描述的其它化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物；和c)装有所述第一剂型和第二剂型的容器装置。
根据本发明的另一方面，提供一种药盒，所述药盒包含a)第一单位剂型的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物，以及药学上可接受的稀释剂或载体；b)第二单位剂型的一种在联合疗法部分所描述的其它化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物；和c)装有所述第一剂型和第二剂型的容器装置。
根据本发明的另一特征，提供式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物以及一种在联合疗法部分所描述的其它化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物在制备用于治疗温血动物(例如人)的代谢综合征或II型糖尿病及其相关并发症的药物中的用途。
根据本发明的另一特征，提供式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物以及一种在联合疗法部分所描述的其它化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物在制备用于治疗温血动物(例如人)的高脂血症的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供一种联合疗法，所述联合疗法包括给予需要这样的治疗性治疗的温血动物(例如人)有效量的任选与药学上可接受的稀释剂或载体相结合的式I化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物，并同时、序贯或独立给予有效量的任选与药学上可接受的稀释剂或载体相结合的一种在联合疗法部分所描述的其它化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物。
实施例在Varian Mercury 300或Varian UNITY plus 400、500或600分光计上，分别以300MHz、400MHz、500MHz和600MHz的1H频率，以及以75MHz、100MHz、125MHz和150MHz的频率13C，进行1H NMR和13C NMR的测量。在δ范围内进行测量。
除非另有说明，否则化学位移是以ppm计，用溶剂作为内标。
缩写DMSO 二甲亚砜THF四氢呋喃DMAP 二甲氨基吡啶t 三重峰s 单峰d 双重峰q 四重峰m 多重峰bs 宽单峰实施例1(2S)-3-(4-{2-[(环己基甲基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸(i)(2S)-3-{4-[2-(苄氧基)-2-氧代乙氧基]苯基}-2-乙氧基丙酸乙酯向(2S)-2-乙氧基-3-(4-羟基苯基)丙酸乙酯(23.8g，100mmol，按WO 99/62872中介绍的方法制备)的乙腈(200ml)溶液中，加入无水碳酸钾(31.9g，231mmol)，再加入溴乙酸苄酯(17.4ml，110mmol)，将反应混合物回流过夜。让反应混合物冷却至室温，滤出不溶盐并真空浓缩溶液。残留物用乙酸乙酯(300ml)萃取，有机相用NaHCO3水溶液(3×100ml)和盐水(100ml)洗涤，经无水MgSO4干燥并真空浓缩。用二氯甲烷作为洗脱液，在硅胶上纯化并收集纯流分，得到22.4g(58％)的黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.16(t，3H)，1.22(t，3H)，2.93-2.97(m，2H)，3.35(m，1H)，3.60(m，1H)，3.97(m，1H)，4.16(q，2H)，4.64(s，2H)，5.23(s，2H)，6.82(d，2H)，7.15(d，2H)，7.32-7.39(m，5H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.3，15.2，38.6，60.9，65.6，66.3，67.0，80.4，114.6，128.5，128.6，128.7，130.6，135.3，156.7，169.0，172.6。
(ii){4-[(2S)-2，3-二乙氧基-3-氧代丙基]苯氧基}乙酸向(2S)-3-{4-[2-(苄氧基)-2-氧代乙氧基]苯基}-2-乙氧基丙酸乙酯(22.33g，57.8mmol)的新蒸馏的THF(290ml)溶液中加入Pd/C(10％，3.1g)。将反应混合物在大气压下于室温氢化过夜。混合物通过硅藻土垫过滤并真空浓缩滤液，得到16.6g(97％)的浅黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.15(t，3H)，1.21(t，3H)，2.93-2.98(m，2H)，3.35(m，1H)，3.60(m，1H)，3.97(m，1H)，4.16(q，2H)，4.65(s，2H)，6.84(d，2H)，7.17(d，2H)，8.48(bs，1H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.3，15.1，38.5，61.0，65.1，66.4，80.3，114.6，130.7，130.9，156.4，172.7，173.7。
(iii)N-(环己基甲基)庚酰胺向氨基甲基环己胺(0.34g，3.0mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中，加入庚酸(0.39g，3mmol)和DMAP(0.37g，3.0mmol)，再加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(0.57g，3.0mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷(100ml)稀释，有机相用5％HCl(3×75ml)、NaHCO3水溶液(75ml)和盐水(75ml)洗涤并经Na2SO4干燥。真空浓缩，得到0.62g(92％)的油状物，然后进行结晶。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.84-0.98(m，5H)，1.08-1.36(m，8H)，1.44(m，1H)，1.56-1.78(m，8H)，2.16(t，2H)，3.09(t，2H)，5.45(bs，1H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.1，22.7，26.0，26.6，29.1，31.0，31.7，37.1，38.1，45.8，173.2。
(iv)N-(环己基甲基)-N-庚胺盐酸盐将N-(环己基甲基)庚酰胺(0.58g，2.6mmol)与甲苯共沸蒸馏干燥一次，用新蒸馏的THF(23ml)萃取并在氩气氛下在冰浴中冷却。加入硼烷(3.2ml 2M二甲硫络合物的乙醚溶液)，15分钟后除去冰浴。将反应混合物回流4小时，再让它冷却至室温。小心加入1.2ml 10％HCl并将混合物搅拌过夜。真空浓缩，再加入冰冷的THF(约15ml)，产生白色沉淀。加入水(约3ml)，再加入甲苯(约10ml)并真空浓缩混合物。向残余物中加入冰冷的THF(约15ml)，滤出所得沉淀并真空干燥，得到2.96g为白色盐的粗产物。该物质无需任何进一步纯化就可用于后续反应步骤。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.87-0.98(m，3H)，0.97-1.11(m，2H)，1.15-1.45(m，11H)，1.65-1.86(m，8H)，2.84(d，2H)，2.93-3.01(m，2H)。
13C NMR(100MHz，CD3OD)δ14.3，23.6，26.6，27.0，27.1，27.6，29.9，31.5，32.7，36.4，55.0。
(v)(2S)-3-(4-{2-[(环己基甲基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸乙酯向{4-[(2S)-2，3-二乙氧基-3-氧代丙基]苯氧基}乙酸(0.108g，0.36mmol)的二氯甲烷(3.6ml)溶液中加入N-(环己基甲基)-N-庚胺盐酸盐(0.090g，0.36mmol)和DMAP(0.098g，0.80mmol)，再加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(0.070g，0.36mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷(25ml)稀释，有机相用5％HCl(3×25ml)、NaHCO3水溶液(25ml)和盐水(25ml)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。用溶于二氯甲烷的甲醇(0-1％梯度)作为洗脱液，在预填充硅胶柱(IsoluteSPE Column，5g Si/25ml)上纯化，得到0.103g(58％)的无色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.83-0.97(m，5H)，1.11-1.33(m，17H)，1.45-1.80(m，8H)，2.88-3.00(m，2H)，3.14和3.19(2d，2H，旋转异构体)，3.24-3.39(m，3H)，3.58(m，1H)，3.95(m，1H)，4.15(q，2H)，4.64和4.66(2s，2H，旋转异构体)，6.84和6.84(2d，2H，旋转异构体)，7.14(d，2H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.2，14.3，15.2，22.7，26.0，26.0，26.5，26.5，27.0，27.0，27.2，28.9，29.1，31.0，31.2，31.9，36.1，37.3，38.6，46.4，48.0，51.7，53.3，60.9，66.3，67.5，67.7，80.4，114.6，114.7，130.2，130.5，157.1，157.1，167.8，167.9，172.6。(峰数大于碳原子数是因为存在旋转异构体。)(vi)(2S)-3-(4-{2-[(环己基甲基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基-丙酸向(2S)-3-(4-{2-[(环己基甲基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基-丙酸乙酯(0.031g，0.057mmol)的THF(2.0ml)溶液中加入水(2.0ml)和氢氧化锂(0.006g，0.26mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。混合物用2M HCl酸化并用乙酸乙酯(4×25ml)萃取。合并的有机相用盐水(25ml)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩，得到0.027g(93％)的无色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.82-0.99(m，5H)，1.10-1.35(m，14H)，1.46-1.82(m，8H)，2.94(m，1H)，3.05(m，1H)，3.15和3.21(2d，2H，旋转异构体)，3.25-3.46(m，3H)，3.61(m，1H)，4.02(m，1H)，4.66和4.68(2s，2H，旋转异构体)，6.85(d，2H)，7.16(d，2H)，7.77(bs，1H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.2，15.1，22.7，26.0，26.0，26.4，26.5，27.0，27.0，27.2，28.9，29.1，31.0，31.2，31.9，36.1，37.2，38.0，46.6，48.0，51.8，53.4，66.8，67.3，67.5，79.9，114.7，114.8，129.9，130.6，157.1，157.2，168.2，168.3，175.2。(峰数大于碳原子数是因为存在旋转异构体。)实施例2(2S)-3-(4-{2-[(2，4-二氟苄基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸(i)N-(2，4-二氟苄基)庚酰胺向2，4-二氟苄胺(0.43g，3.0mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中加入庚酸(0.39g，3.0mmol)和DMAP(0.37g，3.0mmol)，再加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(0.58g，3.0mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷(100ml)稀释，有机相用5％HCl(3×75ml)、NaHCO3水溶液(75ml)和盐水(75ml)洗涤，并经Na2SO4干燥。真空浓缩，得到0.63g(82％)的黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.83-0.91(m，3H)，1.22-1.35(m，6H)，1.56-1.68(m，2H)，2.19(t，2H)，4.43(d，2H)，5.80(bs，1H)，6.75-6.88(m，2H)，7.33(m，1H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.7，29.0，31.6，36.8，37.1，104.0(t)，111.5(dd)，131.5(dd)，173.2。(非质子化碳未报告。)(ii)N-(2，4-二氟苄基)-N-庚胺盐酸盐将N-(2，4-二氟苄基)庚酰胺(0.55g，2.2mmol)与甲苯共沸蒸馏干燥一次，用新蒸馏的THF(19ml)萃取并在氩气氛下在冰浴中冷却。加入硼烷(2.7ml 2M二甲硫络合物的乙醚溶液)，15分钟后除去冰浴。将反应混合物回流4小时，再让它冷却至室温。小心加入1.0ml10％HCl并将混合物搅拌过夜。真空浓缩，再加入冰冷的THF(约15ml)，产生沉淀，滤出沉淀，并真空干燥，得到0.81g为灰白色盐的粗产物。该物质无需任何进一步纯化就可用于后续反应步骤。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.88-0.95(m，3H)，1.27-1.45(m，8H)，1.66-1.79(m，2H)，3.03-3.10(m，2H)，4.27(s，2H)，7.06-7.17(m，2H)，7.62(m，1H)。
13C NMR(100MHz，CD3OD)δ14.3，23.6，27.1，27.5，29.8，32.7，45.0(d)，48.9，105.4(t)，113.3(dd)，134.8(dd)。(非质子化碳未报告。)(iii)(2S)-3-(4-{2-[(2，4-二氟苄基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸乙酯向{4-[(2S)-2，3-二乙氧基-3-氧代丙基]苯氧基}乙酸(0.104g，0.35mmol)的二氯甲烷(3.5ml)溶液中加入N-(2，4-二氟苄基)-N-庚胺盐酸盐(0.098g，0.35mmol)和DMAP(0.094g，0.77mmol)，再加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(0.067g，0.35mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，有机相用5％HCl(3×25ml)、NaHCO3水溶液(25ml)和盐水(25ml)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。用溶于二氯甲烷的甲醇(0-1％的梯度)作为洗脱液，在预填充硅胶柱(IsoluteSPE柱，5g Si/25ml)上纯化，得到0.066g(36％)的无色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.81-0.90(m，3H)，1.15(t，3H)，1.17-1.31(m，11H)，1.43-1.65(m，2H)，2.89-3.00(m，2H)，3.24-3.39(m，3H)，3.59(m，1H)，3.96(m，1H)，4.15(q，2H)，4.60(s，2H)，4.69和4.70(2s，2H，旋转异构体)，6.73-6.88(m，4H)，7.08-7.22和7.22-7.31(2m，3H，旋转异构体)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.1，14.3，15.1，22.6，26.9，27.1，28.7，29.0，31.8，38.5，41.5，44.3，46.1，47.2，60.9，66.3，67.5，68.1，80.3，103.6(t)，104.2(t)，111.6(dd)，114.4，114.6，119.8(dd)，120.3(dd)，129.6(dd)，130.4，130.6，131.7(dd)，156.7，156.9，168.2，168.3，172.5。(峰数大于碳原子数是因为存在旋转异构体。氟化碳未报告。)(iv)(2S)-3-(4-{2-[(2，4-二氟苄基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸向(2S)-3-(4-{2-[(2，4-二氟苄基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸乙酯(0.047g，0.090mmol)的THF(2.0ml)溶液中加入水(2.0ml)和氢氧化锂(0.010mg，0.42mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物经真空浓缩，用2M HCl酸化，并用乙酸乙酯(4×25ml)萃取。合并的有机相用盐水(25ml)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，得到0.044g(89％)的无色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.83-0.93(m，3H)，1.17(t，3H)，1.20-1.35(m，8H)，1.45-1.67(m，2H)，2.90-3.14(m，2H)，3.26-3.35(m，2H)，3.42(m，lH)，3.63(m，lH)，4.04(m，1H)，4.63(s，2H)，4.74(s，2H)，6.75-6.90(m，4H)，7.11-7.22和7.25-7.35(2m，3H，旋转异构体)，9.13(bs，1H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.1，15.1，22.6，26.9，27.1，28.6，29.0，31.8，38.0，41.6，44.3，46.2，47.3，66.8，67.3，68.0，79.8，103.7(t)，104.3(t)，104.3，111.7(dd)，114.6，114.7，119.7(dd)，120.1(dd)，129.7(m)，130.1，130.7，131.8(dd)，156.8，157.0，168.6，168.7，175.6。(峰数大于碳原子数是因为存在旋转异构体。氟化碳未报告。)生物学活性制剂将混合物溶于DMSO中，以获得16mM储液。测定前，再用DMSO和培养基稀释储液。
通用化学药品和试剂萤光素酶检测试剂购自Packard，USA。限制性酶得自Boehringer，Vent聚合酶得自New England Biolabs。
细胞系和细胞培养条件U2-OS(人成骨肉瘤)购自ATCC，USA。扩增细胞并在第6代分批冷冻。将细胞在含有25mM葡萄糖、2mM谷氨酰胺或4mM L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、10％胎牛血清的Dulbecco氏改良Eagle培养基(DMEM)中、在5％CO2下进行培养。使用不加钙或镁的磷酸缓冲盐溶液(PBS)。所有细胞培养试剂都得自Gibco(USA)，96孔细胞培养板购自Wallach。
用于异源表达的质粒构建体标准重组DNA技术按照Ausubel(7)描述的方法进行。萤光素酶报道载体pGL5UAS克隆含有克隆到pGL3-启动子(Promega)的SacI/XhoI位点上的5个拷贝GALA DNA结合序列5′-CGACGGAGTACTGTCCTCCGAGCT-3′。用退火的重叠寡核苷酸构建携带UAS位点的SacI/XhoI片断。
所用的表达载体基于pSG5(Stratagene)。所有载体都含有一个编码GAL4的DNA结合结构域(编码数据库检索号P04386的氨基酸位置1-145)的EcoRI/NheI片断并与一个编码多瘤病毒T抗原核定位序列的片断符合读框地融合。
用产生NheI/KpnI粘端(5′-CTAGCGCTCCTAGAAGAAACGCAAGGTTGGTAC-3′)的退火重叠寡核苷酸构建所述核定位序列。来自人PPARα和小鼠PPARα以及人PPARγ和小鼠PPARγ的配体结合结构域经PCR扩增作为KpnI/BamHI片断，并符合读框地克隆到GAL4 DNA结合结构域和核定位序列中。所用的所有质粒构建体序列经测序加以证实。将下列表达载体用于瞬时转染


1是指用于表达配体结合结构域的核苷酸在所登录的数据库中的位置。
瞬时转染转染前，将冷冻的第6代细胞储液解冻，并扩增到第8代。将汇合细胞用胰酶消化，洗涤并以270xg离心2分钟而沉淀。将细胞沉淀重悬于冷PBS中，至细胞浓度约为18×106细胞/ml。加入DNA后，将细胞悬液在冰上保温约5分钟，然后以每批0.5ml的量、在Biorad′s Gene PulserTM中以230V、960μF进行电穿孔。每批0.5ml细胞中加入总量为50μg的DNA，包括2.5μg表达载体、25μg报道载体和22.5μg非特异性DNA(pBluescript，Stratagene)。
电穿孔后，细胞用无酚红的DMEM稀释到浓度为320′000细胞/ml，并用约25′000细胞/孔接种96孔板。为了让细胞恢复，接种的板于37℃温育3-4小时后，再加入试验化合物。在PPARα测定中，给所述细胞培养基补充树脂-活性炭纯化的胎牛血清(FCS)，以避免FCS中脂肪酸成分引起的背景活化。按下列方法制备树脂-活性炭纯化的FCS向500ml热灭活FCS中，加入10g活性炭和25g Bio-Rad分析级阴离子交换树脂200-400目，然后将该溶液在室温下在磁力搅拌器上保持过夜。第2天，将FCS离心，并将纯化步骤重复4-6小时。第2次处理后，将FCS离心并过滤除菌，以去除残留的活性炭和树脂。
测定程序将溶于DMSO的化合物储液，在主板上稀释到合适浓度范围。从主板上，用培养基稀释化合物，以获得终剂量的试验化合物溶液。
将每孔细胞培养基用量调整到75μl后，加入50μl试验化合物溶液。使瞬时转染细胞接触化合物达约24小时，然后进行萤光素酶检测分析。为了进行萤光素酶分析，将100μl分析试剂手工加入到各孔中，将板静置约20分钟，以使细胞裂解。裂解后，用1420多孔计数器(1420 Multiwell counter，Victor，得自Wallach)测定萤光素酶活性。
参比化合物用TZD吡格列酮作为激活人PPARγ和鼠PPARγ的参比物质。用5，8，11，14-二十碳四烯酸(ETYA)作为人PPARα的参比物质。
计算和分析为了计算EC50值，建立一个浓度-效应曲线。所用的数值得自2次或3次独立测量的平均值(在减去背景平均值后)，并以参比化合物获得的最大激活百分数来表示。将各数值对所述试验化合物浓度的对数值作图。在数据点间用线性内插法估算EC50值，并计算要达到由参比化合物获得的最大激活的50％所需要的浓度。
式I化合物对PPARα的EC50小于0.5μmol/L，优选化合物对PPARα的EC50小于0.05μmol/L。式I化合物的基团是经选择的，以使它们对PPARα比对PPARγ具有更大活性。据信这种关系对所述化合物的药理学活性及其治疗特性是重要的。
另外，本发明的化合物显示改进的DMPK(药物代谢和药物动力学)特性，例如它们显示改进的体外代谢稳定性，并且还显示良好的体内剂量反应曲线。所述化合物也具有有价值的毒理学分布图。
权利要求
1.一种式I化合物的S对映体、及其药学上可接受的盐、溶剂合物、晶形和前体药物， 其中R1代表2，4-二氟苯基或环己基。
2.一种化合物，所述化合物选自(2S)-3-(4-{2-[(环己基甲基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸；和(2S)-3-(4-{2-[(2，4-二氟苄基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸；及其药学上可接受的盐、溶剂合物和晶形。
3.(2S)-3-(4-{2-[(环己基甲基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸、及其药学上可接受的盐、溶剂合物和晶形。
4.(2S)-3-(4-{2-[(2，4-二氟苄基)(庚基)氨基]-2-氧代乙氧基}苯基)-2-乙氧基丙酸、及其药学上可接受的盐、溶剂合物和晶形。
5.一种药物制剂，所述制剂包含一种权利要求1-4中任一项的化合物以及药学上可接受的辅料、稀释剂和/或载体。
6.一种治疗或预防无论是否与胰岛素抵抗相关的脂质异常即血脂异常的方法，所述方法包括给予有需要的哺乳动物一种权利要求1-4中任一项的化合物。
7.一种权利要求1-4中任一项的化合物在制备用于治疗无论是否与胰岛素抵抗相关的脂质异常即血脂异常的药物中的用途。
8.一种治疗或预防II型糖尿病的方法，所述方法包括给予有需要的哺乳动物有效量的一种权利要求1-4中任一项的式I化合物。
9.一种用于制备式I化合物的方法，所述方法包括使以下式II化合物与一种脱保护剂反应 其中R1和R2和n如上定义，而R3代表羧酸羟基的保护基。
10.一种式II化合物， 其中R1和R2和n如上定义，而R3代表羧酸羟基的保护基，与一种脱保护剂。
11.一种式III化合物， 其中R2如上定义。
12.一种药用组合物，所述组合物包含一种权利要求1-4中任一项要求保护的化合物，所述化合物与其它用于治疗诸如高血压、高脂血症、血脂异常、糖尿病和肥胖症的动脉粥样硬化的发展与进程相关疾病的治疗药联合使用。
13.一种药用组合物，所述组合物包含与其它PPAR调节剂联合使用的一种权利要求1-4中任一项要求保护的化合物。
14.一种药用组合物，所述组合物包含与一种胆固醇降低剂联合使用的一种权利要求1-4中任一项要求保护的化合物。
15.一种药用组合物，所述组合物包含与一种HMG-CoA还原酶抑制剂联合使用的一种权利要求1-4中任一项要求保护的化合物。
16.一种药用组合物，所述组合物包含与阿托伐他汀或其药学上可接受的盐、溶剂合物、晶形或前体药物联合使用的一种权利要求1-4中任一项要求保护的化合物。
17.一种药用组合物，所述组合物包含与罗苏伐他汀或其药学上可接受的盐联合使用的一种权利要求1-4中任一项要求保护的化合物。
18.一种药用组合物，所述组合物包含与一种IBAT抑制剂联合使用的一种权利要求1-4中任一项要求保护的化合物。
19.一种权利要求18的药用组合物，其中所述IBAT抑制剂选自下列化合物之一1)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-1′-苯基-1′-[N′-(羧甲基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；2)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(羧甲基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；3)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-1′-苯基-1′-[N′-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；4)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-1′-苯基-1′-[N′-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；5)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；6)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；7)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(2-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；8)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(2-羧乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；9)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(5-羧戊基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；10)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(2-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；11)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{α-[N′-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]-2-氟代苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；12)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(R)-(2-羟基-1-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；13)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(R)-(2-羟基-1-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂14)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-{N-[(R)-α-(N′-{(R)-1-[N″-(R)-(2-羟基-1-羧乙基)氨基甲酰基]-2-羟基乙基}氨基甲酰基)苄基]氨基甲酰基甲氧基}-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；15)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{α-[N′-(羧甲基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；16)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{α-[N′-((乙氧基)(甲基)磷酰基-甲基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；17)1，1-二氧代-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲硫基-8-{N-[(R)-α-(N′-{2-[(羟基)(甲基)磷酰基]乙基}氨基甲酰基)苄基]氨基甲酰基甲氧基}-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；18)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N′-(2-甲硫基-1-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；19)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-{N-[(R)-α-(N′-{2-[(甲基)(乙基)磷酰基]乙基}氨基甲酰基)-4-羟基苄基]氨基甲酰基甲氧基}-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；20)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-{N-[(R)-α-(N′-{2-[(甲基)(羟基)磷酰基]乙基}氨基甲酰基)-4-羟基苄基]氨基甲酰基甲氧基}-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；21)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[(R)-N′-(2-甲基亚磺酰基-1-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；22)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲氧基-8-[N-{(R)-α-[N′-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基]-2，3，4，5-四氢-1，5-苯并硫氮杂；23)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((R)-1-羧基-2-甲硫基-乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；24)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧基-2-(R)-羟丙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；25)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧基-2-甲基丙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；26)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧丁基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；27)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧丙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；28)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；29)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧基-2-(R)-羟丙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；30)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-(2-磺基乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；31)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧乙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；32)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((R)-1-羧基-2-甲硫基乙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；33)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-{(S)-1-[N-((S)-2-羟基-1-羧乙基)氨基甲酰基]丙基}氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；34)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧基-2-甲基丙基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；35)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧丙基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；36)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-[N-((R/S)-α-{N-[1-(R)-2-(S)-1-羟基-1-(3，4-二羟基苯基)丙-2-基]氨基甲酰基}-4-羟基苄基)氨基甲酰基甲氧基]-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；37)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-(2-(S)-3-(R)-4-(R)-5-(R)-2，3，4，5，6-五羟基己基)氨基甲酰基]-4-羟基苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂；和38)1，1-二氧代-3，3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-(2-(S)-3-(R)-4-(R)-5-(R)-2，3，4，5，6-五羟基己基)氨基甲酰基]苄基}氨基甲酰基甲氧基)-2，3，4，5-四氢-1，2，5-苯并硫杂二氮杂。或其药学上可接受的盐、溶剂合物、这类盐的溶剂合物或前体药物。
全文摘要
本发明提供式(I)化合物的S对映体、及其药学上可接受的盐、溶剂合物、晶形和前体药物，其中R
文档编号A61K31/195GK1620423SQ02828155
公开日2005年5月25日 申请日期2002年12月18日 优先权日2001年12月19日
发明者E·－L·阿尔斯特马克林德施泰, A·C·奥尔松, L·李 申请人:阿斯特拉曾尼卡有限公司