专利名称：缓释组合物的制备方法
技术领域：
本发明涉及缓释组合物的制备方法，该组合物包括生理活性物质以及可生物降解聚合物，并涉及由此制备的缓释组合物，等等。
背景技术：
JP-A 57-118512、JP-A 57-150609和JP-A 6-145046公开了使用可生物降解聚合物由W/O型乳剂制备缓释微囊的方法。
缓释的可生物降解聚合物适用作例如包封生物活性物质的微囊等的基底物质。已知聚乳酸、乳酸和羟基乙酸的共聚物等适用作这种可生物降解聚合物(例如，JP-A 11-269094)。
JP-A 7-97334公开了缓释制剂和缓释制剂的制备方法，该缓释制剂包含生理活性物质或其盐和具有末端羧基的可生物降解聚合物。
本发明的目的是提供缓释组合物的制备方法，其能稳定形成W/O型乳剂，以及由所述方法制备的缓释组合物，等等。
发明内容
在这样的技术背景中，为了开发能稳定形成W/O型乳剂的缓释组合物的制备方法，发明人进行了深入的研究。结果，他们发现使用包含相对于生理活性物质过量的酸或碱的水溶液可以稳定W/O型乳剂。基于这一发现，他们深入研究并最终完成了本发明。
即，本发明提供(1)一种缓释组合物的制备方法，包括混合包含生理活性物质、摩尔量至少为1.5倍生理活性物质的酸或碱的水溶液以及可生物降解聚合物，并且干燥所得混合物；(2)根据上述(1)中的方法，其中使用生理活性物质与酸或碱的盐获得水溶液；(3)根据上述(1)中的方法，其中生理活性物质在缓释组合物中比例是约0.001至约50％重量；(4)一种稳定包含生理活性物质的水溶液和可生物降解聚合物溶液的混合物的方法，包括加入摩尔量约为生理活性物质1.5mol或更多的酸或碱；(5)一种使包含生理活性物质的水溶液和可生物降解聚合物溶液的混合物的粘度约为3,000cp或更低的方法，包括加入摩尔量约为生理活性物质1.5mol或更多的酸或碱；(6)根据上述(1)、(4)和(5)任一项的方法，其中生理活性物质是生理活性肽；(7)根据上述(6)的方法，其中生理活性肽是LH-RH衍生物；(8)根据上述(7)的方法，其中LH-RH衍生物是由如下通式表示的化合物5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z其中Y表示DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal或DHis(ImBzl)且Z表示NH-C2H5或Gly-NH2；(9)根据上述(1)、(4)和(5)任一项的方法，其中使用的酸或碱的摩尔量为生理活性物质的约1.5至约5倍；(10)根据上述(1)、(4)和(5)任一项的方法，其中使用的酸或碱的摩尔量为生理活性物质的约1.65至约3倍；(11)根据上述(1)、(4)和(5)任一项的方法，其中酸是有机酸；(12)根据上述(11)的方法，其中有机酸是脂肪酸；(13)根据上述(12)的方法，其中脂肪酸是乙酸；(14)根据上述(1)、(4)和(5)任一项的方法，其中可生物降解聚合物是α-羟基羧酸聚合物；(15)根据上述(14)的方法，其中α-羟基羧酸聚合物是乳酸-羟基乙酸聚合物；(16)根据上述(15)的方法，其中乳酸-羟基乙酸聚合物中乳酸与羟基乙酸的摩尔比是100∶0至50∶50；(17)根据上述(16)的方法，其中乳酸-羟基乙酸聚合物中乳酸与羟基乙酸的摩尔比是100∶0；(18)根据上述(15)的方法，其中乳酸-羟基乙酸聚合物的重均分子量是5,000至50,000；(19)根据上述(15)的方法，其中乳酸-羟基乙酸聚合物的重均分子量是17,000至30,000；(20)根据上述(1)的方法，其中可生物降解聚合物是重均分子量为15,000至50,000的乳酸聚合物，并且在所述乳酸聚合物中重均分子量为5,000或更低的聚合物含量为5％重量或更低；(21)根据上述(1)的方法，其中可生物降解聚合物是每单位质量(克)的聚合物具有约20至约1,000μmol末端羧基的乳酸-羟基乙酸聚合物；(22)根据上述(1)的方法，其中生物降解聚合物的末端羧基的摩尔含量为生理活性物质的约0.1至约5倍；(23)根据上述(1)、(4)和(5)任一项的方法，其中使用低水溶性有机溶剂制备可生物降解聚合物溶液；(24)根据上述(23)的方法，其中低水溶性有机溶剂是二氯甲烷；(25)根据上述(1)、(4)和(5)任一项的方法，其中化合物是均匀混合物；(26)根据上述(25)的方法，其中均匀混合物是乳剂；(27)根据上述(26)的方法，其中乳剂是W/O型乳剂；(28)根据上述(27)的方法，其中W/O型乳剂的粒径非常小；(29)根据上述(1)的方法，其中混合物的干燥是在水中干燥(in-water drying)；(30)根据上述(29)的方法，其中在水中干燥时渗透压调节剂的水溶液用作外部含水相；(31)根据上述(30)的方法，其中渗透压调节剂是甘露醇；(32)根据上述(1)的方法，其中缓释组合物是微粒形式；(33)根据上述(32)的方法，其中微粒是微球或微囊；(34)一种缓释组合物的制备方法，包括混合水溶液和可生物降解聚合物溶液以及然后干燥混合物，水溶液包含1)生理活性物质和2)含量约为所述水溶液0.1至约20％重量的酸或碱；(35)根据上述(34)的方法，其中使用生理活性物质与酸或碱的盐制得水溶液；
(36)根据上述(1)的方法制备的缓释组合物；(37)包含生理活性物质和含量为此生理活性物质摩尔量约1.5倍或更多倍的酸或碱的水溶液用于制备包含生理活性物质的缓释制剂；附图简介
图1的照片显示了实验性的实施例2中所制备的W/O型乳剂的表观。照片下的数值表示乙酸与药物的摩尔比。
图2显示了在实验性的实施例6中所用乙酸的摩尔量为肽A的1.5倍或更多倍的情况下，乳化时间和W/O型乳剂粘度的关系。
从左向右显示乙酸与药物的摩尔比为1.4、1.6、1.8、2.3和2.8的情况。
用于本发明的生理活性物质没有特别的限定，只要其是药学上有用的即可，可以是非肽类化合物或肽类化合物。非肽类化合物的例子包括激动剂、拮抗剂和具有抑酶活性的化合物。肽类化合物可以是激动剂或拮抗剂并且可以优选例如生理活性肽，适宜的生理活性肽的分子量约为300至40,000，优选约400至约30,000，更优选约500至约20,000。
本发明组合物中生理活性物质的比例依据所用生理活性物质的种类、所需的生理效果、效果的持续时间等而变化，并没有特别的限定。例如，可以是组合物总重的约0.001至约50％重量，优选约0.02至约40％重量，更优选约0.1至约30％重量，甚至更优选约0.1至约24％重量，最优选约5至约24％重量。
生理活性物质的例子包括，但不限于，生理活性肽、抗肿瘤药物、抗生素、解热药、镇痛药、消炎药、止咳祛痰药、镇静药、肌肉松弛药、抗癫痫剂、抗溃疡剂、抗抑郁药、抗过敏剂、强心药、抗心律失常药、血管扩张剂、降压利尿剂、抗糖尿病药、抗凝血剂、止血药、抗结核药、激素药物、麻醉药拮抗剂、骨再吸收抑制剂以及血管生成抑制剂。
生理活性肽的例子包括促黄体激素释放激素(LH-RH)、胰岛素、促生长素抑制素、生长激素、生长激素-释放激素(GH-RH)、催乳素、红细胞生成素、肾上腺皮质激素、促黑素细胞激素、甲状腺激素-释放激素(TRH)、促甲状腺激素、促黄体生成激素、促卵泡激素、抗利尿激素、催产素、降钙素、促胃液素、分泌素、胰酶分泌素、缩胆囊素、血管紧张素、人胎盘催乳激素、人绒毛膜促性腺激素、脑啡肽、内啡肽、京都啡肽、吞噬细胞增强激素、胸腺生成素、胸腺素、胸腺刺激素、胸腺体液因子、血液胸腺素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、胃动素、强啡肽、铃蟾素、神经降压素、雨蛙肽、缓激肽、心钠素、神经生长因子、细胞生长因子、神经营养因子、具有内皮素拮抗作用的肽和其衍生物，以及其片段和这些片段的衍生物。
该生理活性肽还可以是LH-RH拮抗剂(参见美国专利US 4,086,219，4,124,577，4,253,997，和4,317,815)。
该生理活性肽的其它例子包括胰岛素、促生长素抑制素、促生长素抑制素衍生物(参见US 4,087,390，4,093,574，4,100,117，和4,253,998)、生长激素、催乳素、促肾上腺皮质激素(ACTH)、促黑素细胞激素(MSH)、甲状腺激素-释放激素[由如下结构式表示(Pyr)Glu-His-ProNH2，在下文还称为促甲状腺素释放激素(TRH)]及其盐和衍生物(参见JP-A 50-121273和JP-A52-116465)、促甲状腺激素(TSH)、促黄体生成激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、抗利尿激素、抗利尿激素衍生物[去氨加压素，参见ENDOCRINE JOURNALVol.54，No.5，676-691页(1978)]、催产素、降钙素、甲状旁腺素、胰高血糖素、促胃液素、分泌素、胰酶分泌素、缩胆囊素、血管紧张素、人胎盘催乳激素、人绒毛膜促性腺激素(绒膜促性腺激素)、脑啡肽、脑啡肽衍生物(参见US 4,277,394和欧洲专利公开号31567)、内啡肽、京都啡肽、干扰素(例如，α-，β-，和γ-干扰素)，白细胞介素(例如，I，II，和III)、吞噬细胞增强激素、胸腺生成素、胸腺素、胸腺刺激素、胸腺体液因子(THF)、血液胸腺因子(FTS)和其衍生物(参见US.4,229,438)、其它胸腺素[Igaku no AyumiVol.125、No.10，835-843页(1983)]、肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、胃动素、强啡肽、韩蛙皮素、神经降压素、蛙皮素、缓激肽、尿激酶、天冬酰胺酶、激肽释放酶、P物质、神经生长因子、细胞生长因子、神经营养因子、凝血因子VIII和IX、氯化溶菌酶制剂、多粘菌素B、粘菌素、短杆菌肽、杆菌肽、红细胞生成素(EPO)和拮抗内皮肽的肽(参见欧洲专利公开号436189，457195，以及496452和JP-A 3-94692和JP-A 3-130299)。
抗肿瘤剂的例子包括博来霉素、氨甲喋呤、放线菌素D、丝裂霉素C、binblastin硫酸盐、bincrystin硫酸盐、柔红霉素、阿霉素、新制癌菌素、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、四氢呋喃基-5-氟尿嘧啶、云芝多糖、溶链菌、蘑菇多糖、左旋四咪唑、贝他定、叠氮美克、甘草甜素、多聚肌苷酸胞苷酸、腺苷酸尿苷酸共聚核苷酸和polyICLC。
抗生素的例子包括庆大霉素、地贝卡星、卡那霉素B、青紫霉素、托普霉素、氨丁卡那霉素、新霉素、紫苏霉素、盐酸四环素、盐酸土霉素、吡咯甲基四环素、盐酸强力霉素、氨必西林、哌拉西林、替卡西林、头孢噻吩、头孢噻啶、噻乙胺唑头孢菌素、头孢磺啶、头孢甲肟、头孢美唑、头孢唑啉、氨噻肟头孢菌素、头孢哌酮、头孢唑肟、拉氧头孢、噻嗯霉素、磺酰胺菌素和氨曲南。
解热药、止痛药和消炎药的例子包括水杨酸、安乃近、氟灭酸、双氯芬酸、消炎痛、吗啡、盐酸哌替啶、酒石酸羟甲左吗南和氧吗啡酮。
止咳祛痰药的例子包括盐酸麻黄碱、盐酸甲基麻黄碱、盐酸诺司卡品、磷酸可待因、磷酸二氢可待因、丙烯氯丙胺、盐酸氯苯达诺、盐酸哌吡苯胺、咳平、盐酸胡椒喘定、盐酸异丙肾上腺素、硫酸双异丁硫胺和硫酸叔丁肾上腺素。
镇静剂的例子包括氯丙嗪、丙氯拉嗪、三氟拉嗪、硫酸阿托品和溴化甲基东莨菪碱。
肌松药的例子包括哌二苯丙醇甲磺酸酯、氯化筒箭毒碱和溴化双哌雄双酯。
抗癫病药的例子包括苯妥英、乙琥胺、乙酰唑胺钠和利眠宁。
抗溃疡药的例子包括灭吐灵和盐酸组氨酸。
抗抑郁药的例子包括丙咪嗪、氯丙咪嗪、诺昔替林和硫酸苯乙基肼。
抗过敏药的例子包括盐酸苯海拉明、马来酸氯非那敏、盐酸苯吡二胺、盐酸甲吡咯嗪、盐酸克立咪唑、盐酸二苯拉林和喘咳宁。
强心剂的例子包括反-π-氧化樟脑、茶碱醋酸钠、氨茶碱和盐酸乙苯福林。
抗心律失常药的例子包括心得安、心得舒、布非洛尔和心得平。
血管扩张剂的例子包括盐酸麻黄苯丙酮、地尔硫卓、盐酸妥拉唑林、克冠二胺和硫酸丁酚胺。
降压利尿剂的例子包括溴化已烷双胺、血安定、盐酸美加明、盐酸乙肼苯哒嗪和可乐宁。
抗糖尿病药的例子包括糖降嘧啶钠、格列甲嗪、苯乙双胍盐酸盐、丁双胍盐酸盐和二甲双胍。
抗凝血剂的例子包括肝素钠和柠檬酸钠。
止血剂的例子包括促凝血酶原激酶、凝血酶、维生素K亚硫酸氢钠、乙酰甲萘醌、ε-氨基己酸、凝血酸、肾上腺色素缩氨脲钠磺酸盐和肾上腺素单胺胍甲磺酸酯。
抗结核药的例子包括异烟肼、乙胺丁醇和对氨基水杨酸。
激素药物的例子包括predonisolone、predonisolone磷酸钠、地塞米松硫酸钠、倍他米松磷酸钠、己雌酚磷酸盐、己雌酚醋酸盐和甲巯咪唑。
麻醉拮抗剂的例子包括洒石酸利瓦洛凡、盐酸烯丙吗啡和盐酸纳洛酮。
骨吸收抑制剂的例子包括(含硫的烷基)氨基亚甲基二膦酸。
血管生成抑制剂的例子包括血管生成-抑制甾体[参见Science，Vol.221，719(1983)]，烟曲霉素(参见欧洲专利申请公开号为325199)，和fumagillol衍生物(参见欧洲专利申请公开号为357061，359036，386667和415294)。
生理活性肽的优选例子包括有效抗激素依赖性疾病的LH-RH衍生物，尤其是依赖性激素的癌症(比如前列腺癌、子宫癌症、乳腺癌、和垂体肿瘤)或依赖性激素的疾病比如前列腺肥大、子宫内膜异位、子宫肌瘤、青春期早熟、痛经、无月经、经前期综合征和多囊卵巢综合症；对于避孕(或不孕，如果休药期后使用了反跳作用)有效的LH-RH衍生物；在预防绝经前乳腺癌手术后乳腺癌复发中有效的LH-RH衍生物；和有效抗阿尔茨海默病或免疫缺乏病的LH-RH衍生物；或其盐。其它的例子包括有效抗良性或恶性肿瘤的LH-RH衍生物，该肿瘤为非性激素-依赖性但是对LH-RH敏感。
LH-RH衍生物的具体例子包括如The Parthenon Publishing Group Ltd.于1996年发表的“Treatment with GnRH analogsControversies andperspectives”以及JP-A 3-503165、JP-A 3-101695、JP-A 7-97334和JP-A8-259460中公开的肽。
LH-RH衍生物可以是LH-RH激动剂或LH-RH拮抗剂。LH-RH拮抗剂的例子包括由通式[I]表示的肽X-D2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-A-B-Leu-C-Pro-DAlaNH2其中X代表N(4H2-糠酰)Gly或NAc，A代表选自NMeTyr、Tyr、Aph(Atz)和NMeAph(Atz)的残基，B代表选自DLys(Nic)、DCit、DLys(AzaglyNic)、DLys(AzaglyFur)、DhArg(Et2)、DAph(Atz)和DhCi的残基，以及C代表Lys(Nisp)、Arg或hArg(Et2)、阿巴瑞克、degarelix、安雷利克斯、伊妥瑞克、orntide、西曲瑞克或加尼瑞克，或其盐。
非肽LH-RH拮抗剂的例子包括在WO 95/28405(JP-A 8-295693)、WO97/14697(JP-A 9-169767)、WO 97/14682(JP-A 9-169735)或WO 96/24597(JP-A 9-169768)中描述的非肽LH-RH拮抗剂，噻吩并吡啶化合物(例如，描述于WO 00/00493中的3-(N-苄基-N-甲氨甲基)4，7-二氢-5-异丁酰基-7-(2，6-二氟苄基)-2-[4-[(1-羟基环丙基)羰基氨基]苯基]-4-氧代噻吩并[2，3-b]吡啶)，噻吩并嘧啶化合物(例如，描述于WO 00/56739中的5-(N-苄基-N-甲氨甲基)-1-(2，6-二氟苄基)-6-[4-(3-甲氧脲基)苯基]-3-苯基噻吩并[2，3-D]嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮)，以及5-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)甲基]-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-2-糠酰胺(美国癌症研究协会(AACR)，2002.4.6-10)。
LH-RH激动剂的例子包括由通式[II]表示的生理活性肽5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z其中Y代表选自DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal和DHis(ImBzl)的残基且Z代表NH-C2H5或Gly-NH2，等等。特别优选的肽中Y是DLeu且Z是NH-C2H5(也就是说，表示为下式的肽A5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5)或盐，特别其醋酸盐(醋酸亮丙瑞林)。
除了上述的亮丙瑞林外优选的LH-RH激动剂的具体例子包括(1)布舍瑞 (US 4,024,248、DE 2438352、JP-A 51-41359)；(2)曲普瑞
(US 4010125，JP-A 52-31073)；(3)纳发阮 (US 4234571，JP-A 55-164663，JP-A 63-264498，JP-A 64-25794)；(4)组氨瑞林 (5)地洛瑞林(US 4569967和4218439)；
(6)美替瑞林(WO 91/18016)； (7)血清促性素(DE 2213737)； (8)戈舍瑞林(US 4100274，JP-A 52-136172)； (9)Lecireli(比利时专利号897455，JP-A 59-59654)；和其盐。
此说明书中所用缩写的定义如下缩写 名称N(4H2-furoyl)GlyN-四氢糠酰甘氨酸残基NAc N-乙酰基D2NalD-3-(2-萘基)丙氨酸残基D4ClPhe D-3-(4-氯)苯丙氨酸残基D3PalD-3-(3-吡啶基)丙氨酸残基NmeTyr N-甲基酪氨酸残基Aph(Atz) N-[5’-(3’-氨基-1’H-1’，2’，4’-三唑基)]苯丙氨酸残基NMeAph(Atz) N-甲基-[5’-(3’-氨基-1’H-1’，2’，4’-三唑基)]苯丙氨酸残基DLys(Nic)D-(e-N-烟酰基)赖氨酸残基Dcit D-瓜氨酸残基DLys(AzaglyNic) D-(氮杂氨基乙酰基烟酰基)赖氨酸残基DLys(AzaglyFur) D-(氮杂氨基乙酰呋喃基)赖氨酸残基DhArg(Et2) D-(N，N’-二乙基)高精氨酸残基DAph(Atz)D-N-[5’-(3’-氨基-1’H-1’，2’，4’-三唑基)]苯丙氨酸残基DhCi D-高瓜氨酸残基Lys(Nisp)(e-N-异丙基)赖氨酸残基hArg(Et2)(N，N’-二乙基)高精氨酸残基这些氨基酸的缩写根据IUPAC-IUB生物化学命名委员会的定义或European Journal of Biochemistry Vol.138，9-37页，1984的定义或根据本领域的常规缩写。虽然氨基酸可以有光学异构体，除非另有说明，它们表现为L-构型。
本发明“包含生理活性物质和含量为此生理活性物质摩尔量约1.5倍或更多倍的酸或碱的水溶液”以及“含量约为所述水溶液0.1至20％重量的酸或碱”中的“酸或碱”是指通常用于制备的任何酸或碱，可以是无机酸、有机酸、无机碱、有机碱、酸性或碱性氨基酸，等等。“酸或碱”优选酸，更优选有机酸。
无机酸的优选例子包括盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸和磷酸。有机酸的优选例子包括磺酸例如甲磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸；脂肪酸比如甲酸、乙酸和丙酸；脂肪族的二羧基酸比如草酸、丙二酸和琥珀酸；不饱和脂肪酸比如丙烯酸、富马酸和马来酸；碳环的羧酸类比如酞酸、间苯二酸和对苯二甲酸；和取代羧酸类比如三氟乙酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸和羟基乙酸。其中，更优选使用脂肪酸、乳酸和羟基乙酸，并且特别优选使用乙酸。酸性氨基酸的优选例子包括天冬氨酸和谷氨酸。碱性氨基酸的优选例子包括精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸。无机碱的优选例子包括碱金属比如钠和钾；碱土金属比如钙和镁；碱金属氢化物比如氢化锂、氢化钾和氢化钠；无机氢氧化物比如氧化锂，氢氧化钾，氢氧化钠和氢氧化钙；碳酸盐比如碳酸钠，碳酸钾和碳酸氢钠；铝，以及铵。有机碱的优选例子包括金属醇化物具有1至6碳原子，比如乙醇锂、叔丁氧锂、甲醇钠、乙醇钠和叔丁氧钾金属；金属酚盐比如苯酚钾和苯酚钠；醋酸盐比如醋酸钠和乙酸钾；有机锂盐比如正丁基锂、叔丁基锂和二乙氨基锂；肼比如苯肼和对甲苯肼；脒；季铵碱；锍碱；和胺比如三甲胺、三乙胺、吡啶、皮考啉、2，6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、环己胺、二环己胺和N，N’-二苄基亚乙基二胺。
当该酸是有机酸时，并不特别地限制其pKa，其pKa例如，优选在约0.1至约6.0之间，更优选在约1.0至约6.0之间，更加优选在约3.5至约6.0之间。
在本发明中，该水溶液中包含的“酸或碱”可独立于生理活性物质或以与生理活性物质形成盐的形式存在。或者，该水溶液可以既包含生理活性物质与“酸或碱”的盐又包含独立于生理活性物质的酸或碱。
如上所述，本发明中可以使用生理活性物质自身或其药学上可接受的盐。
当生理活性物质具有碱性基团比如氨基时，所述盐包括与无机酸(也被称为无机游离酸)(例如，碳酸、碳酸氢酸(bicarbonic acid)、盐酸、硫酸、硝酸、硼酸，等等)以及有机酸(还称为有机游离酸)(例如，琥珀酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸，等等)成盐。当生理活性物质是LH-RH衍生物时，这样的盐优选是醋酸盐。例如，优选醋酸亮丙瑞林等。
当生理活性物质具有酸性基团比如羧基时，所述盐包括与无机碱(还称为无机游离碱)(例如，碱金属比如钠和钾；碱土金属比如钙和镁，等等)以及与有机碱(还称为有机游离碱)(例如，有机胺比如三乙胺，碱性氨基酸比如精氨酸，等等)成盐。生理活性肽还可形成金属络合的化合物(例如，铜络合的、锌络合的，等等)。
这些化合物或盐其可以按照上述提及的文献或专利公报中的方法或类似的方法制备。
每1mol“生理活性物质”所用“酸或碱”的量约为的1.5mol或更多，优选约1.5mol至约5mol，更优选约1.65mol至约3mol。
在本发明中，并不特别限制“水溶液”中“酸或碱”的比例(％重量)，只要其能够发挥本发明的效果即可，但比例优选约0.1至约20％重量，更优选地约1至约15％重量，更优选地约3至约10％重量。
如上所述，“酸或碱”可以独立地或以与生理活性物质成盐的形式加入水溶液中。或者，独立地加入“酸或碱”以及加入生理活性物质与“酸或碱”等等的盐可以合用。
用于本发明的可生物降解聚合物优选是可生物降解聚合物。这样可生物降解聚合物的例子包括脂族聚酯[比如两个或更多的α-羟基酸(例如，羟基乙酸、乳酸、2-羟基丁酸、2-羟基戊酸、2-羟基-3-甲基丁酸、羟基己酸、2-羟基异己酸、2-羟基辛酸，等等)、α-羟基酸环状二聚物(例如，乙交酯、丙交酯，等等)、羟基二羧酸(例如，苹果酸)和羟基三羧酸(例如，柠檬酸)的均聚物(例如，乳酸聚合物)或共聚物(例如，乳酸/羟基乙酸共聚物和2-羟丁酸/羟基乙酸共聚物)，或该均聚物和/或该共聚物的混合物(例如，乳酸聚合物和2-羟丁酸/羟基乙酸共聚物的混合物，等等)]；聚-α-氰基丙烯酸酯，聚氨基酸(例如，聚-γ-苄基-L-谷氨酸、聚-L-丙氨酸、聚-γ-甲基-L-谷氨酸，等等)，以及马来酐共聚物(例如，苯乙烯/马来酸共聚物，等等)。优选是脂族聚酯和聚-α-氰基丙烯酸酯。特别优选脂族聚酯。在脂族聚酯中，优选具有游离末端羧基的聚合物或共聚物或者这些聚合物和/或共聚物的混合物，这些聚合物或共聚物由一种或多种α-羟基酸(比如，α-羟基单羧酸(例如，羟基乙酸、乳酸，等等)，α-羟基二羧酸(例如，苹果酸)和α-羟基三羧酸(例如，柠檬酸)合成；聚(α-氰基丙烯酸酯)；聚氨基酸(例如，聚(γ-苄基-L-谷氨酸)，等等)；和基于马来酐的共聚物(例如，苯乙烯-马来酸共聚物)。
单体的聚合反应类型可以是任何的无规、嵌段和接枝型。当上述α-羟基单羧酸、α-羟基二羧酸和α-羟基三羧酸的分子结构中具有光学活性中心时，它们可以任为D-、L-和DL-型。其中优选乳酸-羟基乙酸聚合物[在下文，也称为聚(丙交酯-共-乙交酯)，聚(乳酸-共-羟基乙酸)或乳酸-羟基乙酸共聚物；除非具体指明，一般是指乳酸均聚物、羟基乙酸均聚物以及乳酸-羟基乙酸共聚物；或乳酸均聚物还被称为乳酸聚合物、聚乳酸或聚交酯，以及羟基乙酸均聚物还被称为羟基乙酸聚合物，聚羟基乙酸或聚乙交酯]，和聚(α-氰基丙烯酸酯)。更优选乳酸-羟基乙酸聚合物，以及更加优选具有游离末端羧基的乳酸-羟基乙酸聚合物。
可生物降解聚合物可以是盐形式。这些盐的例子包括与无机碱(例如，碱金属比如钠和钾；碱土金属比如钙和镁，等等)形成的盐，与有机碱(例如，有机胺比如三乙胺，碱性氨基酸比如精氨酸，等等)形成的盐，与过渡金属(例如，锌、铁、铜，等等)形成的盐以及络合盐。
当乳酸-羟基乙酸聚合物用作可生物降解聚合物时，组成比例(mol％)优选在100/0至约40/60之间，更优选地在100/0至约50/50之间。当本发明的缓释组合物是在2个月或者更长时间内释放生理活性物质的长期缓释微囊时，也优选使用组成比例为100/0的乳酸聚合物。
作为“乳酸-羟基乙酸聚合物”中的一个最小重复单元，乳酸的光学异构体的比例[D型/L型(mol/mol％)]优选在约75/25至约25/75之间。特别地，通常使用D型/L型(mol/mol％)比例在约60/40至约30/70之间的乳酸-羟基乙酸聚合物。
“乳酸-羟基乙酸聚合物”的重均分子量通常在约3,000至约100,000之间，优选在约5,000至约50,000之间，更优选在约8,000至约30,000之间，更加优选在约17,000至约30,000之间。
分散度(重均分子量/数均分子量)通常在约1.1至约4.0之间，优选在约1.2至约3.5之间。在此，通过凝胶渗透色谱法(GPC)测定重均分子量和分散度。具体地说，重均分子量是指基于由凝胶渗透色谱法(GPC)测定的聚苯乙烯的重均分子量，测定中使用单分散聚苯乙烯作为标准，并使用所获得的重均分子量计算各聚合物的含量。使用高效GPC仪(HLC-8120 GPC，由Tosoh Corporation制造)(柱子Super H4000 x 2和Super H2000(由ToshoCorportaion制造)；流动相四氢呋喃；流速0.6mL/min)进行测量。通过微分折射法进行检测。
单位质量(g)的“乳酸-羟基乙酸聚合物”中包含游离末端羧基量优选约20至约1,000μmol，更优选约40至约300μmol。
在本发明中，可生物降解聚合物的游离末端羧基的摩尔数量优选为“生理活性物质的”约0.1至约5倍，更优选约0.2至约4倍，更优选约0.3至约3.5倍。
通过标记法测定上述的游离末端羧基量(以下称为″由标记法测定的羧基量″)。具体地说，就聚乳酸而言，W mg的聚乳酸溶于2mL的一种5N盐酸/乙腈(V/V＝4/96)混合物，并且加入2mL 0.01M邻-硝基苯肼盐酸盐(ONPH)溶液(5N盐酸/乙腈/乙醇＝1.02/35/15)和2mL 0.15M 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐溶液(吡啶/乙醇＝4v/96v)使其在40℃反应30分钟。除去溶剂后，残余物用水(x4)洗涤，然后溶于2mL的乙腈中，并加入1mL的0.5mol/L氢氧化钾的乙醇溶液使其在60℃反应30分钟。该反应混合物经1.5N氢氧化钠水溶液稀释至Y mL。使用1.5N的氢氧化钠水溶液作为对照在544nm处测定吸收度A(/cm)。使用DL-乳酸的水溶液作为标准物经碱量滴定确定游离羧基量(C mol/L)。当通过ONPH标记法测定的DL-乳酸酰肼在544纳米处吸收度定义为B(/cm)时，单位重量(克)聚合物中游离末端羧基的摩尔量可以由下式计算[COOH](mol/g)＝(AYC)/(WB)。
虽然“羧基量”还可通过将可生物降解聚合物溶解在甲苯-丙酮-甲醇混合溶剂中并以酚酞作为指示剂使用氢氧化钾的乙醇溶液滴定该溶液而测定(下文中，此方法的测定值将被称为“由碱滴定法测定的羧基量”)，但是优选上述的标记法测定，因为在碱滴定法的滴定期间聚酯主链水解的竞争可以导致滴定终点的不确定。
“乳酸-羟基乙酸聚合物”可以通过乳酸和羟基乙酸的无催化剂的脱水缩聚作用(JP-A61-28521)制备，或通过环状二酯化合物例如丙交酯和乙交酯在催化剂作用下的开环聚合制备(Encyclopedic Handbook of Biomaterials andBioengineering Part AMaterials，Volume 2，Marcel Dekker，Inc.(1995))。虽然由上述已知的开环聚合方法获得的聚合物可能不具有游离末端羧基，但是它可以经改性从而使每单位物质具有一定的羧基，例如，如EP-A-0839525中的描述进行水解，然后可将所得聚合物用于本发明。
上述“具有游离末端羧基的乳酸-羟基乙酸聚合物”可以通过已知的方法制备(例如，无催化剂的脱水缩聚作用法；参见JP-A 61-28521)或依照它的方法。
用于本发明的聚合物优选乳酸聚合物(在下文，也称为“本发明的乳酸聚合物”)，其例子包括乳酸均聚物和乳酸与其它单体的共聚物(例如，乳酸和羟基乙酸的共聚物)。在本发明的乳酸聚合物中，重均分子量为5,000或更小的聚合物的含量通常约为10wt％或更低，优选约5wt％或更低，但不局限于此。
本发明乳酸聚合物的重均分子量通常在15,000至50,000之间，优选在15,000至40,000之间，更优选在17,000至30,000之间。
用作本发明乳酸聚合物原料的高分子量乳酸聚合物是商业可得的或可通过已知的聚合反应方法制备。高分子量乳酸聚合物的重均分子量通常在15,000至500,000之间，优选在20,000至100,000之间。已知的聚合反应方法包括乳酸，如果必要的话与羟基乙酸，的缩聚；使用催化剂比如路易斯酸(例如，二乙基锌、三乙基铝、辛酸锡，等等)或金属盐的丙交酯，如果必要的话与乙交酯，的开环聚合；上述在羧基保护的羟基羧酸衍生物存在下的丙交酯的开环聚合(例如，WO00/35990)；在加热下使用催化剂的丙交酯开环聚合(例如J.Med.Chem，16，897(1973))；以及丙交酯和乙交酯的共聚。
聚合反应可通过本体聚合或溶液聚合而实现，整体聚合包括融化丙交酯等物质然后使其进行聚合反应，溶液聚合包括在合适的溶剂中溶解丙交酯等物质然后使其进行聚合反应。从工业生产率的观点来看，优选由溶液聚合获得的聚合物用作本发明乳酸聚合物的原料。
在溶液聚合中用于溶解丙交酯溶剂的例子包括芳香烃比如苯、甲苯和二甲苯、十氢化萘、以及二甲基甲酰胺。
所获得的高分子量乳酸聚合物的水解是通过本身已知的水解方法而实现。例如，高分子量乳酸聚合物可以溶于合适的溶剂然后在水，如果必要的话，和酸存在下反应。
用于溶解高分子量乳酸聚合物的溶剂的例子包括卤代烃比如氯仿和二氯甲烷；芳香烃比如甲苯、邻二甲苯、间二甲苯和对二甲苯；环醚比如四氢呋喃；丙酮；和N，N-二甲基甲酰胺。当使用还可以用于水解高分子量乳酸聚合物的溶剂通过聚合制备高分子量乳酸聚合物时，可以连续地进行聚合和水解，在聚合后无需分离该高分子量乳酸聚合物。
溶解高分子量乳酸聚合物的溶剂用量通常为作为溶质的高分子量乳酸聚合物重量的约0.1至约100倍，优选约1至约10倍。
加入的水量通常为高分子量乳酸聚合物的约0.001至约1倍，优选约0.01至约0.1倍。
如果必要的话，加入的酸的例子包括无机酸比如盐酸、硫酸和硝酸，以及有机酸比如乳酸、乙酸和三氟乙酸。优选使用三氟乙酸。
加入的酸量通常约为高分子量乳酸聚合物重量的0至10倍，优选约0.1至约1倍。
水解温度通常约为0至150℃，优选约20至约80℃。
水解时间的变化取决于所用高分子量乳酸聚合物的重均分子量和反应温度，但是通常约为10分钟至100小时，优选约1至约20小时。
根据水解产物的重均分子量判断水解完成。具体地说，在水解期间适当地收集样品并通过凝胶渗透色谱法GPC测定样品中水解产物的重均分子量。当重均分子量在约15,000至约50,000之间，优选在约15,000至约40,000之间，更优选地在约17,000至约30,000之间时，终止水解。
高分子量乳酸聚合物如上所述水解后，获得包含水解产物的溶液。为了从溶液中沉淀目标乳酸聚合物，使用的方法包括用能沉淀包含于溶液中的目标乳酸聚合物的溶剂接触包含水解产物的溶液，等等。
这些包含水解产物的溶液的优选状况是，例如，约10至约50wt％的乳酸聚合物溶液，其中乳酸聚合物的重均分子量为15,000至50,000，优选15,000至40,000，更优选17,000至30,000，所用溶剂能够溶解高分子量乳酸聚合物，比如卤代烃(例如，氯仿、二氯甲烷，等等)，芳香族烃(例如，甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯，等等)，环醚(例如，四氢呋喃，等等)，丙酮或N，N-二甲基甲酰胺。
用于沉淀包含水解产物的溶液中所包含的目标乳酸聚合物的溶剂的例子包括醇比如甲醇和乙醇，线性醚比如异丙醚，脂肪族烃比如己烷，以及水。
用于沉淀目标乳酸聚合物的溶剂量通常为包含水解产物的溶液中溶剂重量的约0.1至约100倍，优选约1至约10倍。
在所述溶剂及其用量结合的优选例子中，包含水解产物的溶液的溶剂是二氯甲烷，其为溶质重量的约1至约5倍，用于降低溶液溶解度的溶剂是异丙醚，其约为二氯甲烷重量的约2至约10倍。
当能够沉淀目标乳酸聚合物溶质的溶剂与包含水解产物的溶液相接触时，该溶剂的温度通常约为-20至约60℃，优选约0至约40℃，包含水解产物的溶液温度通常约为0至约40℃，优选约10至约30℃。
通过将包含水解产物的溶液一步加入溶剂中、将包含水解产物的溶液逐滴加入溶剂中、将溶剂一步加入包含水解产物的溶液中、将溶剂逐滴加入包含水解产物的溶液中等方式使得溶剂与包含水解产物的溶液相接触。
这样获得的本发明的乳酸聚合物具有用作缓释制剂基质材料的优选量的末端羧基，因此其优选用作缓释制剂的基质材料。生物相容的聚合物的其它例子包括聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸、丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、聚胺酸、右旋糖酐硬脂酸盐、乙基纤维素、乙酰纤维素、硝酸纤维素、基于马来酐的共聚物、基于乙烯乙酸乙烯酯的共聚物、聚醋酸乙烯酯和聚丙烯酰胺。
这些聚合物可以单独使用，或其中两种或更多种以共聚物或简单混合物的形式使用，或使用其任何盐。
在下文，将举例说明一种制备缓释组合物(例如，微囊)的方法，该组合物包含根据本发明的生理活性物质或其盐和乳酸聚合物或其盐。
在如下所述的方法中，如果必要的话可以通过本身已知的方法加入下列组分(1)至(4)(1)药物载体白蛋白、明胶、柠檬酸、水杨酸、乙烯二氨基四乙酸钠、糊精、亚硫酸氢钠、多元醇化合物比如聚乙二醇、琼脂、褐藻酸、聚乙烯醇、碱性氨基酸，等等；(2)保持生理活性物质或其盐的稳定性和溶解度的pH调节剂碳酸、乙酸、草酸、柠檬酸、磷酸、盐酸、氢氧化钠、精氨酸、赖氨酸，其盐，等等；(3)生理活性物质或其盐的稳定剂白蛋白、明胶、柠檬酸、乙烯二氨基四乙酸钠、糊精、亚硫酸氢钠、多元醇化合物比如聚乙二醇，等等；(4)防腐剂对羟基苯酸酯(例如，羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸丙酯，等等)、苄醇、氯代丁醇、硫柳汞，等等。
(I)W/O/W的方法在此方法中，首先，制备可生物降解聚合物的溶液，优选在有机溶剂中，更优选在低水溶性有机溶剂中制备。用于制备本发明的缓释组合物(优选为微粒形式，更优选为微球或微囊)的溶液优选是沸点约为120℃或更低的低水溶性溶剂的溶液。
这样的有机溶剂的例子包括卤代烃(例如，二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、三氯乙烷、四氯化碳，等等)，醚(例如，乙醚、异丙醚，等等)，脂肪酸酯(例如，乙酸乙酯、乙酸丁酯，等等)，芳香烃(例如，苯、甲苯、二甲苯，等等)，醇(例如，乙醇、甲醇，等等)和乙腈。其中，优选卤代烃并特别优选二氯甲烷。这些有机溶剂可以以合适的比例混合使用。在使用有机溶剂的混合物的情况中，优选使用卤代烃和醇的混合物，特别优选使用二氯甲烷和乙醇的混合物。
溶液中可生物降解聚合物的浓度的改变取决于该可生物降解聚合物的分子量和该溶剂的种类。例如，当二氯甲烷用作溶剂时，可生物降解聚合物的浓度通常约为0.5至70wt％，优选约1至约60wt％，更优选约2至约50wt％。
当二氯甲烷和乙醇的混合物用作有机溶剂时，二氯甲烷与乙醇的体积比通常约为0.01至50％(V/V)，优选约0.05至约40％(V/V)，更优选约0.1至约30％(V/V)。
接着，如上所述，将生理活性物质溶于包含酸或碱的摩尔量约为生理活性物质1.5倍或更多的水溶液，或溶于包含约0.1至约20wt％的酸或碱的水溶液。生理活性物质还可以与合适的酸或碱以盐的形式溶解。该水溶液的溶剂可以是水或水和醇(例如，甲醇、乙醇，等等)的混合物。
加入生理活性物质或其盐以致它在溶液中的浓度通常在约0.001mg/mL至约10g/mL之间，优选约0.1mg/mL至约5g/mL，更优选约10mg/mL至约3g/mL。
此外，可以使用公知的增溶剂或稳定剂。为了溶解或分散生理活性物质和添加剂，可以在不损害活性的程度上进行加热、摇动、搅拌等。所获得的水溶液称为内水相。
所获得的油相和内水相经公知方法比如均化或超声处理而乳化形成W/O型乳剂。
混合可生物降解聚合物和生理活性物质，使每单位质量(g)可生物降解聚合物的末端羧基量(mol)通常约为生理活性物质摩尔量的0.01至10倍，优选约0.1至约5倍。
混合的油相的重量为内水相重量的约1至约1,000倍，优选约2至约100倍，更优选约3至约30倍。
在大约12至约25℃下，所获得的W/O型乳剂的粘度通常在约10至约10,000cp之间，优选在约100至约5,000cp之间，更优选在约200至约3,000cp之间，更加优选在约300至约2,000cp之间。
当本发明的方法应用工业生产时，在大约12至约25℃下，W/O型乳剂优选在约3,000cp或更低范围内，更优选在约2,000cp或更低范围内，更加优选在约300至约2,000cp范围内。
接着，将所获得的W/O型乳剂加至水相形成W(内水相)/O(油相)/W(外水相)型乳剂。此后，油相中的溶剂经挥发或扩散进入外水相从而制备微囊。在这时候，外水相的重量通常为油相重量的约1至约10,000倍，优选约5至约5,000倍，更优选约10至约2,000倍，特别优选约20至约500倍。
可以将乳化剂加入外水相中。乳化剂通常可以是能够形成稳定的W/O/W型乳剂的任何乳化剂。这样的乳化剂的具体例子包括阴离子表面活性剂(例如，油酸钠、硬脂酸钠、月桂基硫酸钠，等等)，非离子型表面活性剂[例如，聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯(例如，由Atlas powder制造的吐温80和吐温60)、聚氧乙烯蓖麻油衍生物(例如，由Nikko Chemicals制造的HCO-60和HCO-50)]、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、羧甲基纤维素、卵磷脂、明胶和透明质酸。这些乳化剂可单独使用或结合两种或更多种一起使用。加入乳化剂以致它在外水相的浓度优选在约0.01至约10wt％之间，更优选在约0.05至约5wt％之间。
可以将渗透压调节剂加入外水相中。可使用能在水溶液中产生渗透压的任何渗透压调节剂。
这样的渗透压调节剂的例子包括多元醇、一元醇、单糖、二糖、低聚糖、氨基酸，及其衍生物。
多元醇的例子包括三元醇比如甘油，五元醇比如阿糖醇、木糖醇和阿东糖醇，以及六元醇比如甘露醇、山梨醇和卫矛醇。其中，优选六元醇且特别优选甘露醇。
一元醇的例子包括甲醇、乙醇和异丙醇。其中，优选乙醇。
单糖的例子包括戊糖比如阿糖、木糖、核糖和2-脱氧核糖，以及己糖比如葡萄糖、左旋糖、半乳糖、甘露糖、山梨糖、鼠李糖和岩藻糖。其中，优选己糖。
低聚糖的例子包括三糖比如麦芽三糖和棉子糖，以及四糖比如水苏糖。其中，优选三糖。
单糖、二糖或低聚糖衍生物的例子包括葡糖胺、软骨糖胺、葡糖醛酸和半乳糖醛酸。
氨基酸可以是任何L-氨基酸，其例子包括甘氨酸、亮氨酸和精氨酸。其中，优选L-精氨酸。
渗透压调节剂可以单独使用或结合两种或更多种一起使用。所用的渗透压调节剂应达到这样的浓度使得外水相的渗透压约为生理盐水的约1/50至约5倍，优选约1/25至约3倍。当甘露醇用作渗透压调节剂时，它的浓度是优选约为0.5至1.5％。
通过本身已知的方法或与其一致的方法除去有机溶剂。这样的方法的例子包括使用螺旋桨式搅拌器或磁力搅拌器等搅拌的同时，在标准大气压或逐渐减压下蒸发有机溶剂的方法，或使用旋转蒸发器在受调节的真空下蒸发有机溶剂的方法，等等。
通过离心或过滤收集所获得的微胶囊，用蒸馏水洗涤若干次至除去游离的生理活性物质、乳化剂、渗透压调节剂等粘附在它们的表面的物质，在蒸馏水等溶剂中再次分散，然后冷冻干燥。
可以加入防絮凝剂以预防在制备微囊的工艺过程中微粒的絮凝。这样的防絮凝剂的例子包括甘露醇、乳糖、葡萄糖、水溶性多糖比如淀粉(例如玉米淀粉)、氨基酸比如甘氨酸，以及蛋白比如血纤维蛋白和胶原蛋白。特别优选甘露醇。
所加入的防絮凝剂比如甘露醇的量通常约为微囊总重量的0至24wt％。
冷冻干燥以后，如果需要，可以在微囊不相互熔接的条件下加热从而从微囊中除去水和有机溶剂。优选地，在大约微囊的中间玻璃态转变温度或比微囊的该中间玻璃态转变温度稍高的温度加热微囊，使用差示扫描量热计以每分钟10℃至20℃的温度上升速率测定该中间玻璃态转变温度。更优选地，在大约它们的中间玻璃态转变温度至约比该中间玻璃态转变温度高30℃的温度之间加热微囊。特别当可生物降解聚合物是乳酸-羟基乙酸聚合物时，优选在大约它们的中间玻璃态转变温度至约比该中间玻璃态转变温度高10℃的温度之间加入微囊，更优选在大约它们的中间玻璃态转变温度至约比该中间玻璃态转变温度高5℃的温度之间。
加热时间的改变取决于微囊的数量等因素。微囊达到所要求的温度后通常加热约12小时至约168小时，优选约24小时至约120小时，特别优选约48小时到约96小时。
加热微囊的方法可以是任何能够均匀加热全部微囊的方法，并没有特别的限制。
加热干燥方法的例子包括在恒温浴、流化床浴、移动浴或炉中加热干燥的方法，以及使用微波加热干燥的方法。优选在恒温浴中加热干燥的方法。
(II)相分离的方法使用此方法制备微囊时，在搅拌下，向如上(I)水中干燥法所述的包含由生理活性物质和可降解的聚合物组成的组合物的W/O型乳剂中缓慢加入团聚剂并沉淀出微囊，并使其固化。加入的团聚剂的量为油相体积的约0.01至约1,000倍，优选约0.05至约500倍，特别优选约0.1至约200倍。
团聚剂包括基于聚合物的、基于矿物油的或基于植物油的化合物，其可与有机溶剂混合且不溶解本发明的可生物降解聚合物。这样的团聚剂的具体例子包括硅油、芝麻油、豆油、玉米油、棉子油、椰子油、亚麻子油、矿物油、正己烷和正庚烷。可以结合使用两种或多种一起使用。
收集所获得的微囊，用庚烷等溶剂反复冲洗以除去团聚剂等物质，而留下由生理活性物质和可生物降解聚合物组成的组合物，然后减压干燥。或者，可以采用如上(I)水中干燥法所述的方式洗涤微囊，然后冷冻干燥并进一步加热干燥。
(III)喷雾干燥法当使用此方法制备微囊时，如上(I)水中干燥法所述的包含由生理活性物质和可降解的聚合物组成的组合物的W/O型乳剂经喷嘴喷入干燥室中，包含于雾化液滴中的有机溶剂在非常短的时期内挥发而获得微囊。管口的例子包括双相喷嘴，压力喷嘴和旋转的可调圆盘式喷嘴。此后，可以采用如上(I)所述的在水中干燥法的方式洗涤微囊，然后冷冻干燥并进一步加热干燥。
作为除上述微囊之外的剂型，可以提及微粒。这样的微粒可以经如下所述的方式制备。首先，使用例如旋转蒸发器等仪器真空干燥包含如上(I)水中干燥法所述的由生理活性物质和可生物降解聚合物组成的组合物，从而蒸发有机溶剂和水。接着，使用喷射磨等仪器研磨残余物从而获得微粒。
此外，可以以上述(I)中制备微囊方法同样的方式水洗微粒，然后冷冻干燥并进一步加热干燥。
在本发明中，优选使用摩尔量为生理活性物质约1.5至约5倍的酸或碱。
当生理活性物质是由下面通式表示的化合物时5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z其中每个缩写代表如上所述的相同含义，优选使用摩尔量为此生理活性物质约1.5至约5倍的酸。该酸优选为有机酸，特别是乙酸。
该可生物降解聚合物优选是乳酸-羟基乙酸聚合物。乳酸-羟基乙酸聚合物的组成比例(摩尔比)优选100∶0至约50∶50，更优选地100∶0。该可生物降解聚合物优选是重均分子量为15,000至50,000的乳酸聚合物，其中重均分子量为5,000或更低的聚合物的含量约为5wt％或更低。
优选使用低水溶性有机溶剂特别优选二氯甲烷制备可生物降解聚合物的溶液。
在本发明中，优选1)包含生理活性物质和酸或碱的水溶液和2)均匀混合可生物降解聚合物的溶液。更优选地，所获得的混合物是乳剂。
更优选地，这样的乳剂是的W/O型乳剂，其中的粒径微细。
混合物的干燥优选使用水中干燥法进行。特别地，水中干燥法中优选向外水相中加入渗透压调节剂。
渗透压调节剂优选甘露醇。
本发明的缓释组合物可以按原样施用，或作为原料配制成各种剂型比如施用于肌肉、下皮层、器官等内部的注射剂或植入物；施用于鼻腔、直肠、子宫等内部的经粘膜制剂(transmucosal agent)；或口服剂(比如胶囊(例如硬胶囊和软胶囊)，固体制剂比如颗粒剂和粉剂，以及液体制剂比如糖浆剂、乳剂和悬浮剂)。
例如，本发明的缓释组合物可以与分散介质比如分散剂(例如，表面活性剂比如吐温80或HCO-60；多糖比如透明质酸钠，羧甲基纤维素或海藻酸钠，等等)、防腐剂(例如，羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸丙酯，等等)以及等渗剂(例如，氯化钠、甘露醇、山梨醇、葡萄糖、脯氨酸，等等)混合从而制备水悬浮剂或与分散介质比如植物油例如芝麻油或玉米油混合从而制备油悬浮剂，由此制备实用的缓释注射剂。
用作悬浮注射剂的本发明缓释组合物的粒径应该在具有令人满意的分散性并具有令人满意的透过针管的能力的范围内。例如，平均粒子直径在约0.1至300μm之间，优选约0.5至150μm之间，更优选约1至100μm之间。
本发明的缓释组合物可以经任何方法配制成无菌制剂，该方法包括但不限于在所有生成步骤中使用γ射线灭菌以及加入抗菌剂。
对于上述缓释组合物的缓释注射剂，可以向上述悬浮剂组分中加入赋形剂(例如，甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖，等等)，所得悬浮液可经再分散并随后冷冻干燥或喷雾干燥从而获得固体。在给药的时候，可向该固体中加入注射用水和任何合适的分散介质从而获得更加稳定的缓释注射剂。
在向缓释组合物的缓释注射剂中加入赋形剂例如甘露醇的情况中，赋形剂的含量约为全部注射剂重量的0至50％重量，优选约1到20％重量。
在缓释组合物的缓释注射剂分散于注射用水或任何合适的分散介质的情况中，在给药的时候，该缓释组合物的含量约为分散介质和缓释组合物总重的1至80％重量，优选10到60％重量。
本发明的缓释组合物可以根据本身已知的方法配制成口服制剂。例如，本发明的缓释组合物可以与赋形剂(例如，乳糖、白糖、淀粉，等等)，崩解剂(例如，淀粉、碳酸钙，等)，粘结剂(例如，淀粉、阿拉伯树胶、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素，等等)，润滑剂(例如，滑石粉、硬脂酸镁、聚乙二醇6000，等等)等等进行混合，压模，然后，如果必要的话，为掩蔽味道或获得肠溶或缓释性质的目的由本身已知的方法进行包衣。包衣剂的例子包括羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚氧乙二醇、吐温80、Pluronic F68、醋酞纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、羟甲基乙酸纤维素琥珀酸盐、Eudragit(由RohmCompany制造，德国，甲基丙烯酸-丙烯酸酯共聚物)和色素比如二氧化钛或铁丹。
根据本发明方法制备的缓释组合物可以通过本身已知的方法配制成固体、半固体或液体形式的鼻制剂。例如，固体鼻制剂可以是由缓释组合物单独制成的粉末组合物或通过混合缓释组合物和赋形剂(例如，葡萄糖、甘露醇、淀粉、微晶纤维素，等等)、增稠剂(例如，天然胶、纤维素衍生物、丙烯酸聚合物，等等)等等并接着进行粉碎而制备的粉末组合物。液体鼻制剂可以以上述注射剂类似的方式制备成油或水悬浮剂。半固体制剂优选制备成水或油的凝胶或软膏。这些鼻制剂可以包含酸碱度调节剂(例如，碳酸、磷酸、柠檬酸、盐酸、氢氧化钠，等等)，抗菌剂(例如，对羟基苯酸酯、氯代丁醇、苯扎氯铵，等等)等等。
本发明的缓释组合物可以根据本身已知的方法配制成含油的或含水的固体或半固体或液体形式的栓剂。用于上述栓剂的含油基质可以是任何不溶解微囊的含油基质。这样的含油基质的例子包括高级脂肪酸的甘油酯[例如，可可脂，Witepsol-系列产品(Dynamite Nobel)，等等]，中级脂肪酸[例如，Witepsol-系列产品(Dynamite Nobel)，等等]和植物油(例如，芝麻油、豆油、棉子油，等等)。含水基质的例子包括聚乙二醇和丙二醇。含水凝胶基质的例子包括天然树胶、纤维素衍生物、乙烯基聚合物和丙烯酸聚合物。
本发明的缓释组合物优选用作注射剂。
本发明的缓释组合物毒性较低并由此能被用作对于哺乳动物(例如，人类，牛、猪、狗、猫、小鼠、大鼠、兔，等等)安全的药物等等。
本发明缓释组合物的剂量的改变取决于作为主药的生理活性物质或其盐的类型和含量、剂型、释放生理活性物质或其盐的持续时间、目标疾病、目标动物等等，但是应是有效量的生理活性物质或其盐。当缓释组合物是6个月的制剂时，对于成年人，作为主药的生理活性物质或其盐的剂量例如可以选自约0.01mg至约10mg/公斤体重之间，更优选地约0.05mg至约5mg/公斤体重。
对于成年人，缓释组合物的剂量可以优选约0.05mg至约50mg/公斤体重之间，更优选约0.1mg到约30mg/公斤体重。
给予的频率可以是几周一次、一月一次、几月一次(例如，三个、四个或六个月)等等，其恰当的选择取决于作为主药的生理活性物质或其盐的类型或含量、剂型、释放生理活性物质或其盐的持续时间、目标疾病、目标动物，等等。
本发明的缓释组合物可以用作预防或治疗各种的疾病的药物，其预防或治疗的疾病取决于包含其中的生理活性物质或其盐的类型。在生理活性物质或其盐是LH-RH衍生物的情况中，本发明的缓释组合物可以用作例如预防或治疗依赖激素的疾病的药物，尤其是依赖激素的癌症(例如，前列腺癌、子宫癌症、乳腺癌、垂体肿瘤，等等)或依赖性激素的疾病比如前列腺肥大、子宫内膜异位、子宫肌瘤、早熟青春期、痛经、无月经、经前期综合征或多囊卵巢综合症；避孕药物(或者如果在休药期后使用反跳作用，用于预防或治疗不孕)；或预防或治疗疾病比如阿尔茨海默病原或免疫缺陷的药物。本发明的缓释组合物还可以用作于预防或治疗与性激素无关但对LH-RH敏感的良性或恶性肿瘤的药物。
人们已经相信，给予绝经前患者包括醋酸亮丙瑞林的激素治疗药物难以预防手术后乳腺癌的复发，这是因为一些乳腺癌细胞对激素敏感并因雌激素而生长。但是，根据上述方法或与其一致的方法制备的包含LH-RH激动剂或拮抗剂(优选亮丙瑞林或其盐，更优选醋酸亮丙瑞林)的药物，优选包含亮丙瑞林或其盐(优选地醋酸亮丙瑞林)的缓释微囊的药物，出人预料的可以用作预防或抑制手术后的绝经前乳腺癌复发的药物。
包括上述含LH-RH激动剂或拮抗剂(优选亮丙瑞林或其盐，更优选醋酸亮丙瑞林)[优选该药物包含亮丙瑞林或其盐(优选醋酸亮丙瑞林)的缓释微囊]的药物的缓释组合物可以作为注射剂或植入物的形式(优选注射剂)方便地皮下、肌内或血管内给予(优选皮下)。这样的缓释组合物可以配制成上述各种剂型或还可以用作制备这样的剂型中的原料。
包含LH-RH激动剂或拮抗剂的缓释组合物的剂量的改变取决于目标疾病、LH-RH激动剂或拮抗剂(优选亮丙瑞林或其盐，更优选醋酸亮丙瑞林)的含量、剂型、释放LH-RH激动剂或拮抗剂(优选亮丙瑞林或其盐，更优选醋酸亮丙瑞林)的持续时间、目标动物[例如，温血哺乳动物(例如，人类，小鼠、大鼠、兔、绵羊、猪、牛、马，等等)]等等，但是应是有效量的LH-RH激动剂或拮抗剂(优选亮丙瑞林或其盐，更优选醋酸亮丙瑞林)。对于温血哺乳动物，LH-RH湿度激动剂或拮抗剂(优选地亮丙瑞林或其盐，更优选醋酸亮丙瑞林)的剂量例如可以为约0.01mg至约100mg/公斤体重之间，优选约0.02mg至约50mg/公斤体重，更优选约0.05mg至约20mg/公斤体重。
在包含LH-RH激动剂或拮抗剂的缓释组合物以注射剂形式给予的情况下，该LH-RH激动剂或拮抗剂(优选亮丙瑞林或其盐，更优选醋酸亮丙瑞林)可以皮下或肌内给予成年人(60公斤体重)，每月剂量通常为约0.01至约50mg，优选约0.1至约20，g，更优选约0.1至约15mg。
包含LH-RH激动剂或拮抗剂(优选亮丙瑞林或其盐，更优选醋酸亮丙瑞林)[优选该剂包含缓释微囊包含亮丙瑞林或其盐(优选地醋酸亮丙瑞林)]的药物的给药期没有特别地限制，但通常为约1至约5年，优选约2年。
给予其它动物时，上述每60公斤体重的剂量可以根据其体重而转化。
LH-RH激动剂或拮抗剂[优选由下式表示的肽5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5或其盐(在下文，也称为“亮丙瑞林或其盐”]，更优选醋酸亮丙瑞林可以以下列方式给予任选有糖包衣的片剂、胶囊、酏剂或缓释制剂的口服形式，或在水中或药学上可接受的除水外的液体中的注射剂，例如，无菌溶液或悬浮液，的胃肠外形式，或缓释制剂(特别地，缓释微囊)，植入物(例如，使用可生物降解聚合物作为基质材料而成型的植入物，或通过向由生物相容金属比如钛制成的管中填充活性成分以便恒速释放活性成分从而制备的植入物)，通过将可生物降解聚合物和药物溶解于或分散于活体可接受的有机溶剂中从而制备的注射剂，或鼻制剂，例如溶液或悬浮液。优选给予缓释制剂的形式，特别优选缓释注射剂的形式。此外，在该缓释制剂是缓释微囊的情况中，该缓释微囊优选是能够在2个月或更长时间内释放LH-RH激动剂或拮抗剂的长期缓释微囊。
上述制剂可以通过在通常药物使用中所需要的单位剂型中混合亮丙瑞林或其盐优选醋酸亮丙瑞林与已知的生理学可接受的载体而制备，其中载体包括调味剂、赋形剂、赋形剂、防腐剂、稳定剂、粘合剂，等等。
可以结合入片剂、胶囊等等的添加剂包括粘合剂比如明胶、玉米淀粉、黄蓍胶或阿拉伯树胶，赋形剂比如结晶纤维素，膨胀剂比如玉米淀粉、明胶或褐藻酸，润滑剂比如硬脂酸镁，甜味剂比如蔗糖、乳糖或糖精，以及调味剂比如薄荷、akamono油或樱桃。在单位剂型是胶囊的情况中，液体载体比如油脂可以进一步与上述组分相结合。可以根据常规的药物惯例配制注射剂的无菌组合物，例如，通过将活性成分溶解或悬浮于赋形剂比如注射用水中或天然存在的植物油例如芝麻油或椰子油中。
用于注射液的水溶液包括生理盐水和包含葡萄糖或其他的助剂(例如，D-山梨醇，D-甘露醇，氯化钠，等等)的等渗溶液并可以与合适的增溶剂比如醇(例如，乙醇)、多元醇(例如，丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂(例如，聚山梨酸酯80(TM)、HCO-50)等等合用。注射用油包括芝麻油和豆油并可以与增溶剂比如苯甲酸苄酯或苄醇合用。
上述制剂还可包含缓冲液(例如，磷酸盐缓冲液、醋酸钠缓冲液，等等)、安抚剂(例如，苯扎氯铵、盐酸普鲁卡因，等等.)、稳定剂(例如，人血清白蛋白，聚乙二醇，等等.)、防腐剂(例如，苄醇、酚，等等.)、抗氧化剂，等等。所制备的注射剂通常被填入合适的密封容器比如一种安瓿或瓶中。
实施例下文中本发明将参考实施例进行更加详细的描述。
实施例1将DL-乳酸聚合物(重均分子量21,900)(206.6g)的二氯甲烷(354.8g)溶液调节至约30℃。该溶液(381.5g)与预先加热至约55℃的溶于含水乙酸(通过在31.75g蒸馏水中溶解0.6g冰乙酸而制备)(16.6g)中的醋酸亮丙瑞琳(15.8g)水溶液混合。使用微型混合器(由Tokushu Kika Kogyo Co.，Ltd.制造)于10,000rpm乳化所得混合物从而获得W/O型乳剂。接着，冷却W/O型乳剂至约18℃并倾入含有0.1％(w/w)聚乙烯醇(EG-40，由Nippon SyntheticChemical Industry Co.，Ltd制造)和1％甘露醇的水溶液中(25L)，该溶液已预先调至18℃，经HOMOMIC LINE FLOW(由Tokushu Kika Kogyo Co.，Ltd.制造)使溶液二次乳化从而形成W/O/W型乳剂(涡流旋转速率，约7,000rmp；旋转泵转速，约2,000rmp)。该W/O/W型乳剂在水中干燥约3小时，经75μm孔径的标准筛过筛，然后离心(H-600S，由Kokusan Enshinki K.K.制造)(转速，约2,000rmp；流速，约600mL/min)从而允许微球持续沉降而收集。收集的微球再次分散于少量蒸馏水中然后经90μm孔径的标准筛过筛。向分散体中加入甘露醇(18.9g)并使用冷冻干燥机(TRIOMASTER，由KyowaShinku K.K.制造)进行冷冻干燥从而获得粉末(微球粉末)。所获得的微球中醋酸亮丙瑞琳的含量为8.2％，收率约为75％。
加入乙酸使得可获得令人满意的W/O型乳剂，向外部水相中加入甘露醇使得可改善所得微球的分散性。
实验性实施例1调节DL-乳酸聚合物(重均分子量21,900)(151.3g)的二氯甲烷(259.9g)溶液至约30℃。该溶液(373.7g)与预先加热至约55℃的溶于含水乙酸(通过在31.75g蒸馏水中溶解0.6g冰乙酸而制备)(16.2g)中的醋酸亮丙瑞琳(15.5g)水溶液混合。使用微型混合器(由Tokushu Kika Kogyo Co.，Ltd.制造)于10,000rpm乳化所得混合物从而获得W/O型乳剂。在开始乳化2，5和8分钟后，取部分W/O型乳剂，然后进行粘度测量(使用振动粘度计)。结果示于表1。
如表1所示，获得了稳定的W/O型乳剂。乳化8分钟后的W/O型乳剂具有稍高的粘度。尽管乳化5分钟后W/O型乳剂的粘度也增加了，但该水平并不会给制备带来问题。
比较实施例1调节DL-乳酸聚合物(重均分子量21,900)(151.1g)的二氯甲烷(259.8g)溶液至约30℃。该溶液(374.6g)与预先加热至约55℃的醋酸亮丙瑞琳(15.5g)溶于蒸馏水(15.9g)的水溶液混合。使用微型混合器(由Tokushu Kika KogyoCo.，Ltd.制造)于10,000rpm乳化所得混合物从而获得W/O型乳剂。在开始乳化2和4分钟后，取部分W/O型乳剂，然后进行粘度测量(使用振动粘度计)。结果示于表2。
W/O型乳剂的粘度在乳化4分钟后增加了。与加入乙酸的实验性实施例1相比，W/O型乳剂的粘度显著增加。
实验性实施例2醋酸亮丙瑞琳(药物含量97.4％，乙酸含量6.0％)(分别为0.2061g)溶于不同浓度的乙酸水溶液中(分别为0.2116g)，向其中加入DL-乳酸聚合物(重均分子量21,900)(1.82g)溶于二氯甲烷(3.15g)的溶液。所得混合物经涡流混合器搅拌约30秒从而获得W/O型乳剂。比较所获得的W/O型乳剂的表观。结果示于图1中。在使用摩尔量约为药物1.8倍的乙酸所制备的W/O型乳剂中，似乎形成了小乳剂颗粒。在使用摩尔量约为药物1.4倍的乙酸所制备的W/O型乳剂中，药物凝胶化。在使用摩尔量约为药物1.6倍的乙酸所制备的W/O型乳剂中，药物轻微凝胶化。使用摩尔量约为药物1.8、2.3或2.8倍的乙酸，获得了均一乳剂。使用摩尔量约为药物1.8倍的乙酸所制备的W/O型乳剂呈蓝色透明。另一方面，使用摩尔量约为药物2.3倍或更多的乙酸所制备的W/O型乳剂呈乳白色。使用摩尔量约为药物1.7倍的乙酸所制备的W/O型乳剂呈蓝色透明。从这些结果中发现，使用摩尔量为药物1.7至1.8倍的乙酸所制备的蓝色透明的W/O型乳剂形成了最小的乳剂颗粒。
实验性实施例3醋酸亮丙瑞琳(药物含量97.4％，乙酸含量6.0％)(分别为0.2g)溶于不同浓度的乙酸水溶液中(分别为0.2116g)，向其中加入乳酸-羟基乙酸共聚物(重均分子量10,500)(1.82g)溶于二氯甲烷(3.15g)的溶液。所得混合物经涡流混合器搅拌约30秒从而获得W/O型乳剂。比较所获得的W/O型乳剂的表观。结果，在使用摩尔量约为药物1.8倍的乙酸所制备的W/O型乳剂中，似乎形成了均一乳剂颗粒。在使用摩尔量约为药物1.3和1.4倍的乙酸所制备的W/O型乳剂中，油相和内水相分离。
实验性实施例4醋酸亮丙瑞琳(药物含量97.4％，乙酸含量6.0％)(分别为0.2g)溶于不同浓度的乙酸水溶液中(分别为0.2116g)，向其中加入DL-乳酸聚合物(重均分子量14,500)(1.82g)溶于二氯甲烷(3.15g)的溶液。所得混合物经涡流混合器搅拌约30秒从而获得W/O型乳剂。比较所获得的W/O型乳剂的表观。结果，在使用摩尔量约为药物1.8倍的乙酸所制备的W/O型乳剂中，似乎形成了均一乳剂颗粒。在使用摩尔量约为药物1.3和1.4倍的乙酸所制备的W/O型乳剂中，油相和内水相分离。
实验性实施例5将实施例1中获得的微球(110mg)分散于分散媒介(0.3mL)(通过将0.15mg羧甲基纤维素、0.3mg聚山梨醇酯80和15mg甘露醇溶解于蒸馏水中而制备)中，然后使用22G注射针皮下给药至7周龄雄性SD大鼠背部。自给药开始经过预定的时间后，处死大鼠。切除留在给药位点的微球。确定微球内肽A的量，定量数值除以起始含量从而确定残留率。结果示于表3。
从表3中可见，仅配制肽A所制备的实施例1的微球可以以高包封率(trapping rate)包含生理活性物质，并且具有出色的分散性。此外，实施例1的微球抑制了生理活性物质开始时的过度释放，并在非常长的时间内以恒速释放生理活性物质。
实验性实施例6肽A(0.6g)的乙酸盐溶于2wt％的乙酸水溶液中(0.65g)(肽A摩尔量的1.5倍或更多)。对于此溶液，加入聚乳酸(重均分子量为21,000)(5.4g)的二氯甲烷(9.45g)溶液。通过用手震动轻微分散所得混合物，然后使用Polytron(由Kinematica制造)乳化预定的时间从而获得W/O型乳剂。在除了将乳化时间改变至不同的长度外的相同方式下，形成各种乳剂。测量所获得W/O型乳剂的粘度。结果示于图2中。
在上述相同方式下，肽A(0.6g)溶于2wt％的乙酸水溶液中(0.635g)(小于肽A摩尔量的1.5倍)。对于此溶液，加入聚乳酸(重均分子量为21,000)(5.4g)的二氯甲烷(9.45g)溶液。通过用手震动轻微分散所得混合物，然后使用Polytron(由Kinematica制造)乳化预定的时间从而获得W/O型乳剂。
当乳化时间相对短时，使用摩尔量小于肽A 1.5倍的乙酸所制备的W/O型乳剂的粘度增加了。另一方面，使用摩尔量为肽A 1.5倍或更多的乙酸所制备的W/O型乳剂是稳定的，而且即使乳化时间短其粘度也不增加，如表2所示，因此可以容易地制备W/O型乳剂。
从这些实验结果中发现，使用摩尔量约为药物1.5或更多倍的乙酸所制备的W/O型乳剂可以获得稳定的W/O型乳剂，使用摩尔量约为药物1.6倍或更多的乙酸所制备的W/O型乳剂使得可以获得相对小的粒径。此外，已证实乳酸聚合物或乳酸-羟基乙酸聚合物可被用作油相聚合物，其改善了最终药物的产率。
工业应用根据本发明缓释制剂的制备方法，可以稳定地形成W/O型乳剂并抑制药物在制备过程中的渗漏，因此提高了缓释组合物的产率。还可以获得其中结合了大量药物的缓释组合物，其可以以恒速释放药物。此外，由于本发明方法获得的缓释组合物具有高含量的药物和稳定的药物释放性质，因而可用作药物。
根据本发明的方法，可以稳定包含生理活性物质和可生物降解聚合物溶液的水溶液组合物，并在正常条件下获得粘度为3,000cp或更低的混合物。
本发明基于日本专利申请No.2002-185352，在此全部引入作为参考。
权利要求
1.一种缓释组合物的制备方法，包括将包含生理活性物质、摩尔量为生理活性物质1.5倍或更多的酸或碱的水溶液与可生物降解聚合物溶液混合，并且干燥所得混合物。
2.根据权利要求1的方法，其中水溶液是通过使用生理活性物质与酸或碱的盐而获得。
3.根据权利要求1的方法，其中生理活性物质在缓释组合物中比例约是约0.001至约50％重量。
4.一种稳定包含生理活性物质的水溶液和可生物降解聚合物溶液的混合物的方法，包括加入摩尔量约为生理活性物质1.5mol或更多倍的酸或碱。
5.一种使包含生理活性物质的水溶液和可生物降解聚合物溶液的混合物的粘度约为3,000cp或更低的方法，包括加入摩尔量约为生理活性物质1.5mol或更多的酸或碱。
6.根据权利要求1，4和5任一项的方法，其中生理活性物质是生理活性肽。
7.根据权利要求6的方法，其中生理活性肽是LH-RH衍生物。
8.根据权利要求7的方法，其中LH-RH衍生物是由如下通式表示的化合物5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z其中Y表示DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal或DHis(ImBzl)且Z表示NH-C2H5或Gly-NH2。
9.根据权利要求1，4和5任一项的方法，其中使用的酸或碱的摩尔量为生理活性物质的约1.5至约5倍。
10.根据权利要求1，4和5任一项的方法，其中使用的酸或碱的摩尔量为生理活性物质的约1.65至约3倍。
11.根据权利要求1，4和5任一项的方法，其中酸是有机酸。
12.根据权利要求11的方法，其中有机酸是脂肪酸。
13.根据权利要求12的方法，其中脂肪酸是乙酸。
14.根据权利要求1，4和5任一项的方法，其中可生物降解聚合物是α-羟基羧酸聚合物。
15.根据权利要求14的方法，其中α-羟基羧酸聚合物是乳酸-羟基乙酸聚合物。
16.根据权利要求15的方法，其中乳酸-羟基乙酸聚合物中乳酸与羟基乙酸的摩尔比是100∶0至50∶50。
17.根据权利要求16的方法，其中乳酸-羟基乙酸聚合物中乳酸与羟基乙酸的摩尔比是100∶0。
18.根据权利要求15的方法，其中乳酸-羟基乙酸聚合物的重均分子量是5,000至50,000。
19.根据权利要求15的方法，其中乳酸-羟基乙酸聚合物的重均分子量是17,000至30,000。
20.根据权利要求1的方法，其中可生物降解聚合物是重均分子量为15,000至50,000的乳酸聚合物，并且在所述乳酸聚合物中重均分子量为5,000或更低的聚合物含量为5％重量或更低。
21.根据权利要求1的方法，其中可生物降解聚合物是每单位质量(克)的聚合物具有约20至约1,000μmol末端羧基的乳酸-羟基乙酸聚合物。
22.根据权利要求1的方法，其中生物降解聚合物的末端羧基的摩尔量为生理活性物质的约0.1至约5倍。
23.根据权利要求1，4和5任一项的方法，其中可生物降解聚合物溶液是通过使用低水溶性有机溶剂而制备。
24.根据权利要求23的方法，其中低水溶性有机溶剂是二氯甲烷。
25.根据权利要求1，4和5任一项的方法，其中混合物是均匀混合物。
26.根据权利要求25的方法，其中均匀混合物是乳剂。
27.根据权利要求26的方法，其中乳剂是W/O型乳剂。
28.根据权利要求27的方法，其中W/O型乳剂的粒径非常小。
29.根据权利要求1的方法，其中混合物的干燥是在水中干燥。
30.根据权利要求29的方法，其中在水中干燥时渗透压调节剂的水溶液用作外水相。
31.根据权利要求30的方法，其中渗透压调节剂是甘露醇。
32.根据权利要求1的方法，其中缓释组合物是微粒形式。
33.根据权利要求32的方法，其中微粒是微球或微囊。
34.一种缓释组合物的制备方法，包括混合水溶液和可生物降解聚合物溶液以及然后干燥混合物，其中水溶液包含1)生理活性物质和2)含量为所述水溶液约0.1至约20％重量的酸或碱。
35.根据权利要求34的方法，其中水溶液是通过使用生理活性物质与酸或碱的盐制得。
36.根据权利要求1的方法制备的缓释组合物。
37.含生理活性物质和酸或碱的水溶液在制备含该生理活性物质的缓释制剂中的应用，其中酸或碱含量为所述生理活性物质摩尔量约1.5倍或更多倍。
全文摘要
一种制备缓释组合物的方法，包括混合包含生理活性物质、摩尔量至少为1.5倍生理活性物质的酸或碱的水溶液以及可生物降解聚合物，并且干燥所得混合物。
文档编号A61K9/16GK1662260SQ0381491
公开日2005年8月31日 申请日期2003年6月24日 优先权日2002年6月25日
发明者山本一路, 斋藤和宏, 星野哲夫 申请人:武田药品工业株式会社