专利名称：三七总皂苷脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，具体涉及一种三七总皂苷脂质体及其制备方法。
背景技术：
调查显示心脑血管疾病是影响我国人口寿命的第二大因素，随着人们生活水平的提高，工作压力的增大，心脑血管疾病的患病呈年轻化，患病人数呈上升的趋势。目前，可供选择的药物大多为西药品种，而中药品种少，且制剂多为传统剂型或普通剂型。三七是我国传统的名贵中药，又名田七，为五加科人参属的一个种，学名为Panax notoginseng(Buck.)F.H.Chen，盛产于我国云南、广西。三七的药理作用为扩张冠脉、改善心肌缺血、减少心肌耗氧量、扩张血管、抗心率失常等。临床应用其总皂苷(Saponins of Panax Notoginseng，PNS)治疗中风、脑血栓、冠心病、心绞痛、动脉粥样硬化、视网膜中央静脉阻塞等。
人参皂苷Rb1、Rg1是三七总皂苷中含量最高的两个活性单体，各占总皂苷的30％左右。目前已经上市的三七类产品主要有注射液如血塞通和口服片剂如三七总甙片。注射液采用滴注给药，患者顺应性差，且副作用也日趋增多，如过敏反应等影响了药物的应用。口服片剂临床应用疗效较低，据有关报道三七总皂苷水溶性极大，在胃肠道黏膜的透过性差，胃的强酸环境对药物有降解作用，而且其中活性单体极易被胃肠道酶和肠道细菌代谢，因此导致了PNS口服制剂的生物利用度很低，其中人参皂苷Rb1口服绝对生物利用度仅为4.35％，；人参皂苷Rg1的口服生物利用度为18.40％，且在血中消除很快。因此寻找三七总皂苷新剂型和新的给药途径显得尤为必要。
肺部给药是一种具发展潜力的给药途径，临床已广泛应用于治疗呼吸道疾病，其优点为表面积大，血流丰富，肺泡壁薄，细胞内外生物代谢酶的活性低，且无肝脏首过效应，药物生物利用度高。
脂质体与肺泡具有良好的生物相容性，制备工艺简单，药物包封于脂质体中，能降低药物毒性，增强药理作用，而且能够降低药物的消除速率，延长药物作用，增加药物的体内外稳定性。同时，作为膜材的磷脂，本身无毒，对心脑血管疾病具有积极的预防作用，可降低血清胆固醇、甘油三酯含量，预防动脉硬化并可清扫血管使其柔软，能显著减轻动脉粥样硬化及心肌缺血-再灌注损伤程度，清除动脉硬化引发的心脑血管疾病等多种慢性病变的诱发因素。
发明内容
本发明的目的是提供一种三七总皂苷脂质体。经本发明三七总皂苷脂质体肺部非注射给药，能减少药物刺激性和毒性，提高药物的生物利用度，改善患者用药的顺应性。
本发明由三七总皂苷(DFC-SQZD-01，云南文山)和磷脂加亲脂性添加剂制备成三七总皂苷脂质体。
本发明的磷脂与三七总皂苷的重量比为0.5∶1-100∶1，磷脂与亲脂性添加剂的重量比为1∶1-10∶1。
所述脂质体的磷脂，可以是卵磷脂，包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂，双肉豆蔻磷脂酰胆碱，双肉豆蔻磷脂酰甘油，二油酰磷脂酰胆碱，二棕榈酰磷脂酸，二棕榈酰磷脂酰胆碱，二棕榈酰磷脂酰甘油和二硬脂酰磷脂酰胆碱。优选卵磷脂、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二棕榈酰磷脂酰甘油。
本发明采用亲脂性添加剂选择性改善脂质体的特性。所述添加剂包括，硬脂胺，磷脂酸，生育酚、胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯和羊毛酯提取物；优选胆固醇。
药物肺部给药，肺内沉积量是反映药物能否有效的发挥药效的重要指标，而进入呼吸道的药物颗粒的大小及形状是影响肺内沉积量的重要因素。本发明脂质体粒径范围为1-5μm，颗粒易到达呼吸道深部作用部位。
本发明脂质体可通过常规方法包括薄膜法、逆相蒸发法、熔融法、注入法、冷冻干燥法、表面活性剂法、复乳法、钙融合法，优选薄膜法、逆相蒸发法和冷冻干燥法制备。
本发明的三七总皂苷脂质体可制成粉末吸入剂，气雾剂和喷雾剂等剂型，通过肺部给药，改善三七总皂苷口服吸收差，生物利用度低的不足，增强三七总皂苷对心脑血管疾病的疗效，提高患者用药的顺应性。
本发明根据中华人民共和国药典2000年版二部，对三七总皂苷脂质体的质量进行检查。结果表明，本发明的三七总皂苷脂质体粒径大小符合肺部给药对制剂粒径的要求，形态均一，包封率高，渗漏率低，符合药典对脂质体制剂的各项要求。
图1是PNS脂质体照片其中a光学显微镜照片，经相应介质稀释20倍后放大300倍，b电镜照片，放大84000倍。
图2是PNS脂质体在不同温度水相介质中的累积释放曲线，其中，n＝5，x±s。
具体实施例方式通过下列实施例说明本发明的具体实施方式
，但本发明的保护范围，不局限于此。
实施例1 薄膜法制备三七总皂苷脂质体取大豆卵磷脂(上海太伟药业有限公司)1.25克，胆固醇(中国医药集团上海化学试剂公司)0.3克用60毫升乙醚溶解于250ml梨形瓶中，在旋转蒸发仪上减压蒸发出去乙醚，脂质在瓶壁上成一薄膜，加15ml三七总皂苷磷酸盐缓冲液旋转水化得到三七总皂苷脂质体。包封率为81％。
实施例2 逆相蒸发法制备三七总皂苷脂质体取大豆卵磷脂2克，胆固醇1克用100ml乙醚溶解于250ml梨形瓶中，再加入20ml三七总皂苷磷酸盐缓冲液，水浴超声使成为均一的单相体系，减压蒸发除去乙醚至凝胶形成，继续减压蒸发15分钟，得到三七总皂苷脂质体。包封率为60％。
实施例3 冷冻干燥法制备三七总皂苷脂质体取大豆卵磷脂1.25克，胆固醇0.3克用60毫升乙醚溶解于250ml梨形瓶中，在旋转蒸发仪上减压蒸发出去乙醚，脂质在瓶壁上成一薄膜，加15ml磷酸盐缓冲液旋转水化得到空白脂质体，加适量海藻糖，混匀，在真空中冷冻干燥，随即用三七总皂苷磷酸盐缓冲液振摇进行分散，得到三七总皂苷脂质体。包封率为55％。
实施例4 注入法制备三七总皂苷脂质体取大豆卵磷脂2克，胆固醇2克，用80ml乙醚溶解，三七总皂苷磷酸盐缓冲液保温在60℃恒温振荡水浴中，，用微量注射器将乙醚脂质溶液缓缓注入缓冲溶液中，并通氮气去除残余乙醚蒸气，得到三七总皂苷脂质体。包封率为50％。
实施例5 熔融法制备三七总皂苷脂质体取大豆卵磷脂2克，胆固醇1克熔融混匀，将三七总皂苷磷酸盐缓冲液缓缓加入熔融液中，在组织搅拌机中高速搅拌，至脂质体形成。包封率为48％。
实施例6将三七总皂苷脂质体经冷冻干燥，装入粉末吸入装置，得到三七总皂苷脂质体粉末吸入剂。脂质体粉末装在定量装置中，经患者主动吸入。
实施例7将三七总皂苷脂质体与抛射剂一起填入气雾剂装置中，得到三七总皂苷脂质体气雾剂。脂质体混悬液在抛射剂作用下呈气雾状喷出。
实施例8将三七总皂苷脂质体装入喷雾剂装置中，得到三七总皂苷脂质体喷雾剂。脂质体混悬液在压力作用下直接喷出呈雾状。
实施例9 三七总皂苷脂质体质量检查1.PNS脂质体的粒径及其形态粒径测定PNS脂质体适量经磷酸盐缓冲液稀释后，用Zeta电位及粒度测定仪测定其粒径大小。
形态观察PNS脂质体适量置铜网上，经磷钨酸负染后，于透射电镜下观察脂质体结构。并取适量经稀释后，置于光学显微镜下观察其形态和分布。
三七总皂苷脂质体为大单室脂质体(LUV)，圆形或椭圆形，外形圆整光滑，形态分布均一。平均粒径为1546.5nm±321.4nm。
2.包封率测定取三七总皂苷脂质体混悬液适量，置低温高速离心机中，4℃，20000g×30min离心，取上清液20μl，用磷酸盐缓冲液稀释至5ml，摇匀。RP-HPLC法测定游离的Rbl按下式计算包封率。
3.脂质体体外泄漏分别考察PNS脂质体在(25±0.5)℃和(37±0.5)℃恒温水浴中持续振荡5天的体外释放状况。将脂质体适量置于透析袋内，释放介质为磷酸盐缓冲液，振荡频率为80r/min，持续振荡5天，分别于1d，2d，3d，4d，5d取透析液1ml，并同时补充同温新鲜磷酸盐缓冲液1ml，RP-HPLC测定透析液中游离的Rb1。透析完成后，剪破透析袋，收集袋内的脂质体并用10％Triton X-100破坏，作为时间无穷大时的药物泄漏量。计算其累积释放量，评价PNS脂质体的体外稳定性。
体外释放实验结果表明PNS脂质体在25℃和37℃介质中药物释放缓慢，37℃5天的体外累积释放量占时间无穷大时脂质体释放量的2.04％，25℃5天的体外累积释放量占时间无穷大时脂质体释放量的0.43％。
权利要求
1.一种三七总皂苷脂质体，其特征是含三七总皂苷，磷脂和亲脂性添加剂。
2.根据权利要求1所述的三七总皂苷脂质体，其特征是其中磷脂与三七总皂苷的重量比为0.5∶1-100∶1，磷脂与亲脂性添加剂的重量比为1∶1-10∶1。
3.根据权利要求1所述的三七总皂苷脂质体，其特征是所述的脂质体的磷脂是卵磷脂，包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂，双肉豆蔻磷脂酰胆碱，双肉豆蔻磷脂酰甘油，二油酰磷脂酰胆碱，二棕榈酰磷脂酸，二棕榈酰磷脂酰胆碱，二棕榈酰磷脂酰甘油和二硬脂酰磷脂酰胆碱。
4.根据权利要求1所述的三七总皂苷脂质体，其特征是所述的磷脂是卵磷脂，二棕榈酰磷脂酸，二棕榈酰磷脂酰胆碱和二棕榈酰磷脂酰甘油。
5.根据权利要求1所述的三七总皂苷脂质体，其特征是所述的亲脂性添加剂包括，硬脂胺，磷脂酸，生育酚、胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯和羊毛酯提取物。
6.根据权利要求1所述的三七总皂苷脂质体，其特征是所述的亲脂性添加剂是胆固醇。
7.根据权利要求1所述的三七总皂苷脂质体，其特征是所述的脂质体粒径范围为1-5μm。
8.根据权利要求1-7所述的任一三七总皂苷脂质体，可制成粉末吸入剂，气雾剂和喷雾剂。
全文摘要
本发明属医药技术领域，具体涉及一种三七总皂苷脂质体及其制备方法。本发明由三七总皂苷和磷脂加亲脂性添加剂制备成三七总皂苷脂质体。可通过常规方法制成粉末吸入剂，气雾剂和喷雾剂等剂型，通过肺部非注射给药，改善三七总皂苷口服吸收差的不足，减少药物刺激性和毒性，提高药物的生物利用度，增强三七总皂苷对心脑血管疾病的疗效，改善患者用药的顺应性。质检结果表明，本发明的三七总皂苷脂质体粒径形态均一，包封率高，渗漏率低，符合药典要求。
文档编号A61K31/7048GK1543974SQ200310108690
公开日2004年11月10日 申请日期2003年11月19日 优先权日2003年11月19日
发明者方晓玲, 沈央, 沙先谊 申请人:复旦大学