专利名称：一种治疗血管栓塞的中药胶囊制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗血管栓塞的药物组合物，特别是能够清除脑血栓、冠脉血栓的中药胶囊制剂。
背景技术：
目前采用中药治疗血管栓塞的文献报道很多，涉及多种组方、剂型和不同的疗效。其中单独研究黄芪、地龙或在组方中涉及黄芪和地龙的研究也有报道，但在制备过程中，大多采用煎煮水提的方法，工艺落后。特别是地龙在炮制和煎煮时，其组织中蛋白质及酶类的活性物质已被破坏，导致药物的疗效不佳。
现代研究证明，地龙中具有溶栓作用的有效成分是纤溶酶和地龙素，黄芪的有效成分是黄芪多糖、黄芪甲甙、黄芪总皂甙和黄芪黄酮。在一些文献中也有采用地龙提取物或黄芪提取物的，但其地龙提取物中纤溶酶和地龙素含量很低，而不具有溶栓作用的杂质含量较高，有效成分含量低将直接影响药物的疗效。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是采用生物工程技术，精纯化提取鲜地龙体内纤溶酶和地龙素，使其既可直接溶解纤维蛋白，又可激活纤溶酶原为纤溶酶而使纤维蛋白溶解，还可降低血液黏度，有利于防止血栓形成；利用超临界萃取技术制备黄芪提取物，将地龙与黄芪的提取物科学配伍，制成抗栓、溶栓，改善微循环系统，增加血流量的治疗血管栓塞的中药胶囊制剂。
本发明利用层析和冷冻干燥技术对鲜地龙进行处理，制备含有纤溶酶和地龙素的地龙提取物；利用超临界萃取技术，从中药黄芪中提取含有黄芪多糖、黄芪甲甙、黄芪总皂甙和黄芪黄酮的黄芪提取物。具体制备方法如下1、将鲜地龙清洗干净，用组织匀浆机将其制成匀浆后进行二次离心处理，第一次离心处理后对上清液进行酸变性处理，加入醋酸钠溶液，使上清液中醋酸钠的浓度达到30-60mol/L，然后进行第二次离心处理，收集上清液。
将收集的上清液过中压层析柱，收集两个主峰，将得到的层析流出液透析除盐，然后进行冷冻干燥，得到含量为85％-90％的纤溶酶和地龙素的干粉。
2、采用超临界萃取黄芪提取物，将黄芪洗净、干燥、粉碎成20目的粗粉，投入萃取釜中，分别对萃取釜、解析釜I、解析釜II和精馏柱进行加热，当温度分别达到48-52℃、52-58℃、50-55℃和37-43℃时，通入CO2对萃取釜、解析釜I、解析釜II和精馏柱进行加压，当压力分别达到25-30MPa、8-14MPa、6-9MPa和5-8MPa时，开始循环萃取，并保持恒温恒压，收集萃取液，进行冷冻干燥，得到含量为90％-95％的黄芪多糖、黄芪甲甙、黄芪总皂甙和黄芪黄酮的干粉。
3.将含有纤溶酶和地龙素的地龙提取物干粉与含有黄芪多糖、黄芪甲甙、黄芪总皂甙和黄芪黄酮的黄芪提取物干粉以及淀粉以质量比2∶1∶50的比例混合均匀，制成治疗血管栓塞的中药胶囊制剂。
按照本发明的制备方法，由太原迈迪生物科技有限公司生产了治疗血管栓塞的中药胶囊制剂——克栓胶囊，并进行了毒性试验和主要药效学试验。
本发明对动物进行了长期毒性试验，观察连续重复给药对大鼠所产生的毒性反应。
试验结论以成人临床用药量的40倍、60倍、90倍三个剂量连续灌胃给予大鼠9周，停药后继续观察两周。给药期间及恢复期克栓胶囊低、中、高三个剂量组，均无一例大鼠死亡，一般状况、血液学、血液生化学等指标、主要脏器肉眼观察、脏器指数、光镜下病理组织学检查均未见异常。表明克栓胶囊对大鼠无明显毒性作用(具体试验资料见附件1)。
本发明对动物进行了急性毒性试验，观察当日给药对小鼠所产生的毒性反应，连续观察7天，详细记录小鼠反应情况。克栓胶囊因其药的浓度和体积的限制无法测出LD50。因此，对该药进行最大给药量试验，即动物能耐受的最大浓度、最大体积即50％、0.5ml/10g，一日内给予小鼠两次灌胃，观察其毒性反应。给药量为50g/kg、折合生药量360g/kg，即相当于临床成人用药量的625倍，给小鼠灌胃，未见毒性反应，表明无急性毒性作用(具体试验资料见附件2)。
本发明进行了与功能主治有关的主要药效学试验，包括药物对实验性脑缺血的保护作用；药物对动物脑血管及其功能的影响；药物对大鼠血小板、凝血时间的影响；药物的抗血栓作用。结论如下1.克栓胶囊对实验性急性脑缺血有保护作用中、高剂量显著降低实验性脑缺血大鼠脑含水量及脑指数、毛细血管通透性；减少锥体细胞重度病变细胞(死亡细胞)数，减轻实验性脑缺血大鼠脑组织病理损伤。
2.克栓胶囊对家兔、犬脑供血有改善作用各剂量组给药后家兔脑血流量显著增加；高剂量有增加犬脑血流量的趋势，给药后20分钟脑血流量作用显著。
3.中、高剂量克栓胶囊对抗动物血栓形成高剂量显著降低大鼠在体血栓湿重和干重；中、高剂量给药后家兔体外血栓长度、湿重和干重较给药前降低。
4.克栓胶囊对大鼠、家兔血流变有一定的改善作用高剂量组显著延长大鼠凝血时间；中、高剂量降低家兔纤维蛋白原、给药后红细胞压积较给药前降低，血浆压积增加。
实验表明克栓胶囊对动物急性缺血性脑损伤具有保护作用，改善脑供血和血流变；随给药次数和给药剂量增加，有一定对抗血栓作用(见药效学试验报告3)。
本发明从2000年至2002年治疗血栓病患者100例，并与溶栓胶囊对照组100例做对照，治疗组服用的胶囊制剂——克栓胶囊，是按照本发明的配方，由太原迈迪生物科技有限公司提供。每日3次，每次4粒(每粒含0.41g)，口服。对照组服用的溶栓胶囊为山西中远威药业有限公司生产，每日3次，每次2粒(每粒0.25g)。两组均以单盲法给药，以服药1个月为1疗程，治疗两个疗程后做对比观察。观察结果治疗组临床控制率和总有效率分别达到60％和85％，而对照组则分别为50％和70％，经统计学检验，P＜0.05，两组有显著性差异。临床初步试验表明，克栓胶囊有较好的治疗血栓的效果，显愈率及总有效率均高于对照组，统计学有显著差异。证实克栓胶囊对血栓造成的组织损伤有保护作用，有对抗血栓作用和增加组织血流量的作用。
本发明抗栓、溶栓机理主要是通过改善微循环系统，减少血管阻力，降低血液粘度，增加血流量，降低新生小血栓的形成率，延缓体内血栓形成。制剂具有强效溶栓作用，同时还可改善血栓组织的局部坏死状况。此外，本发明还有显著的降血脂、降血压、降血糖作用。对脑血栓、冠脉血栓、静脉曲张及血栓形成，高血粘度综合症的总有效率为82.3％，其中显效率为79.6％。对短暂性脑缺血、心肌梗塞、心绞痛、风湿性关节炎、糖尿病、高血脂症、高血压等也有显著疗效。
本发明组方，以黄芪为君药，其性味甘、温，入脾、肺经，补元气、壮筋骨、固护营卫，以助康复增强自身祛邪之力；以地龙为臣药，其性味咸寒，入胃、肾、肝经，重用地龙，取其清热止痉，善入血分搜风、祛瘀、活络、开清窍之功效。地龙、黄芪配伍使用呈现的基本协同效应，说明了益气通络配伍的合理性。黄芪配地龙，正是互为助力，扶正祛邪，相得益彰。特别是本发明在合理配方的基础上，又采用了先进的提取工艺，将地龙和黄芪中的溶解血栓的有效成分高效的提取出来。去除与溶解血栓无关的物质，可以避免这些物质对成药溶栓作用的影响和它们可能产生的副作用。有效成分的提纯，有利于药效的提高，并且可以方便的对给药剂量进行科学的控制，更有利于临床应用。
具体实施例方式
本发明治疗血管栓塞的中药胶囊制剂由地龙提取物和黄芪提取物制备而成。
由地龙中提取纤溶酶和地龙素的制备工艺将鲜地龙清洗干净，用组织匀浆机将其制成匀浆后进行离心处理。地龙匀浆后进行第一次离心处理的转速为7000-9000转/分，处理时间为30分钟；收集上清液进行酸变性处理，加入醋酸钠溶液，使上清液中醋酸钠的浓度达到30-60mol/L，放置4-8小时后进行第二次离心处理，转速为10000-15000转/分，处理时间为15分钟，离心后收集上清液。
将收集的上清液过中压层析柱，先用0.1mol/L的氯化钠溶液平衡层析柱，将上清液上样后，用0.1mol/L的氯化钠溶液以20ml/min的流速冲洗层析柱并用紫外检测器检测，收集两个主峰，层析结束后，将得到的层析流出液透析除盐，采用截留分子量为20000的透析膜，采用蒸馏水作透析液。然后在-50℃进行冷冻干燥，得到含有85％-90％的纤溶酶和地龙素的干粉，干粉得率为1％-2％。
由黄芪中提取黄芪多糖、黄芪甲甙、黄芪总皂甙和黄芪黄酮的制备工艺采用超临界萃取制备黄芪提取物，将黄芪洗净、干燥、粉碎成20目的粗粉，然后投入萃取釜中，分别对萃取釜、解析釜I、解析釜II和精馏柱进行加热，当温度分别达到52℃、56℃、54℃和38℃时，通过高压泵加入CO2对萃取釜、解析釜I、解析釜II和精馏柱进行加压，当压力分别达到28MPa、14MPa、9MPa和7MPa时，开始循环萃取，并保持恒温恒压，萃取过程中循环流速为110～120kg/h，分别收集萃取液，将萃取液混合后在-50℃进行冷冻真空干燥，得到含有90％-95％黄芪多糖、黄芪甲甙、黄芪总皂甙、黄芪黄酮的干粉，干粉得率为4％-5％。
治疗血管栓塞的中药胶囊制剂——克栓胶囊的制备工艺将含有纤溶酶和地龙素的地龙提取物干粉与含有黄芪多糖、黄芪甲甙、黄芪总皂甙和黄芪黄酮的黄芪提取物干粉以及淀粉以质量比2∶1∶50混合，两种提取物与淀粉混匀后制粒，测定堆密度为0.603g/cm3，装入胶囊规格为0.41g/粒。
由太原迈迪生物科技有限公司生产的临床试验用克栓胶囊，经山西中医学院方剂研究所进行了药品的初步稳定性试验，结果均符合国家有关规定，说明该药质量是稳定的(克栓胶囊初步稳定性试验见附件4)。
权利要求
1.一种治疗血管栓塞的中药胶囊制剂，其特征在于中药胶囊制剂由地龙提取物和黄芪提取物配制而成，具体制备方法如下A、将鲜地龙清洗干净，用组织匀浆机将其制成匀浆后进行二次离心处理，第一次离心处理后对上清液进行酸变性处理，加入醋酸钠溶液，使上清液中醋酸钠的浓度达到30-60mol/L，然后进行第二次离心处理，收集上清液；将收集的上清液过中压层析柱，收集两个主峰，将得到的层析流出液透析除盐，然后进行冷冻干燥，得到含量为85％-90％的纤溶酶和地龙素的干粉；B、采用超临界萃取黄芪提取物，将黄芪洗净、干燥、粉碎成20目的粗粉，然后投入萃取釜中，分别对萃取釜、解析釜I、解析釜II和精馏柱进行加热，当温度分别达到48-52℃、52-58℃、50-55℃和37-43℃时，通入CO2对萃取釜、解析釜I、解析釜II和精馏柱进行加压，当压力分别达到25-30MPa、8-14MPa、6-9MPa和5-8MPa时，开始循环萃取，并保持恒温恒压，收集萃取液，进行冷冻干燥，得到含量为90％-95％的黄芪多糖、黄芪甲甙、黄芪总皂甙和黄芪黄酮的干粉；C、将含有纤溶酶和地龙素的地龙提取物干粉与含有黄芪多糖、黄芪甲甙、黄芪总皂甙和黄芪黄酮的黄芪提取物干粉以及淀粉以质量比2∶1∶50的比例混合均匀，制成治疗血管栓塞的中药胶囊制剂。
2.根据权利要求1所述的治疗血管栓塞的中药胶囊制剂，其特征在于上述层析流出液透析除盐，采用截留分子量为20000的透析膜，采用蒸馏水作透析液。
3.根据权利要求1所述的治疗血管栓塞的中药胶囊制剂，其特征在于地龙匀浆后进行第一次离心处理的转速为7000-9000转/分，处理时间为30分钟。
4.根据权利要求1所述的治疗血管栓塞的中药胶囊制剂，其特征在于地龙匀浆后进行第二次离心处理的转速为10000-15000转/分，处理时间为15分钟。
5.根据权利要求1所述的治疗血管栓塞的中药胶囊制剂，其特征在于黄芪萃取过程中循环流速为110～120kg/h。
全文摘要
本发明涉及一种治疗血管栓塞的中药胶囊制剂，利用层析和冷冻干燥技术对鲜地龙进行处理，制备含有纤溶酶和地龙素的地龙提取物；利用超临界萃取技术，从中药黄芪中提取含有黄芪多糖、黄芪甲甙、黄芪总皂甙和黄芪黄酮的黄芪提取物；将地龙提取物干粉和黄芪提取物干粉与淀粉以质量比2∶1∶50的比例混合均匀，制成治疗血管栓塞的中药胶囊制剂。本发明采用生物工程技术，精纯化提取鲜地龙体内纤溶酶和地龙素，使其既可直接溶解纤维蛋白，又可激活纤溶酶原为纤溶酶而使纤维蛋白溶解，还可降低血液黏度，有利于防止血栓形成；利用超临界萃取技术制备黄芪提取物，将地龙与黄芪的提取物科学配伍，制成抗栓、溶栓、改善微循环系统、增加血流量的治疗血管栓塞的中药胶囊制剂。
文档编号A61P7/02GK1539464SQ20031010379
公开日2004年10月27日 申请日期2003年10月30日 优先权日2003年10月30日
发明者解军, 徐钧, 聂继盛, 于保锋, 胥显民, 陈显久, 黄登宇, 董华慧, 谭杏丽, 解 军 申请人:解军, 解 军