一种治疗颈椎病的中药及其制备方法

专利名称：一种治疗颈椎病的中药及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药复方制剂，特别是涉及一种治疗颈椎病的中药复方制剂及其制备方法、质量控制方法。
背景技术：
颈椎病又称颈椎综合症，是一种骨骼的退行性病理改变，其主要病理变化为颈椎间盘退行性变，纤维环弹力减退而向四周膨出或髓核疝出，压迫神经根、脊髓、椎动脉，从而出现多种症状。随着我国白领阶层日益增多、人们的生活习惯发生改变，长时间伏案工作学习、使用电脑、驾车、睡高枕软床等诸多因素，都会令人的颈项部长时间保持单一姿势，使肌肉韧带疲劳，从而加速了颈椎疾病的发生。调查显示，全国大约有7％～10％的人患有颈椎病，有学者在2000份样本中调查发现，发病率竟达12％。50～60岁年龄段颈椎病的发病率成倍增加，约20％～30％，60～70岁年龄段可达50％。不容忽视的是，颈椎病近年有年轻化的趋势。有关调查显示，我国青少年的颈椎发病率已从1997年年底的8.9％，上升到1999年年底的12％，而且其中的87％伴有脑血管痉挛。
颈椎病虽然病位在于颈椎，但其临床症状可表现为多种多样。如神经根型可出现前臂、手指的放射性疼痛麻木、感觉异常、握力减弱，甚至肌肉萎缩。脊髓型可出现单侧或双下肢麻木无力，步态笨拙不稳，甚至四肢僵硬瘫痪，大小便困难等。椎动脉型可出现头晕、恶心、呕吐、视物不清等症状。交感神经型可出现为头痛、恶心、耳鸣、心慌、胸闷等症状。此外，还有一些比较极易造成误诊的症状，如颈性吞咽困难、颈性胃炎、高血压、心绞痛、视力障碍、乳房疼痛、牙痛等。这些都给患者正常的生活和临床诊治带来了极大的不便。因此加强对颈椎病的防治，特别是对青少年发病具有着非常重要的现实意义。

发明内容
本发明目的在于提供一种治疗颈椎病的中药复方制剂及其制备方法，本发明另一目的在于提供该中药复方制剂的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现本发明是通过如下原料组成天麻450-600重量份，葛根450-600重量份，川芎450-600重量份，醋制延胡索320-480重量份。
上述原料优选配比为天麻520重量份，葛根520重量份，川芎520重量份，醋制延胡索390重量份。
上述原料可制成临床上可接受的剂型，如片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、口服液体制剂、滴丸及保健食品。
本发明片剂制备工艺如下取以上四味混合，粉碎成5-20目的粗颗粒；取以上粗颗粒，分别加3-7倍量60％-80％乙醇回流提取3次，每次0.5-2小时，滤过，滤液合并；在60-70℃、-0.08Mpa条件下减压回收乙醇，并继续浓缩至相对密度在50℃时约为1.30-1.35的稠浸膏；在60-70℃、-0.08Mpa条件下稠浸膏减压干燥，得干膏；干膏粉碎过70-100目筛，加入微晶纤维素40-50重量份，羧甲淀粉钠8-10重量份，以乙醇制粒，在40-45℃下干燥，整粒，加入硬脂酸镁2-3重量份，再补加适量淀粉使其总量达到350-450重量份，压制成片，包薄膜衣，包装，即得。
本发明中天麻素的含量测定方法色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；2-4∶96-100的乙腈—水为流动相，检测波长为221nm，温度30℃。理论塔板数按天麻素峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备精密称取天麻素对照品10mg，置50ml量瓶中，加5％甲醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加5％甲醇至刻度，摇匀，即得到每1ml含天麻素40μg。
供试品溶液的制备取本发明片剂10片，去包衣后研细，取细粉0.2g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入5％甲醇50ml，称定重量，超声提取在250w，50kHz条件下静置30-40分钟，5％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清夜用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定，即得。
颈舒片(由本发明上述制备工艺所得)每片含天麻以天麻素C13H18O7计，不得少于0.30-1.90mg。
本发明的鉴别方法A、取颈舒片2片，除去薄膜衣，研细，加乙醚15ml超声提取10-20分钟，滤过，滤渣备用。滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，同法制成川芎对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照药材溶液6μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以6-10∶1的正己烷—乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B、取A项的滤渣，挥干乙醚，加甲醇25ml超声提取10-20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液5ul、对照品溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2.5∶0.25氯仿—甲醇—水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
C、取本发明片剂5片，除去薄膜衣，研细，加乙醇25ml，超声提取25-35分钟，滤过，滤液挥干，残渣加加水10ml使溶解，水液加浓氨试液调pH＝10-12，用乙醚提取3次，每次10ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照品溶液1ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶6∶1正己烷—氯仿—甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，在与对照品色谱中相应的位置上显相同颜色的斑点。
本发明的药物组合物仅有四味，但配伍精当，药简而力宏。天麻味辛性平，既可祛痹阻颈项的风寒之邪，又可入肝经，通调筋脉气血之不足。故以之作为君药。《伤寒论》中治疗感受风寒，项背强急的名方葛根汤尽人皆知，方中葛根味甘平，能升阳解表，舒筋缓急，与君药相配，祛风寒、行津液，使筋急缓而血脉通。佐药川芎味辛性温，功善活血祛风止痛。其常被用作“诸经头痛之要药”关键在于性善上行，能祛太阳、少阳、厥阴经诸经之风邪血滞，止痛效佳，且能引诸药上行，兼为使药。佐药之二延胡索味辛苦性温，为理气活血止痛之要药。两味佐药均味辛而性温，一侧重于祛风寒，一侧重于通经络，二者相合，加强君臣药祛风通络，舒筋止痛的作用，使病邪除，筋脉利，诸症得以解除。
按本发明上述制备工艺所得的本发明片剂具有活血化瘀，减轻棉球肉芽肿的肉芽重量，抑制对角叉菜胶所致的肿胀，抑制毛细血管通透性增加作用。同时，本发明片剂还能显著提高热板痛阈值，具有抗炎镇痛作用。
下述实验例进一步说明本发明制备工艺的先进性及其在治疗颈椎病的药物中的应用。
实验例1提取工艺选择1、预试验根据药物特性的资料可知，葛根总黄酮、川芎有机酸及内酯、延胡索生物碱醇提为好，而天麻酚类化合物及其苷类水提、醇提均可。为了简化工艺，设计如下试验全方水提、全方水提醇沉及全方醇提三种提取工艺，从药理试验和药学试验两个方面进行比较。
实验方法准确称取天麻40g 葛根40g 川芎40g 延胡索30g药材共三份粉碎成粗颗粒(1)全方水提取上述药材一份加入10倍量水(1500ml)置2000ml圆底烧瓶中提取1.5小时，用8层纱布滤过，得滤液1130ml，药渣加8倍量水(1200ml)提取1.5小时，8层纱布滤过，合并滤液，浓缩，减压干燥。干膏称重，计算得膏率。
(2)全方水提醇沉取上述药材一份同(1)所述提取后，合并滤液，浓缩至每1ml含1g原药材时加入乙醇使含醇量达70％，放置24小时。抽滤，取滤液减压回收乙醇，减压浓缩，减压干燥。干膏称重，计算得膏率。
(3)全方醇提取上述药材一份用5倍量75％乙醇(750ml)回流提取1小时，抽滤，得滤液640ml，再以每次4倍量(600ml)每次1小时提取两次，抽滤，合并滤液，减压回收乙醇，减压浓缩、干燥。称重计算得膏率。
药理试验结果疼痛是颈椎病的主要症状之一，采用醋酸所致小鼠扭体反应对提取工艺进行选择。试验方法如下取小鼠40只，随机分为五组，每组10只，按表1所示分组并灌胃给药，给药剂量为6g生药/kg，每日1次，连续3日。末次给药后1小时，各鼠依次腹腔注射0.6％醋酸0.1ml/10g，记录注射后10分钟内小鼠出现扭体反应次数。结果见表1。
表1 醋酸所致小鼠扭体反应的结果表组别 动物数(n)10分钟内扭体反应次数(次；X±SD)蒸馏水组 10 14.1±5.32水提组10 10.3±7.02水提醇沉组10 11.5±7.11醇提组10 9.2±6.23结果表明，三份提取物均可对抗醋酸引起的小鼠扭体反应，使小鼠扭体反应次数减少。但以醇提物镇痛作用最强，水提物次之，水提醇沉物的作用最低。
药学试验结果表2 药学试验吸液量、得膏率试验结果表滤过情况吸液量(倍)得膏量(g)得膏率(％)水提易滤过 2.5 43.6529.1水提醇沉易滤过 2.5 23.5515.7醇提易滤过 0.7 27.9 18.6
表3 药学试验多指标成份测定结果表天麻素 天麻素阿魏酸 阿魏酸 葛根素 葛根素提取方法(mg) 转移率(mg)转移率 (mg) 转移率水提108.273.1％18.615.8％ 773.562.4％水提醇沉103.870.1％30.625.9％ 753.960.8％醇提123.983.7％82.569.9％ 982.179.2％注天麻药材中天麻素含量为0.37％；葛根药材中葛根素含量为3.1％；川芎药材中阿魏酸含量为0.295％。
以上药学试验表明，三种提取方法所得提取液均较容易过滤，水提与水提醇沉的吸液量较大为2.5倍，醇提吸液量为0.7倍。水提得膏率高，有效成分提取率低，若做成制剂服用量大；水提醇沉得膏率低，但有效成分提取率低；醇提得膏率低，有效成分提取率高，制剂服用量小。
根据以上药理药学试验结果，选择醇提作为本方的提取工艺。其中天麻角质较多，水煎煮易煎透，醇提不易润湿，不易煎透，所以醇提时应采用极薄片。
2、正交试验根据预试验确定本方采取醇提工艺进行提取，设计以下正交试验，对醇提的提取时间、提取次数、乙醇浓度、溶剂用量等提取工艺条件进行优选。
实验方法分别称取天麻40g 葛根40g 川芎40g 延胡索30g 药材共9份，每份150g，粉碎成粗颗粒(5-10目)，按设计的正交试验表试验，每份提取液在减压状态下回收乙醇至尽，60℃干燥，计算得膏率。以HPLC法测定天麻素、阿魏酸及葛根素的含量。正交试验中以天麻素含量最高者为1，其他天麻素含量与之相比所得的数值作为得分，阿魏酸及葛根素同样计分，各列三者之和作为总得分，进行结果处理，如结果见表4、表5、表6。
表4 乙醇回流工艺因素水平表因素A B C D水平乙醇浓度(％)溶剂量(倍)提取时间(h)提取次数(次)1 60 4 1.012 75 5 1.523 90 6 2.03注溶剂量为每次提取所用溶剂的量。
表5 L9(34)正交试验结果表天麻素含量 可魏酸含量列号 A B C D 葛根素含量mg 总得分mgmg1 1 1 1 1 71.35 57.19 617.24 1.88982 1 2 2 2 99.62 79.97 887.26 2.66623 1 3 3 3 122.3780.03 971.82.87974 2 1 2 3 127.2479.20 1026.2 2.96095 2 2 3 1 94.29 68.29 946.96 2.49246 2 3 1 2 113.6082.42 989.26 2.85687 3 1 3 2 106.9779.28 911.69 2.69108 3 2 1 3 120.6478.61 996.22 2.87279 3 3 2 1 78.24 69.47 846.32 2.2825K17.436 7.542 7.619 6.665K28.310 8.019 7.910 8.214K37.846 8.031 8.063 8.713R 0.291 0.163 0.148 0.683正交试验中，天麻素最大提取率为85.6％，阿魏酸最大提取率为69.8％，葛根素的最大提取率为80.2％.
表6 方差分析表方差来源离均差平均和自由度均方 F值显著性A 0.12758948 2 0.063795 3.766809B 0.05195687 2 0.025978 1.533917C 0.03387203 2 0.016936 1D 0.76076635 2 0.380383 22.46002 *
F(0.05，2)＝19.0F(0.01，2)＝99.0实验结果由正交表及方差分析表中可以看出D＞A＞B＞C，最佳工艺为A2B3C3D3，由于C因素为误差项，B2与B3之间相差不大，从节省生产成本，提高生产效率上考虑，故选A2B2C1D3为最佳工艺。即分别用5倍量75％乙醇回流提取3次，每次1小时。
3药学试验多指标成份的选择方中天麻中天麻素、葛根中葛根素为其主要有效成分及指标性成分，川芎中阿魏酸为其受热易破坏的活性成分，故选择天麻素、阿魏酸及葛根素作为指标成分。验证实验结果表明A2B2C1D3工艺所得天麻素、阿魏酸与A2B3C3D3工艺所得天麻素、阿魏酸、葛根素含量相差无几(<5％>，所以，选定工艺A2B2C1D3(用5倍量75％乙醇提取3次，每次1小时)作为本方的提取工艺。
实验例2浓缩干燥工艺研究1、浓缩工艺研究处方中川芎中含有阿魏酸，受热易破坏。减压浓缩能减少药液受热时间，降低有效成分的损失；同时减少生产周期，提高生产效率。所以选择减压浓缩。
2、干燥工艺研究对浓缩液采用常压干燥、减压干燥(75±5℃，-0.08MPa)、减压干燥(65±5℃，-0.08MPa)三种干燥方式进行干燥。对干燥时间、外观性状以及天麻素、阿魏酸、葛根素的含量进行HPLC比较，结果见表7。
表7 干燥方法比较表干燥方式 干燥时间 外观性状 天麻素含量(mg) 阿魏酸含量(mg) 葛根素含量(g)常压干燥 86h 黑色 116.71 52.89 0.977减压干燥10h 棕黄色118.67 70.73 0.984(75±5℃-0.08MPa)减压干燥12h 棕黄色118.78 78.80 0.988(65±5℃-0.08MPa)由上表可看出，常压干燥较减压干燥耗费时间长，外观上看色深。从天麻素、葛根素、阿魏酸含量看，(75±5℃，-0.08MPa)阿魏酸含量明显降低，而减压干燥(65±5℃-0.08MPa)三者的含量都最高。所以选择减压干燥(65±5℃，-0.08MPa)这种方式进行干燥。
实验例3质量标准的研究含量测定1、方法学考察(1)测定条件采用安捷伦高效液相色谱仪，选用C18ODS柱ф×L＝4.6×250mm，粒度5μm，流速1.0ml/min，温度30℃。
流动相采用药典系统，甲醇—磷酸盐溶液(0.1mol/L磷酸二氢钾溶液和0.1mol/L磷酸氢二钠溶液等量混合)—水(1.5∶3∶95.5)分别在270nm、221nm下测定，药材中天麻素峰没能分开，改用甲醇—水(3∶97)时，TR＝12min，基线不好，改变流动相为甲醇—水(4∶96)分离度不好，TR＝13min，改变流动相为乙腈—水(2∶98)分离度较好。最后确定流动相为乙腈—水(2∶98)为流动相。
(2)提取条件①试验中考查了不同溶剂对结果的影响，采用甲醇、5％的甲醇、50％的甲醇、50％的乙醇超声处理得四份样品，经高效液相测定，结果表明5％的甲醇提取完全且图谱效果好，甲醇、50％的甲醇、50％的乙醇对样品中的天麻素提取都不完全而且使基线上移。故提取溶剂选择5％的甲醇。
②试验中考查了不同超声时间对结果的影响，称取样品0.2602g、0.2546g、0.2551g加5％的甲醇50ml超声20min，30min，40min，比较差异，结果表明20min提取不够完全，30min、40min提取对含量的影响不大，最后确定样品超声提取30min。
实验例4对三批样品进行含量测定表8 含量测定结果批次天麻素含量(mg/片)200110051.42200110101.40200110151.35
根据三批样品测定结果，每片含天麻以天麻素(C13H18O7)计不得少于0.50mg。
实验例5川芎的特征鉴别研究参照中国药典2000年版一部30页川芎的鉴别方法进行鉴别。供试品溶液的制备，取本发明片剂2片，除去薄膜衣，研细，加乙醚15ml超声提取15分钟，滤过，滤渣备用。滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，同法制成川芎对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照药材溶液6μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷—乙酸乙酯(15∶1)(9∶1)、(3∶1)为展开剂，分别展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，三种展开剂展开的供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。以正己烷—乙酸乙酯(15∶1)展开，主荧光斑点的比移值太小，约为0.2；(9∶1)主荧光斑点的比移值约为0.5。(3∶1)主荧光斑点的比移值约为0.9，比移值太大。所以选择，以正己烷—乙酸乙酯(9∶1)为展开剂。
空白溶液的制备是按处方中药味比例，自配不含川芎的群药，按制备工艺制成空白制剂，再按正文供试品溶液制备方法制成空白溶液。展开及检视条件同正文。结果表明，薄层色谱斑点清晰，重现性好，空白无干扰，。
实验例6葛根的鉴别曾参照中国药典2000年版一部273页葛根项下鉴别方法进行鉴别。样品制备如下取本发明片剂2片，除去薄膜衣，研细，加甲醇25ml超声提取15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。另葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，结果样品色谱有一条白色映光色带，影响鉴别。对样品另行处理。取川芎鉴别中乙醚提取后的滤渣，挥干乙醚，加甲醇25ml提取15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，样品色谱中与对照品色谱相对应处有明显的斑点，且斑点无干扰。
空白溶液的制备是按处方中药味比例，自配不含葛根的群药，按制备工艺制成空白制剂，再按正文供试品溶液制备方法制成空白溶液。展开及检视条件同正文。实验结果表明，薄层色谱斑点清晰，重现性好，空白无干扰。
实验例7延胡索的鉴别研究曾参照中国药典2000年版一部108页延胡索项下鉴别方法进行鉴别。方法为取取本发明片剂5片，除去薄膜衣，研细，乙醇超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，滤渣加水10毫升使溶解，加氨水调pH值大于10，碱液用乙醚萃取三次，每次10毫升，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1毫升使溶解，作为样品液。另取延胡索乙素对招聘1毫克，加甲醇定容至1毫升，作为对招品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，以正己烷-氯仿-甲醇(7.5∶4∶1)，为展开剂展开，晾干后，以饱和碘蒸气显色，带显色清晰后日光下观察，样品色谱中在与对照品色谱相对应的位置上的下方有一紧挨且颜色相同的斑点，斑点的比移值太大。改变展开剂的比例来改变斑点的比移值。分别以正己烷-氯仿-甲醇(10∶4∶1)与正己烷-氯仿-甲醇(9∶6∶1)为展开剂展开，饱和碘蒸气显色后，正己烷-氯仿-甲醇(10∶4∶1)展开的比移值小，约0.2，斑点未分开。正己烷-氯仿-甲醇(9∶6∶1)展开效果较好，比移值0.6左右，且斑点无干扰。但以饱和碘蒸气显色后，放置一段时间后，延胡索乙素斑点由紫色变为黄色，由于黄色不利于照相，需摸索显色条件。考虑到延胡索乙素为生物碱类，试用碘化铋钾来显色。碘化铋钾显色呈紫红色，故确定碘化铋钾为显色剂。
空白溶液的制备是按处方中药味比例，自配不含延胡索的群药，按制备工艺制成空白制剂，再按正文供试品溶液制备方法制成空白溶液。展开及检视条件同正文。实验结果表明，薄层色谱斑点清晰，重现性好，空白无干扰。
实验例8对小鼠自家血肿消退作用的影响取雄性小鼠50只，随机分为五组，每组10只。各鼠在严格消毒情况下剪鼠尾，用微量注射器取血30ul，准确地注射于小鼠消毒的自身右后足跖皮下，造成微隆起的近似圆形血肿，从造型即日起，各鼠如表1所示剂量灌胃给药，每日1次，连续3日，每日给药前用卡尺测量右后足跖血肿部位最长和最短直径，并计算血肿面积变化值，末次给药后1h，处死小鼠，取小鼠足跖血肿部位组织，剪碎，每100mg组织加0.1NHCl1.0ml浸泡振荡溶血，取上清液置752-紫外分光光度计，在540nm处比色，测OD值。结果见表9。
表9 本发明片剂对小鼠自家血肿消退作用的影响动物数 血肿血积变化(cm2；X±SD) 血肿溶出液血红蛋组别 g生药/kgn1d 2d 白值(OD；X±SD)对照组 10 0.33±0.20 0.91±0.15 0.130±0.0201.56g药粉颈痛灵胶囊 10 0.61±0.34*1.13±0.26* 0.098±0.015***/kg本发明片剂12.64 10 1.08±0.31*** 1.36±0.42**0.086±0.022***本发明片剂6.32 10 0.81±0.49*1.33±0.61* 0.102±0.015**本发明片剂3.16 10 0.60±0.29*0.91±0.35 0.114±0.012*实验例9对大鼠血液流变学的影响取大鼠50只，雌雄各半，随机分为五组，每组10只。按表2所示剂量灌胃给药，每日1次，连续10日，对照组每日灌以等体积水。于末次给药后1h，各组大鼠以3％戊巴比妥钠依次麻醉后，经腹主动脉采血，肝素抗凝，置LBY-N6A自清洗旋转式粘度计上，测定全血粘度及血浆粘度。结果见表10。
表10 本发明片剂对正常大鼠血液流变学的影响(mpa·S；X±SD)动物 全血粘度组别 g生药/kg血浆粘度数n 10S-140S-1120S-1对照组 1013.67±1.47 7.56±0.64 5.32±0.36 2.33±0.34颈痛灵胶囊1.08g药粉/kg 109.76±3.08**5.72±0.59*** 4.20±0.24*** 2.07±0.41本发明片剂8.75 109.47±1.97*** 5.76±0.95*** 4.34±0.58*** 1.97±0.49本发明片剂4.37 10010.90±2.33** 6.67±1.10* 4.92±0.67 2.12±0.50本发明片剂2.19 1012.65±2.27 7.24±1.05 5.15±0.56 1.99±0.23*结果表明，本发明片剂能够降低大鼠的全血粘度，与对照组比较差异显著。对血浆粘度影响不大。
实验例10对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响取雄性小鼠50只，随机分为五组，每组10只，按表3所示剂量灌胃给药，每日1次，连续7日。与末次药后30min，小鼠依次尾静脉注射0.5％伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g，随即依次腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，20分钟后脱臼处死，腹腔注射生理盐水6ml，轻按小鼠腹部，抽取腹腔液3ml，3000rpm离心10min，取上清液置752-紫外光栅分光光度计上，590nm处测OD值。结果见表11。
表11 本发明片剂对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响组别 g生药/kg动物数nOD值X±SD抑制率％对照组10 0.215±0.059颈痛灵胶囊1.56g药粉/kg10 0.166±0.045*22.8本发明片剂12.64 10 0.155±0.037*28.9本发明片剂6.3210 0.161±0.044*25.1本发明片剂3.1610 0.176±0.049 18.1结果表明，本发明片剂对醋酸引起小鼠腹腔毛细血管通透性增加有明显抑制作用，使OD值降低，与对照组比较差异显著。
实验例11对大鼠棉球肉芽肿的影响取雄性大鼠50只，在乙醚浅麻醉无菌条件下，将灭菌棉球(10mg)植入各鼠腋窝皮下，手术后次日，随机分为五组，每组10只。按表4所示剂量灌胃给药，每日1次，连续7日，末次给药后1h，将大鼠断头处死，剥离并取出棉球肉芽组织，称重、并减去棉球重量即为肉芽组织湿重。结果见表12。
表12 本发明片剂对大鼠棉球肉芽肿的影响组别 g生药/kg动物数n 血肿溶出液血红蛋白值(OD；X±SD)对照组10 479.2±41.01颈痛灵胶囊1.08g药粉/kg10 440.4±40.71*本发明片剂8.7510 438.2±36.91*本发明片剂4.3710 440.2±36.13*本发明片剂2.1910 453.7±46.40结果表明，本发明片剂各给药剂量组可明显抑制肉芽组织的增生，使肉芽棉球重量减轻。
实验例12对角叉菜胶所致大鼠足肿胀的影响取大鼠50只，饲养2天后，随机分成五组，每组10只。按表5所示剂量灌胃给药，每日一次，连续三日，末次给药后1h，将1％角叉菜胶(0.1ml/只)依次注射大鼠右后足跖腱膜下致炎，每隔1小时以自制窄带尺测量大鼠足跖及踝关节圆周，以左后足作对照，以左右足跖及踝关节圆周和之差为肿胀程度。结果表明，注射角叉菜胶后，本发明片剂各剂量组均显示出对大鼠足肿胀有不同程度的抑制作用，与对照组比较差异显著。
实验例13对醋酸所致小鼠扭体反应的影响取小鼠50只，随机分为五组，每组10只。按表6所示剂量灌胃给药，每日1次，连续3日。末次给药后1h，各鼠依次腹腔注射0.6％醋酸0.1ml/10g，记录注射后10min内小鼠出现扭体反应次数，计算抑制率。结果见表13。
表13 本发明片剂对醋酸所致小鼠扭体反应的影响10min内扭体反应次数组别 g生药/kg动物数n抑制率％(次；X±SD)正常对照组10 14.5±6.29颈痛灵胶囊1.56g药粉/kg10 4.0±2.98***72.4本发明片剂12.64 10 8.7±6.09* 40.0本发明片剂6.3210 10.5±8.06* 27.6本发明片剂3.1610 12.7±7.36* 12.4结果表明，本发明片剂可对抗醋酸引起的小鼠扭体反应，使小鼠扭体反应次数减少。
实验例14对小鼠热板痛阈值的影响取经筛选痛阈值在5-30S的雌性小鼠50只，随机分为五组，按表7所示剂量灌胃给药，每日1次，连续3日，分别于末次给药后30’、60’、90’、120’、150’、180’、240’，将各组小鼠置GJ一8402热板测痛仪热板上(55±0.5℃)测痛阈值，结果表明，本发明片剂可明显提高小鼠热板痛阈值。
实施例1片剂的制备取天麻520g，葛根520g，川芎520g，延胡索(醋制)390g，按上述方法制得本发明片剂1000片，每片重0.40g。口服，一日3次，一次4片。
实施例2胶囊剂的制备取天麻520g，葛根520g，川芎520g，延胡索(醋制)390g，按上述方法制得颈舒胶囊1000粒，每粒重0.40g。口服，一日3次，一次4粒。
实施例3药物组合物的制备方法取天麻520g，葛根520g，川芎520g，醋制延胡索390g；混合，粉碎成5-20目的粗颗粒；取以上粗颗粒，分别加5倍量75％乙醇回流提取3次，每次1小时，滤过，滤液合并；在60℃、-0.08Mpa条件下，滤液减压回收乙醇，并继续浓缩至相对密度60℃时约为1.30的稠浸膏；在65±5℃、-0.08Mpa条件下，稠浸膏减压干燥，得干膏；干膏粉碎过80目筛，加入微晶纤维素45g，羧甲淀粉钠9g，以乙醇制粒，40℃条件下干燥，整粒，加入硬脂酸镁3g，再补加适量淀粉使其总量达到380g，压制成1000片，包薄膜衣，包装，即得。
实施例4药物组合物的制备方法取天麻500g，葛根500g，川芎500g，醋制的延胡索370g；混合，粉碎成5-20目的粗颗粒；取以上粗颗粒，分别加4倍量70％乙醇回流提取3次，每次1小时，滤过，滤液合并；在60℃、-0.08Mpa条件下，滤液减压回收乙醇，并继续浓缩至相对密度60℃时约为1.30的稠浸膏；在65±5℃-0.08Mpa条件下，稠浸膏减压干燥，得干膏；干膏粉碎过80目筛，加入微晶纤维素55g，羧甲淀粉钠12g，以乙醇制粒，在45℃条件下干燥，整粒，加入硬脂酸镁3g，再补加适量淀粉使其总量达到400g，压制成1000片，包薄膜衣，包装，即得。
实施例5取天麻520g，葛根520g，川芎520g，醋制延胡索390g；混合，粉碎成5-20目的粗颗粒；取以上粗颗粒，分别加5倍量75％乙醇回流提取3次，每次1小时，滤过，滤液合并；在60℃、-0.08Mpa条件下，滤液减压回收乙醇，并继续浓缩至相对密度60℃时约为1.30的稠浸膏；在65±5℃、-0.08Mpa条件下，稠浸膏减压干燥，得干膏，常规工艺制成胶囊1000粒。
实施例6本发明片剂质量控制方法含量测定天麻素的测定方法色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；2∶98乙腈-水为流动相，检测波长为221nm，温度30℃。理论塔板数按天麻素峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备精密称取天麻素对照品10mg，置50ml量瓶中，加5％甲醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加5％甲醇至刻度，摇匀，即得到每1ml含天麻素40μg。
供试品溶液的制备取本发明片剂10片，除去薄膜衣，研细，取细粉0.2g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入5％甲醇50ml，称定重量，在250w，50kHz条件下超声提取30分钟，静置，5％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清夜用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定，即得。
本实施例每片本发明片剂中天麻素含量不少于0.50mg川芎的鉴别A、取本发明片剂2片，除去薄膜衣，研细，加乙醚15ml超声提取15分钟，滤过，滤渣备用。滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，同法制成川芎对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照药材溶液6μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷—乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
葛根的鉴别B、取A项滤渣，挥干乙醚，加甲醇25ml超声提取15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液5ul、对照品溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2.5∶0.25氯仿—甲醇—水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
延胡索的鉴别取本发明片剂5片，除去薄膜衣，研细，加乙醇25ml，超声提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加加水10ml使溶解，水液加浓氨试液调pH＝10-12，用乙醚提取3次，每次10ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照品溶液1ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶6∶1正己烷—氯仿—甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，在与对照品色谱中相应的位置上显相同颜色的斑点。
权利要求
1.一种具有治疗颈椎病的药物组合物，其特征在于该组合物由如下原料制成的天 麻450-600重量份 葛 根450-600重量份川 芎450-600重量份 醋制延胡索320-480重量份。
2.如权利要求1所述的治疗颈椎病的药物组合物，其特征在于该组合物由如下原料制成的天 麻520重量份 葛 根520重量份川 芎520重量份 醋制延胡索390重量份。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于该组合物可制成临床上或药学上可接受的剂型，如片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、口服液体制剂、滴丸。
4.如权利要求1或2所述的药物组合物的片剂制备方法，其特征在于该方法为取天麻450-600重量份，葛根450-600重量份，川芎450-600重量份，醋制延胡索320-480重量份，四味混合，粉碎成5-20目的粗颗粒；取以上粗颗粒，分别加3-7倍量60％-80％乙醇回流提取3次，每次0.5-2小时，滤过，滤液合并；在60-70℃、-0.08Mpa条件下减压回收乙醇，并继续浓缩至相对密度在50℃时约为1.30-1.35的稠浸膏；在60-70℃、-0.08Mpa条件下稠浸膏减压干燥，得干膏；干膏粉碎过70-100目筛，加入微晶纤维素40-50重量份，羧甲淀粉钠8-10重量份，以乙醇制粒，在40-45℃下干燥，整粒，加入硬脂酸镁2-3重量份，再补加适量淀粉使其总量达到350-450重量份，压制成片，包薄膜衣，包装，即得。
5.如权利要求4所述的片剂制备方法，其特征在于该方法为取天麻520重量份，葛根520重量份，川芎520重量份，醋制延胡索390重量份；混合，粉碎成20目的粗颗粒；取以上粗颗粒，分别加5倍量75％乙醇回流提取3次，每次1小时，滤过，滤液合并；在60℃、-0.08Mpa条件下，滤液减压回收乙醇，并继续浓缩至相对密度60℃时约为1.30的稠浸膏；在65±5℃、-0.08Mpa条件下，稠浸膏减压干燥，得干膏；干膏粉碎过80目筛，加入微晶纤维素45重量份，羧甲淀粉钠9重量份，以乙醇制粒，在40℃条件下干燥，整粒，加入硬脂酸镁3重量份，再补加适量淀粉使其总量达到380重量份，压制成片，包薄膜衣，包装，即得。
6.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为包括如下含量测定方法天麻素的含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；2-4∶96-100的乙腈-水为流动相，检测波长为221nm，温度30℃；理论塔板数按天麻素峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备 精密称取天麻素对照品10mg，置50ml量瓶中，加5％甲醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加5％甲醇至刻度，摇匀，即得到每1ml含天麻素40μg；供试品溶液的制备 取本发明片剂10片，去包衣后研细，取细粉0.2g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入5％甲醇50ml，称定重量，超声提取在250w，50kHz条件下静置30-40分钟，5％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清夜用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定，即得；每片含天麻以天麻素C13H18O7计，不得少于0.30-1.90mg。
7.如利要求6所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为包括如下含量测定方法天麻素的含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；2∶98乙腈-水为流动相，检测波长为221nm，温度30℃；理论塔板数按天麻素峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备 精密称取天麻素对照品10mg，置50ml量瓶中，加5％甲醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加5％甲醇至刻度，摇匀，即得到每1ml含天麻素40μg；供试品溶液的制备 取本发明片剂10片，除去薄膜衣，研细，取细粉0.2g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入5％甲醇50ml，称定重量，在250w，50kHz条件下超声提取30分钟，静置，5％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清夜用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定，即得；每片中天麻素含量不少于0.50mg。
8.如权利要求1或2所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别方法中的一种或几种A、取本发明片剂2片，除去薄膜衣，研细，加乙醚15ml超声提取10-20分钟，滤过，滤渣备用；滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取川芎对照药材1g，同法制成川芎对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照药材溶液6μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以6-10∶1的正己烷—乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；B、取A项的滤渣，挥干乙醚，加甲醇25ml超声提取10-20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液5ul、对照品溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2.5∶0.25氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；C、取本发明片剂5片，除去薄膜衣，研细，加乙醇25ml，超声提取25-35分钟，滤过，滤液挥干，残渣加加水10ml使溶解，水液加浓氨试液调pH为10-12，用乙醚提取3次，每次10ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照品溶液1ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶6∶1正己烷-氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，在与对照品色谱中相应的位置上显相同颜色的斑点。
9.如权利要求8所述的质量控制方法，其特征在于该方法中鉴别方法含有如下鉴别方法中的一种或几种A、取本发明片剂2片，除去薄膜衣，研细，加乙醚15ml超声提取15分钟，滤过，滤渣备用；滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取川芎对照药材1g，同法制成川芎对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照药材溶液6μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；B、取A项滤渣，挥干乙醚，加甲醇25ml超声提取15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液5ul、对照品溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2.5∶0.25氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；C、取本发明片剂5片，除去薄膜衣，研细，加乙醇25ml，超声提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加加水10ml使溶解，水液加浓氨试液调pH＝10-12，用乙醚提取3次，每次10ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl，对照品溶液1ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶6∶1正己烷-氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，在与对照品色谱中相应的位置上显相同颜色的斑点。
10.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备治疗颈椎病的药物中的应用。
11.如权利要求10所述的药物组合物的应用，其特征在于该药物组合物具有活血化瘀，减轻棉球肉芽肿的肉芽重量，抑制对角叉菜胶所致的肿胀，抑制毛细血管通透性增加，提高热板痛阈值，抗炎镇痛作用。
全文摘要
本发明公开了一种治疗颈椎病的中药复方制剂及其制备方法、质量控制方法。它主要由天麻、葛根、川芎、醋制延胡索原料药制成。本发明组合物治疗颈椎病菌效果显著，无副作用。
文档编号A61P19/08GK1634210SQ200310123838
公开日2005年7月6日 申请日期2003年12月31日 优先权日2003年12月31日
发明者张红 申请人:张红