一种库拉索芦荟提取物在预防和治疗糖尿病方面的应用方法

专利名称：：一种库拉索芦荟提取物在预防和治疗糖尿病方面的应用方法
技术领域：
：本发明属于生物医学领域，尤其是指一种使用库拉索芦荟的提取物和/或其他天然产物，和/或其他西药以预防和治疗糖尿病的方法。
背景技术：
：作为常见病、多发病之一的糖尿病进入新千年以来正以越来越惊人的速度增长。全球范围来看，随着人们生活水平的不断提高、饮食结构的改变、劳动强度的改善，而应激状态的增多，糖尿病的发病数已从1993年的1.35亿上升至2000年的1.6亿，到2004年将更上升至2.4亿。在我国，据最近的流行病学调查显示，我国的糖尿病发病率已由15年前的0.67％上升至近年来的3.21％，其中II型糖尿病占总数的95％以上，且男女无显著性差异。1998年我国糖尿病患者已达2000多万人。专家们估计，如果糖尿病得不到有效控制，至2010年，我国发病人数将达6000万。此外，糖尿病发病率的增加还和我国人口老龄化有关，在年龄大于60岁的人群中，糖尿病的发病率已达11.62％。属于百合科芦荟属植物的芦荟，种类繁多，现已知的植物已超过300种。芦荟是一种药用价值很高的植物，作为药用，已有数百年历史。其可应用的范围遍及内、外、妇、儿、皮肤、五官等科，如用于通便、抗炎、免疫、抗菌、伤口和烧伤愈合以及抗溃疡乃至抗肿瘤等等。为此，芦荟的药用已为马丁代尔副药典所收载。芦荟用于糖尿病，最早可追溯到阿拉伯半岛的民间验方。至今科威特等地还在使用一份由五种天然产物(含芦荟)组成的方剂，用于糖尿病的防治。而现代意义的研究，则只是最近十多年的事情。1985年，Agarwal在尝试用草药预防动脉粥样硬化心脏病的过程中，注意到在每日二次服用包括芦荟在内的二种天然产物以后，受试者中患糖尿病人群的血中胆固醇、血糖和血脂均显著下降。由于使用了二种天然产物，所以我们不能判定糖尿病患者血糖等的下降应归功于芦荟还是另一种天然产物或是二种天然产物共同作用的结果。对引起这种下降的机理，研究人员猜测可能与高纤维物质相关。1986年，Ghannam等报道了市售(沙特阿拉伯)芦荟汁的干浸膏对于五位II型糖尿病患者和由四氧吡啶(alloxan)诱发的糖尿病鼠的有统计学意义的降血糖效果。与Agarwal的实验不同，Ghannam等仅仅用了芦荟。所以人们有理由相信这种降血糖效果源自于芦荟或其中的某一或某几个成份。但令人不无遗憾的是，实验所用的芦荟汁干浸膏直接购自利亚得商店。传统上阿拉伯半岛的居民是劈开各种芦荟的叶子，收集流出来的汁，在空气中蒸发得到棕色的干浸膏。因为购自于商店，所以我们无从知道所做实验的干浸膏是那一种或那几种芦荟的汁干燥得来的。但这报告至少说明了有一种或数种芦荟中含有降血糖的有效组份。类似地，1987年，Al-Awadi等在对科威特糖尿病患者所使用的五种天然产物混合物进行研究时，报告了五种组分之一的芦荟浸膏可以有效地增加正常鼠和糖尿病鼠的葡萄糖耐受性。1990年，仍是沙特阿拉伯的学者Ajabnoor用翠叶芦荟的流出物和其中的苦的组分对四氧嘧啶诱发的糖尿病鼠实验结果证实了Ghannam的实验发现，即芦荟中含有能有效降低血糖的组分，其机理可能是刺激β细胞合成或释放胰岛素。但就在第二年(1991年)，墨西哥学者Roman-Ramas等发表的实验结果却报告翠叶芦荟没有有效的降血糖效果。还是在1991年，Al-Awadi在1987年研究的基础上用STZ(streptozotocin)诱发的糖尿病鼠试图揭示芦荟的降血糖机理。研究表明包括芦荟在内的五种天然产物的降血糖效果至少部分源自于对肝脏葡萄糖异生的抑制作用。1994年，Koo的实验却有相反的发现，Koo报道了一种含芦荟凝胶的保健品不是降低而是升高四氧嘧啶诱发的糖尿病鼠的血糖。此外，Hikino等人于1985年，Beppu等人于1993年分别报道了从源自日本的一种芦荟品种(A.arborescens)，中分离了两种显示有降血糖作用的组分。2001年，Okyar等报道了他们分别从磷酸盐缓冲的生理盐水提取翠叶芦荟叶的肉质部分或稀释翠叶芦荟叶的渗出物以分别考察这二部分物对正常鼠和STZ诱发的I型、II型糖尿病鼠血糖的影响情况。他们的实验表明翠叶芦荟的肉质部分对I型和II型糖尿病有降血糖作用，但翠叶芦荟的渗出物则不能降低血糖，反而升高血糖。仅仅以上述简略的小结不难理解芦荟对血糖影响研究的复杂性。我们有理由相信，芦荟的品种、产地、收集部位、提取方法以及所用糖尿病的动物模型均可能影响研究结果。发明目的本发明目的是提供一种库拉索芦荟提取物在预防和治疗糖尿病方面的应用方法，包括该提取物在制备和防治糖尿病的药物和保健品中的应用。以确定利用库拉索芦荟提取物在治疗糖尿病中的疗效，提供一种新的治疗糖尿病的药物或保健品及其应用方法。本发明所指的库拉索芦荟提取物特指使用中国发明专利CN1065015A所提取的库拉索芦荟提取物。其主要技术方案是根据糖尿病患者年龄、人种、健康状况、性别、饮食、病情、病程、给药时间、给药途径和药物联合使用等因素，每日所用库拉索芦荟提取物的总量在每公斤体重1.0mg至1000mg之间。其中每日所用库拉索芦荟提取物的总量在每公斤体重5.0mg至500mg之间。所用库拉索芦荟提取物的最佳总量在每日每公斤体重10～250mg之间。将库拉索芦荟提取物制成药用制剂或保健用制剂后服用。药用制剂或保健用制剂可以散方或以单位剂量形式供使用。所述单位剂量形式为一个由库拉索芦荟提取物以及其他药用或食品用原料、辅料或载体的混合物。所述单位剂量形式可以含有或不含其它天然产物或天然产物提取物。所述单位剂量形式也可以含有或不含其它活性化合物。所述单位剂量形式为片剂或胶囊剂或滴剂或丸剂或散剂或膏剂或霜剂或溶液剂或混悬剂或乳浊剂或注射剂或植入剂或贴剂或涂剂或喷雾剂或任一形式的保健品。药用制剂或保健用制剂以口服或注射或吸入或腔道或皮肤透入或植入等途径给药。在众多的芦荟品种中，库拉索芦荟已在我国南方一些省份，如广东、广西、云南、海南、福建、四川、贵州等，有栽培并已在食品和化妆品中有应用。此外，这一品种亦是国外种植、研究和使用较为普遍的芦荟品种之一。本发明使用库拉索芦荟的另一原因是发明人自1990年开展芦荟专题研究以来，早已建立了专门的库拉索芦荟的科研种植基地。这样可以从药材源头保证所研究药材的真实性和质量的一致性。除了发明所使用芦荟品种、产地的唯一性以外，本发明严格遵循中国发明专利“化妆品及药用芦荟的提取精制方法”(中国专利号CN1065015A)，采收新鲜的芦荟叶按专利规定的工艺提取和精制。为了确证经上述方法得到的库拉索芦荟提取物的质量，我们用高效液相—质谱仪分离开提取物内的所有组分并得到相应的高压液相色谱图、紫外光谱图和质谱图。本发明使用优秀的糖尿病模型，成年雄性Zucker糖尿病鼠，的口服葡萄糖耐受性试验表明库拉索芦荟的提取物具有明显的降血糖效果。此外，以保健品方式制成的含该提取物的片剂为糖尿病患者试用的结果显示，该提取物可以有效地降低糖尿病患者的血糖，26例患者的总有效率为84.6％。临床上还同时观察到该提取物可以消除或改善患者头昏、眼花、善饥、恶心等症状。本发明提供含库拉索芦荟提取物的药物或保健品用以治疗或预防糖尿病及其它疾病。本发明含库拉索芦荟提取物的药物或保健品在糖尿病治疗或预防过程中，可以是单独使用，也可以是与另一种、二种或更多种药物或保健品联合使用。这种联合使用可以是同时给药，也可以用不同先后次序给药。这里所说的联合使用，可以是与其他西药联合使用，也可以是与其他天然药物联合使用。本发明的含库拉索芦荟提取物的药物或保健品可以经口服摄入也可以经注射、吸入、腔道、皮肤透入或植入给药。口服时，每日所用库拉索芦荟提取物的总量在每公斤体重1.0mg至1000mg之间。一般地说，应该在5.0mg至500mg之间，而最佳范围应在10-250mg之间。每日给药次数依病种而定。多数情况下，每日不多于四次。应当指出的是，给药剂量可能受多种因素影响，如年龄、体重、人种、健康状况、性别、饮食、病情、病程以及给药时间、途径和药物的联合使用等。于是最终给药方案应由医生根据患者的具体情况而定。本发明含库拉索芦荟提取物的药物或保健品可使用各类药品或保健品生产技术进行制剂或保健品的加工。相应制剂和保健品可根据制剂和保健品的性质、使用对象和功能、市场承受能力选用符合国家或地区药典、保健品标准或相关规定的药用或保健品辅料，佐料或材料。本发明的含库拉索芦荟提取物的药物或保健品可以片剂、胶囊、滴剂、丸剂、散剂、膏剂、霜剂、溶液剂、混悬剂、乳浊剂、注射剂、植入剂、贴剂、涂剂、栓剂、喷雾剂等剂型使用。使用途径可以经口服或经注射、吸入、腔道、皮肤透入、植入等给药。与现有技术相比的有益效果与
背景技术：
相比，本发明至少有以下优点1、仅仅使用芦荟，不含任何其他天然产物；2、仅仅使用库拉索芦荟，不含任何其他芦荟品种；3、产地明确；4、收集部位明确，即新鲜库拉索芦荟叶。5、加工和提取方法明确；6、提取物质量受控制；7、动物模型更好。背景资料中的动物模型均是用四氧吡啶或STZ破坏正常鼠的胰岛素细胞，突然造成正常鼠糖代谢的异常。这与人的糖尿病，尤其是II型糖尿病的病理过程有较大差异。本发明所使用的Zucker糖尿病鼠，出生后饲养几周，就是II型糖尿病。美国研究人员用此种鼠研究糖尿病的机理和抗糖尿病药的药效。有临床研究资料，而且有一定的样本数。背景资料中，单纯使用芦荟提取物研究其对患者影响同时又有降血糖报告的只有Ghannam(1996年)，其结果来自五位II型糖尿病患者。具体实施例方式实施例一，库拉索芦荟提取物的高压液相——质谱分析材料与方法试剂三氟醋酸、乙腈均购自美国Sigma-Aldrich公司；仪器HPLC-ESI-MS美国惠普公司；高压液相色谱仪柱ZorbaxSB-Phenyl；方法高压液相色谱仪线性梯度洗脱0分钟，100％水(含0.1％三氟醋酸)；60分钟，100％乙腈；紫外检测器检测，检测波长232nm；质谱仪检测，带正离子检测器的75伏Fragmentor。结果与讨论提取物得到较为理想的分离，约30个组分被分离开。其中有6个组分的相对含量超过4.5％。这6个组分的保留时间分别为16.8分；17.8分；23.5分；25.0分；25.3分；25.8分。实施例二；库拉索芦荟提取物对Zucker糖尿病鼠口服葡萄糖耐受性试验的影响材料与方法受试鼠7周的雄性Zucker糖尿病鼠购自美国GeneticModels，Inc。Zucker糖尿病鼠一般在7周时出现高血糖。每只鼠在到达实验室时均称重并从尾部抽血测定葡萄糖含量以确证高血糖。库拉索芦荟提取物由我们实验室提取，以HPLC-ESI-MS确证；库拉索芦荟提取物为暗绿色。实验时，加蒸馏水配成溶液。实验方法3-1.1小时口服葡萄糖耐受性试验受试鼠和对照鼠均禁食过夜。试验日的早晨分别给受试鼠胃饲库拉索芦荟水溶液，对照鼠胃饲等体积蒸馏水。一小时后，分别给受试鼠和对照鼠胃饲等体积50％葡萄糖水溶液。分别于0分，30分，45分，60分，90分和120分检测受试鼠和对照鼠的血糖水平。3-2.第四日口服葡萄糖耐受性试验第一次口服葡萄糖耐受性试验后，受试鼠和对照鼠均休息一周。其间进食和饮水均不受限制。一周后，受试鼠分别于上午、下午各一次胃饲库拉索芦荟水溶液(将单次剂量分成相等二份)；而对照鼠则在相应时间内胃饲等体积蒸馏水。连续三日后，禁食过夜。第四日的早晨分别给受试鼠胃饲库拉索芦荟水溶液，对照鼠胃饲等体积蒸馏水。一小时后，分别给受试鼠和对照鼠胃饲等体积50％葡萄糖水溶液。分别于0分，30分，45分，60分，90分和120分检测受试鼠和对照鼠的血糖水平。结果与讨论表1.库拉索芦荟提取物对Zucker糖尿病鼠二小时口服葡萄糖耐受性试验的影响表2，库拉索芦荟提取物对Zucher糖尿病鼠第四日口服葡萄糖耐受性试验的影响表1和表2的结果有力地证明了库拉索芦荟提取物的降血糖作用。我们从中可以得到以下的初步结论1、无论是1小时还是第四日的口服葡萄糖耐受性试验，库拉索芦荟提取物均能显著下降Zucker糖尿病鼠的血糖水平；2、与对照鼠比较，受试鼠不论在一小时还是在第四日的口服葡萄糖耐受性试验中，血糖峰值下降快而早；3、与一小时口服葡萄糖耐受性试验比较，第四日的降血糖效果更为明显。这至少表现在以下二个发面(i)血糖峰值下降更快，在一小时代谢试验中，血糖峰值从45分钟以后开始下降，而在第四日试验中，血糖峰值则从30分钟以后就开始下降；(ii)与对照鼠相比较，血糖峰值更低。在一小时试验中，受试鼠血糖峰值约为对照鼠血糖峰值的2.5分之一；而在第四日试验中，受试鼠血糖峰值约为对照鼠峰值的五分之一。这样的试验结果说明，与大多数中药类似，库拉索芦荟提取物降血糖效果会随着服用时间的延长，更为有效。这一发现无疑对糖尿病这种以老年人为主的慢性病的治疗是有积极意义的。实施例三，库拉索芦荟提取物对糖尿病患者的治疗作用观察对象确诊为II型(非胰岛素依赖型)糖尿病患者。诊断标准依照1990年世界卫生组织提出的糖尿病诊断标准，二次空腹血糖≥7.8mmol/L或餐后2小时血糖≥11.1mmol/L；尿糖检查阳性，伴有多饮、多尿、善饥、体重减轻等症状。治疗方案药物组成库拉索芦荟提取物片，每片含提取物100mg。用法与用量每日早、中、晚各服1次，每次3-4片，一个月为一个疗程，重症者，原用降糖西药可逐渐减少，直至停用。疗效标准按我国第五届糖尿病学术会议疗效标准制定。(i)显效空腹血糖下降至正常5.5mmol/L以下或下降幅度＞4.5mmol/L，且症状消失，空腹尿糖定性转阴。(ii)有效空腹血糖下降＞3mmol/L，症状明显减轻，空腹尿糖定性原阳性者加号减少＞2个。(iii)无效症状无明显改变，空腹血糖下降＜3mmol/L。结果与讨论结果见表3。表3库拉索芦荟提取物对糖尿病患者有效率观察<tablesid="table3"num="003"><tablewidth="772">病例数无效有效显效总有效率％26例比例％例比例％例比例％415.4103812464.6</table></tables>从我们的初步临床结果来看，库拉索芦荟提取物对于糖尿病，尤其是II型糖尿病确实有治疗作用。单独应用该药总有效率在84.6％，其中有效38％，显效46％。临床观察证实，库拉索芦荟提取物的降糖效果持久、稳定。有一名患者，已年过7旬，患糖尿病五年多，多食、多饮、多尿，长期用药反复发作。使用库拉索芦荟提取物以后，血糖得到很好的控制，二年多来一直正常。这种现象也与我们在实施例二中Zucker糖尿病鼠所观察到的药理试验结果是一致的。除了持久稳定的降血糖效果以外，库拉索芦荟的提取物还能明显改善糖尿病患者头昏、眼花、善饥、恶心等症状。这至少说明库拉索芦荟提取物在控制糖尿病患者血糖及其它症状方面均是有效的。此外，由于本品是以保健品形式供患者使用的，部分重症患者并没有立即停止原降糖西药(如拜糖平等)，而是逐渐减少，直至停用。在与原降糖西药平行使用的过程中，患者并未感到任何不适。尽管我们的样本还不够大，但这至少预示库拉索芦荟提取物是可以单独使用，也有可能与拜糖平等降糖西药联合使用。初步临床试验的26名患者中，短的服用本品一个月，长的已达数年，迄今尚无不良反应的报告。这至少说明库拉索芦荟提取物可能是安全的。权利要求1.一种库拉索芦荟提取物在预防和治疗糖尿病方面的应用方法，其特征是根据糖尿病患者年龄、人种、健康状况、性别、饮食、病情、病程、给药时间、给药途径和药物联合使用等因素，每日所用库拉索芦荟提取物的总量在每公斤体重1.0mg至1000mg之间。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是每日所用库拉索芦荟提取物的总量在每公斤体重5.0mg至500mg之间。3.根据权利要求1所述的方法，其特征是所用库拉索芦荟提取物的总量在每日每公斤体重10～250mg之间。4.根据权利要求1所述的方法，其特征是将库拉索芦荟提取物制成药用制剂或保健用制剂后服用。5.根据权利要求4所述的方法，其特征是药用制剂或保健用制剂以散方或以单位剂量形式供使用。6.根据权利要求5所述的方法，其特征是所述单位剂量形式为一个由库拉索芦荟提取物以及其他药用或食品用原料、辅料或载体的混合物。7.根据权利要求6所述的方法，其特征是所述单位剂量形式含有或不含其它天然产物或天然产物提取物。8.根据权利要求7所述的方法，其特征是所述单位剂量形式含有或不含其它活性化合物。9.根据权利要求5所述的方法，其特征是单位剂量形式为片剂或胶囊剂或滴剂或丸剂或散剂或膏剂或霜剂或溶液剂或混悬剂或乳浊剂或注射剂或植入剂或贴剂或涂剂或喷雾剂或任一形式的保健品。10.根据权利要求5所述的方法，其特征是药用制剂或保健用制剂以口服或注射或吸入或腔道或皮肤透入或植入等途径给药。全文摘要本发明属于生物医学领域，尤其是指一种使用库拉索芦荟的提取物和/或其他天然产物，和/或其他西药以预防和治疗糖尿病的方法。其主要技术方案是根据糖尿病患者年龄、人种、健康状况、性别、饮食、病情、病程、给药时间、给药途径和药物联合使用等因素，每日所用库拉索芦荟提取物的总量在每公斤体重1.0mg至1000mg之间；在服用时可以将库拉索芦荟提取物制成药用制剂或保健用制剂，其中的药用制剂或保健用制剂可以散方或以单位剂量形式供使用。以确定利用库拉索芦荟提取物在治疗糖尿病中的疗效，提供一种新的治疗糖尿病的药物或保健品及其应用方法。文档编号A61P3/10GK1575803SQ0311264公开日2005年2月9日申请日期2003年1月7日优先权日2003年1月7日发明者程景才,万金志申请人:无锡杰西医药科技有限公司