治疗癌症的联合疗法的制作方法

专利名称：治疗癌症的联合疗法的制作方法
相关申请本申请要求保护2002年4月15日提交的美国临时申请No.60/373,033的利益。上述申请的完整教导内容结合在此作为参考。
政府支持本发明全部或部分地得到来自National Cancer Institute的CoreGrant(Grant No.08748)和来自NIH的CA 05826的支持。政府在本发明中享有某些权利。
背景技术：
正常的组织内环境稳定借助细胞增殖率与细胞死亡之间的复杂平衡而实现。这种平衡因增加细胞增殖率或降低细胞死亡率而破坏能够导致细胞的异常生长，被认为是癌症形成中的主要事件。治疗癌症的常规策略包括化疗、放疗、手术、生物疗法或它们的组合；不过这些策略受到特异性的缺乏和对正常组织的过分毒性的限制。另外，某些癌症对治疗(例如化疗)而言是顽固的，而有些策略(例如手术)不总是可用的选择对象。
利用某些种类放射的轰击可以弱化并最终杀死癌细胞，因此放射疗法是一种重要的治疗癌症的措施。癌症放疗的既往分析，例如在前列腺癌的情况下，已经证明了实现原发性肿瘤的局部控制的失败与疾病的最终转移性扩散密切有关(Yorke，E.D.等，Cancer Res.532987-93(1993)；Fuks，Z.等，Int.J.Radiat.Onco.l Biol.Phys.21537-47(1991))。早期复发标记(例如PSA)的可利用性也已提示了用在前列腺癌放疗中的标准服药制度是不恰当的(Pollack，A.等，Int J RadiatOncol Biol Phys.531097-1105(2002))。这两项观察结果已经为3-D共形治疗和强度调控放疗(IMRT)等技术的研究提供了动力，使增加治疗性放射剂量且仅微小增加正常器官照射成为可能(Zelefsky，M.J.等，Radiother.Oncol.55241-9(2000))。使用放射致敏剂增加治疗功效而不增加剂量递送也已受到检验(Lawton，C.A.等，Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.36673-80(1996))。
癌症治疗还可以包括化疗剂的使用。例如，辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)是一种异羟肟酸类杂合极性化合物，它抑制组蛋白脱乙酰酶(Histone Deacetylase)(HDAC)活性，体外诱导肿瘤细胞的末期分化、细胞生长停止和/或细胞凋亡(Richon，V.M.等，Proc.Natl.Acad SciUSA.953003-7(1998)；Marks，P.A.等，Curr.Opin.Oncol.13477-83(2001)；Marks，P.A.等，Nature Reviews Cancer 1.194-202(2001))。SAHA属于一类组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂，能够诱导肿瘤细胞的末期分化、细胞生长停止和/或细胞凋亡。该化合物已经显示对裸鼠前列腺肿瘤异种移植物的抑制，仅有微小至没有可检测的毒性(Butler，L.M.等，Cancer Res.60.5165-70(2000))。它已经完成了实体与血液学肿瘤包括前列腺癌的I期治疗试验(Kelly，W.K.等，Expert Opin.Investig.Drugs 111695-713(2002)；Kelly，W.K.等，InASCO Proceedings，Orlando，FL，2002，pp.1831)。
通常，HDAC抑制剂分为五大类A)异羟肟酸衍生物；B)环状四肽；C)短链脂肪酸(SCFA)；D)苯甲酰胺衍生物；和E)亲电性酮衍生物。
在癌症治疗中经常采用联合疗法。例如，已经采用两种或多种被公认的疗法，例如化疗和放疗。某些联合疗法的治疗利益已经被Steel和Peckham分为四大类(Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.585-91(1979))。这些分类是1)空间上的合作——化疗和放疗在不同的解剖学部位根除疾病；2)毒性的独立性——化疗的杀死作用加上放疗的杀死作用，因为正常器官毒性是不重叠的；3)对正常组织的保护——使向靶递送更大剂量的放射成为可能的试剂；4)肿瘤响应的增强——一种试剂(化疗或放疗)优先使肿瘤细胞“敏感”于另一种，以便这两种的效果大于单独每种的加和效果。
前两种策略不需要两种试剂之间的相互作用。联合放疗/化疗的治疗利益的临床实例属于第1和2类，第1类是联合方式疗法的主要临床原理。已经在实验室中观察到相当于第3和4类的治疗利益，但是向临床的转换仍然缓慢。
鉴于上述，癌症是一种有很多潜在有效治疗可用的疾病。不过，由于各种类型癌症的普遍性和可能具有的严重后果，需要更有效的治疗，尤其是不利副作用少于目前可用的治疗形式的那些。
发明概述本发明基于这样的发现，组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂(例如SAHA)能够与放射源联合使用，例如外束辐射(external beam irradiation)或一种放射性同位素，例如放射药物，以提供治疗上有效的抗癌效果。进而，HDAC抑制剂与放射源之间的意外协同作用产生增强了的或协同性治疗效果，其中该联合效果大于这两种治疗各自按治疗剂量给药所得加和效果。这些观察结果提示了HDAC抑制剂(例如SAHA)能够充当放射致敏剂，它们能够与放疗联合用于治疗癌症。以前还没有描述过HDAC抑制剂(例如SAHA)作为放射致敏剂的能力。
已经意外地发现，如本文所述包括组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂给药的第一治疗程序与如本文所述采用放射治疗的第二治疗程序的组合对需要治疗的患者能够提供治疗上有效的抗癌效果。每种治疗(HDAC抑制剂的给药和放射疗法的给药)的使用量或剂量与另一种联合提供治疗上有效的治疗。
因此，本发明涉及治疗需要治疗的患者癌症的方法。本文所用的癌症治疗表示在哺乳动物、例如人类中部分或完全地抑制、延迟或防止癌症的进展，包括癌症转移；抑制、延迟或防止癌症的复发，包括癌症转移；或者防止癌症的发生或形成(化学预防)。
本发明的方法可用于治疗多种癌症，包括但不限于实体肿瘤(例如肺、乳腺、结肠、前列腺、膀胱、直肠、脑或子宫内膜的肿瘤)、血液学恶性肿瘤(例如白血病、淋巴瘤、骨髓瘤)、癌(例如膀胱癌、肾癌、乳腺癌、结肠直肠癌)、成神经细胞瘤或黑素瘤。
该方法包含对需要治疗的患者在第一治疗程序中给以第一量组蛋白脱乙酰酶抑制剂，在第二治疗程序中给以第二量或剂量放射。第一与第二量一起构成治疗有效量。
本发明进一步涉及可用于治疗癌症的药物组合物。该药物组合物包含第一量组蛋白脱乙酰酶抑制剂和第二量放射(例如一种放射药物)。第一与第二量一起构成治疗有效量。
本发明进一步涉及第一量HDAC抑制剂和第二量放射(例如一种放射药物试剂)在药剂制备中的用途，该药剂用于治疗癌症。
在本发明的特定实施方案中，HDAC抑制剂与放射疗法的组合被视为治疗上协同性的，这种联合治疗方案产生显著好于每种成分单独按治疗剂量给药时的加和效果的抗癌结果(例如生长的抑制)。可以采用标准统计学分析来确定这些结果显著更好的时机。例如，可以采用Mann-Whitney检验或一些其他公认的统计学分析。
用在放射治疗中的放射源可以是电磁放射(例如X-射线或γ-射线)或粒子放射(例如电子束(β粒子)、质子束、中子束、α粒子或负π介子)。
放射治疗可以是外束放射，或者可以牵涉放射性同位素的使用(例如一种放射药物试剂的给药，如本文所述)。放射治疗还可以是外束放射与放射性同位素的组合，例如与一种放射药物试剂的组合。
在一个特定的实施方案中，放射是借助靶放射性缀合物的靶向递送或全身递送而提供的，例如一种放射性标记的抗体。
放射的剂量可以根据患者和所治疗癌症的类型加以确定。在特定的实施方案中，患者可以接受至少约1Gy放射，例如约5-40Gy放射，例如约5、6、7、8、9或10Gy、20Gy或40Gy放射等。
治疗程序可以按照任意顺序先后发生、同时发生或其组合。例如，第一治疗程序、即组蛋白脱乙酰酶抑制剂的给药可以发生在第二治疗程序即放射之前、在放射治疗之后、与放射同时或其组合。例如，总治疗周期可以根据组蛋白脱乙酰酶抑制剂来决定。放射可以在抑制剂治疗开始之前或者在抑制剂治疗之后给予。另外，放射治疗可以在抑制剂给药期间给予，但是不必完全跨越整个抑制剂治疗阶段。
适用于本发明的HDAC抑制剂包括但不限于异羟肟酸衍生物、短链脂肪酸(SCFA)、环状四肽、苯甲酰胺衍生物或亲电性酮衍生物，如本文所定义。
适用于本发明方法的HDAC抑制剂的具体非限制性实例有A)异羟肟酸衍生物，选自SAHA、Pyroxamide、CBHA、制滴菌素A(TSA)、制滴菌素C、水杨异羟肟酸(SBHA)、壬二酸双异羟肟酸(ABHA)、壬二酸-1-异羟肟酸-9-酰基苯胺(AAHA)、6-(3-氯苯基脲基)己酸异羟肟酸(6-(3-Chlorophenylureido)-carpoic Hydroxamic Acid)(3Cl-UCHA)、Oxamflatin、A-161906、Scriptaid、PXD-101、LAQ-824、CHAP、MW2796和MW2996；B)环状四肽，选自Trapoxin A、FR901228(FK 228，Depsipeptide)、FR225497、Apicidin、CHAP、HC-Toxin、WF27082和Chlamydocin；C)短链脂肪酸(SCFA)，选自钠的丁酸盐、异戊酸盐、戊酸盐、4-苯基丁酸盐(4-PBA)、苯基丁酸盐(PB)、丙酸盐、丁酰胺、异丁酰胺、苯基乙酸盐、3-溴丙酸盐、甘油三丁酸酯、丙戊酸(Valproic acid)和丙戊酸盐；D)苯甲酰胺衍生物，选自CI-994、MS-27-275(MS-275)和MS-27-275的3′-氨基衍生物；E)亲电性酮衍生物，选自三氟甲基酮和一种α-酮基酰胺，例如N-甲基-α-酮基酰胺；和F)DEPUDECIN。
具体HDAC抑制剂包括由下列结构式代表的辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)
由下列结构式代表的Pyroxamide 由下列结构式代表的间-羧基肉桂酸双异羟肟酸(CBHA) 适用于本发明方法的HDAC抑制剂的其他非限制性实例有由下列结构代表的化合物 其中R1和R2可以是相同或不同的；当R1与R2相同时，各自是取代或未取代的芳基氨基(例如苯氨基、吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基或噻唑氨基)、环烷基氨基或哌啶子基；当R1与R2不同时，R1＝R3-N-R4，其中每个R3和R4是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的直链或支链烷基、链烯基、环烷基、芳基(例如苯基或吡啶基)、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基或吡啶基，或者R3和R4一起键合构成哌啶基，R2是羟氨基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或烷氧基；n是约4至约8的整数；由下列结构代表的化合物
其中R是取代或未取代的苯基、哌啶、噻唑、2-吡啶、3-吡啶或4-吡啶；n是约4至约8的整数；和由下列结构代表的化合物 其中A是酰胺部分；R1和R2各自选自取代或未取代的芳基、芳基氨基(例如吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基或噻唑氨基)、芳基烷基、芳氧基、芳基烷氧基；R4是氢、卤素、苯基或环烷基；n是约3至约10的整数。
鉴于与两种治疗用药程式有关的不同毒性，联合疗法可以提供治疗上的优点。更具体地，HDAC抑制剂治疗可以引起血液学毒性，而放射疗法可以是对邻近肿瘤部位的组织有毒性的。因此，这种有差别的毒性能够允许每种治疗按其治疗剂量给药，不会增加患者发病率。不过惊人地，由联合治疗所实现的治疗效果是增强了的或协同性的，例如显著好于加和治疗效果。
附图的简要说明

图1A-D是LNCaP细胞球状体积图，(A)未处理；(B)用1μM SAHA处理；(C)用2.5μM SAHA处理；(D)用5μM SAHA处理，均连续处理和处理120小时。粗实线相当于每种个别实验的中位线。
图2A-B是LNCaP细胞球状体的光学显微镜图象扫描，在用(A)5μMSAHA和(B)2.5μM SAHA(上方的1D和1C)连续温育开始后不同时间进行。每栏底部左侧的数字相当于温育后的时间，以天计。
图3A-D是按照下列方案处理的LNCaP细胞球状体积的中位线(粗线)和个别线(细线)A)未处理；B)用5μM SAHA温育96小时；C)用急性剂量外束放射照射，利用6Gy Cs-137辐射器(LET 02.keV/μm)；和D)用5μM SAHA处理96小时，在SAHA处理中点(48小时后)开始用急性剂量放射束处理，利用6Gy Cs-137辐射器(LET 02.keV/μm)。
图4是如图3D所述用SAHA与6Gy放射组合处理的球状体的光学显微镜图象扫描。每栏底部左侧的数字相当于用SAHA培育开始后的时间。
图5A-C是经过处理的LNCaP球状体的TUNEL染色切片扫描。栏(A-C)已经用单独的SAHA处理过(5μM，96h)。栏(A)显示在温育，处理结束后不久的球状体；栏(B)显示在用SAHA温育处理结束后24小时的球状体；栏(C)显示在用SAHA温育处理结束后48小时的球状体。栏(D-F)显示用SAHA+6Gy放射组合处理过的LNCaP球状体的TUNEL染色栏(D)是温育结束后不久；栏(E)是温育结束后24小时；栏(F)是温育结束后48小时。关于TUNEL染色栏(G)为阳性DNA酶处理过的对照；栏(H)为未处理的球状体；栏(I)为用6Gy放射处理过的球状体。所有切片都是用苏木精复染色的。
图6A-C是经过处理的LNCaP球状体的Ki67染色切片扫描。栏(A-C)已经用单独的SAHA处理过(5μM，96h)。栏(A)显示用SAHA温育结束后不久的球状体；栏(B)显示温育结束后24小时的球状体；栏(C)显示温育结束后48小时的球状体。栏D至F显示用SAHA+6Gy放射组合处理过的球状体的Ki67染色，分别为培育结束后(D)不久、(E)24小时和(F)48小时。也显示了未处理球状体(G)和用6Gy放射处理过的球状体(H)的Ki67染色。所有切片都是用苏木精复染色的。
图7A-B显示(A)TUNEL和(B)Ki67染色的细胞阳性百分比的平均和标准偏差。每项实验为三至五份不同的切片评分。在48小时时，仅有SAHA与SAHA+放射处理过的细胞的阳性染色百分比显著不同于Ki67染色(p＜0.01)。
图8显示按照下列方案处理过的LNCaP细胞球状体积未处理的对照；■用Ac225-HuM195处理；用5μM SAHA处理96小时；X用Ac225-HuM195和5μM SAHA处理。
本发明的上述与其他目的、特征和优点将因下列优选的发明实施方案的具体说明而显而易见，如附图中所述。
发明的详细说明本发明涉及治疗需要治疗的患者癌症的方法。该方法包含对需要治疗的患者在第一治疗程序中给以第一量组蛋白脱乙酰酶抑制剂，在第二治疗程序中给以第二量或剂量放射。第一与第二量一起构成治疗有效量。
在一种实施方式中，该方法提供协同性的抗癌效果。
本文所用的癌症治疗表示在哺乳动物、例如人类中部分或完全地抑制、延迟或防止癌症的进展，包括癌症转移；抑制、延迟或防止癌症的复发，包括癌症转移；或者防止癌症的发生或形成(化学预防)。
在一种实施方式中，HDAC抑制剂使患者癌细胞对放射敏感。因此，HDAC抑制剂可以充当放射致敏剂。例如，不希望受任何特定机理或理论的局限，HDAC抑制剂与放射治疗联合给药的治疗效果可以是由HDAC抑制剂充当放射致敏剂的能力所引起的，从而增加患者癌细胞对放射治疗的敏感性。因此，HDAC抑制剂可以按照放射致敏量给药。致敏作用可以是由不可逆的细胞周期停止所引起的。
在另一种实施方式中，放射使患者癌细胞对HDAC抑制剂的作用敏感。
本发明还涉及测定特定癌对本发明联合疗法敏感性的方法。该方法包含使癌细胞在第一治疗程序中暴露或接触于第一量组蛋白脱乙酰酶抑制剂，在第二治疗程序中暴露或接触于第二量或剂量放射，再评估抗癌效果。第一与第二量一起构成治疗有效量。抗癌效果可以利用任意适合的测定法进行评估。
在进一步的实施方式中，本发明涉及筛选确定就特定癌症类型而言HDAC抑制剂与放射疗法最佳组合的方法。筛选方法包含使癌细胞在第一治疗程序中暴露于第一量组蛋白脱乙酰酶抑制剂，在第二治疗程序中暴露于第二量或剂量放射。第一与第二治疗一起构成治疗有效量。细胞可以是在培养物中或者存在于需要治疗的患者体内。治疗的抗癌效果可以利用适合的方法进行评估。
本文所用的术语“治疗有效量”意欲限定联合疗法中第一与第二治疗的组合量。该组合量将实现所需的生物响应。在本发明中，所需的生物响应是哺乳动物、例如人类癌症进展包括癌症转移的部分或完全抑制、延迟或防止；癌症复发包括癌症转移的抑制、延迟或防止；或者癌症发生或形成的防止(化学预防)。
本发明联合疗法适用于多种癌症的治疗。本文所用的癌症表示肿瘤、赘生物、癌、肉瘤、白血病、淋巴瘤等。例如，癌症包括但不限于白血病与淋巴瘤，例如皮肤T-细胞淋巴瘤(CTCL)，非皮肤外周T-细胞淋巴瘤，与人T-细胞亲淋巴病毒(HTLV)有关的淋巴瘤，例如成人T-细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)，急性淋巴细胞性白血病，急性非淋巴细胞性白血病，慢性淋巴细胞性白血病，慢性骨髓性白血病，何杰金氏病，非何杰金氏淋巴瘤和多发性骨髓瘤，儿童实体肿瘤，例如脑肿瘤，成神经细胞瘤，成视网膜细胞瘤，维尔姆斯肿瘤，骨肿瘤和软组织肉瘤，成人普通实体肿瘤，例如头颈癌(例如口、喉和食管)，泌尿生殖癌(例如前列腺、膀胱、肾、子宫、卵巢、睾丸、直肠和结肠)，肺癌，乳腺癌，胰腺癌，黑素瘤和其他皮肤癌，胃癌，脑癌，肝癌和甲状腺癌。
组蛋白脱乙酰酶和组蛋白脱乙酰酶抑制剂本文所用的术语组蛋白脱乙酰酶(HDAC)是催化从核小体核心组蛋白氨基末端赖氨酸残基上除去乙酰基的酶。因此，HDAC与组蛋白乙酰转移酶(HAT)一起调节组蛋白的乙酰化状态。组蛋白乙酰化影响基因表达，HDAC抑制剂、例如异羟肟酸类杂合极性化合物辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)体外诱导转化细胞的生长停止、分化和/或细胞凋亡，体内抑制肿瘤生长。HDAC基于结构同源性可以分为三类。第I类HDAC(HDAC 1，2，3和8)与酵母RPD3蛋白具有相似性，位于核中，见于与转录共抑制物有关的复合物中。第II类HDAC(HDAC 4，5，6，7和9)与酵母HDA1蛋白相似，具有核性与胞质性亚细胞定位化。第I和II类HDAC都受异羟肟酸类HDAC抑制剂、例如SAHA的抑制。第III类HDAC构成一类在结构上疏远的NAD依赖性酶，它们与酵母SIR2蛋白相关，不受异羟肟酸类HDAC抑制剂的抑制。
本文所用的术语组蛋白脱乙酰酶抑制剂或HDAC抑制剂是能够体内和/或体外抑制组蛋白脱乙酰化的化合物。因此，HDAC抑制剂抑制至少一种组蛋白脱乙酰酶的活性。抑制至少一种组蛋白脱乙酰化的结果，导致乙酰化组蛋白的增加，乙酰化组蛋白的蓄积是适合于评估HDAC抑制剂活性的生物标记。因此，能够测定乙酰化组蛋白蓄积的方法也能用于测定有关化合物的HDAC抑制活性。可以理解的是能够抑制组蛋白脱乙酰酶活性的化合物也能与其他底物结合，因此能够抑制其他生物活性分子，例如酶。
例如，在接受HDAC抑制剂的患者中，能够与适合对照相比测定乙酰化组蛋白在用HDAC抑制剂处理的外周单核细胞以及组织中的蓄积。
特定化合物的HDAC抑制活性可以在体外例如利用一种酶测定法加以测定，该测定法显示至少一种组蛋白脱乙酰酶的抑制。进而，乙酰化组蛋白在用特定组合物处理的细胞中的蓄积的测定可以是确定化合物的HDAC抑制活性。
乙酰化组蛋白的蓄积测定是文献所熟知的。例如参见Marks，P.A.等人，J.Natl.Cancer Inst.，921210-1215，2000，Butler，L.M.等人，Cancer Res.605165-5170(2000)，Richon，V.M.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，953003-3007，1998和Yoshida，M.等人，J.Biol.Chem.，26517174-17179，1990。
例如，测定组蛋白脱乙酰酶抑制剂化合物活性的酶测定法可以如下进行。简而言之，HDAC抑制剂化合物对亲和性纯化人表位-标记(Flag)HDAC1的效果可以这样测定，在没有底物的存在下，将酶制备物与所示量抑制剂化合物在适合温度下温育约20分钟。加入底物([3H]-乙酰基-标记的鼠红白血病细胞组蛋白)，将样本在约37℃下温育20分钟，总体积为30μL。然后终止反应，提取所释放的乙酸盐，借助闪烁计数测定所释放的放射性的量。可用于测定组蛋白脱乙酰酶抑制剂化合物活性的替代测定法是″HDAC Fluorescent Activity Assay；DrugDiscovery Kit-AK-500″，可从BIOMOLResarch Laboratories，Inc.，Plymouth Meeting，PA获得。
体内研究可以如下进行。向动物、例如小鼠腹膜内注射HDAC抑制剂化合物。在给药后预定时间分离所选定的组织，例如脑、脾、肝等。从组织中分离组蛋白，基本上如Yoshida等，J.Biol.Chem.26517174-17179，1990所述。将等量组蛋白(约1μg)在15％SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳，转移至Hybond-P滤膜(可从Amersham获得)。将滤膜用3％乳封闭，用兔纯化多克隆抗-乙酰化组蛋白H4抗体(αAc-H4)和抗乙酰化组蛋白H3抗体(αAc-H3)(Upstate Bioteclmology，Inc.)探查。利用辣根过氧化物酶-缀合的山羊抗-兔抗体(1∶5000)和SuperSignal化学发光底物(Pierce)使乙酰化组蛋白水平可视化。作为组蛋白的加载对照，进行平行的凝胶电泳，用考马斯蓝(CB)染色。
另外，已经显示异羟肟酸类HDAC抑制剂如SAHA上调p21WAFI基因的表达，所述基因负责细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制，有助于细胞周期G1相的暂时停止(Richon，V.M.等，Proc Natl Acad Sci USA.9710014-9.，2000)。利用标准方法，在多种转化细胞中在与HDAC抑制剂培养2小时内诱导p21WAFI蛋白。p21WSFI基因的诱导与乙酰化组蛋白在这种基因的染色质区域中的蓄积有关。p21WAFI的诱导因此可以被视为参与转化细胞中由HDAC抑制剂所导致的G1细胞周期停止。
最近，已经显示HDAC抑制剂、象SAHA上调硫氧还蛋白结合性蛋白-2(Butler，L.M.等，Proc Natl Acad Sci USA.9911700-5.，2002)。TBP-2参与硫氧还蛋白的调节(Nishiyama，A.等，J Biol Chem.27421645-50.，1999)。它抑制硫醇还原活性，减少硫氧还蛋白的水平。硫氧还蛋白是一种主要的细胞蛋白质二硫化物还原酶(Arner，E.S.等，Eur J Biochem.2676102-9.，2000)。除了大量其他功能以外(Gasdaska，J.R.等，Cell Growth Differ.61643-50.，1995；Berggren，M.等，Anticancer Res.16.3459-66.，1996；Gallegos，A.等，Cancer Res.565765-70.，1996；Grogan，T.M.等，Hum Pathol.31475-81.，2000；Baker，A.等，Cancer Res.57.5162-7.，1997)，硫氧还蛋白在核糖核苷酸还原酶反应中充当电子供体，负责核苷三磷酸向脱氧核苷三磷酸的还原，后者是DNA复制和修复所必需的(Arner，E.S.等，Eur J Biochem.2676102-9.，2000)。象谷胱甘肽一样，硫氧还蛋白也是一种还原剂，参与解毒反应和放射-诱发的反应性氧属与其他游离基的消除(Didier，C.等，P Radic Biol Med.30537-46.，2001)。
因此，异羟肟酸衍生物、例如SAHA适用于治疗或预防多种硫氧还蛋白(TRX)-介导的疾病和病症，例如炎性疾病、变应性疾病、自体免疫疾病、与氧化性应激反应有关的疾病或以细胞过度增殖为特征的疾病(Richon等2003年2月15日提交的美国申请No.10/369,094，题为“利用组蛋白脱乙酰酶抑制剂治疗TRX-介导疾病的方法”，其完整内容结合在此作为参考)。
进而，最近已经显示异羟肟酸衍生物、例如SAHA可用于治疗中枢神经系统(CNS)疾病，例如神经变性疾病，和用于治疗脑癌(Richon等2002年10月16日提交的美国申请No.10/273,401，题为“利用组蛋白脱乙酰酶抑制剂治疗神经变性疾病和脑癌”，其完整内容结合在此作为参考)。
通常，HDAC抑制剂分为五大类1)异羟肟酸衍生物；2)短链脂肪酸(SCFA)；3)环状四肽；4)苯甲酰胺；和5)亲电性酮。
因而，所有HDAC抑制剂化合物都适用于本发明。例如，适合的HDAC抑制剂包括1)异羟肟酸衍生物；2)短链脂肪酸(SCFA)；3)环状四肽；4)苯甲酰胺；5)亲电性酮；和/或任意其他类能够抑制组蛋白脱乙酰酶的化合物。
这类HDAC抑制剂的实例包括但不限于A.异羟肟酸衍生物，例如辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)(Richon等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95，3003-3007(1998))；间-羧基肉桂酸双异羟肟酸(CBHA)(Richon等，见上)；pyroxamide；CBHA；制滴菌素类似物，例如制滴菌素A(TSA)和制滴菌素C(Koghe等，1998.Biochem.Pharmacol.561359-1364)；水杨异羟肟酸(Salicylhydroxamic)(SBHA)(Andrews等，International J.Parasitology 30，761-768(2000))；壬二酸双异羟肟酸(ABHA)(Andrews等，见上)；壬二酸-1-异羟肟酸-9-酰基苯胺(AAHA)(Qiu等，Mol.Biol.Cell 11，2069-2083(2000))；6-(3-氯苯基脲基)己酸异羟肟酸(3Cl-UCHA)；Oxamflatin((2E)-5-[3-[(苯磺酰基)氨基]苯基-戊-2-烯-4-炔基异羟肟酸)(Kim等，Oncogene，182461-2470(1999))；A-161906，Scriptaid(Su等，2000 Cancer Research，603137-3142)；PXD-101(Prolifix)；LAQ-824；CHAP；MW2796(Andrews等，见上)；和MW2996(Andrews等，见上)。
B.环状四肽，例如Trapoxin A(TPX)-环状四肽(环-(L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-D-哌啶甲酰(pipecolinyl)-L-2-氨基-8-氧代-9，10-环氧癸酰))(Kijima等，J Biol.Chem.268，22429-22435(1993))；FR901228(FK 228，Depsipeptide)(Nakajima等，Ex.Cell Res.241，126-133(1998))；FR225497环状四肽(H.Mori等，PCT申请WO00/08048(17 Feb.2000))；Apicidin环状四肽(环-(N-O-甲基-L-色氨酰-L-异亮氨酰-D-哌啶甲酰-L-2-氨基-8-氧代癸酰))(Darkin-Rattray等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93，13143-13147(1996))；Apicidin Ia、Apicidin Ib、Apicidin Ic、Apicidin IIa和Apicidin IIb(P.Dulski等，PCT申请WO97/11366)；CHAP，HC-Toxin环状四肽(Bosch等，Plant Cell 7，1941-1950(1995))；WF27082环状四肽(PCT申请WO98/48825)；和Chlamydocin(Bosch等，见上)。
C.短链脂肪酸(SCFA)衍生物，例如钠的丁酸盐(Cousens等，J.Biol.Chem.254，1716-1723(1979))；异戊酸盐(McBain等，Biochem.Pharm.531357-1368(1997))；戊酸盐(McBain等，见上)；4-苯基丁酸盐(4-PBA)(Lea和Tulsyan，Anticancer Research，15，879-873(1995))；苯基丁酸盐(PB)(Wang等，Cancer Research，59，2766-2799(1999))；丙酸盐(McBain等，见上)；丁酰胺(Lea和Tulsyan，见上)；异丁酰胺(Lea和Tulsyan，见上)；苯基乙酸盐(Lea和Tulsyan，见上)；3-溴丙酸盐(Lea和Tulsyan，见上)；甘油三丁酸酯(Guan等，CancerResearch，60，749-755(2000))；丙戊酸和丙戊酸盐。
D.苯甲酰胺衍生物，例如CI-994；MS-27-275(N-(2-氨基苯基)-4-[N-(吡啶-3-基甲氧羰基)氨基甲基]苯甲酰胺)(Saito等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96，4592-4597(1999))；和MS-27-275的3’-氨基衍生物(Saito等，见上)。
E.亲电性酮衍生物，例如三氟甲基酮(Frey等，Bioorganic & Med.Chem.Lett.(2002)，12，3443-3447；U.S.6,511,990)和α-酮酰胺，例如N-甲基-α-酮酰胺。
F.其他HDAC抑制剂，例如Depudecin(Kwon等，1998.PNAS 953356-3361)。
优选的异羟肟酸类HDAC抑制剂是辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)、间-羧基肉桂酸双异羟肟酸(CBHA)和pyroxamide。已经显示SAHA直接结合在组蛋白脱乙酰酶的催化部位。SAHA诱导培养物中转化细胞的细胞周期终止、分化和/或细胞凋亡，抑制啮齿动物中肿瘤生长。SAHA在实体肿瘤和血液学癌症中都有效地诱导这些效应。已经显示SAHA有效地抑制动物肿瘤生长，对动物没有毒性。SAHA-诱导的肿瘤生长抑制与乙酰化组蛋白在肿瘤中的蓄积有关。SAHA有效地抑制致癌物(N-甲基亚硝基脲)-诱导的大鼠乳房肿瘤的形成和持续生长。在进行研究的130天中，将SAHA在饲料中对大鼠给药。因而，SAHA是一种无毒的、口服有活性的抗肿瘤剂，它的作用机理牵涉组蛋白脱乙酰酶活性的抑制。
SAHA可以由下列结构式代表 Pyroxamide可以由下列结构式代表 CBHA可以由下列结构式代表
在一种实施方式中，HDAC抑制剂可以由式I代表 其中R1和R2可以是相同或不同的；当R1与R2相同时，各自是取代或未取代的芳基氨基(例如吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基或噻唑氨基)、环烷基氨基或哌啶子基；当R1与R2不同时，R1＝R3-N-R4，其中每个R3和R4是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的直链或支链烷基、链烯基、环烷基、芳基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基或吡啶基，或者R3和R4一起键合构成哌啶基，R2是羟氨基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或烷氧基；n是约4至约8的整数；因此，在另一种实施方式中，用在本发明方法中的HDAC抑制剂可以由式II代表 其中每个R3和R4独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的直链或支链烷基、链烯基、环烷基、芳基、烷氧基、芳氧基或芳基烷氧基，或者R3和R4一起键合构成哌啶基，R2是羟氨基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或烷氧基；n是约4至约8的整数。
在特定的式II实施方式中，R2是羟氨基、羟基、氨基、甲氨基、二甲氨基或甲氧基，n是6。在式II的另外一种实施方式中，R4是氢原子，R3是取代或未取代的苯基，n是6。在式II的进一步实施方式中，R4是氢，R3是α-、β-或γ-吡啶。
在其他具体的式II实施方式中，R4是氢原子，R3是环己基；R4是氢原子，R3是甲氧基；R3和R4一起键合构成哌啶基；R4是氢原子，R3是羟基；R3和R4都是甲基；R3是苯基，R4是甲基。
进一步适用于本发明的HDAC抑制剂可以由结构式III代表 其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基；R是氢原子、羟基、取代或未取代的烷基、芳基烷氧基或芳氧基；每个m和n独立地是彼此相同或不同的，各自是约0至约8的整数。
在特定的实施方式中，HDAC抑制剂是式III化合物，其中X、Y和R各自是羟基，m和n都是5。
在另外一种实施方式中，适用于本发明方法的HDAC抑制剂化合物可以由结构式IV代表 其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基；每个R1和R2独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的烷基、芳基、烷氧基或芳氧基；每个m、n和o独立地是彼此相同或不同的，各自是约0至约8的整数。
其他适用于本发明的HDAC抑制剂包括具有结构式V的化合物
其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基；每个R1和R2独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的烷基、芳基、烷氧基或芳氧基；每个m和n独立地是彼此相同或不同的，各自是约0至约8的整数。
在进一步的实施方式中，适用于本发明方法的HDAC抑制剂可以具有结构式VI 其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基；每个m和n独立地是彼此相同或不同的，各自是约0至约8的整数。
在另外一种实施方式中，可用于本发明方法的HDAC抑制剂可以具有结构式VII 其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基；R1和R2独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的烷基、芳基烷氧基或芳氧基；每个m和n独立地是彼此相同或不同的，各自是约0至约8的整数。
在更进一步的实施方式中，适用于本发明的HDAC抑制剂可以具有结构式VIII 其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基或芳氧基烷基氨基；n是约0至约8的整数。
另外适用于本发明方法的化合物包括由式IX代表的那些 其中每个X和Y独立地是彼此相同或不同的，是羟基、氨基或羟氨基、取代或未取代的烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基；每个R1和R2独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的烷基、芳基、烷氧基、芳氧基、羰基羟氨基或氟代基团；每个m和n独立地是彼此相同或不同的，各自是约0至约8的整数。
在进一步的实施方式中，适用于本发明的HDAC抑制剂包括具有结构式X的化合物 其中每个R1和R2独立地是彼此相同或不同的，是羟基、烷氧基、氨基、羟氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基。在特定的实施方式中，HDAC抑制剂是结构式X化合物，其中R1和R2都是羟氨基。
在进一步的实施方式中，适用于本发明的HDAC抑制剂具有结构式XI 其中每个R1和R2独立地是彼此相同或不同的，是羟基、烷氧基、氨基、羟氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基。在特定的实施方式中，HDAC抑制剂是结构式XI化合物，其中R1和R2都是羟氨基。
在进一步的实施方式中，适用于本发明的HDAC抑制剂包括由结构式XII代表的化合物 其中每个R1和R2独立地是彼此相同或不同的，是羟基、烷氧基、氨基、羟氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷基芳基氨基、烷氧基氨基、芳氧基氨基、烷氧基烷基氨基或芳氧基烷基氨基。在特定的实施方式中，HDAC抑制剂是这样的结构式XII化合物，其中R1和R2都是羟氨基。
另外适用于本发明方法的化合物包括由结构式XIII代表的那些
其中R是取代或未取代的苯基、哌啶、噻唑、2-吡啶、3-吡啶或4-吡啶，n是约4至约8的整数。
在另外一种实施方式中，适用于本发明方法的HDAC抑制剂可以由结构式XIV代表 其中R是取代或未取代的苯基、吡啶、哌啶或噻唑基团，n是约4至约8的整数，或其药学上可接受的盐。
在特定的实施方式中，R是苯基，n是5。在另一种实施方式中，n是5，R是3-氯苯基。
其他可用于本发明的HDAC抑制剂可以由结构式XV代表 其中每个R1和R2是直接或者通过连接基团连接的，是羟基、取代或未取代的芳基(例如萘基、苯基、喹啉基、异喹啉基或吡啶基)、环烷基、环烷基氨基、哌啶子基、直链或支链烷基、链烯基、芳基氨基(吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基或噻唑氨基)、芳基烷基氨基、芳基烷基、烷氧基、芳氧基或芳基烷氧基；n是约3至约10的整数；R3是异羟肟酸、羟氨基、羟基、氨基、烷基氨基或烷氧基。
连接基团可以是酰胺部分、-O-、-S-、-NH-或-CH2-。
在某些实施方式中，R1是-NH-R4，其中R4是羟基、取代或未取代的芳基(例如萘基、苯基、喹啉基、异喹啉基或吡啶基)、环烷基、环烷基氨基、哌啶子基、直链或支链烷基、链烯基、芳基氨基(例如吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基或噻唑氨基)、芳基烷基氨基、烷氧基、芳基烷基、芳氧基或芳基烷氧基。
进一步和更具体的式XV HDAC抑制剂包括可以由式XVI代表的那些 其中每个R1和R2是羟基、取代或未取代的芳基(例如苯基、萘基、喹啉基、异喹啉基或吡啶基)、环烷基、环烷基氨基、哌啶子基、芳基氨基(吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基或噻唑氨基)、芳基烷基氨基、直链或支链烷基、链烯基、烷氧基、芳基烷基、芳氧基或芳基烷氧基；R3是异羟肟酸、羟氨基、羟基、氨基、烷基氨基或烷氧基；R4是氢、卤素、苯基或环烷基部分；A可以是相同或不同的，代表酰胺部分、-O-、-S-、-NR5-或-CH2-，其中R5是取代或未取代的C1-C5烷基；n是约3至约10的整数。
例如，进一步具有更具体的式XVI结构的化合物可以由结构式XVII代表 其中A是酰胺部分；R1和R2各自选自取代或未取代的芳基(例如苯基、萘基、喹啉基、异喹啉基或吡啶基)、芳基氨基(例如吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基或噻唑氨基)、芳基烷基氨基、芳基烷基、芳氧基或芳基烷氧基；n是约3至约10的整数。
例如，在A具有酰胺部分的化合物可以由下式代表
或 在另一种实施方式中，HDAC抑制剂可以具有式XVIII 其中R7选自取代或未取代的芳基(例如苯基、萘基、喹啉基、异喹啉基或吡啶基)、芳基氨基(例如吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基或噻唑氨基)、芳基烷基氨基、芳基烷基、芳氧基或芳基烷氧基；n是约3至约10的整数；Y选自 或其药学上可接受的盐。
在进一步的实施方式中，HDAC抑制剂化合物可以具有式XIX 其中n是约3至约10的整数；Y选自
R7’选自 或其药学上可接受的盐。
进一步用在本发明中的化合物可以由结构式XX代表 其中R2选自取代或未取代的芳基、芳基氨基(例如吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基或噻唑氨基)、芳基烷基氨基、芳基烷基、芳氧基或芳基烷氧基；n是3至10的整数；R7’选自
进一步可用于本发明的HDAC抑制剂可以由结构式XXI代表 其中A是酰胺部分；R1和R2各自选自取代或未取代的芳基、芳基氨基(例如吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基或噻唑氨基)、芳基烷基氨基、芳基烷基、芳氧基或芳基烷氧基；R4是氢、卤素、苯基或环烷基部分；n是约3至约10的整数，或其药学上可接受的盐。
例如，式XXI化合物可以由下列结构代表 或者可以由下列结构代表 其中R1、R2、R4和n具有式XXI的含义。
进而，HDAC抑制剂具有结构式XXII
其中L是连接基团，选自由-(CH2)n-、-(CH＝CH)m、苯基、-环烷基-或其任意组合组成的组；其中每个R7和R8独立地是取代或未取代的芳基、芳基氨基(例如吡啶氨基、9-嘌呤-6-氨基或噻唑氨基)、芳基烷基氨基、芳基烷基、芳氧基或芳基烷氧基；n是约3至约10的整数；m是0-10的整数。
例如，式XXII化合物可以是 其他适用于本发明的HDAC抑制剂包括如下更具体的结构式所示那些 其中n是3至10的整数，或对映体，或者
其中n是3至10的整数，或对映体，或者 其中n是3至10的整数，或对映体，或者 其中n是3至10的整数，或对映体，或者
其中n是3至10的整数，或对映体。
进一步适用于本发明的具体HDAC抑制剂包括
其中n各自是3至10的整数，和下列化合物 进一步具体的HDAC抑制剂包括可以由式XXIII代表的那些 其中R1是取代或未取代的芳基、芳基烷基、芳基氨基、芳基烷基氨基、芳氧基或芳基烷氧基；n是3至10的整数。在特定的结构式XXIII化合物实施方式中，n是5。
在具体的实施方式中，式XXIII化合物是由下列结构代表的 在另一种具体的实施方式中，式XXIII化合物是由下列结构代表的
在另外一种具体的实施方式中，式XXIII化合物是由下列结构代表的 在另一种具体的实施方式中，式XXIII化合物是由下列结构代表的 进一步具体的HDAC抑制剂包括可以由式XXIV代表的那些 其中Q1是取代或未取代的喹啉基或异喹啉基；n是3至10的整数。在特定的结构式XXIV化合物实施方式中，n是5。
在具体的实施方式中，式XXIV化合物是由下列结构代表的
进一步具体的HDAC抑制剂包括可以由式XXV代表的那些 其中Q1和Q2独立地是取代或未取代的喹啉基或异喹啉基；n是3至10的整数。在特定的结构式XXV化合物实施方式中，n是5。
在具体的实施方式中，式XXV化合物是由下列结构代表的 进一步具体的HDAC抑制剂包括可以由式XXVI代表的那些 其中R1是芳基烷基，R2是取代或未取代的芳基、芳基烷基、芳基氨基、芳基烷基氨基、芳氧基或芳基烷氧基；A是酰胺；n是3至10的整数。在特定的结构式XXVI化合物实施方式中，n是5。
在具体的实施方式中，式XXVI化合物是由下列结构代表的
在具体的实施方式中，式XXVI化合物是由下列结构代表的 在具体的实施方式中，式XXVI化合物是由下列结构代表的 这类化合物和其他HDAC抑制剂的其他实例可以参见颁布于1994年11月29日的美国专利No.5,369,108、颁布于1997年12月23日的5,700,811、颁布于1998年6月30日的5,773,474、颁布于1999年8月3日的5,932,616、颁布于2003年1月28日的6,511,990，均颁发给Breslow等；1991年10月8日颁布的美国专利No.5,055,608、1992年12月29日颁布的5,175,191和1997年3月4日颁布的5,608,108，均颁发给Marks等；以Breslow等的名义于2003年4月1日提交的美国临时申请No.60/459,826；以及Yoshida，M.，等，Bioassays 17，423-430(1995)；Saito，A.，等，PNAS USA 96，4592-4597，(1999)；Furamai R.等，PNAS USA 98(1)，87-92(2001)；Komatsu，Y.，等，Cancer Res.61(11)，4459-4466(2001)；Su，G.H.，等，Cancer Res.60，3137-3142(2000)；Lee，B.I.等，Cancer Res.61(3)，931-934；Suzuki，T.等，J.Med.Chem.42(15)，3001-3003(1999)；Sloan-Kettering Institute for Cancer Research和The Trustees ofColumbia University的PCT申请公报WO01/18171，2001年3月15日公开；Hoffmann-La Roche的PCT申请公报WO02/246144；Novartis的PCT申请公报WO02/22577；Prolifix的PCT申请公报WO02/30879；Methylgene，Inc.的PCT申请公报WO01/38322(2001年5月31日公开)、WO01/70675(2001年9月27日公开)和WO00/71703(2000年11月30日公开)；Fujisawa Pharmaceutical Co.，Ltd.的PCT申请公报WO00/21979，1999年10月8日公开；Beacon Laboratories，L.L.C.的PCT申请公报WO98/40080，1998年3月11日公开；Curtin M.(Current patent status of histone deacetylase inhibitors，ExpertOpina.Ther.Patents(2002) 12(9)1375-1384和其中引用的参考文献)。
下表提供HDAC抑制剂的具体非限制性实例。应当注意，本发明涵盖任何在结构上与下列化合物相似并且能够抑制组蛋白脱乙酰酶的化合物。


定义“脂族基团”是非芳族的，仅由碳和氢组成，可以可选地含有一个或多个不饱和单元，例如双键和/或叁键。脂族基团可以是直链的、支链的或环状的。若为直链或支链，脂族基团通常含有约1至约12个碳原子，更通常约1至约6个碳原子。若为环状，脂族基团通常含有约3至约10个碳原子，更通常约3至约7个碳原子。脂族基团优选地是C1-C12直链或支链烷基(也就是完全饱和的脂族基团)，更优选C1-C6直链或支链烷基。实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基。
本文所用的“芳族基团”(也称为“芳基”)包括碳环芳族基团、杂环芳族基团(也称为“杂芳基”)和稠合多环芳族环系，如本文所定义。
“碳环芳族基团”是5至14个碳原子的芳族环，包括与5-或6-元环烷基稠合的碳环芳族基团，例如茚满(indan)。碳环芳族基团的实例包括但不限于苯基；萘基，例如1-萘基和2-萘基；蒽基，例如1-蒽基、2-蒽基；菲基；芴基，例如9-芴基；二氢茚基(indanyl)等。碳环芳族基团可选地被指定数量的取代基取代，取代基如下所述。
“杂环芳族基团”(或“杂芳基”)是5-至14-环原子的单环、二环或三环芳族环，所述环原子是碳和一至四个选自O、N或S的杂原子。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基，例如2-吡啶基(也称为α-吡啶基)、3-吡啶基(也称为β-吡啶基)和4-吡啶基(也称为γ-吡啶基)；噻吩基，例如2-噻吩基和3-噻吩基；呋喃基，例如2-呋喃基和3-呋喃基；嘧啶基，例如2-嘧啶基和4-嘧啶基；咪唑基，例如2-咪唑基；吡喃基，例如2-吡喃基和3-吡喃基；吡唑基，例如4-吡唑基和5-吡唑基；噻唑基，例如2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基；噻二唑基；异噻唑基；噁唑基，例如2-噁唑基、4-噁唑基和5-噁唑基；异噁唑基；吡咯基；哒嗪基；吡嗪基等。如上所定义的杂环芳族基团(或杂芳基)可以可选地被指定数量的取代基取代，取代基如下关于芳族基团所述。
“稠合多环芳族”环系是碳环芳族基团或杂芳基，与一个或多个其他杂芳基或非芳族杂环稠合。实例包括喹啉基和异喹啉基，例如2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基、5-喹啉基、6-喹啉基、7-喹啉基和8-喹啉基，1-异喹啉基、3-异喹啉基、4-异喹啉基、5-异喹啉基、6-异喹啉基、7-异喹啉基和8-异喹啉基；苯并呋喃基，例如2-苯并呋喃基和3-苯并呋喃基；氧芴基，例如2，3-二氢苯并呋喃基；硫芴基；苯并噻吩基，例如2-苯并噻吩基和3-苯并噻吩基；吲哚基，例如2-吲哚基和3-吲哚基；苯并噻唑基，例如2-苯并噻唑基；苯并噁唑基，例如2-苯并噁唑基；苯并咪唑基，例如2-苯并咪唑基；异吲哚基，例如1-异吲哚基和3-异吲哚基；苯并三唑基；嘌呤基；硫茚基等。稠合多环芳族环系可以可选地被指定数量的取代基取代，取代基如本文所述。
“芳烷基”(芳基烷基)是被芳族基团、优选苯基取代的烷基。优选的芳烷基是苄基。适合的芳族基团是如本文所述的，适合的烷基是如本文所述的。适合于芳烷基的取代基是如本文所述的。
“芳氧基”是经由氧附着于化合物的芳基(例如苯氧基)。
本文所用的“烷氧基”(烷基氧基)是经由氧原子连接于化合物的直链或支链C1-C12或环状C3-C12烷基。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基和丙氧基。
“芳基烷氧基”(芳基烷基氧基)是经由芳基烷基的烷基部分上的氧附着于化合物的芳基烷基(例如苯基甲氧基)。
本文所用的“芳基氨基”是经由氮附着于化合物的芳基。
本文所用的“芳基烷基氨基”是经由芳基烷基的烷基部分上的氮附着于化合物的芳基烷基。
本文所用的很多部分或基团被称为“取代或未取代的”。若一个部分被称为取代的，这表示该部分上任意为本领域技术人员已知可用于取代的部分都可以被取代。例如，可取代的基团可以是氢原子，它被除氢以外的基团(即取代基)所代替。可以存在多个取代基。若存在多个取代基，这些取代基可以是相同或不同的，取代可以发生在任意可取代的位置。这种取代含义是本领域熟知的。出于例证的目的，所述例证不应被解释为限制本发明的范围，一些取代基的实例有烷基(它也可以被一个或多个取代基取代，例如CF3)、烷氧基(它可以被取代，例如OCF3)、卤素或卤代基团(F，Cl，Br，I)、羟基、硝基、氧代、-CN、-COH、-COOH、氨基、叠氮基、N-烷基氨基或N，N-二烷基氨基(其中的烷基也可以被取代)、酯(-C(O)-OR，其中R可以是烷基、芳基等基团，它可以被取代)、芳基(最优选的是苯基，它可以被取代)、芳基烷基(它可以被取代)和芳氧基。
立体化学很多有机化合物存在旋光活性形式，具有绕平面偏振光的平面旋转的能力。在描述旋光活性化合物时，前缀D和L或R和S用于表示分子关于其手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)用于表示化合物绕平面偏振光旋转的符号，(-)或l意味着化合物是左旋的。带有前缀(+)或d的化合物是右旋的。就既定的化学结构而言，这些被称为立体异构体的化合物是等同的，除非它们是彼此的不可叠加镜像。特殊的立体异构体也可以被称为对映体，这类异构体的混合物经常被称为对映体混合物。对映体的50∶50混合物被称为外消旋混合物。很多本文所述化合物可以具有一个或多个手性中心，因此可以存在不同的对映体形式。如果需要的话，手性碳可以用星号(*)表示。若与手性碳的键合在本发明结构式中被描绘为直线，这被理解为在该结构式内涵盖该手性碳的(R)与(S)构型，以及两种对映体及其混合物。正如本领域所用的，若需要指定关于手性碳的绝对构型，与该手性碳的键合之一可以被描绘为楔形(与平面以上的原子键合)，其他可以被描绘为一系列或楔形的短平行线(与平面以下的原子键合)。Cahn-Inglod-Prelog系统可以用于指派(R)或(S)构型给手性碳。
若本发明HDAC抑制剂含有一个手性中心，这些化合物存在两种对映体形式，本发明包括这两种对映体和对映体混合物，例如特殊的50∶50混合物，称为外消旋混合物。对映体可以借助本领域技术人员已知的方法加以拆分，例如生成非对映体盐，后者例如可以借助结晶分离(CRCHandbook of Optical Resolutions via Diastereomeric SaltFormation by David Kozma(CRC Press，2001))；生成非对映体衍生物或络合物，后者例如可以借助结晶、气-液或液相色谱加以分离；一种对映体与对映体特异性制剂的选择性反应，例如酶的酯化作用；或者在手性环境中的气-液或液相色谱，例如在手性载体上，例如结合有手性配体的二氧化硅，或者在手性溶剂的存在下。将被领会到的是，在所需对映体借助上述分离工艺之一转化为另一种化学实体时，需要进一步的步骤释放所需的对映体形式。或者，特殊的对映体可以这样合成，使用旋光活性的试剂、底物、催化剂或溶剂，进行不对称合成，或者进行不对称转化，使一种对映体转化为另一种。
本发明化合物手性碳上特殊绝对构型的指定被理解为意味着所指定的化合物对映体形式是对映体过量的(ee)，或者换句话说是基本上不含其他对映体的。例如，化合物的“R”型基本上不含化合物的“S”型，因而是对映体过量于“S”型的。相反，化合物的“S”型基本上不含化合物的“R”型，因而是对映体过量于“R”型的。本文所用的对映体过量是特定对映体的存在大于50％。例如，对映体过量可以是约60％或以上，例如约70％或以上，例如约80％或以上，例如约90％或以上。在特定的实施方式中，若指定特殊的绝对构型，所述化合物的对映体过量为至少约90％。在更特定的实施方式中，化合物的对映体过量为至少约95％，例如至少约97.5％，例如至少99％对映体过量。
若本发明化合物具有两个或多个手性碳，它可以具有两种以上旋光异构体，并且可以存在非对映体形式。例如，若存在两个手性碳，化合物可以具有至多4种旋光异构体和2对对映体((S，S)/(R，R)和(R，S)/(S，R))。对映体对(例如(S，S)/(R，R))是彼此的镜像立体异构体。不是镜像的立体异构体(例如(S，S)和(R，S))是非对映体。非对映体对可以借助本领域技术人员已知的方法加以分离，例如色谱或结晶，每对中的个别对映体可以如上所述分离。本发明包括这类化合物的每种非对映体及其混合物。
本文所用的“一个”、“一种”和“该”包括单独和复数指示物，除非上下文另有明确指示。因而例如，对“一种活性剂”或“一种药理活性剂”的称谓包括单一的活性剂以及两种或多种不同的活性剂组合，对“一种载体”的称谓包括两种或多种载体的混合物以及单一的载体，等等。
所公开的活性化合物如上所述，可以被制成它们药学上可接受的盐。药学上可接受的盐是保留母体化合物所需生物活性并且不会带来不希望的毒理学后果的盐。这类盐的实例有(a)与无机酸生成的酸加成盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等；和与有机酸生成的盐，所述有机酸例如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、葡萄糖酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、苯甲酸、鞣酸、棕榈酸、藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、甲磺酸、对-甲苯磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸等；(b)从元素阴离子生成的盐，例如氯、溴和碘；和(c)从碱衍生的盐，例如铵盐、碱金属盐(例如钠和钾的盐)、碱土金属盐(例如钙和镁的盐)和有机碱的盐，所述有机碱例如二环己胺、N-甲基-D-葡糖胺、异丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等。
所公开的活性化合物如上所述，可以被制成它们水合物的形式，例如半水合物、一水合物、二水合物、三水合物、四水合物等。
本发明还打算涵盖本文所公开的HDAC抑制剂的前体药物。任意化合物的前体药物都可以利用熟知的药理学技术加以制备。
除了上面列举的化合物以外，本发明还打算涵盖这类化合物的同系物和类似物的用途。在上下文中，同系物是具有上述化合物的实质性结构相似性的分子，类似物是具有实质性生物相似性的分子，与结构相似性无关。
放射疗法适用于本文所述联合治疗的放射疗法包括a)外束放射(externalbeam radiation)和b)放射药物试剂的使用，其中b)包含发出辐射的放射性同位素。
外束放射用于癌症治疗的外束放射疗法采用一种放射源，它对患者而言是外部的，通常为一种放射性同位素，例如60Co、137Cs，或者一种高能X-射线源，例如直线加速器。外部光源产生准直束(collimated beam)，直接进入患者至肿瘤部位。外部光源放射疗法避免内部光源放射疗法的一些问题，但是它不可取地和必然地照射位于放射束路径中的显著体积非肿瘤组织或健康组织，以及肿瘤组织。
通过以不同“龙门(gantry)”角发射外束放射进入患者，并且使光束集中在肿瘤部位上，可以减少照射健康组织的不利后果，同时在肿瘤组织中维持既定剂量的放射。沿放射束路径的健康组织的特定体积要素发生变化，减少在整个治疗阶段到达健康组织每一这类要素的总剂量。
通过使放射束紧紧准直于与放射束轴垂直的肿瘤全截面，也可以减少对健康组织的照射。现有大量系统产生这样一种周缘准直，其中一些使用多个滑动光闸，它们能够分段生成任意轮廓的不透射线的屏蔽。
放射药物试剂如本文所定义的“放射药物试剂”表示含有至少一种发出放射的放射性同位素的药物试剂。放射药物试剂习惯上在核医学中用于各种疾病的诊断和/或治疗。放射性标记的药物试剂、例如放射性标记的抗体含有充当放射源的放射性同位素(RI)。正如本文所示，术语“放射性同位素”包括金属与非金属放射性同位素。放射性同位素是基于放射性标记药物试剂的医学应用加以选择的。若放射性同位素是一种金属放射性同位素，通常采用螯合剂使金属放射性同位素与分子其余部分结合。若放射性同位素是一种非金属放射性同位素，该非金属放射性同位素通常直接或者经由一种连接剂与分子其余部分连接。
本文所用的“金属放射性同位素”是任意适合用在体内或体外治疗或诊断程序中的金属放射性同位素。适合的金属放射性同位素包括但不限于锕-225、锑-124、锑-125、砷-74、钡-103、钡-140、铍-7、铋-206、铋-207、铋-212、铋-213、镉-109、镉-115m、钙-45、铈-139、铈-141、铈-144、铯-137、铬-51、钴-55、钴-56、钴-57、钴-58、钴-60、钴-64、铜-60、铜-62、铜-64、铜-67、铒-169、铕-152、镓-64、镓-67、镓-68、钆-153、钆-157、金-195、金-199、铪-175、铪-175-181、钬-166、铟-110、铟-111、铱-192、铁-55、铁-59、氪-85、铅-203、铅-210、镥-177、锰-54、汞-197、汞-203、钼-99、钕-147、镎-237、镍-63、铌-95、锇-185+191、钯-103、钯-109、铂-195m、镨-143、钷-147、钷-149、镤-233、镭-226、铼-186、铼-188、铷-86、钌-97、钌-103、钌-105、钌-106、钐-153、钪-44、钪-46、钪-47、硒-75、银-110m、银-111、钠-22、锶-85、锶-89、锶-90、硫-35、钽-182、锝-99m、碲-125、碲-132、铊-204、钍-228、钍-232、铊-170、锡-113、锡-114、锡-117m、钛-44、钨-185、钒-48、钒-49、镱-169、钇-86、钇-88、钇-90、钇-91、锌-65、锆-89和锆-95。
本文所用的“非金属放射性同位素”是任意适合用在体内或体外治疗或诊断程序中的非金属放射性同位素。适合的非金属放射性同位素包括但不限于碘-131、碘-125、碘-123、磷-32、砹-211、氟-18、碳-11、氧-15、溴-76和氮-13。
鉴别最适合于放射疗法的同位素要求衡量各种因素。这些因素包括肿瘤摄取与留存、血液廓清率、放射递送速率、放射性同位素的半衰期与比活性和放射性同位素大规模生产在经济意义上的可行性。治疗性放射药物的关键点是向肿瘤细胞递送必需量的放射剂量，以实现细胞毒性或杀肿瘤效果，同时不会导致难以控制的副作用。
优选的是，在肿瘤部位治疗性放射性同位素的物理半衰期与放射药物的生物半衰期相似。例如，如果放射性同位素的半衰期过短，将在放射药物达到最大靶/背景比之前发生大量衰变。另一方面，过长的半衰期导致对正常组织不必要的放射剂量。理想情况是，放射性同位素应当具有足够长的半衰期，以在细胞周期的大多数放射敏感期内达到最小剂量率和照射全部细胞。另外，放射性同位素的半衰期必须是足够长的，以便有充分的时间制造、释放和运输。
在选择用于肿瘤疗法中既定应用的放射性同位素时，其他实际的考虑是可利用性和质量。纯度必须是充分的和可再现的，因为痕量杂质可能影响放射药物的放射性标记和放射化学纯度。
肿瘤中的靶接受部位通常是数量有限的。因此优选地，放射性同位素具有较高的比活性。比活性主要依赖于生产方法。痕量金属污染物必须被减到最少，因为它们经常与放射性同位素竞争螯合剂，它们的金属络合物与放射性标记的螯合试剂竞争受体结合。
适用于本发明方法的放射类型可以各不相同。例如，放射可以是电磁性的或微粒性的。可用于实施本发明的电磁放射包括但不限于X-射线和γ射线。可用于实施本发明的微粒放射包括但不限于电子束(β粒子)、质子束、中子束、α粒子和负π介子。利用常规的放射学处理仪器与方法，借助操作内和定向(intraoperative and stereotactic)方法，可以递送放射。另外关于适用于实施本发明的放射处理的讨论可以参见Steven A.Leibel等，Textbook of Radiation Oncology(1998)(publ.W.B.Saunders Company)，特别是第13和14章。还可以借助其他方法递送放射，例如靶向递送，例如借助放射性“种子”，或者借助靶向放射性缀合物的全身递送。J.Padawer等，Combined Treatment withRadioestradiol lucanthone in Mouse C3HBA Mammary Adenocarcinomaand with Estradiol lucanthone in an Estrogen Bioassay，Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.7347-357(1981)。其他放射递送方法也可以用于实施本发明。
就肿瘤疗法而言，已经研究了α和β粒子发射体。α粒子是特别好的细胞毒性剂，因为它们在一个或两个细胞直径内散发大量能量。β粒子发射体具有相对长的穿透距离(组织中2-12mm)，这依赖于能量水平。长距穿透对具有异质血流和/或受体表达的实体肿瘤而言是特别重要的。β粒子发射体产生更均匀的剂量分布，即使它们不均匀分布在靶组织内也是如此。
给药的方式和剂量本发明方法包含对需要治疗的患者在第一治疗程序中给以第一量组蛋白脱乙酰酶抑制剂，在第二治疗程序中给以第二量或剂量放射。第一与第二量一起构成治疗有效量。
本文所用的术语“患者”表示治疗的接受者。哺乳动物和非哺乳动物患者都包括在内。在具体的实施方式中，患者是一种哺乳动物，例如人、犬、鼠、猫、牛、绵羊、猪或山羊。在特定的实施方式中，患者是人。
HDAC抑制剂的给药本发明HDAC抑制剂可以按口服形式给药，例如片剂、胶囊剂(它们各自包括持续释放或定时释放的制剂)、丸剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、酊剂、混悬液、糖浆剂和乳剂。同样，HDAC抑制剂可以按静脉内(快速注射剂(bolus)或输注)、腹膜内、皮下或肌内方式给药，所有这些方式都是药学领域普通技术人员熟知的。
HDAC抑制剂可以按药库注射剂或植入制备物的剂型给药，它们可以按照这样一种方式配制，以便活性成分的持续释放。可以将活性成分压制成颗粒状物或小型圆柱体，作为药库注射剂或植入剂皮下或肌内植入。植入剂可以采用惰性材料，例如生物可降解的聚合物或合成的硅酮，例如硅橡胶、硅酮橡胶或其他由Dow-Corning Corporation制造的聚合物。
HDAC抑制剂还可以按脂质体递送系统的方式给药，例如小型单层囊、大型单层囊和多层囊。脂质体可以从各种磷脂生成，例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。
HDAC抑制剂还可以利用单克隆抗体作为与化合物分子偶联的单独载体加以递送。
HDAC抑制剂还可以利用可溶性聚合物作为可靶向药物载体加以制备。这类聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基-丙基-异丁烯酰胺-苯酚、聚羟乙基-天冬酰胺-苯酚或被棕榈酰残基取代的聚氧乙烯-聚赖氨酸。此外，HDAC抑制剂还可以利用生物可降解的聚合物加以制备，可用于实现药物的控制释放，所述聚合物例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸与聚乙醇酸的共聚物、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和交联或两亲的水凝胶嵌段共聚物。
采用HDAC抑制剂的剂量方案可以根据各种因素加以选择，包括类型、种类、年龄、体重、性别和所治疗癌症的类型；所治疗癌症的严重性(即阶段)；给药的途径；患者的肾与肝功能；和所采用的特定化合物或其盐。普通医师或兽医能够容易地确定和指定治疗所需药物的量，例如以防止、抑制(完全或部分)或阻止疾病的进展。
在用于治疗所需癌症时，HDAC抑制剂的口服剂量可以在约2mg至约2000mg每天之间，例如约20mg至约2000mg每天，例如约200mg至约2000mg每天。例如，口服剂量可以是约2、约20、约200、约400、约800、约1200、约1600或约2000mg每天。可以理解，每天的总量可以在单剂中给予，或者可以分多次给予，例如每天两次、三次或四次。
例如，患者可以接受约2mg/天至约2000mg/天，例如约20-2000mg/天，例如约200至约2000mg/天，例如约400mg/天至约1200mg/天。适当制成每天给药一次的药剂因而可以含有约2mg至约2000mg，例如约20mg至约2000mg，例如约200mg至约1200mg，例如约400mg/天至约1200mg/天。HDAC抑制剂可以在单剂中给药，或者每日分两次、三次或四次给药。就每天给药两次而言，适当制成的药剂因此将含有所需每日剂量的一半。
患者静脉内或皮下接受HDAC抑制剂的量将足以递送约3-1500mg/m2每天，例如约3、30、60、90、180、300、600、900、1200或1500mg/m2每天。这类量可以按多种适合的方式给予，例如大体积低浓度HDAC抑制剂，每天一个较长的时间或者若干次。也可以每周(7天周期)给予连续一天或多天、间歇的数天或其组合。或者，例如低体积高浓度HDAC抑制剂，在较短的时间内，例如每天一次达一天或多天，每周(7天周期)连续、间歇或其组合。例如，可以给予300mg/2每天的剂量达连续5天，每次治疗总计1500mg/m2。在另一种服药方案中，连续天数也可以是5，治疗持续连续2或3周，治疗总计3000mg/m2和4500mg/m2。
通常，静脉内制剂可以被制成含有浓度在约1.0mg/mL至约10mg/mL之间的HDAC抑制剂，例如2.0mg/mL、3.0mg/mL、4.0mg/mL、5.0mg/mL、6.0mg/mL、7.0mg/mL、8.0mg/mL、9.0mg/mL和10mg/mL，给药量达到上述剂量。在一种实施例中，可以在一天内对患者给以足量体积的静脉内制剂，以便当天的总剂量在约300与约1500mg/m2之间。
可以使用葡萄糖醛酸、L-乳酸、乙酸、柠檬酸或任意药学上可接受的酸/共轭碱作为缓冲剂，它们在HDAC抑制剂静脉内给药可接受的pH范围内具有合理的缓冲能力。还可以采用氯化钠溶液，其中已经用酸或碱、例如盐酸或氢氧化钠调节pH至所需的范围。通常，静脉内制剂的pH范围可以在约5至约12的范围内。其中HDAC抑制剂具有异羟肟酸部分的静脉内制剂所优选的pH范围可以是约9至约12。在选择适当的赋形剂时应当考虑HDAC抑制剂的溶解度和化学相容性。
皮下制剂优选地按照本领域熟知的工艺制备，pH在约5与约12之间的范围内，还包括适合的缓冲剂和等渗剂。它们可以被配制成在一次或多次每日皮下给药中递送HDAC抑制剂的每日剂量，例如每天一次、两次或三次。适当缓冲剂和制剂pH的选择依赖于所要给药的HDAC抑制剂的溶解度，本领域普通技术人员容易确定之。在皮下制剂中也可以采用氯化钠溶液，其中已经用酸或碱、例如盐酸或氢氧化钠调节pH至所需的范围。通常，皮下制剂的pH范围可以在约5至约12的范围内。其中HDAC抑制剂具有异羟肟酸部分的皮下制剂所优选的pH范围可以是约9至约12。在选择适当的赋形剂时应当考虑HDAC抑制剂的溶解度和化学相容性。
HDAC抑制剂还可以以鼻内方式给药，经由适合的鼻内载体的局部应用，或者经由透皮途径，采用本领域普通技术人员熟知的透皮贴剂形式。为了以透皮递送系统的形式给药，剂量给药在整个剂量方案中当然将是连续的，而非间歇的。
HDAC抑制剂可以作为活性成分与适合的药物稀释剂、赋形剂或载体(本文总称为“载体”材料)混合给药，所述载体材料根据预期给药方式加以适当选择，也就是口服片剂、胶囊剂、酏剂、糖浆剂等，并且与常规的药学实践相一致。
例如，就以片剂或胶囊剂形式口服给药而言，HDAC抑制剂可以与口服无毒性的药学上可接受的惰性载体混合，例如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、甘露糖醇、山梨糖醇等或其组合；就以液体形式口服给药而言，口服药物组分可以与任意口服无毒性的药学上可接受的惰性载体混合，例如乙醇、甘油、水等。而且，如果需要或必要的话，还可以向混合物掺入适合的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂。适合的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然与合成的树胶(例如阿拉伯胶、黄蓍胶或藻酸钠)、羧甲基纤维素、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、聚乙二醇、蜡等。用在这些剂型中的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂非限制性地包括淀粉甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。
本文所述适用于本发明方法的组蛋白脱乙酰酶化合物的适合的药学上可接受的盐是常规的无毒性盐，可以包括碱盐或酸加成盐，例如无机碱盐，例如碱金属盐(例如锂盐、钠盐、钾盐等)、碱土金属盐(例如钙盐、镁盐等)、铵盐；有机碱盐，例如有机胺盐(例如三乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、乙醇胺盐、三乙醇胺盐、二环己胺盐、N，N’-二苄基乙二胺盐等)等；无机酸加成盐(例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等)；有机羧酸或磺酸加成盐(例如甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对-甲苯磺酸盐等)；碱性或酸性氨基酸盐(氨基酸例如精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等)等。
组蛋白脱乙酰酶抑制剂和放射还可以用在治疗细胞癌症的方法中，所述方法包含使该细胞与第一量能够抑制组蛋白脱乙酰酶的化合物或其盐接触，和使该细胞与第二量放射疗法接触，以防止、抑制(完全或部分)或阻止癌症的进展。细胞可以是转基因的细胞。在另一种实施方式中，细胞可以是在患者中的，例如哺乳动物，例如人。
在某些实施方式中，治疗细胞癌症的第一量是HDAC抑制剂的约1pM至约50μM接触浓度，例如约1pM至约5μM，例如约1pM至约500nM，例如约1pM至约50mM，例如1pM至约500pM。在特定的实施方式中，浓度小于约5.0μM。在另一种实施方式中，浓度是约500nM。
外束放射的给药就外束放射的给药而言，给药量可以是至少约1戈瑞(Gy)，至少每隔一天一次至治疗体积。在一个特定实施方式中，放射给予每天2戈瑞(Gy)，至少每天一次至治疗体积。在另一特定的实施方式中，放射给予至少约2戈瑞(Gy)，至少每天一次至治疗体积达每周连续五天。在另一种特定的实施方式中，放射给予10Gy每隔一天，每周三次至治疗体积。在另一种特定的实施方式中，对需要的患者给予总计至少约20Gy。在另一种特定的实施方式中，对需要的患者给予至少约30Gy。在另一种特定的实施方式中，对需要的患者给予至少约40Gy。
通常，患者一周接受外束疗法四或五次。完整的治疗过程通常持续一至七周，这依赖于癌症的类型和治疗的目标。例如，患者可以接受2Gy/天的剂量达30天。
放射药物试剂的给药有大量方法供放射药物试剂的给药。例如，放射药物试剂可以借助靶向放射性缀合物的靶向递送或全身递送进行给药，例如放射性标记的抗体、放射性标记的肽和脂质体递送系统。
在一个特定的靶向递送实施方式中，放射性标记的药物试剂可以是放射性标记的抗体。例如参见Ballangrud A.M.等，Cancer Res.，2001；612008-2014和Goldenber，D.M.J.Nucl.Med.，2002；43(5)693-713，其内容结合在此作为参考。
在另一种特定的靶向递送实施方式中，放射性药物试剂可以以脂质体递送系统的形式给药，例如小型单层囊、大型单层囊和多层囊。脂质体可以是由各种磷脂生成的，例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。例如参见Emfietzoglou D，Kostarelos K，Sgouros G.An analyticaldosimetry study for the use of radionuclide-liposome conjugatesin internal radiotherapy.J Nucl Med 2001；42499-504，其内容结合在此作为参考。
在另外一种特定的靶向递送实施方式中，放射性标记的药物试剂可以是放射性标记的肽。例如参见Weiner RE，Thakur ML.Radiolabeledpeptides in the diagnos is and therapy of oncological diseases.Appl Radiat Isot 2002 Nov；57(5)749-63，其内容结合在此作为参考。
除了靶向递送以外，近程疗法(Bracytherapy)可以用于向靶部位递送放射性药物试剂。近程疗法是这样一种技术，它将放射源置于尽可能接近肿瘤部位处。经常将放射源直接插入肿瘤内。放射源可以是丝、种子或杆的形式。一般使用铯、铱或碘。
近程疗法有两种类型腔间治疗和间质治疗。在腔间治疗中，将容纳放射源的容器置于肿瘤中或附近。将放射源置于体腔内。
在间质治疗中，将单独的放射源置于肿瘤中。这些放射源可以永久留在患者中。经常在若干天后从患者中除去放射源。放射源位于容器内。
另外，利用任意一种上文关于HDAC抑制剂所述给药方式可以将放射药物试剂对患者给药。
本领域技术人员基于关于特定癌症类型的已知剂量可以确定所必需的放射量。例如参见Cancer Medicine 5th ed.，Edited by R.C.Bast等，July 2000，BC Decker，其完整内容结合在此作为参考。
在特定的实施方式中，在与HDAC抑制剂联合给药时，放射的给药量有效导致癌症的终止或消退。
联合给药第一治疗程序是组蛋白脱乙酰酶抑制剂的给药，可以发生在第二治疗程序放射之前、在放射治疗之后、与放射同时或其组合。第一与第二量可以在给药之前联合，或者同时给以不同的部位。例如，可以根据组蛋白脱乙酰酶抑制剂决定总的治疗周期。放射可以在抑制剂治疗开始之前或者在抑制剂治疗之后给予。另外，放射治疗可以在抑制剂给药期间给予，但是不必跨越整个抑制剂治疗阶段。
下列实施例更充分地阐述优选的发明实施方式。不过，它们决不应当被解释为限制本发明的宽泛范围。
实验方法材料和方法细胞培养从ATCC(Manassas，VA)购买人前列腺癌细胞系LNCaP(CRL 1740)。使储备T-瓶培养物在37℃、95％相对湿度和5％CO2下繁殖，所用RPMI 1640(Invitrogen，Carlsbad，CA)补充有10％胎牛血清(Sigma，St.Louis，MO)、100单位/mL青霉素和100mg/mL链霉素(Gemini Bio-products，Woodland，CA)。通过用血细胞计数器计数经过胰蛋白酶处理的细胞，测定细胞浓度。
球状体引发按照Yuhas等的液体覆盖技术引发肿瘤细胞簇或球状体。参见Yuhas J.M.等，Cancer Res.，37.3639-3643，1977。关于LNCaP球状体生成和鉴别的细节参见Ballangrud A.M.等，Clin.Cancer Res.，5.3171s-3176s，1999。上述文献的完整内容结合在此作为参考。
简而言之，从100mm或35mm培养皿制备液体覆盖平板(BectonDickinson Labware，Franklin Lakes，NJ)，其中含有RPMI 1640培养基的薄层，所述培养基用1％琼脂固化(Difco，Detroit，MI)。向培养基接种6.7×104细胞/mL经过胰蛋白酶处理的储备培养物。所得悬液用于向100mm平板接种大约106细胞。培育5-7天后，使用Eppendorf吸管在配有目镜刻度的逆相-反差显微镜(Axiophot 2；Carl Zeiss Ltd.，Gttingen，Germany)下选择直径～200μm的球状体。
处理方案每次处理后，将球状体悬于新鲜培养基中洗涤三次。全部处理由SAHA培育、照射或暴露于SAHA与放射组成。每种条件使用最少12个球状体，实验一式两份。
就SAHA培育而言，将10mM在DMSO中的储备溶液系列稀释在培养基中，得到1-5μM SAHA，最终DMSO浓度＜0.01％。将12-24个经过洗涤的球状体置于如上所述琼脂-预备35mm培养皿，覆盖含有充分SAHA的培养基，以覆盖整个琼脂表面。
就外束照射而言，利用铯辐射器使球状体暴露于急性剂量的6Gy外束光子照射，剂量率为2.3Gy/min(Cs-137 Model 68；JL Shepherd andAssociates，Glendale，CA)。
就α-发射性放射而言，使球状体暴露于放射性浓度为100nCi/mL的Ac225-HuM 195α-发射性放射达24小时。Ac225-HuM 195是一种重组人源化抗-CD33单克隆抗体，它已经用锕225放射性标记过。从DavidScheinberg，M.D.，Ph.D.，Memorial Sloan-Kettering Cancer Center的实验室获得该抗体。
在全部处理之后，将经过洗涤的球状体置于单独24孔平板的琼脂-预备孔中。将未处理的球状体洗涤，在初选之后立即分离。置换每孔中的培养基，进行体积测量，每周两次。利用前述反转显微镜和目镜刻度，测定主直径和次直径，分别为dmax和dmin，根据V＝(1/6)πdmaxdmin2计算球状体体积。一旦球状体超出显微镜视野或者碎裂为个别的细胞或多个小细胞簇，即终止体积监测。在每次实验结束时，利用向外生长测定法(outgrowth assay)为没有重新生长的球状体的生存力评分——从含有没有重新生长的球状体的小孔中收集细胞或球状体片段，置于单独的无琼脂(粘连)24孔平板的个别小孔中，培育2周，然后为集落评分。
免疫组织化学分别借助Ki67或TdT-介导的dUTP-生物素缺口端标记(TUNEL)染色评估球状体内肿瘤细胞的增殖或细胞凋亡。在处理后0、6、24或48小时，将球状体在冷培养基中洗涤，在4％低聚甲醛中固定4小时，置于石蜡块中。利用切片机切制系列5μm石蜡块切片，固定在包被聚-L-赖氨酸的玻片上，在冰冷的丙酮中固定10分钟。
利用针对Ki67的单克隆小鼠抗体和MOM试剂盒(Vector Labs，Burlingame，CA)进行Ki67染色。
将细胞凋亡的细胞用改自Gavrieli等的TUNEL染色(J Cell Biol.119493-501.，1992)。最后在苏木精中温育2分钟，用于使切片复染色。使用未处理的球状体作为对照；使用DNA酶I创建阳性对照(Boehringer，Ingelheim，Germany)。利用所连接的Pixera专业照相机和有关软件(Pixera Visual Communication Suite，Pixera，LosGatos，CA)，从逆相-反差显微镜捕获数码图象。为图象的阳性染色评分，为球状体切片内反应性细胞的百分比。
统计学分析为了评估SAHA与放射之间的协同性，测量每一球状体的肿瘤体积曲线下面积(AUC)。对肿瘤生长的协同抑制作用被定义为联合治疗组平均产生比加和模型预期更小的log AUC，所述模型单独包括每种治疗组。我们把这种关系描述为下列不等式avg(V|S＝5M，R＝6Gy)＜C+{avg(V|S＝5μM，R＝0)-C}+{avg(V|S＝0，R＝6Gy)-C}其中V是log AUC，S＝5μM和R＝6Gy代表用在实验中的SAHA和放射的剂量，C是对照组中的平均log AUC[C＝avg(V|S＝0，R＝0)]。为了测试协同性，我们计算了平均log AUC的2000个引导副本(bootstrap replicate)，就四组中的每组而言，还计算了其中没有得到该不等式的副本比例。这种比例被称为所达到的显著性水平(p值)。所达到的显著性水平小说明由于联合治疗已经发生对肿瘤生长的协同抑制作用。
利用双尾T检验测试阳性染色细胞百分比的显著性差异。
结果实施例SAHA对球状体生长的影响在对化疗剂和放射的响应已经显示大约好于体内肿瘤中所见到的响应的球状体中进行研究(Stuschke，M.等，Int J Radiat Oncol BiolPhys.24119-26，1992；Santini，M.T.等，Int J Radiat Biol.75787-99，1999；Dertinger，H.等，Radiat Environ Biophys.19101-7，1981)。
SAHA对球状体生长的影响是这样检查的，将球状体用0、1.25、2.5和5μM SAHA温育120小时或者连续培养(图1A-D)。在用SAHA温育120小时或40天连续处理之后监测球状体生长达至少40天。在1.25μMSAHA的浓度下，球状体的生长被延迟，但是就120小时和连续暴露条件而言都没有被阻止。在2.5μM下，在120小时培育阶段观察到完全的生长阻止。在药物暴露结束后，生长抑制持续另外4至5天。这种恢复的延迟之后是指数生长，之后是平台期(即Gompertzian生长(Bassukas，I.D.Cancer Res.544385-92.，19949))，与未处理球状体所得相似。用5μM SAHA培育120小时后五天，见到中位体积减少2.4倍，然后球状体生长恢复至Gompertzian动力学。在0(没有SAHA暴露)、1.25、2.5和5μM SAHA(5天培育)之后球状体体积达到1000倍于起始体积所需时间(大约10个体积加倍时间)分别为16、20、23和29天；分别产生4、7和13天的生长延迟，就SAHA处理过的球状体而言。
2.5μM下球状体的连续暴露导致完全的生长抑制；在5μM下，观察到球状体体积迅速下降，大部分球状体在第20天之前解聚。受阻或解聚的球状体的典型形态如图2A(5μM)和图2B(2.5μM)所示。
为了评价SAHA作为抗肿瘤细胞剂的活性，有益的是对比利用球状体与单层培养物实验所得结果。在LNCaP单层细胞培养物中，2.5μM SAHA导致完全的生长抑制，在4天阶段内有很少至没有细胞杀死，5μM SAHA导致进行性细胞杀死，开始于SAHA培育48小时后(Butler，L.M.等，Cancer Res.605165-70，2000)。
在这些实验中，LNCaP球状体对这些浓度的体积响应一般与单层培养物结果是一致的(图1A-D)。不过，图象(图2A-B)揭示这些效果的时标和病因学不同于单层培养物所见到的。在5μM下，直到用SAHA培育13至16天后才发生完全的球状体破坏；2.5μM下的表观生长抑制似乎主要引起球状体表面上细胞的连续丧失。正如TUNEL染色(见下和图5A-C)所显示的和形态学与球状体中细胞的迅速消除(图2A)所提示的，暴露于SAHA之后的细胞死亡主要是细胞凋亡。
实施例2SAHA和外束放射对球状体生长的影响以前已经报道过LNCaP球状体对外束、低LET、高剂量率照射的剂量响应(Ballangrud，A.M.，等，Cancer Res.612008-14.，2001；Enmon，R.M.，等，Cancer Res.submitted)。基于这些数据，在联合研究中选择3和6Gy的吸收剂量，因为这些剂量的单独放射产生这样的生长曲线，形状上匹配未处理曲线，但是延迟4至10天达到1000倍于原始球状体体积。基于SAHA剂量响应数据(图1A-D)，选择用5μM SAHA培育96小时供联合研究。联合治疗是这样进行的，使球状体暴露于SAHA达48小时，照射，然后培育另外48或72小时，再洗涤和监测生长。
在本研究中使用生长成为球状体的LNCaP。采用下列处理方案A没有处理B用5μM SAHA处理96小时C利用Cs-137辐射器进行6Gy急性照射处理，剂量率为2.3Gy/min(Cs-137 Model 68JL Shepherd and Associated，Glendale，CA)。处理均匀跨越球状体，采用0.2keV/μm的低LET。
D用5μM SAHA处理总计96小时，在总计96小时的SAHA暴露的48小时后利用Cs-137辐射器(如上所述)进行6Gy急性照射。
3Gy(与120小时SAHA)联合研究使球状体生长产生适度的SAHA-剂量依赖性延迟；在5μM浓度下观察到7天延迟(数据没有显示)。
6Gy与用5μM SAHA培育96小时的联合研究导致完全的生长抑制，在向外生长测定法中12个球状体无一形成集落(图3D)。相反，单独的放射(图3C)或单独暴露于5μM SAHA达96小时(图3B)分别产生5和15天延迟，就原始体积增加1000倍而言。这些结果的统计学分析表明联合治疗产生对肿瘤生长的协同抑制作用(p＜0.01)。图4描绘在联合疗法后不同时间的典型球状体形态。在治疗结束后不久(第4和9天)，球状体的外观与仅用SAHA处理所见到的相似。在晚些时候，球状体形态发生可观的改变；球状体似乎由少量肿胀的、可能坏死的细胞组成。
实施例3SAHA和外束放射对细胞凋亡的影响为了检查SAHA是否增加放射-诱导的细胞凋亡，在单一或联合疗法结束后不同时间进行球状体切片的TUNEL染色。在96小时SAHA培育结束后不久，球状体表面上的大多数细胞经历细胞凋亡，在球状体内部很少有细胞凋亡的迹象(图5A)。这种发现与SAHA处理3天和6天的球状体形态学外观也是一致的(图2A)。SAHA培育结束后48小时，在球状体表面上没有检测到细胞凋亡细胞，可能由于脱落，发现细胞凋亡细胞遍及球状体。在内部，细胞碎屑袋也很明显。这些在SAHA培育结束后不久都很明显，但是在6和24小时后变为更加突出。用SAHA和放射处理过的球状体的TUNEL染色产生几乎相同的图案，提示了尽管SAHA诱导实质性细胞凋亡，不过组合处理所见到的协同性球状体响应不能由细胞凋亡增强来解释(图7A)。
实施例4SAHA和外束放射对增殖的影响与实施例3所示TUNEL染色结果相反，对应的免疫组织化学研究借助Ki67染色检查增殖活性，显示单独每种处理与组合对细胞增殖的实质性差异(图6A-C和7B)。在用SAHA培育96小时结束时，事实上构成球状体的全部细胞都已经停止细胞周期。这与SAHA的已知细胞周期抑制效果是一致的。抑制效果是短暂的，在6至24小时内可以见到微弱的阳性Ki67染色。48小时时，遍及切片的很多细胞显示在仅用SAHA处理的球状体中有强烈的Ki67染色。在用组合处理的球状体中见到没有这样的染色(p＜0.01)。
实施例5SAHA和α-放射对球状体生长的影响为了测试SAHA与发射α-粒子的放射性同位素的组合的影响，如下进行联合处理使球状体暴露于100nCi/mL Ac-225达24小时，然后暴露于SAHA达96小时。
LNCaP细胞如上生长成球状体。采用下列处理方案A没有处理B用5μM SAHA处理96小时C用100nCi/mL Ac225-HuM 195处理24小时D用5μM SAHA处理总计96小时，在SAHA处理之前用100nCi/mLAc225-Hum 195处理24小时。
24小时暴露于Ac225-Hum 195继之以用5μM SAHA培育96小时的联合研究导致完全的生长抑制，这维持50天的时间(图8)。相反，单独的Ac225-Hum 195处理没有导致球状体的生长抑制，单独的96小时暴露于5μM SAHA产生最初的10天延迟，继之以球状体生长至几乎为未处理对照球状体体积在30天后的水平。在这些实验中选择抗-CD33抗体，因为已知它不与前列腺癌细胞或球状体结合，从而能够控制培育时间和由Ac225放射性核素递送的α-粒子剂量。“无关”抗体的使用更容易计算递送至球状体的吸收剂量，因为在培育期后没有放射性保留。在建立剂量-响应关系中和在确保所观察到的协同效果主要由于SAHA与放射的组合而非抗体介导的效应中，这一点尤为重要。在实践中，可以使用识别肿瘤细胞上抗原位点的特异性抗体来递送放射性核素。
发现的总结放射与SAHA的组合产生生长抑制，引起球状体体积相对于每种单独的用药程式而言存在一万至十万倍的差异(图3A-D)。仅用SAHA处理与联合处理过的球状体的TUNEL染色结果提示了功效的协同性增加似乎不是细胞凋亡增强的结果(图5A与图5B和图7A)。这种观察结果与联合处理结束后不久和若干周至一个多月以后的球状体形态学特征是一致的。在用6Gy照射过的球状体的SAHA暴露结束后(图4，4天)，球状体的形态学外观与仅用SAHA处理过的球状体相似，与SAHA-诱导的细胞凋亡是一致的。相比之下，14至42天的形态学显示有细胞肿胀和溶解，与坏死性死亡是一致的。
在仅用SAHA处理与联合处理之间球状体命运分歧的最早证据是在Ki67染色中观察到的(图6A-C和7B)。单独用5μM SAHA培育结束后48小时，观察到增殖中的细胞，而在用SAHA和放射处理过的球状体中见到没有这类恢复；在所用剂量下，单独的放射没有改变细胞增殖，正如Ki67染色所评价的(图6C，H栏)。总之，增殖和细胞凋亡数据提示了SAHA与放射的增强效应主要由于随后细胞在用SAHA培育后增殖的减少，而非放射-诱导的细胞凋亡增加。
细胞在暴露于SAHA与放射联合疗法后不能重新开始细胞周期，这可能由于放射诱导损伤的修复的破坏或者其他可修复DNA损伤的增强。
尽管已经参照优选的实施方式确切地显示和描述了本发明，不过将为本领域技术人员所理解的是，可以进行各种形式和细节上的变化，而不背离由权利要求书所涵盖的发明范围。
权利要求
1.治疗需要治疗的患者癌症的方法，包含对所述患者在第一治疗程序中给以第一量组蛋白脱乙酰酶抑制剂，在第二治疗程序中给以第二量放射，其中第一与第二量一起构成治疗有效量。
2.根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂是一种异羟肟酸衍生物、短链脂肪酸(SCFA)、环状四肽、苯甲酰胺衍生物或亲电性酮衍生物。
3.根据权利要求2的方法，其中所述HDAC抑制剂是一种异羟肟酸衍生物，选自由SAHA、Pyroxamide、CBHA、制滴菌素A(TSA)、制滴菌素C、水杨异羟肟酸(SBHA)、壬二酸双异羟肟酸(ABHA)、壬二酸-1-异羟肟酸-9-酰基苯胺(AAHA)、6-(3-氯苯基脲基)己酸异羟肟酸(3Cl-UCHA)、Oxamflatin、A-161906、Scriptaid、PXD-101、LAQ-824、CHAP、MW2796和MW2996组成的组。
4.根据权利要求2的方法，其中所述HDAC抑制剂是一种环状四肽，选自由Trapoxin A、FR901228(FK 228，Depsipeptide)、FR225497、Apicidin、CHAP、HC-Toxin、WF27082和Chlamydocin组成的组。
5.根据权利要求2的方法，其中所述HDAC抑制剂是一种短链脂肪酸(SCFA)，选自由钠的丁酸盐、异戊酸盐、戊酸盐、4-苯基丁酸盐(4-PBA)、苯基丁酸盐(PB)、丙酸盐、丁酰胺、异丁酰胺、苯基乙酸盐、3-溴丙酸盐、甘油三丁酸酯、丙戊酸和丙戊酸盐组成的组。
6.根据权利要求2的方法，其中所述HDAC抑制剂是一种苯甲酰胺衍生物，选自由CI-994、MS-27-275(MS-275)和MS-27-275的3′-氨基衍生物组成的组。
7.根据权利要求2的方法，其中所述HDAC抑制剂是一种亲电性酮衍生物，选自由三氟甲基酮和一种α-酮基酰胺组成的组。
8.根据权利要求2的方法，其中所述HDAC抑制剂是Depudecin。
9.根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂是由下列结构所代表的 或其药学上可接受的盐。
10.根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂是由下列结构所代表的pyroxamide 或其药学上可接受的盐。
11.根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂是由下列结构所代表的 或其药学上可接受的盐。
12.根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂是由下列结构所代表的 或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水化物，其中R1和R2可以是相同或不同的；当R1与R2相同时，各自是取代或未取代的芳基氨基环烷基氨基或哌啶子基；当R1与R2不同时，R1＝R3-N-R4，其中每个R3和R4独立地是彼此相同或不同的，是氢原子、羟基、取代或未取代的直链或支链烷基、链烯基、环烷基、芳基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基，或者R3和R4一起键合构成哌啶基；R2是羟氨基、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或烷氧基；并且n是约4至约8的整数。
13.根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂是由下列结构所代表的 或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水化物，其中R是取代或未取代的苯基、哌啶子基、噻唑基、2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基；并且n是约4至约8的整数。
14.根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂是由下列结构所代表的 或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水化物，其中A是酰胺部分；R1和R2各自选自取代或未取代的芳基、芳基氨基、芳基烷基氨基、芳基烷基、芳氧基或芳基烷氧基；R4是氢、卤素、苯基或环烷基；并且n是约3至约10的整数。
15.根据权利要求1的方法，其中该第二治疗程序的放射是外束放射。
16.根据权利要求1的方法，其中该第二治疗程序的放射是一种放射药物试剂。
17.根据权利要求16的方法，其中该放射药物是一种放射性缀合物。
18.根据权利要求17的方法，其中所述放射性缀合物是一种放射性标记的抗体。
19.根据权利要求1的方法，其中该放射选自由电磁放射和微粒放射组成的组。
20.根据权利要求19的方法，其中该电磁放射选自由X-射线、γ射线和其任意组合组成的组。
21.根据权利要求19的方法，其中该微粒放射选自由电子束(β粒子)、质子束、中子束、α粒子和负π介子组成的组。
22.权利要求21的方法，其中该微粒放射是α粒子。
23.根据权利要求1的方法，其中向该患者给以总计至少约1Gy的放射。
24.根据权利要求1的方法，其中向该患者给以总计至少约10Gy的放射。
25.根据权利要求1的方法，其中向该患者给以总计至少约20Gy的放射。
26.根据权利要求1的方法，其中向该患者给以总计至少约40Gy的放射。
27.根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂和所述放射的治疗效果是协同性的。
28.根据权利要求26的方法，其中所述HDAC抑制剂使该患者中的癌细胞敏感于放射。
29.根据权利要求1的方法，其中放射使该患者中的癌细胞敏感于所述HDAC抑制剂。
30.根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂和放射是同时给予的。
31.根据权利要求1的方法，其中所述HDAC抑制剂和所述放射是先后给予的。
32.根据权利要求31的方法，其中所述HDAC抑制剂是在给以所述放射之前给药的。
33.根据权利要求31的方法，其中所述HDAC抑制剂是在给以所述放射之后给药的。
34.权利要求1的方法，其中该HDAC抑制剂是口服、肠胃外、腹膜内、静脉内、动脉内、透皮、舌下、肌内、直肠、经颊、鼻内、经由吸入、阴道、眼内、局部、皮下、脂肪内、关节内、鞘内给药的。
35.权利要求1的方法，其中该HDAC抑制剂是一种缓释剂型。
36.权利要求16的方法，其中该放射药物试剂是口服、肠胃外、腹膜内、静脉内、动脉内、透皮、舌下、肌内、直肠、经颊、鼻内、经由吸入、阴道、眼内、局部、皮下、脂肪内、关节内或鞘内给药的。
37.权利要求16的方法，其中该放射药物试剂是一种缓释剂型。
38.测定癌细胞对HDAC抑制剂与放射联合疗法敏感性的方法，所述方法包含下列步骤使所述癌细胞在第一治疗程序中与第一量组蛋白脱乙酰酶抑制剂接触，在第二治疗程序中与第二量放射接触，其中第一与第二治疗一起构成治疗有效量，再评估该细胞对治疗的敏感性。
39.测定HDAC抑制剂与放射的组合治疗癌症的治疗有效量的方法，包含下列步骤使癌细胞在第一治疗程序中暴露于第一量组蛋白脱乙酰酶抑制剂，在第二治疗程序中暴露于第二量放射，其中第一与第二治疗一起构成治疗有效量，再评估抗癌效果。
40.药物组合物，包含第一量组蛋白脱乙酰酶抑制剂和第二量放射，其中第一与第二量一起构成治疗有效量。
41.权利要求40的组合物，其中该放射是一种放射药物试剂。
42.第一量HDAC抑制剂与第二量放射在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
43.权利要求42的用途，其中该放射是一种放射药物试剂。
全文摘要
本发明涉及治疗需要治疗的患者癌症的方法。该方法包含对需要治疗的患者在第一治疗程序中给以第一量组蛋白脱乙酰酶抑制剂，在第二治疗程序中给以第二量或剂量放射。第一与第二治疗一起构成治疗有效量。HDAC抑制剂与放射疗法的组合在治疗上是有协同性的。
文档编号A61K31/44GK1728991SQ03813849
公开日2006年2月1日 申请日期2003年4月15日 优先权日2002年4月15日
发明者G·斯格罗斯, V·M·利驰昂, P·A·马克斯, R·A·利福坎德 申请人:斯隆-凯特林癌症研究院