专利名称：防止局部缺血损伤的保护溶液的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种溶液组合物，用于保护器官尤其是心脏、肺、肾、肝、胰腺和血管系统，以便必要时可以对血液不流通的局部缺血器官进行较长时间的手术，用于保存该移植器官，使其在运输和存放过程中相对于其他保存方法降低组织的损伤，或者用于缺血器官的再灌注(Reperfusion)。本发明提供了合适的溶液以及符合GMP细则要求的制备方法。
Melrose在1955年引入高钾血心搏停止后，心脏外科学就可以对无血、不搏动的心脏进行复杂的手术了。尽管用当时的心脏麻痹溶液只可以手术40分钟，却第一次使改建手术在先天的心脏畸形和使用心瓣膜假体中成为可能。Banard在1967年的第一次完成的心脏移植竖立了心脏外科学的里程碑。
进一步研究的目标在于，用合适的溶液和相应的使用方法来延长当时仍然很有限的手术时间。Bretschneider的工作组早在60年代就已经能够用改进心肌保护的新配方来显著地延长局部缺血时间。第一次通过脱去钠诱发心搏停止，并利用底物例如普鲁卡因、乙酰胆碱和奴佛卡因保护细胞膜，以抵制细胞内水肿的形成。
欧洲专利说明书12272描述了一种心脏、肾和其他器官的保护性溶液，其特征是一种基于组氨酸+组氨酸-HCl的缓冲体系，此外还含有钠、钾和镁离子以及一种多元醇或一种糖。借助于该保护性溶液可使允许的缺血时间达到未经处理的心脏所允许缺血时间的8倍。欧洲专利54635描述了该溶液的进一步的改进，其中在用保护性溶液对器官持续灌注8-10分钟期间，通过添加需氧代谢的α-酮戊二酸在柠檬酸循环的积极影响降低ATP损失。在此后的数年间，临床医师和生理学家的关注点在于结束缺血的时间阶段，该阶段通过加热低温低氧的器官和再灌注来终止，并在此阶段器官重新恢复其全部功能。研究表明，恰恰在此所谓的再灌注阶段经历了各种不同的病理生理学过程，这些过程均由再灌注损伤(I-R-损伤)这一概念所涵盖。在此主要是内皮细胞损伤，它可部分地解释为发炎过程的起因，部分地解释成其结果，在其发病机理上活性氧形式显示具有重要的作用。此外，近年来证实保护器官所使用的冷却是作为独立的损伤因素，当时使用的保存溶液均不能抑制该损伤而提供一种保护。
本发明的目的在于，在局部缺血和再灌注过程中抑制或降低以下病理生理学过程●局部缺血损伤●冷却损伤(冷却引起的细胞的凋亡)●再灌注损伤●炎症过程权利要求1或权利要求8各自提供了一种器官保护溶液，用以实现本发明的目的。从心麻痹和器官保存方面所述的细胞和组织损伤机理出发，对器官保护溶液的组合物提出了一系列要求。为了实现这些要求，我们找到了权利要求1和/或8所述的可以用来配制新型有效的器官保护溶液的物质。该溶液组合物如此选择，使其首先要对上述的损伤性组份提供一种有效的保护。通过针对该机理且无毒的组份可以明显降低保存损伤。避免了迄今为止所用的保存溶液在(偶尔或在吻合期间所需要的)器官加热时已知的毒性。以此方式改进了相应器官组织的功能和生存能力，并提高了局部缺血和冷藏的耐受力；从而可能达到更长的器官保存时间。这也可以对后勤运输有所贡献，改善用于移植的器官的供应状况。
业已证明，使用异羟肟酸衍生物是有利的，其中异羟肟酸氮上氢原子被C1-C20烷基、芳基或烷芳基所取代。
另外，建议在异羟肟酸衍生物中异羟肟酸碳上的氢原子被C1-C20的烷基、芳基或烷芳基所取代，其中该取代基也可以含有杂原子和/或羟基、氨基、甲氧基基团。
有利的还有异羟肟酸氮上的取代基与异羟肟酸碳上的取代基形成一个封闭的环的情况。
本发明提议含有下列组中的一或多个化合物和/或其盐乙酰基异羟肟酸，乙酰基-N-甲基异羟肟酸，N-苄基乙酰基异羟肟酸，己烷异羟肟酸，己烷-N-甲基异羟肟酸，
苯氧肟酸，N-甲基苯氧肟酸，邻羟苄基异羟肟酸，邻羟苄基-N-甲基异羟肟酸，邻羟苄基-N-苄基异羟肟酸，2-苯基乙酰基异羟肟酸，2-苯基乙酰基-N-甲基异羟肟酸，3，4-二甲氧基苯氧肟酸，3，4-二甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸，2，3-二甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸，2，4-二甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸，3，5-二甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸，2，4-二羟基苯氧肟酸，2，3-二羟基苯氧肟酸，3，4-二羟基苯氧肟酸，3，4， 5-三甲氧基-苯氧肟酸，3，4，5-三甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸，4-羟基-3-甲氧基-苯氧肟酸，2-羟基-3-甲氧基-苯氧肟酸，2-羟基-5-甲氧基-苯氧肟酸，2-羟基-3-甲基-异喹诺酮，4-氯-N-甲基-苯氧肟酸，6-环己基-1-羟基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮。
另外，添加去铁胺也是有利的，其中去铁胺的浓度优选最多约10mmol/l。
值得推荐的还有添加6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸的衍生物或其相应的甲酯。
合适的是缓冲液基于N-乙酰基组氨酸，特别是基于N-乙酰化的组氨酸，必要时与合适的有积碱相结合，例如N-甘氨酰组氨酸/N-甘氨酰组氨酸氢氯化物或者N-乙酰基组氨酸/赖氨酸和/或精氨酸和/或胆碱。
有利的是溶液含有赖氨酸和/或赖氨酸衍生物的一定的阳离子含量，优选含赖氨酸的二肽，以及必要时含有天冬氨酸的一定量的阴离子。
有针对性的是溶液中异羟肟酸和/或其衍生物的浓度最多为约10mmol/l。
还优选溶液中Trolox的浓度最多为约10mmol/l。
N-乙酰基组氨酸/N-乙酰基组氨酸-的浓度为约20mmol/l-265mmol/l。
另外，建议溶液中用浓度为约10mmol/l-120mmol/l的钠作为电解质。也可以代之以或者补充含有浓度为约5mmol/l-25mol/l的钾。
另外，应当有含有合适浓度为约3mmol/l-27mmol/l的镁。
最后，含有合适浓度为约0.0001mmol/l-1.5mmol/l的钙是有利的。
特别提议赖氨酸和/或其衍生物，优选作为含赖氨酸的二肽，适当的是浓度最多为约140mmol/l。
溶液中含有浓度最多为约140mmol/l的天冬氨酸是有利的。
当溶液中含有氯化物时，建议天冬氨酸相对于氯化物应当过量。
经过证明的还有α-酮戊二酸的含量的合适浓度为约1mmol/l-9mmol/l。
溶液中含有，适当浓度最多为约140mmol/l的渗压剂是有利的。
为了制备任一项上述要求所述的溶液，提出如下一种方法，其中使用过量的水，合适地为所需水量的约90％，在搅拌条件下溶解电解质，接着添加缓冲液以及异羟肟酸和/或其衍生物，然后调节pH值，添加一或多种渗压剂，用水将溶液补充到所需要的体积。
为了得到异羟肟酸和/或其衍生物，合适的是可以使用低级醇和/或DMF和/或THF作为溶剂。
本方法特别优选用羧酸酯在碱性催化条件下进行反应。
按照权利要求5，本发明可以用来减轻或避免在心肌梗塞、中风、事故外科手术或手足再灌注后的再灌注损伤。还建议将其用于治疗因血铁过多(例如阿耳茨海默)、由游离基、氧自由基或H2O2造成的细胞损伤引起的疾病。
铁螯合剂可以用来抑制与铁相关的冷却损伤或冷却引发的细胞的凋亡。并不是每种螯合剂都适合用作避免细胞损伤的化合物。例如，EDTA和在Custodiol中含有的组氨酸在此就不太起作用，尽管这些配位体可以形成很强的铁络合物。铁必须以特定的方式与配位体结合，该配位体必须快速并以足够的浓度到达细胞内区室(Kompartiment)。
业已表明，在去铁胺中含有三个的结构单位异羟肟酸I或II作为铁的合适的结构单位或配位体是特别重要的。 式中R1＝直链或带支链的C1-C20烷基、芳基、烷芳基也可以包括杂原子和/或其他取代基如-OH、-NH2等，R2＝H，此外可以与R1相同，且其中R1和R2形成一个环和/或可以含有其他的取代基，例如2-羟基吡啶-N-氧化物和仅仅表示另一种互变异构体的衍生物，其中R1和R2可以由共轭的双键连接形成一个环。由于含有比去铁胺小且亲脂的取代基，该方案可以使一种强的铁螯合剂快速到达细胞内。
简单的异羟肟酸也表明有积极的作用；但对于良好的有效性必须要求特定的亲水/亲脂比。由此可以看到，在异羟肟酸的氮上有烷基取代基的化合物(R2＝烷基)比不取代的化合物(R2＝H)一般更有效。如果R2是一个强烈吸引电子的基团如-CO-R3(R3含义与R1相同)，则会导致失效，虽然这些化合物也很容易形成铁复合物，例如N-羟基琥珀酰亚胺3，4-二氢-3-羟基-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪这两种举例化合物的有效性如
图1和2所示。
因此，本发明的溶液可以含有异羟肟酸和/或其衍生物，其浓度根据需要最多可达约10mmol/l。
图1表示邻羟苄基-N-甲基异羟肟酸对肝内皮细胞冷却损伤的抑制作用。Wisconsin-Loesung大学(UW)将经培养的大鼠肝内皮细胞在4℃、有氧及存在和不存在1mM邻羟苄基-N-甲基异羟肟酸的条件下孵育72小时，接着在细胞培养介质中重新加热(37℃)3小时。以释放的胞质乳酸脱氢酶(LDH)作为细胞损伤的参数。
图2表示3，4-二甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸对肝细胞冷却损伤的抑制作用。Wisconsin-Loesung大学(UW)将经培养的大鼠肝内皮细胞在4℃、有氧及存在和不存在1mM 3，4-二甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸的条件下孵育24小时，接着在细胞培养介质中重新加热(37℃)3小时。以释放的胞质乳酸脱氢酶(LDH)作为细胞损伤的参数。
去铁胺是一种很强的铁螯合剂，它以非氧化还原活性的形式与铁结合成为六齿形配位体。从而在较长时间冷却条件下提供最佳的保护。但去铁胺是一个比较大的亲水分子，因而其膜通过率(Membrangaengigkeit)有限。所以，去铁胺不能以足够的浓度和速度达到所有的细胞内区室，以提供全面的保护。它在溶液中的浓度优选为最多约10mmol/l。
本发明的器官保护性溶液中可以适当地添加的其他化合物如权利要求5和6所述。
在本发明的另一实施方案中，向要求保护的溶液添加6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸(Trolox)或其衍生物。其相对亲水，但添加膜通透的捕获自由基的Trolox或其衍生物，目的在于捕获冷却损伤和再氧化损伤产生的细胞内自由基。Trolox衍生物在本发明溶液中的合适浓度最多为约10mmol/l。
所有器官保护溶液具有缓冲物质，这些物质对在局部缺血期间不可避免的酸毒症起抑制作用。磷酸盐或碳酸氢盐是最经常使用的无机缓冲体系。已证明在Custodiol中使用的有机缓冲体系组氨酸/组氨酸-HCl在缓冲容量和pH值稳定性方面是绝对优越的。其优点特别在于，当以组氨酸的衍生物例如N-乙酰基组氨酸代替组氨酸/组氨酸-HCl作为缓冲体系时，不但可以在本发明而且也可以在其他已知的保护溶液中使用。图3表明，N-乙酰基组氨酸在生理学范围内的缓冲容量比组氨酸/组氨酸-HCl大2倍。通过使用组氨酸衍生物，还避免了组氨酸的几种不希望有的副作用(特别是在受热也包括受冷时对几种细胞例如肝细胞的毒性)，而不影响良好的缓冲容量(图4)。
图3分别表示组氨酸/组氨酸-HCl和N-乙酰基组氨酸的中和曲线，其给出在生理学pH值范围内可用的缓冲容量，以所用碱对底物的比例计，N-乙酰基组氨酸约60％，组氨酸约30％。
所述缓冲体系在本发明溶液中的浓度可以优选约20mmol/l-265mmol/l。
图4表示组氨酸在加热条件下的毒性和通过组氨酸衍生物降低该毒性的实例。在37℃、有氧及存在和不存在198mM L-组氨酸或198mM Nα-乙酰基组氨酸的条件下将经培养的大鼠肝细胞孵育5小时。用在细胞培养中经常使用的一种生理盐溶液-Krebs-Henseleit缓冲液(KH)作为基础溶液；将含组氨酸(衍生物)的溶液中的NaCl浓度降低99mM，并通过添加HCl或NaOH将pH值调节到7.2。
此进一步的研发允许在存放后更好地保持细胞功能。
适当的阳离子之一是钠。较低的钠浓度一方面有利于在细胞膜上的电子机械脱离(心搏停止)，另一方面由于避免/减少了氧不足引起的钠流入而抑制了缺氧损伤。此外为其他物质(例如缓冲物质，见下文)保持了渗透储备。在溶液中低的钠浓度下也可以快速调节再灌注阶段的内环境平衡，因为钠在组织间隙中能快速升高(140mM)。因此，建议本发明溶液中钠的浓度为约10mmol/l-120mmol/l。
相对较低但超过生理学细胞外的钾浓度值支持细胞膜的电子机械脱离(心搏停止)，但是可以避免强高血钾溶液的缺点(强高血钾溶液诱发快速的心搏停止，但在再氧化阶段会造成节律紊乱和有时强烈的再灌注损伤；在再灌注阶段时间上延迟调节组织间隙钾浓度，由此在该溶液中提高器官经延迟初始功能的限额)。只有低度高血钾的溶液具有不需要在再灌注之前清洗待移植器官中的溶液的优点(溶液可以发挥其保护作用直至局部缺血阶段结束)，并提供很高的系统耐受能力。因此，建议本发明溶液中钾的浓度为约5mmol/l-25mmol/l。
应试图明显提高镁的浓度(高于血浆的正常值)，原因在于镁作为许多糖酵解酶体系的辅因子支持无氧代谢，因而在冷却的局部缺血期间也能有助于形成ATP。此外镁有助于保持细胞膜的Na+-K+-ATPase活性，并对离子内环境平衡的变化起抑制作用。另外，作为生理学的Ca2+-拮抗药，镁还可以抑制细胞内钙聚集的损害作用。在再灌注阶段高镁贮库是必要的，以刺激有氧的能量代谢。另外，镁的血管扩张特性抑制了再灌注损伤的收缩作用。因此，建议本发明溶液中镁的浓度为约3mmol/l-27mmol/l。
在局部缺血(和与此相关的细胞内酸毒症和钠的内环境平衡的紊乱)条件下有胞液钙升高的危险。这会导致不希望的活性升高，例如刺激蛋白酶和磷酯酶，从而引起心脏伴随有高ATP消耗的高挛缩。由此，钙的生理学功能在局部缺血期间应当受到最大限度的抑制，所以溶液中钙的浓度应该在细胞质浓度范围内变化。因而建议本发明溶液中钙的游离浓度为约0.0001mmol/l-1.5mmol/l。
碱性氨基酸赖氨酸和精氨酸及其衍生物作为含甘氨酸的二肽(Lys-Gly，Gly-Lys，或Arg-Gly，Gly-Arg)可以用来弥补缺少的碱当量，因为阳离子钠、钾、镁和钙的浓度和比例由已经描述的事实确定。本发明溶液中赖氨酸和/或赖氨酸衍生物及精氨酸和/或精氨酸衍生物的浓度可以分别最多达到约140mmol/l。
生理学细胞外阴离子氯化物使用的浓度明显低于生理学数值，以避免冷局部缺血期间的离子内环境平衡的紊乱。这特别适用于低氧引起的阳离子如钠的流入。基于电中性的理由，该流入与阴离子首先为氯化物的并列流入相关。由各个作者的论述可以得出结论，高的氯化物浓度会加速细胞内水肿的程度。因此，建议本发明溶液中氯化物的浓度保持尽可能远低于生理学水平，最多可达90mmol/l。除了氯化物以外，还可以添加浓度最多为约140mmol/l的乳糖酸作为不渗透的阴离子。
在该有机保护溶液中使用的阴离子的浓度通常取决于选择的阳离子和所使用的(无机)有机缓冲液。不渗透阴离子如乳糖酸的应用应当能够抑制细胞内水肿的产生。天冬氨酸是优选的替代物，使用天冬氨酸可以出于多种目的a)用天冬氨酸作为酸当量物替代不利的氯化物。
b)天冬氨酸积极支持膜代谢，并可以加快内环境平衡的恢复。
c)天冬氨酸与α-酮戊二酸结合有利于在器官再灌注或再氧化危象阶段的能量代谢，并加速其初始功能。
特别是在再氧化阶段，当能量需求随着器官的不断加热大幅度上升时，必须加强能量的提供，因为恰恰在该加热阶段ATP的贫乏将明显影响器官的功能性并提高再灌注损伤的程度。建议本发明溶液中天冬氨酸的浓度最多为约140mmol/l。适宜地使本发明溶液中存在相对于氯化物过量的天冬氨酸。
氨基酸甘氨酸以较高的毫摩尔浓度使用，因为甘氨酸在该浓度可通过稳定细胞膜(避免定向扩散的物质交换)防止低氧引发的钠流入，并此外抑制巨噬细胞的活化。建议本发明溶液中甘氨酸的浓度最多为约30mmol/l。
在冷局部缺血期间，相关器官的能量需求并不是微不足道的，因此要向溶液中添加提供能量的底物或者促进能量代谢的物质以支持其需求。对此可以使用各种不同的方案(也参见天冬氨酸，见上文，和α-酮戊二酸，见下文)，其中之一是添加葡萄糖。
溶液中的葡萄糖生理浓度也可以使得由于自身糖元储量较低而依赖于外源葡萄糖供给的细胞(例如内皮细胞)在局部缺血期间通过无氧的糖酵解得到能量。然而应当如此选择葡萄糖浓度，使得能够避免其他细胞特别是肝细胞过度地吸收葡萄糖(这是以前的含极高葡萄糖浓度的保存溶液的一个问题)。所以，本发明溶液可以含有最多10mmol/l的葡萄糖。
α-酮戊二酸与天冬氨酸一起用来在低氧条件下或其后支持代谢。其浓度可适当地选择为约1mmol/l-9mmol/l。
有渗透效应的物质的添加量必须是达到所要求的约300mosm/L的生理学渗透压所需要的。为此，通常使用多元醇/糖(例如甘露糖醇、蜜三糖、蔗糖)或者高分子物质(例如HES、葡聚糖)。后者对于几种器官是不适合的，因为HES和葡聚糖产生高粘性这一缺点会影响保护的质量。
在4℃时的粘度Custodiol1.8cPUW溶液4.8cP根据器官的不同，应当考虑使用甘露糖醇、木糖醇、山梨糖醇、蔗糖或蜜三糖作为渗压剂。本发明溶液中渗压剂的浓度可适当地最多为140mmol/l。
为了避免在一些器官/组织的组织间隙水肿，优选添加一种起胶体渗透压作用的物质，例如葡聚糖-40/葡聚糖-70。这特别适合用于肺和胰腺保护。
为了冷冻细胞和组织，还可以添加其他的低温防护剂，例如优选二甲基亚砜(DMSO)。
图5表示过氧化氢对肝细胞的细胞损伤和使用各种异羟肟酸对其的保护，其中曲线1)N4+20mM/l H2O2曲线2)N4+20mM/l H2O2+1mM/l 4-氯-N-甲基-苯氧肟酸曲线3)N4+20mM/l H2O2+1mM/l 2-羟基-3-甲基-苯异喹诺酮曲线4)N4+20mM/l H2O2+1mM/l 3，4，5-三甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸曲线5)N4+20mM/l H2O2+1mM/l 3，4-二甲氧基-N-甲基-异羟肟酸其中N4表示实施例II的溶液，但不含Trolox和异羟肟酸衍生物。
图6表示新的保存溶液对肝细胞冷损伤的抑制作用。为了与Krebs-Henseleit缓冲液(KH)作对比，本发明的溶液在4℃条件下孵育经培养的大鼠肝细胞24小时，其中以N-乙酰组氨酸为缓冲剂，并添加1mM/l的Trolox和0.5mM/l的异羟肟酸衍生物藜芦基-N-甲基异羟肟酸。冷孵育在有氧条件下进行，24小时后在细胞培养介质中于37℃下重新加热细胞以模拟再灌注。以释放的胞质乳酸脱氢酶(LDH)作为细胞损伤的参数。
实施例下面是溶液的实施例，其满足了在此所需要保护的范围的要求。
实施例I
实施例II
实施例III
实施例IV
实施例V
相应于器官保护溶液的功能组份，即缓冲体系、电解质，保护性物质和渗压剂，制备了本发明的溶液。为此，首先用90％的必要水量溶解缓冲物质。然后以给定的具有生理学意义的浓度添加作为电解质所必需的阳离子例如钠、钾、镁和钙的中和盐，并在搅拌条件下溶解。接着向溶液添加保护性物质作为进一步的组份。随后检查溶液的pH值，必要时调节到权利要求1所述的数值。最后添加给定量的渗压剂，并将溶液稀释到所需要的体积。灌装到合适的容器中以后对溶液进行消毒。
环状异羟肟酸例如由2-羟基吡啶-N-氧化物衍生的化合物的制备，例如已经在《有机合成文集》(Organic Synthesis Collective)第V卷623页起所描述。由羧酸衍生物制备异羟肟酸的方法可在Houben-Weyl的《有机化学方法》(Methoden der organischen Chemie)686页起找到，其中用低级醇DMF、THF作溶剂。与相应羧酸酯的反应可以在碱性催化(NaOMe、K2CO3、CaO)条件下进行。最后，为了制备环状异羟肟酸，还可以参考A.Kleemann，J.Engel等人的《药用活性物质》(Pharmazeutische Wirkstoffe)，第二版，1982年，206页起。
权利要求
1.用于避免器官或者分离出来的细胞体系或组织部分在灌注、手术、移植或者低温储存并在随即灌注后的储存损伤或局部缺血损伤或再灌注损伤的保护性溶液，其中含有作为电解质的碱金属和/或碱土金属离子、一种缓冲剂以及一种多元醇和/或一种糖，其摩尔渗透压浓度为约290-350mosm/l，pH值为约6.8-7.4，并添加有异羟肟酸和/或一种或多种异羟肟酸衍生物。
2.根据权利要求1所述的溶液，其特征是，使用一种异羟肟酸衍生物，其中异羟肟酸的氮上氢原子被C1-C20烷基、芳基或烷芳基所取代。
3.根据权利要求1或2所述的溶液，其特征是，异羟肟酸的碳上氢原子被C1-C20烷基、芳基或烷芳基所取代，其中取代基也可以含有杂原子和/或羟基、氨基、甲氧基。
4.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是，异羟肟酸的氮上取代基和异羟肟酸的碳上取代基连接形成一个环。
5.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是，含有下列一或多种化合物如/或其盐乙酰基异羟肟酸，乙酰基-N-甲基异羟肟酸，N-苄基乙酰基异羟肟酸，己烷异羟肟酸，己烷-N-甲基异羟肟酸，苯氧肟酸，N-甲基苯氧肟酸，邻羟苄基异羟肟酸，邻羟苄基-N-甲基异羟肟酸，邻羟苄基-N-苄基异羟肟酸，2-苯基乙酰基异羟肟酸，2-苯基乙酰基-N-甲基异羟肟酸，3，4-二甲氧基苯氧肟酸，3，4-二甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸，2，3-二甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸，2，4-二甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸，3，5-二甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸，2，4-二羟基苯氧肟酸，2，3-二羟基苯氧肟酸，3，4-二羟基苯氧肟酸，3，4，5-三甲氧基-苯氧肟酸，3，4，5-三甲氧基-N-甲基-苯氧肟酸，4-羟基-3-甲氧基-苯氧肟酸，2-羟基-3-甲氧基-苯氧肟酸，2-羟基-5-甲氧基-苯氧肟酸，2-羟基-3-甲基-异喹诺酮，4-氯-N-甲基-苯氧肟酸，6-环己基-1-羟基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮。
6.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是添加有去铁胺。
7.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是添加有一种6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-碳酸衍生物，优选其相应的甲酯。
8.用于避免器官或者分离出来的细胞体系或组织部分在灌注、手术、移植或者低温储存并在随即灌注后的储存损伤或局部缺血损伤或再灌注损伤的保护性溶液，其中含有作为电解质的碱金属和/或或碱土金属离子、一种基于组氨酸和/或一种或多种组氨酸衍生物的缓冲剂以及一种多元醇和/或一种糖，其摩尔渗透压浓度为约290-350mosmol，pH值为约6.8-7.4，特别是如上述权利要求任一项所述。
9.权利要求8所述的溶液，含有一种基于N-乙酰基组氨酸的缓冲剂。
10.权利要求8和/或9之一所述的溶液，含有基于N-乙酰化组氨酸的缓冲剂，必要时还混合有一种合适的有机碱例如N-氨基乙酰组氨酸/N-氨基乙酰组氨酸氯化物或者N-乙酰基组氨酸/赖氨酸和/或精氨酸和/或胆碱。
11.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是含有阳离子赖氨酸和/或赖氨酸衍生物，优选含赖氨酸的二肽。
12.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是含有阴离子天冬氨酸。
13.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是异羟肟酸和/或其衍生物的浓度为最多约10mmol/l。
14.权利要求6-13任一项所述的溶液，其特征是去铁胺的浓度为最多约10mmol/l。
15.权利要求6-13任一项所述的溶液，其特征是Trolox的浓度为最多约10mmol/l。
16.权利要求6-15任一项所述的溶液，其特征是N-乙酰组氨酸/N-乙酰细氨酸-的浓度为约20mmol/l-265mmol/l。
17.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是含有浓度为约10mmol/l-120mmol/l的钠作为电解质。
18.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是含有浓度为约5mmol/l-25mmol/l的钾作为电解质。
19.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是是含有浓度为约3mmol/l-27mmol/l的镁。
20.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是含有游离浓度为约0.0001mmol/l-1.5mmol/l的钙。
21.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是含有赖氨酸和/或其衍生物作为阳离子，优选含赖氨酸的二肽，其合适的浓度为最多约140mmol/l。
22.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是天冬氨酸的浓度为最多约140mmol/l。
23.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是含有氯化物。
24.权利要求22和23所述的溶液，其特征是含有相对于氯化物过量的天冬氨酸。
25.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是含有合适浓度为约1mmol/l-9mmol/l的α-酮戊二酸。
26.上述权利要求任一项所述的溶液，其特征是含有合适浓度为最多约140mmol/l的渗压剂。
27.制备上述权利要求任一项所述的溶液的方法，其中使用过量的水搅拌溶解电解质，优选约为所需水量的90％，添加缓冲液以及随后添加异羟肟酸和/或其衍生物，然后调节pH值，添加一或多种渗压剂，用水将溶液补充到所需要的体积。
28.根据权利要求27所述的方法，其特征是，为了得到异羟肟酸和/或其衍生物，合适地使用低级醇和/或DMF和/或THF作为溶剂。
29.根据权利要求28所述的方法，其特征是，用羧酸酯在碱性催化条件下进行反应。
30.根据权利要求1-26所述溶液中的异羟肟酸衍生物在防止例如梗死后局部缺血和再灌注的损伤以及炎症反应中的应用。
31.权利要求5所述的溶液在心肌梗塞、中风、事故外科手术或手足再灌注后防止再灌注损伤中的应用。
32.权利要求5所述的溶液在治疗因血铁过多(例如阿耳茨海默)引起的疾病中的应用。
33.权利要求5所述的溶液在由自由基、氧自由基或H2O2造成的细胞损伤引起的疾病中的应用。
全文摘要
描述了一种用于避免器官或者分离出来的细胞体系或组织部分在灌注、手术、移植或者低温储存并在随即灌注后的局部缺血损伤的保护性溶液，其中含有作为电解质的碱金属和/或碱土金属离子、一种缓冲剂以及一种多元醇和/或一种糖，其摩尔渗透压浓度为约290mosm/l－350mosm/l，pH值为约6.8－7.4，并添加有异羟肟酸和/或一种或多种异羟肟酸衍生物。
文档编号A61K31/4412GK1480132SQ0314384
公开日2004年3月10日 申请日期2003年5月16日 优先权日2002年5月17日
发明者维尔弗里德·布伦斯, 格诺特·科勒, 赫伯特·德格鲁特, 乌尔苏拉·劳恩, 德格鲁特, 科勒, 拉 劳恩, 维尔弗里德 布伦斯 申请人:弗兰茨·科勒博士化学有限公司, 弗兰茨 科勒博士化学有限公司