治疗剂的制作方法

专利名称：治疗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及对于治疗或预防需要增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的疾病，例如骨质疏松症和骨折等有效的(医)药品、食品、饮料或饲料。
背景技术：
在骨组织中，骨形成和骨吸收一般是一面保持一定平衡，一面反复进行的。该过程调节着骨强度和血液中的钙浓度。一般认为在骨形成中，成骨细胞起主要作用；在骨吸收中，破骨细胞起主要作用，当由于某种原因使骨形成和骨吸收的平衡受到破坏时，会导致骨质疏松症。骨质疏松症大致可以分为以雌激素分泌降低为主要原因的闭经后的骨质疏松症和以年龄增长为主要原因的老年性骨质疏松症。除此之外，众所周知的还有因糖尿病和甲状腺功能亢进等内分泌·代谢疾病和施用类固醇等药物，消化系统·肝脏疾病，缺乏维生素C，不运动(不動性)，卵巢摘除，风湿性关节炎等为主要原因的继发性骨质疏松症。
目前作为骨质疏松症的治疗药物，使用雌激素剂、降钙素、二膦酸盐等主要通过阻碍骨吸收而抑制骨量降低的药物。但是存在如下缺点，使用雌激素剂治疗时导致乳腺癌和子宫癌、心脏疾病的可能性增大，副作用较大；使用降钙素则容易产生耐药性，不能口服；二膦酸盐的的吸收率低，残留性高，会导致骨代谢的过度钝化。为了达到激活骨代谢的目的，还使用了维生素D3制剂，但是与其它药物相比，治疗效果低，而患高钙症等的副作用大。这些现有骨质疏松症治疗剂不能使已经缺失的骨恢复到原有的状态，作为真正的骨质疏松症治疗剂，很难说它们能够充分满足要求。
与骨形成有密切关系的细胞是成骨细胞。成骨细胞，与软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞、腱细胞等都是以共同的间质干细胞为起源，在分化过程中，经过前成骨细胞形成成熟的成骨细胞。成骨细胞在成熟过程中，产生以作为骨构成成分的胶原为主的大量胞外基质，还表达碱性磷酸酶，引起磷酸钙向基质中沉淀。就这样一部分成骨细胞被埋在钙化的基质中，进一步分化成骨细胞。
人的骨量在20～30岁呈现出最大值，以后逐渐减少。随着年龄增加，骨组织中的成骨细胞数量减少，同时由间叶系干细胞向成骨细胞的分化能力也降低。相反，可以说来源于间叶系干细胞的脂肪细胞数量随着年龄的增加而增殖。因此从预防、治疗骨质疏松症的观点考虑，也可以认为在骨成长期增加成骨细胞、骨细胞的量以及在老年期和闭经期以后，更有选择性地促进间叶系干细胞向成骨细胞分化，增强骨形成也是有效的。
最近，对于促进骨形成的药物一直进行着开发研究，公开了通过使用苯并吡喃衍生物(例如参照特开平7-291983号公报)、苯基取代羟环戊烯酮类似物(例如参照特开平11-43460号公报)、前列腺素A1类似物(例如参照特开平11-43461号公报)、苯并噻吩(ベンゾチエピン)衍生物(例如参照特开2000-109480号公报)、色酮衍生物(例如参照特开2001-139571号公报)促进骨形成的作用。但是，对其有效性、安全性的评定还不充分，尚未达到实用阶段。
人们发现在骨基质中含有诱导骨形成的蛋白性因子，并将其定名为骨形成蛋白质(bone morphogenetic protein，以下称为BMP)。在很长一段时间内，对其本质的了解是不明确的，但是克降了4种BMP基因，以此为契机，当前已经了解到有十几种分子种超越种群广泛存在于动物之中。BMP作用于前成骨细胞，可以诱导碱性磷酸酶活性、对甲状旁腺激素的应答性、产生骨钙素、提高胶原合成并向成骨细胞分化。BMP是根据具有多分化能力的未分化间叶系细胞的分化阶段，分别向软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞分化的。BMP可以抑制成肌细胞向肌肉分化，而转变为向成骨细胞分化。同时还了解到BMP中具有由成骨细胞诱导胰岛素样增殖因子等二次增殖因子的诱导活性。通过把BMP与载体一起皮下或肌肉内给药可以诱导骨形成。目前已经确认了在重组人BMP中BMP-2、-4、-5、-6、-7中具有单独诱导骨形成的活性。其中，重组人BMP-2具有很强的骨形成活性，在大鼠、羊、狗、猴子等的骨缺失模型中可以使缺失组织恢复。同时还有对于BMP-4、BMP-5参与骨折治愈过程，BMP-6参与软骨内骨化的报导；BMP-12中具有形成韧带、肌腱的活性，BMP-13中具有形成软骨的活性，这些都是众所周知的。一般认为老龄动物和高龄人中，骨基质中的BMP量降低，成骨细胞对BMP的敏感性降低，由此而提出了BMP与老年性骨质疏松症有关系的观点。
BMP不仅对骨形成起着重要作用，而且在发育过程中也起着很重要的作用，BMP-2、-4、-7、-8、-11等参与背腹轴的形成和中胚层形成、心脏形成、肾脏形成、眼形成、精子形成等有关系。剔除BMP的动物显示致死性或重症障碍。这样众所周知BMP对于机体是必须的，并且具有多种生理活性。
由于BMP显示前述各种作用，所以对把BMP本身直接作为蛋白制剂，用于治疗骨质疏松症和骨折等进行了尝试。但是由于BMP是蛋白质，所以给药方法有局限性以及出现耐受性等就成了问题。同时BMP受体在多种组织中广泛表达，所以当进行全身给药时，有可能对骨以外的其它组织产生影响。由于存在这些缺点，要把BMP本身作为治疗药物实现应用还存在着种种限制。但是可以认为如果不是从外部施用BMP，而是能够任意在所需要的组织部位增强BMP的产生，则对于治疗、预防骨质疏松症和骨折等必需增强BMP产生的疾病是有效的。近年来提出了含有2种芳香族系的特定化合物(例如参照WO 97/15308号的小册子。)和ネバスタチン、洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀等他汀类化合物(例如参照WO 98/25460号的小册子)具有增强BMP-2产生的活性。另外也提出了ヘリオキサンチン(例如参照特开平8-245386号公报)和缩合噻吩衍生物(例如参照特开平9-15113号公报)具有增强BMP作用的活性。但是对于这些物质的安全性、有效性的评定还不充分，尚未达到实用阶段。
近年来也进行了把BMP用于骨再生治疗的开发研究，同时也进行了把BMP与载体的复合体和植入材料配合埋在骨折处的方法而获得治疗效果的尝试。但是由于要在机体内引入大量的BMP，在安全性和经济性方面都会出现问题。同时也考虑了通过使用可以增强BMP产生或促进骨形成的物质替代BMP来避免这些缺点，但是还不了解确切的具有实用意义的方法。
这样虽然考虑了通过促进骨形成、增强BMP产生可以治疗或预防相关的各种疾病，但是尚未了解不显示毒性和副作用，而根据需要确实能够适当增强BMP产生的物质、方法等。
发明公开本发明的目的在于开发可以简单摄取的、适合作为食品材料和医药品材料的、具有增强骨形成蛋白质产生作用或促进骨形成作用的组合物，并提供使用该组合物的(医)药品、食品、饮料或饲料。
也就是本发明涉及[1]需要增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的疾病的治疗剂或预防剂，其特征是含有选自(a)酸性糖，(b)聚丙烯酸，(c)绿原酸和(d)绿原酸的氧化处理物中的至少一种化合物作为有效成分，[2]根据前述[1]中所述的治疗剂或预防剂，其中，酸性糖是选自酸性多糖、酸性寡糖、酸性单糖以及它们的分解物中的至少一种酸性糖，[3]根据前述[1]中所述的治疗剂或预防剂，其中，酸性糖是从岩藻依聚糖(フコィダン)、肝素、硫酸葡聚糖、硫酸软骨素B、果胶酸、来源于蓝藻类(スピルリナ)的酸性多糖，岩藻依聚糖分解物，角叉菜聚糖λ，角叉菜聚糖κ，角叉菜聚糖ι，低分子肝素，硫酸乙酰肝素以及来源于小球藻(クロレラ)的酸性多糖中的至少一种酸性糖，[4]骨形成蛋白质产生增强剂或骨形成促进剂，其特征是含有选自(a)酸性糖，(b)聚丙烯酸，(c)绿原酸和(d)绿原酸的氧化处理物中的至少一种化合物作为有效成分，[5]根据前述[4]中所述的骨形成蛋白质产生增强剂或骨形成促进剂，其中，酸性糖是选自酸性多糖、酸性寡糖、酸性单糖以及它们的分解物中的至少一种酸性糖，[6]根据前述[4]中所述的骨形成蛋白质产生增强剂或骨形成促进剂，其中，酸性糖是选自岩藻依聚糖、肝素、硫酸葡聚糖、硫酸软骨素B、果胶酸、来源于蓝藻类的酸性多糖，岩藻依聚糖分解物，角叉菜聚糖λ，角叉菜聚糖κ，角叉菜聚糖ι，低分子肝素，硫酸乙酰肝素以及来源于小球藻的酸性多糖中的至少一种酸性糖，[7]用于增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的食品、饮料或饲料，其特征是含有选自(a)酸性糖，(b)聚丙烯酸，(c)绿原酸和(d)绿原酸的氧化处理物中的至少一种化合物作为有效成分，[8]根据前述[7]中所述的用于增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的食品、饮料或饲料，其中，酸性糖是选自酸性多糖、酸性寡糖、酸性单糖以及它们的分解物中的至少一种酸性糖，[9]根据前述[7]中所述的用于增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的食品、饮料或饲料，其中，酸性糖是选自岩藻依聚糖、肝素、硫酸葡聚糖、硫酸软骨素B、果胶酸、来源于蓝藻类的酸性多糖，岩藻依聚糖分解物，角叉菜聚糖λ，角叉菜聚糖κ，角叉菜聚糖ι，低分子肝素，硫酸乙酰肝素以及来源于小球藻的酸性多糖中的至少一种酸性糖，[10]需要增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的疾病的治疗剂或预防剂，其特征是含有来源于藻类的提取物作为有效成分，[11]骨形成蛋白质产生增强剂或骨形成促进剂，其特征是含有来源于藻类的提取物作为有效成分，和[12]用于增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的食品、饮料或饲料，其特征是含有来源于藻类的提取物作为有效成分。
附图的简单说明

图1是表示来源于北海道函馆产海带(ガゴメ)的岩藻依聚糖的DEAE-Cellulofine A-800柱洗脱图形的图。
实施本发明的最佳方案本说明书中的“增强BMP产生的作用”和“增强BMP产生的活性”分别是指导致增强BMP产生和增强BMP产生的功能，其意义没有特别严格的区别。“增强”包括与本发明涉及的有效成分作用前相比，在作用后目的物质量增加的状态，同时还包括通过使本发明涉及的有效成分作用而使目的物质发生的状态(诱导)。另外，在本说明书中，作为有效成分列举的所有物质，在本发明中均可以单独使用，或者是混合2种或2种以上使用。
作为本发明中所使用的有效成分，可以使用选自(a)酸性糖，(b)聚丙烯酸，(c)绿原酸和(d)绿原酸的氧化处理物中的至少一种化合物。作为酸性糖只要是具有酸性基团的糖，则没有特别限定，例如可以使用选自酸性多糖、酸性寡糖、酸性单糖以及它们的分解物中的至少一种酸性糖。
作为酸性多糖，只要是具有增强BMP产生的作用或促进骨形成的作用即可，没有特别的限定，可以列举来源于藻类的酸性多糖，来源于动物的酸性多糖，来源于鱼类的酸性多糖，来源于植物的酸性多糖，来源于微生物的酸性多糖，合成酸性多糖。
作为来源于藻类的酸性多糖，例如有来源于褐藻类的硫酸化多糖，如含有硫酸化岩藻糖的多糖，可以列举如岩藻依聚糖、硫酸化岩藻半乳聚糖(フコガラクタン)(G-岩藻依聚糖)、硫酸化岩藻葡糖甘露聚糖(フコグルクロノマンナン)、葡糖木糖藻聚糖(グルロノキシロフカン)、马尾藻糖(サルガツサン)、葡糖甘露糖半乳聚糖(グルクロノマンノガラクタン)、木糖岩藻糖(キシロフコグルクロナン)、アスコフイラン、葡糖半乳糖藻聚糖(グルクロノガラクトフカン)、硫酸化葡糖藻聚糖(グルクロノフカン)。
作为上述的原料，例如可以使用北海道函馆产海带、标准海带(マ昆布)、类海带海菜(トロロ昆布)、岩藻(ヒバマタ)、海蕴(モズク)、冲绳海蕴(オキナワモズク)、裙带菜、クロメ、黑海带(アラメ)、褐藻海草(カジメ)、巨藻(レッソニア)、ニグレセンス、挪威产海藻(アスコフィラム)、ノドッサム等海带目、ながもつも目、岩藻目等的褐藻类。
作为来源于藻类的酸性多糖，可以使用来源于红藻类的酸性多糖，例如来源于草料(マクサ)、发菜(オゴノリ)、巨藻(ジャィアントケルプ)、プテロクラディア、カピラセア的酸性多糖和角叉菜聚糖λ，角叉菜聚糖κ，角叉菜聚糖ι等。作为来源于蓝藻类的酸性多糖，例如来源于蓝藻类的酸性多糖；来源于绿藻类的酸性多糖，例如来源于小球藻的酸性多糖；还可以使用来源于藻类的硫酸鼠李聚糖(ラムナソ)作为本发明的酸性多糖。另外磷酸化多糖类，例如核酸也包括在本发明的酸性多糖内。
作为本发明中所使用的酸性多糖，例如可以列举作为含有硫酸化岩藻糖的多糖的前面叙述过的岩藻依聚糖，但是只要是以硫酸化岩藻糖作为构成成分的多糖，并且是具有增强BMP产生作用或促进骨形成作用的多糖，则对其来源没有特别限定，可以使用来源于棘皮动物，例如海参、海胆、海星等的岩藻依聚糖。作为含有岩藻依聚糖的海参，例如有特开平4-91027号公报中所公开的海参，并用该公报中所公开的方法，用海参制备岩藻依聚糖。
例如可以用北海道函馆产海带制备岩藻依聚糖，把该岩藻依聚糖分离为含有葡糖醛酸的岩藻依聚糖(称为U-岩藻依聚糖)和不含葡糖醛酸的岩藻依聚糖(称为F-岩藻依聚糖)，可以分别使用这两种岩藻依聚糖作为本发明有效成分，还可以用北海道函馆产海带制备硫酸化岩藻半乳聚糖使用。
U-岩藻依聚糖和F-岩藻依聚糖，可以通过在用北海道函馆产海带制备岩藻依聚糖后，使用阴离子交换树脂、表面活性剂等进行分离。来源于北海道函馆产海带的U-岩藻依聚糖和F-岩藻依聚糖的存在比率(重量比)约为1∶2，U-岩藻依聚糖含有岩藻糖、甘露糖、半乳糖、葡糖醛酸等，硫酸含量约为20重量％，F-岩藻依聚糖含有岩藻糖和半乳糖，硫酸含量约为50重量％。两种物质的分子量均以大约20万为中心分布(第18次糖质シンポジゥム要旨，第159页，1996年)。
例如把由北海道函馆产海带制备的岩藻依聚糖溶液加入到DEAE-Cellulofine A800柱中后，用含有NaCl的缓冲液，通过浓度梯度法洗脱，可以分离出U-岩藻依聚糖和F-岩藻依聚糖。图1示出其一个例子。也就是图1是表示对U-岩藻依聚糖和F-岩藻依聚糖进行分离的图，图中的前一个峰是U-岩藻依聚糖，后一个峰是F-岩藻依聚糖。
另外，作为本发明中所使用的岩藻依聚糖，也可以通过已知的方法分别制备来源于岩藻的岩藻依聚糖、来源于海蕴的岩藻依聚糖，来源于冲绳海蕴的岩藻依聚糖、来源于裙带菜的岩藻依聚糖，来源于巨藻的岩藻依聚糖，来源于挪威产海藻的岩藻依聚糖，来源于其它藻类的岩藻依聚糖，用于本发明。
作为来源于鱼类的酸性多糖，例如可以列举来源于软骨鱼类，例如来源于鲨鱼的硫酸软骨素；作为来源于植物的酸性多糖，可以列举来源于苹果、柠檬、柑桔的果胶酸和果胶等；作为来源于微生物的多糖，可以列举来源于大肠杆菌的多聚乙酰神经氨(糖)酸，来源于枯草杆菌的糖酸磷壁酸质(ティカン)，来源于酵母的磷酸甘露聚糖、磷酸半乳聚糖；作为来源于动物的酸性多糖，可以列举肝素、低分子肝素、硫酸软骨素、硫酸乙酰肝素、软骨素、硫酸角质素、透明质酸、多核糖磷酸等等。
作为本发明使用的合成酸性多糖，只要是具有增强BMP产生作用或促进骨形成作用的多糖即可，并没有特别限定。到目前为止作为(医)药品使用的酸性多糖都是适宜的。作为该合成酸性多糖，可以列举合成硫酸化多糖，如葡聚糖硫酸钠。该化合物是通过对用肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides van Tieghem)得到的蔗糖发酵生产的葡聚糖的部分分解物进行硫酸化而得到的硫酸酯的钠盐。
另外本发明中，作为合成硫酸化多糖，可以使用如葡聚糖、硫酸葡聚糖、糊精、环糊精、纤维素、淀粉、甘露聚糖、木聚糖、藻酸、果胶、果胶酸、果聚糖、阿拉伯糖(アラビナン)、壳质、茁霉多糖、木糖葡聚糖(キシログルカン)、淀粉等的硫酸化物。还可以使用如硫酸呋喃核糖(リボフラナン硫酸)、硫酸呋喃木糖(キシロフラナン硫酸)、硫酸蘑菇多糖(レソチナン)、硫酸凝乳糖(カ一ドラン硫酸)、硫酸甘露吡喃糖(マンノピラナン硫酸)等合成硫酸化多糖和含有棕榈酰基的硫酸呋喃核糖(リボフラナン硫酸)等合成硫酸化烷基多糖。对于合成硫酸化烷基多糖中所含的烷基的结构没有特别的限定，作为其碳原子数，只要有1～50左右即可。还可以通过对硫酸化多糖或其分解物进行硫酸化，制备高硫酸化硫酸化多糖或高硫酸化分解物。这些硫酸化多糖、高硫酸化硫酸化多糖、高硫酸化分解物，分别可以用已知的方法进行制备，其分解物也可以用已知的方法进行制备而用于本发明中。还可以使用市场上出售的硫酸葡聚糖、硫酸化纤维素，也可以使用这些合成硫酸化多糖等的盐等。
本发明中当使用硫酸化多糖作为酸性多糖时，硫酸化多糖的硫酸含量(或者是硫酸根数)，只要是可以表达BMP产生增强作用或骨形成促进作用，则没有特别的限定。酸性多糖的分解物也包括寡糖和单糖，例如可以使用岩藻糖-2-硫酸、葡糖-2-硫酸。这些硫酸化单糖，硫酸化寡糖、硫酸化多糖，可以用它们的一般合成方法进行制备。可以把制备物、精制物用于本发明中。本发明中的所谓寡糖的定义是由2个～10个单糖连接起来的糖化合物，所谓多糖的定义是由11个或11个以上单糖连接起来的糖化合物。
本发明具有BMP产生增强作用或骨形成促进作用的酸性多糖的分解物，例如硫酸化多糖、岩藻依聚糖的分解物，可以通过酶学方法、化学方法、物理方法等已知方法进行制备，选择使用所需要的具有BMP产生增强作用或骨形成促进作用的分解物。
所谓分解物，其分子量取决于作为分解对象的酸性多糖，但是优选使用对酸性多糖进行分解而得到的分子量大致范围优选为200～10万，更优选1000～3万的分解物。
作为本发明中使用的酸性多糖分解物的优选制备方法，有酸分解法，通过对相应酸性多糖进行酸分解，可以制备具有BMP产生增强作用或骨形成促进作用的分解物。
本发明中所使用的酸性多糖的酸分解条件，只要是能够生成具有促进骨形成作用或增强BMP产生作用的分解物(以下称为本发明分解物)的条件，则没有特别限定。
例如通过把酸性多糖溶解或悬浮在酸的水溶液等中，使其反应，生成本发明的分解物。还可以通过在反应时进行加热，缩短生成本发明分解物所需要的时间。
对于溶解或悬浮酸性多糖的酸的种类，没有特别限定，可以使用盐酸、硫酸、硝酸等无机酸，柠檬酸、甲酸、乙酸、乳酸、苹果酸、抗坏血酸等有机酸，还可以使用阳离子交换树脂、阳离子交换纤维、阳离子交换膜等固体酸。
对酸的浓度也没有特别限定，优选以0.0001～5当量，更优选以0.01～1当量左右的浓度使用。同时对反应温度也没有特别限定，可优选设定为0～200℃，更优选设定为20～130℃。
对反应时间也没有特别限定，可优选设定在几秒～几天。酸的种类和浓度、反应温度以及反应时间可以根据本发明中所用的分解物的生成量、分解物的聚合度进行适当选择。例如在制备岩藻依聚糖分解物的过程中，使用柠檬酸、乳酸、苹果酸等有机酸，可以在酸的浓度为数10mM～数M；加热温度为50～110℃，优选70～95℃；加热时间为数分钟～24小时的范围内进行适当选择，制备本发明的分解物。作为岩藻依聚糖的酸分解物，例如有来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖的酸分解物，该分解物可以作为具有BMP产生增强作用或骨形成促进作用的食物纤维使用。
本发明的分解物，可以以BMP产生增强作用或骨形成促进作用为指标进行分级，例如用凝胶过滤法、利用分子量分级膜的分级方法对酸分解物进行分子量分级。
作为凝胶过滤法的例子，如使用CellulofineGCL-300，可以制备分子量超过25000、分子量超过10000～25000、分子量超过5000～10000、分子量在5000以下的任意分子量的组分；使用CellulofineGCL-25，可以把分子量在5000以下的组分制备成分子量超过3000～5000、分子量超过2000～3000、分子量超过1000～2000、分子量超过500～1000、分子量在500以下的任意分子量的组分。
还可以利用超滤膜在工业上进行分子量分级，例如通过使用ダイセル公司制造的FE10-FUSO382，可以制备分子量在30000以下的组分；通过使用同一系列的FE-FUS-T653，可以制备分子量在6000以下的组分；进一步通过使用纳米级过滤膜，可以得到分子量在500以下的组分，还可以通过组合使用这些凝胶过滤法和分子量分级法制备任意分子量的组分。
本发明中能够使用的具有BMP产生增强作用或骨形成促进作用的酸性多糖的分解物，例如作为岩藻依聚糖的分解物，可以列举下述通式(1)所示的化合物， (式中，R是H或SO3H，并且至少一个R是SO3H)。
下述通式(2)所示的化合物，
(式中，R是OH或OSO3H，并且至少一个R是OSO3H)。
下述通式(3)所示的化合物， (式中，R是OH或OSO3H，至少一个R是OSO3H)。
这些化合物可以通过特开2003-199596、WO 97/26896号小册子、WO 00/50464号小册子中所公开的方法进行制备。本说明书中化合物结构式中的“·H”表示结合在糖的异头碳上的处于α位和β位的氢原子。具有由通式(1)、通式(2)、通式(3)所示化合物的重复结构的硫酸化多糖以及寡糖也可以作为本发明具有BMP产生增强作用的硫酸化糖使用。
另外在有机酸存在的条件下，对来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖进行加热处理，可以得到葡糖醛酸和甘露糖的聚合物，该聚合物也可以作为本发明的具有增强BMP产生作用或促进骨形成作用的酸性多糖使用。并且通过调整加热处理条件、加热时间可以制备任意聚合度的聚合物。
作为酸性寡糖，可以优选列举硫酸化寡糖；此外作为酸性单糖，可以优选列举硫酸化单糖。这些硫酸化寡糖或硫酸化单糖，除了可以使用市场上出售的物质以外，还可以以各种寡糖、单糖作为原料，用已知的方法进行硫酸化而制备。还可以优选使用它们的盐。这些糖或其盐，既可以单独使用，也可以混合2种或2种以上使用。此外作为酸性寡糖或酸性单糖的分解物，可以与前述酸性多糖分解物同法获得。作为酸性单糖，只要是具有BMP产生增强作用或骨形成促进作用，则没有特别限定，例如硫酸化葡萄糖、硫酸化半乳糖、硫酸化木糖、硫酸化2-脱氧-葡萄糖、硫酸化塔罗糖以及硫酸化甘露糖。而且硫酸化多糖、硫酸化寡糖、硫酸化单糖的脂肪酸衍生物等也包括在本发明的酸性多糖、酸性寡糖、酸性单糖之中。
本发明中所用的酸性糖中还包括其盐。作为本发明中所使用的酸性糖的盐，可以列举如碱金属盐、碱土类金属盐、有机碱盐，可以列举与钠、钾、镁、铵，还有二乙醇胺、乙二胺等形成的盐。这些盐，可以通过用已知方法把本发明中所使用的酸性糖的硫酸根和羧基变换成盐而获得，作为这些盐，优选可药用盐。
本发明中，作为酸性糖，优选使用选自酸性多糖、酸性寡糖、酸性单糖以及它们的分解物中的至少一种化合物，更具体地，可以优选使用选自岩藻依聚糖、肝素、硫酸葡聚糖、硫酸软骨素(特别是硫酸软骨素B)、果胶酸、来源于蓝藻类的酸性多糖、岩藻依聚糖分解物、角叉菜聚糖λ、角叉菜聚糖κ、角叉菜聚糖ι、低分子肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸角质素、藻酸、果胶、透明质酸以及来源于小球藻的酸性多糖中的至少一种化合物，其中作为岩藻依聚糖、其分解物的上述通式(1)所示的化合物、来源于蓝藻类的酸性多糖、来源于小球藻的酸性多糖，都是从具有长期食用历史的海藻类而获得的酸性多糖，所以安全性高，不用担心负作用的问题，当然可以通过口服摄取。特别是来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖，其增强BMP-2产生的活性高，安全性也高，在本发明中可以最优选采用。
对作为本发明中所采用的聚丙烯酸，没有特别的限定，例如可以使用市场上出售的聚丙烯酸，对于其分子量，也没有特别的限定，只要具有本发明的BMP产生增强作用或骨成形促进作用即可。例如可以使用平均分子量为5000～1000000的聚丙烯酸。
对作为本发明中所使用的绿原酸，没有特别限定，可以使用市场上出售的绿原酸或者是用各种植物通过已知方法制备的绿原酸。绿原酸是茜草科(アカネ科)、菊科和茄科植物等各种双子叶植物的果实和叶子之中含有的成分，即使是用任意植物制备的绿源酸，只要是具有本发明的BMP产生增强作用或骨形成促进作用，也都可用于本发明。
对本发明中所使用的绿原酸的氧化处理物没有特别限定，例如可以使用通过使上述绿原酸发生氧化反应而得到的处理物。作为氧化反应，例如可以使上述绿原酸与氧接触进行氧化、使用氧化剂进行氧化、使用氧化酶进行氧化，或者是进行电化学氧化的方法进行氧化反应。所有的氧化都可以按照已知的方法进行。例如，通过与氧接触进行氧化时，可以通过泵对溶解在水溶液中的绿原酸送入空气来进行氧化。用氧化剂进行氧化时，作为氧化剂，可以优选使用过氧化氢、臭氧、银、铜、铁、镍、锰、钴、铬等进行氧化。使用氧化酶进行氧化时，作为氧化酶，可以使用酪氨酸酶、过氧化物酶等进行氧化。而且用氧化酶进行氧化时，还包括前面所列举的采用含有氧化酶的微生物进行的氧化。进行电化学氧化时，例如可以采用铂、氧化铅、碳、石墨、氧化铂等作为电极的阳极氧化反应进行氧化。
虽然对于经氧化处理所得到的组合物的结构尚不明确，但是可以推测绿原酸仅仅被氧化，或者是被聚合以聚合物的形式而存在。
这些有效成分，可以单独使用，也可以混合2种或2种以上使用。而且对列举的这些酸性多糖的分解物和盐也没有特别限定，只要是具有BMP产生增强作用或骨形成促进作用均可使用。
本发明中对于作为来源于藻类的提取物，没有特别限定，只要是具有增强BMP产生的作用或促进骨形成的作用即可。例如只要是褐藻类、蓝藻类、红藻类、绿藻类等前面叙述的作为酸性多糖原料的藻类，则没有特别限定，均可使用。特别可以优选使用北海道函馆产海带等的褐藻类、小球藻和蓝藻类。本发明中所谓的提取物，是使用提取溶剂，经进行提取操作工序所得到的物质。提取可以采用已知的方法按照以下操作进行。例如将原料进行粉碎或切细后，使用溶剂用间歇或连续的方式进行提取。对于作为获得提取物过程中所使用的提取溶剂，没有特别限定，可以列举水、氯仿、乙醇、甲醇、异丙醇等醇类，丙酮、甲乙酮等酮类，乙酸甲酯、乙酸乙酯等亲水性或亲油性溶剂。这些溶剂，根据需要可以单独使用，也可以进行适当混合作为混合溶剂使用。优选以钙盐的水溶液作为溶剂使用。提取溶剂的量，可以根据需要适当进行确定，通常相对于原料优选按重量计算使用0.1～100倍量的提取溶剂。提取温度也可以根据需要适当进行确定，用水进行提取时，优选提取温度为4～130℃，更优选25～100℃。当溶剂中含有乙醇时，优选的提取温度范围是4～60℃。提取时间，可以考虑提取效率进行确定，通常优选在设定原料、提取溶剂和提取温度时，考虑使提取时间范围优选达到数秒钟～数天，更优选5分钟～24小时。对于提取时的压力，没有特别限定，可以根据需要适当确定，例如可以在常压下、加压下或者是通过抽滤的减压下进行。提取操作，可以一面搅拌，一面进行；也可以静止进行。同时根据需要还可以反复进行数次提取。通过以上操作，可以得到来源于藻类的提取物(以下称为本发明的提取物)。对于提取物，根据需要还可以进行过滤、离心分离、浓缩、超滤、分子筛等处理，制备具有增强BMP产生作用或促进骨形成作用的成分得以浓缩的提取物。而且本发明中，要作为有效成分而使用的前述酸性多糖等来源于藻类的提取物或浓缩提取物的BMP产生增强作用或骨形成促进作用，可以通过后面将要叙述的实施例1或6中所述的方法进行简单的测定。本发明中也可以使用含有2种或2种以上用不同提取方法得到的提取物。
本发明中，通过用已知的方法对来源于藻类的提取物进行分级而得到的组分以及通过反复数次进行分级操作所得到的组分也包括在本发明的提取物之中。作为上述分级的方法，可以列举提取、分步沉淀、柱色谱、薄层色谱等方法。以增强BMP产生的作用或促进骨形成的作用作为指标，还可以通过进一步对所得组分进行精制，对增强BMP产生的物质或促进骨形成的物质进行分离。
本发明中，对来源于藻类的提取物的形状没有特别限定，只要是具有增强BMP产生的作用或促进骨形成的作用即可。可以是粉状、固体状、液体状的任意形状。还可以用已知方法对该具有任意形状的提取物的处理物进行造粒，得到粒状的固体物作为本发明的来源于藻类的提取物使用。对于作为造粒的方法，没有特别限定，如有旋转造粒、搅拌造粒、流化床造粒、气流造粒、挤出造粒、压缩成型造粒、粉碎造粒、喷射造粒或喷雾造粒等。还可以使粉状提取物溶解于液体，如水和乙醇等中以液态，作为本发明的提取物使用。
作为本发明的提取物，特别优选与藻类本身相比，以高浓度和/或高纯度含有可以增强BMP产生的物质或促进骨形成的物质，如酸性多糖、酸性寡糖、酸性单糖或它们的分解物。这里所谓高浓度是指每单位重量本发明提取物中增强BMP产生的物质或促进骨形成物质的重量多于每单位重量原料藻类中增强BMP产生的物质或促进骨形成的物质的重量。另外所谓高纯度是指与原料藻类相比，该物质中增强BMP产生的物质或促进骨形成的物质的含有比率高。
本发明涉及的有效成分中，如后面将要叙述的，没有发现其毒性。同时也不必担心会产生副作用。因此可以安全并切实地进行疾病的治疗或预防。因此含有该有效成分的本发明的治疗剂、预防剂、食品、饮料或饲料对于治疗或预防需要增强BMP产生或促进骨形成的疾病是有效的。
本发明中作为BMP，可以列举如BMP-1、BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7、BMP-8、BMP-9、BMP-10、BMP-11、BMP-12、BMP-13、BMP-14、BMP-15等，特别优选的例子为BMP-2、BMP-4或BMP-7。此外对于测定有无BMP产生增强作用的方法没有特别的限定，但可以通过后面实施例1中所述的方法进行简单的测定。
可以认为BMP是强力促进骨、软骨、韧带、肌腱等形成的因子，作用于前成骨细胞，并促进其向成骨细胞分化，参与骨的发育、成长、修复、骨折的治愈过程。同时通过BMP作用于未分化的间叶系细胞，根据分化阶段还可以分别向软成骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞分化，广泛参与来源于间叶系细胞的成熟和增殖。而且，BMP在个体发育过程中对背腹轴和中胚层形成等也起着重要作用。在BMP中，BMP-2、-4、-7的骨形成活性特别强，重组人BMP-2作用于骨缺损动物，可以使骨缺损恢复。
BMP是只作用于具有敏感性的细胞的高选择性蛋白质。而且由BMP引起的从未分化间叶系细胞向成骨细胞分化方向上的特异性强，不会向成骨细胞以外的不需要的细胞分化。因此，具有增强BMP产生作用的本发明的有效成分没有副作用的危险，非常适宜作为(医)药品或功能性食品材料使用。
本发明中所谓的促进骨形成的作用，只要是促进骨和软骨形成的作用，则没有特别限定，例如可以列举促进由间叶系干细胞向成骨细胞分化的作用、促进由未分化间叶系细胞向成骨细胞分化的作用、促进由前成骨细胞向骨细胞分化的作用、促进骨基质形成的作用、使骨基质钙化的作用、促进由成骨细胞向成骨细胞分化的作用、诱导软骨内骨化的作用等。同时，对测定有无促进骨形成的作用的方法没有特别限定，可以通过后面将要叙述的实施例6中所述的方法，例如作为促进由间叶系干细胞向成骨细胞分化的作用，进行简单的测定。这里的“促进”中包括“诱导”。
本发明中，作为需要增强BMP产生或促进骨形成的疾病，可以列举如骨质疏松症(例如慢性骨质疏松症、闭经后由激素平衡异常而引起的骨质疏松症、由糖尿病或类固醇药物等副作用而引起的继发性骨质疏松症等)、骨折、再次骨折、骨缺损、骨形成不全症、骨软化症、骨贝切特病、强直性脊髓炎、慢性风湿性关节炎、变形性关节炎、软骨影响的变形性关节症、牙周病、牙周疾病中的牙周组织缺损、牙根·牙槽缺损、牙槽嵴形成、腭裂的修复等等。
本发明的治疗剂，由于可以增强BMP产生或促进骨形成，所以对于前述疾病，能够发挥治疗效果。同时本发明的预防剂，由于通过本发明有效成分的作用，可以增强骨、软骨和牙齿，所以能够对于前述疾病发挥预防效果。
本发明的治疗剂或预防剂，也可以作为多发性骨髓瘤、肺癌、乳腺癌等外科手术后的骨组织修复剂使用。本发明的治疗剂或预防剂，也可以用于再生医疗领域中的骨再生目的。具体是本发明的治疗剂或预防剂，可用于使人造骨和人造牙根的活化稳定化，还可以从患病之前的或患有疾病的患者生物体内取得细胞，在体外使本发明的治疗剂或预防剂对其产生作用，并形成再生骨组织，然后再回置于患者的体内。
作为本发明的治疗剂或预防剂，可以列举使本发明涉及的前述有效成分与已知的(医)药用载体组合并制成制剂的治疗剂或预防剂。例如可以同时与阻碍骨吸收的药物，如雌激素、降钙素、活化型维生素D3、双膦酸盐等一起使用。
本发明的治疗剂或预防剂的制备，可以通过把前述有效成分与在可药用的液体状或固体状的载体配合在一起进行，根据需要可以添加溶剂、分散剂、乳化剂、缓冲剂、稳定剂、赋形剂、粘结剂、崩解剂、润滑剂等，制成片剂、颗粒剂、散剂、粉末制剂、胶囊剂等固体形态的制剂，常规溶液剂、悬浮剂、乳化剂等液体形态的制剂。也可以作为在使用之前通过添加适当载体形成液体剂型的干燥制品，除此之外，还可以作为外用制剂使用。
作为医药用载体，可以根据治疗剂或预防剂的给药形式和剂型进行适当选择。当作为由固体组合物组成的口服制剂时，可以制成片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、细颗粒剂、颗粒剂等，可以利用如淀粉、乳糖、白糖、甘露糖醇、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐等作为载体。另外当制备口服制剂时，还可以配合粘结剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、助流剂、矫味剂、着色剂、香料等。例如当作为片剂或丸剂时，根据需要还可用蔗糖、明胶、羟丙基纤维素等的糖衣或用胃溶性或肠溶性物质的薄膜进行包被。当作为由液体组合物组成的口服制剂时，能制成可药用的乳剂、溶液剂、悬浮剂、糖浆剂等等，可以使用精制水、乙醇等作为载体。还可以根据需要添加如湿润剂、助悬剂、甜味剂、调味剂、防腐剂等等。
另一方面，作为非口服制剂时，可以按照一般方法，使本发明的前述成分溶解或悬浮在作为稀释剂的注射用蒸馏水、生理食盐水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉米油、丙二醇、聚乙二醇等中，根据需要还可以添加杀菌剂、稳定剂、等渗调节剂、止痛剂等。还可以制备固体组合物，在使用前将其溶解在无菌水或无菌注射用溶剂中使用。
作为外用制剂，包括经皮施用的或经粘膜(口腔内、鼻腔内)施用的固体、半固体或液体状态的制剂，还包括栓剂等。例如，乳剂、洗剂等乳剂，外用酊剂、经粘膜施用的溶液剂等液体制剂，油性软膏、亲水性软膏等软膏剂，薄膜剂、贴剂、糊剂等经皮施用的或经粘膜施用的贴敷剂等等。
以上各种制剂，可以分别利用已知的医药用载体，适当用一般常规方法制备。这些制剂中有效成分的含量，需要考虑其施用形式和施用方法等，只要是能够以后面将要叙述的施用量范围，施用该有效成分的量，则没有特别限定，均可优选。作为本发明有效成分的含量，通常在0.0001重量％或以上，优选范围是0.001～80重量％、更优选范围是0.01～70重量％左右。本说明书中，关于使用本发明的提取物作为有效成分时，在医药、食品、饮料、或饲料中的含量，以及有效成分的施用量，均用换算为本发明提取物的干燥重量表示。
本发明的治疗剂或预防剂，可以采用对应于制剂形态的适当给药途径进行给药。对于给药方法，也没有特别限定，可以采用内用、外用、注射等给药途径。注射剂可以静脉、肌肉、皮下、皮内等方式注射，当为外用剂时，例如可以通过适当的给药方法施用栓剂。
本发明治疗剂或预防剂的给药量是不一定的，可以根据其制剂形态、给药方法、使用目的以及该治疗剂或预防剂的给药对象患者的年龄、体重、症状态进行适当设定。通常制剂中所含前述有效成分的给药量，例如当使用来源于北海道函馆产海带的岩藻糖作为有效成分时，没有特别限定。但是对于人(例如成人)，每天的给药量为0.0001μg～2000mg/kg体重，优选0.001μg～1000mg/kg体重，更优选0.01μg～100mg/kg体重。当然给药量要根据各种情况而变化，所以有时的给药量少于上述给药量范围也是可以的，有时超过上述用量范围也是有必要的。在所需要的给药量范围之内，在一天内可以一次给药，也可以分几次给药。对于给药时间也没有特别限定。另外本发明的治疗剂或预防剂，除了可以直接口服以外，还可以添加到任意饮料食品中，以进行日常摄取。
另外，本发明还可以提供含有前述有效成分的BMP产生增强剂或骨形成促进剂。作为该BMP产生增强剂或骨形成促进剂，可以是前述有效成分本身，也可以是含有前述有效成分的组合物。BMP产生增强剂或骨形成促进剂可以是将前述有效成分和能够用于与该有效成分具有相同用途的其它成分等配合，按照上述治疗剂或预防剂的制备方法制备成通常使用的试剂形态。该BMP产生增强剂或骨形成促进剂中前述有效成分的含量，只要是考虑到该BMP产生增强剂或骨成形促进剂的给药方法、使用目的，能够发挥本发明所期待效果的量即可，没有特别限定。本发明有效成分的含量通常是0.01～100重量％左右。另外，对该BMP产生增强剂或骨形成促进剂的使用量也没有特别限定，只要是能够发挥本发明所期待效果的量即可。特别是施用于机体时，只要是能够在前述治疗剂或预防剂中有效成分的给药量范围之内给药有效成分的量则均可优选。本发明的BMP产生增强剂或骨形成促进剂可用于需要增强BMP产生或促进骨形成的疾病。
本发明的BMP产生增强剂或骨形成促进剂，也可以使其包含在植入物内使用。通过这种方法，例如在骨折时，使用这种植入物，可以促进骨结合，因此可以加速骨折的治愈或植入物与骨组织的整合。这里的植入物是指在外科手术过程中，至少部分导入到体内的器具，可对如关节、骨骼、牙齿、韧带或肌腱等的断裂或损伤部位使用。而且植入物可以永久地留在体内，也可以被机体再吸收。这里，本发明的BMP产生增强剂或骨形成促进剂，可以使其包含在植入物的内部，也可以将其涂敷在植入物的表面而使其含有该增强剂或促进剂。对植入物中本发明BMP产生增强剂或骨形成促进剂的含量没有特别限定，通常为0.01～80重量％左右。
本发明的BMP产生增强剂或骨形成促进剂，也可以使其含在牙膏中使用。由于本发明的BMP产生增强作用或骨形成促进作用，该牙膏可以促进牙齿的再次钙化。对牙膏中本发明的BMP产生增强剂或骨形成促进剂的含量没有特别限定，一般为0.01～80重量％左右。
本发明的BMP产生增强剂或骨形成促进剂，还可以用于筛选与骨有关的疾病的药物。本发明的BMP产生增强剂或骨形成促进剂还可用于有关骨物理变化的功能性研究。
本发明还提供含有前述有效成分的用于增强BMP产生或促进骨形成的食品、饮料或饲料。这里，所谓的含有是指含有、添加和/或稀释的意思。本发明的食品、饮料或饲料，由于其增强BMP产生作用或促进骨形成作用的原因，对于需要增强BMP产生或促进骨形成的疾病的症状改善或预防是非常适用的。因此，本发明的食品或饮料也非常适合于关注骨健康、关注骨密度的人群食用。
本说明书中的食品、饮料或饲料中，所谓的“含有”是指食品、饮料或饲料中含有本发明中所使用的有效成分的形式；所谓“添加”是指在食品、饮料或饲料的原料中添加本发明中所使用的有效成分的形式；所谓“稀释”是指在本发明所使用的有效成分中添加食品、饮料或饲料原料的形式。
对于本发明的食品、饮料或饲料的制备方法，没有特别限定，只要按照如混合、烹调、加工等一般食品、饮料或饲料的加工方法即可，可以用这些方法制备，并且所得食品、饮料或饲料中含有具有增强BMP产生作用或促进骨形成作用的本发明涉及的前述有效成分即可。
对于本发明的食品或饮料，没有特别限定，例如可以列举含有本发明涉及的前述有效成分构成的谷物加工制品(小麦粉加工制品、淀粉类加工制品、预混合加工制品、面类制品、通心粉类、面包类、馅类、荞麦类、麦麸、米粉、粉丝、包装饼等)，油脂加工品(可塑性油脂、油炸食品用油、色拉油、蛋黄酱类、调味品类等)，大豆加工制品(豆腐类、豆酱类、纳豆等)，肉食加工制品(火腿、腊肉、压制火腿、香肠类等)，水产品(冷冻鱼糜、鱼糕制品、圆筒状鱼卷、方饼、油炸鱼丸子、氽鱼丸子、寿司(すじ)、鱼肉火腿、鱼肉香肠、干松鱼、鱼子加工制品、水产罐头、用调料煮的海味等)，乳制品(原料乳、乳脂、酸奶、黄油、干酪、炼乳、奶粉、冰淇淋等)，蔬菜·果实类加工品(糖果料类、果酱类、咸菜类、果实饮料、蔬菜饮料、混合饮料等)，糕点类(口香糖、糖块、巧克力、饼干类、点心面包类、蛋糕、糕饼、成酥脆饼干等)，醇类饮料(日本酒、中国酒、葡萄酒、成士忌、烧酒、伏特加、白兰地、杜松子酒、老姆酒、啤酒、清凉醇类饮料、果酒、利口酒等)，嗜好饮料(绿茶、红茶、乌龙茶、咖啡、清凉饮料、乳酸饮料等)，调味品(酱油、调味汁、醋、料酒等)，罐头·瓶装罐头·袋装罐头食品(牛肉盖饭、小锅烩饭、红小豆大米饭、咖喱饭以及其它各种烹调好的食品)，半干燥或浓缩食品(猪肝酱、其它的糊状食品、荞麦面条·面条的调味汁、浓缩汤类等)，干燥食品(速食面类、速食咖喱饭、速溶咖啡、粉末果汁、粉末汤、速食豆酱汤、烹调好的食品、烹制好的饮料、烹调好的汤等)，冷冻食品(鸡素烧、蒸鸡蛋羹、鳗鱼的烤鱼片、汉堡牛排、烧麦、饺子、各种浓肉汤、水果鸡尾酒等)，固体食品、液体食品(汤等)，香辣料类等农·林产加工品，畜产加工品，水产加工品等等。另外作为本发明的食品，特别优选口香糖、糖类。因为这种食品要在口腔内咀嚼一定时间，如果使这些食品中含有本发明的有效成分，则通过本发明有效成分所发挥的效果，可以更有效地发挥牙周组织的再生效果，促进牙齿再次钙化的效果。
本发明的食品或饮料中，可以含有、添加和/或稀释1种或多种前述有效成分。只要含有发挥增强BMP产生的作用或促进骨形成作用的必要量，则对其形状没有特别限定，也包括片状、颗粒状、胶囊状等形状的可以通过口服而摄取的形状。
对本发明的食品或饮料中前述有效成分的含量没有特别限定，可以从其功能和活性发挥的角度进行适当选择，例如当使用来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖作为有效成分时，虽然没有特别限定，但是每100重量％食品中的有效成分含量为0.0001重量％或以上，优选0.001～50重量％，更优选0.006～10重量％。每100重量％饮料中的有效成分含量为0.0001重量％或以上，优选0.001～50重量％，更优选0.006～10重量％。本发明的食品或饮料，当食品中含有的有效成分是以来源于北海道函馆产海带的岩藻作为有效成分时，人(例如成人)每天的摄取量只要达到0.0001μg～2000mg/kg体重，优选达到0.001μg～1000mg/kg体重，更优选达到0.01μg～100mg/kg体重即可。当然摄取量要根据各种条件而变化，所以有时摄取量可以低于上述摄取量范围，或者有时摄取量超过上述摄取量范围也是必要的。
本发明还提供含有、添加和/或稀释前述有效成分的具有BMP产生增强作用或骨形成促进作用的生物用饲料，作为本发明的另一种方案是提供生物饲养方法，该饲养方法的特征是对生物施用前述有效成分。作为本发明的又一种方案是提供生物饲养剂，该饲养剂的特征是含有前述有效成分。
在这些发明中，所谓的生物是指如养殖动物、宠物动物等，作为养殖动物可以列举家畜、实验动物、家禽、鱼类、甲壳类或贝类。作为饲料可以例举保持和/或改进健康状况用的饲料。作为生物饲养剂，可以列举浸渍用剂、饲料添加剂、饮料用添加剂。
根据这些发明，在前面所列举的适合采用这些发明的生物中，由于本发明中所用前述有效成分的BMP产生增强作用或骨形成促进作用，可以期待显示与本发明前述治疗剂和预防剂所产生的相同效果。也就是可以期待发挥治疗或预防该生物体中需要增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的疾病的效果。
本发明中所使用的前述有效成分，例如以来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖作为有效成分时，对象生物每天的摄取量，只要以0.0001μg～2000mg/kg体重，优选以0.001μg～1000mg/kg体重，更优选以0.01μg～100mg/kg体重的量摄取即可。当然施用量要根据各种条件而变化，例如当使用本发明的提取物时，还要根据所用溶剂的用量等而变化，所以有时施用量可以低于上述施用量范围，或者有时施用量超过上述施用量范围也是必要的。例如可以将该有效成分添加混合到用于对象生物的人工配合饲料的原料中，或者是与人工配合饲料的粉末原料混合后再添加混合到其它原料中使用的方法施用。另外对于前述有效成分在饲料中的含有量没有特别限定，可以根据需要进行适当设定，例如当使用来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖作为有效成分时，虽然没有特别限定，但是每100重量％饲料中的有效成分含量为0.0001重量％或以上，优选0.001～50重量％，更优选0.006～10重量％。
对于本发明饲料的制备方法没有特别限定，同时其配合也可以按照一般饲料的情况进行，只要制备的饲料中含有具有BMP产生增强作用或骨形成促进作用的本发明涉及的前述有效成分即可。
对于可以使用本发明的生物也没有特别限定，作为养殖动物，可以列举马、牛、猪、羊、山羊、骆驼、骡子(ラマ)等家畜，小鼠、大鼠、豚鼠、兔子等实验动物，鸡、鸭、火鸡、鸵鸟等家禽，作为宠物有狗、猫等等，本发明可广泛用于各种动物。
通过使生物摄取含有具有增强BMP产生作用或促进骨形成作用的本发明中所使用的前述有效成分的饲料，或把对象生物浸渍在含有具有增强BMP产生作用或促进骨形成作用的本发明中所使用的前述有效成分的液体(例如添加有浸渍用剂的水浴等)中，可以使家畜、实验动物、家禽、宠物动物等的健康状况保持在良好水平，或改进其健康状况。这些就构成了本发明生物饲养方法的一个方案。
本发明中所使用的前述有效成分，即使以发挥其作用为标准的有效量进行施用，也没有发现毒性。例如通过口服给药时，即使一次对小鼠施用1g/kg体重的来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖，也没有发现死亡例。另外，即使一次对大鼠口服给药前述有效成分1g/kg体重，也没有发现死亡例。
实施例以下列举实施例更具体地说明本发明，但是本发明并不受这些实施例的任何限定。实施例中的％，只要没有特别说明，表示重量％。
参考例1(1)对北海道函馆产海带进行充分干燥后，用自由粉碎机(奈良机械制作所制造)对干燥物20kg进行粉碎。在900升自来水中加入氯化钙二水合物(日本曹达公司制造)7.3kg使其溶解，接着混合北海道函馆产海带粉碎物20kg。吹入水蒸气对其进行40分钟升温，使液体温度由12℃升高至90℃，接着在搅拌下于90～95℃下保温1小时。接着进行冷却，得到冷却物1100升。接着使用固液分离装置ウエストフアリアセパレ一タ一公司制造的CAN型)对冷却物进行固液分离，制备约900升的固液分离上清液。使用ダィセル公司制造的FE10-FC-FUS0382(组分分子量为3万)把固液分离上清360升液浓缩至20升。接着加入自来水20升，再次浓缩到20升，反复进行5次这样的操作，进行脱盐处理，制备来源于北海道函馆产海带的提取液25升。对1升该提取液进行冷冻干燥，得到来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖干燥物13g。
(2)把参考例1-(1)中所述的岩藻依聚糖干燥物7g溶解于含有50mM的氯化钠和10％乙醇的20mM的咪唑缓冲液(pH为8.0)700ml中，通过离心分离除去不溶物。用相同的缓冲液对DEAE-Cellulofine A-800柱(Φ11.4cm×48cm)进行平衡处理，添加离心分离上清后，用相同的缓冲液进行洗脱，从氯化钠的50mM开始，以1.95M的浓度梯度进行洗脱(1级分250ml)。用苯酚硫酸法和咔唑硫酸法求出总糖量以及糖醛酸的含量，按照洗脱顺序分别得到级分43～49，级分为50～55，级分为56～67的组分，然后通过电析渗对这些组分进行脱盐后冷冻干燥，分别由级分43～49制备I组分(340mg)，由级分50～55制备II组分(870mg)，由级分56～67制备III组分(2.64g)。图1示出了来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖的DEAE-CellulofineA-800柱洗脱图形。图1中，纵坐标表示用咔唑硫酸法测得的在530nm处的吸光度(图中的黑圆点)、用苯酚硫酸法测得的在480nm处的吸光度(图中的空白圆点)以及导电率(mS/cm图中的空白方块)，横坐标表示级分的编号。
参考例2(1)在加入(分注)由含有葡糖0.25％、蛋白胨1.0％、酵母提取物0.05％的人造海水(ジャマリンラボラトリ一公司制造)(pH为8.2)构成的培养基600ml灭菌过(120℃，20分钟)的2升三角烧瓶中，接种交替单胞菌(アルテロモナス)sp.SN-1009(CCRC910070)，在25℃下培养26小时，作为种培养液。把由含有蛋白胨1.0％、酵母提取物0.02％、下述参考例2-(2)中所述的硫酸化多糖0.2％以及消泡剂(信越化学工业公司制造，KM70)0.01％的人造海水(pH为8.0)构成的培养基20升加入到30升容量的发酵罐中，在120℃下进行20分钟灭菌处理。冷却后，接种上述种培养液600ml并进行培养，培养条件24℃，24小时，通气量10升/分钟，搅拌速度250转/分钟。培养结束后，对培养液进行离心分离，得到菌体和培养上清。通过使用安装有排阻分子量为(排除分子量)1万的中空纤维的超滤机对所得培养上清进行浓缩后，进行85％的饱和硫酸铵盐析，通过离心分离收集生成的沉淀，对于含1/10浓度人造海水的20mM的TRIS盐酸缓冲液(pH8.2)进行充分透析，制备600ml选择性地作用于硫酸化多糖的末端型(エンド型)硫酸化多糖分解酶液体。
(2)用安装有孔径为1mm筛网的切刀式粉碎机(カツタ一ミル)(增幸产业公司制造)对干燥的北海道函馆产海带2kg进行粉碎，把所得到的海带碎片悬浮在20升的80％乙醇中，在25℃下搅拌3小时，用滤纸过滤后对残渣进行充分清洗，把所得残渣悬浮在加热到95℃的40升含50mM氯化钠的20mM磷酸钠缓冲液(pH6.5)中，一面偶尔进行搅拌，一面在95℃下处理2小时，提取硫酸化多糖。对提取液中的悬浮物进行过滤，制备过滤液后，再用3.5升的100mM氯化钠溶液对过滤残渣进行清洗，再得到滤液，将两滤液合并后，把温度降低至30℃，添加3000U的藻酸裂解酶(ナガセ生化学工业公司制造)后，再添加乙醇4升，在25℃下搅拌24小时。接着进行离心分离，用具有排阻分子量为10万的中空纤维的超滤机对所得上清进行浓缩，使之达到4升，再用含有10％乙醇的100mM的氯化钠继续进行超滤，直至着色性物质不透过为止。通过离心分离，除去非过滤液中生成的沉淀，把该上清降低至5℃，用0.5N盐酸将pH调节至2.0后，通过离心分离除去生成的蛋白质等沉淀，再迅速用1N氢氧化钠将所得上清的pH调节至8.0。接着用安装有排阻分子量为10万的中空纤维的超滤机进行超滤，通过20mM氯化钠(pH8.0)完全进行溶剂置换后，再次将pH调节至8.0，离心分离后，进行冷冻干燥，制备大约95g的硫酸化多糖。
(3)用安装有孔径为1mm筛网的切刀式粉碎机对干燥的北海道函馆产海带2kg进行粉碎，把所得到的海带碎片悬浮在20升的80％乙醇中，在25℃下搅拌3小时，用滤纸过滤后对残渣进行充分清洗，把所得残渣悬浮在含有30ml在上述参考例2-(1)中制备的末端型硫酸化多糖分解酶液体、10％乙醇、100mM氯化钠、50mM氯化钾以及50mM咪唑的20升缓冲液(pH8.2)中，在25℃下搅拌48小时，用网眼直径为32μm的不锈钢滤网对该悬浮液进行过滤，用含有50mM氯化钙的10％乙醇对该残渣进行清洗。再把该残渣悬浮在10升的含有50mM氯化钙的10％乙醇中，搅拌3小时后，用不锈钢滤网过滤，清洗。然后再以相同条件对该残渣进行悬浮后，搅拌16小时，用直径为32μm的不锈钢滤网过滤、清洗。然后将这样得到的滤液和清洗液集中起来，用安装有排阻分子量为3000的中空纤维的超滤机进行超滤，分离成过滤液和非过滤液。用旋转蒸发器把该过滤液浓缩至约3升后，进行离心分离得到上清，用安装有排阻分子量为300的膜的电渗析器对所得的上清进行脱盐处理，在该溶液中，添加乙酸钙，使其达到0.1M。通过离心分离除去生成的沉淀。把得到的该上清添加到事先用50mM乙酸钙进行平衡处理的DEAE-Cellulofine(树脂量4升)中，用50mM的乙酸钙以及50mM的氯化钠进行充分清洗后，以50mM～800mM的氯化钠梯度进行洗脱。这时以分离量为500ml/柱进行洗脱。通过乙酸纤维素膜电泳法[Analytical Biochemistry，第37卷，第197～202页(1970)]对分离组分进行分析的结果表明，氯化钠浓度大约为0.4M时洗脱的硫酸化糖(级分编号在63附近)是均匀的。于是首先把级分编号为63的液体浓缩至150ml后，添加氯化钠，使其浓度达到4M，再加入到预先用4M氯化钠进行平衡处理的苯基-Cellulofine(树脂量为200ml)中，用4M氯化钠进行充分清洗。收集非吸附性硫酸化糖组分，通过安装有排阻分子量为300的膜的电渗析器进行脱盐处理，得到脱盐液505ml，把所得脱盐液中的40ml添加到用含有10％乙醇的0.2M氯化钠进行平衡处理的Cellulofine GCL-90的柱(4.1cm×87cm)中，进行凝胶过滤，以每级分为9.2ml进行分离。通过苯酚硫酸法[AnalyticalChemistry，第28卷，第350页(1956)]对所有级分的总糖量进行分析。
结果表明硫酸化糖形成一个峰，该峰的中间部分集中了级分编号为63～70的部分，通过安装有排阻分子量为300的膜的电渗析器进行脱盐处理后，进行冷冻干燥，得到112mg下述通式(4)所示化合物的干燥品，以下把该化合物称为7-12SFd-F。
参考例3把干燥的蓝藻粉末(销售(株)スピルリナ研究所)20g放入到匀化器(日本精机公司制造)中，加入400ml丙酮，以8000rpm的转速匀化10分钟。用滤纸对匀化物进行过滤，得到残渣。与前述操作一样，对残渣反复进行3次丙酮清洗，得到丙酮清洗的残渣。与用丙酮清洗一样，用90％乙醇对丙酮清洗残渣反复清洗4次，用80％乙醇反复清洗4次，得到乙醇清洗残渣。在乙醇清洗残渣中加入600ml含100mM氯化钠和10％乙醇的30mM磷酸缓冲液(pH7.0)，在室温下搅拌18小时。以10000rpm转速对该混合物进行40分钟的离心分离，得到上清。用滤纸过滤除去混入在上清中的不溶物，得到粗提取物(滤液)。用安装有排阻分子量为1万的中空纤维的超滤装置对所得到的粗提取物进行浓缩，使其达到300ml，一面添加2升含10％乙醇的100mM氯化钠，一面进行超滤。然后，将溶剂换成含10％乙醇和50mM氯化钠的10mM咪唑盐酸缓冲液(pH7.0)，得到蓝藻的高分子组分240ml。
把蓝藻高分子组分添加到经含有10％乙醇和50mM氯化钠的10mM咪唑盐酸缓冲液(pH7.0)平衡处理的DEAE-Cellulofine A-800柱(φ3×14.2cm)中，用相同缓冲液360ml对柱进行清洗后，用0.05M(200ml)至2M(200ml)的氯化钠进行梯度洗脱。洗脱液以10ml/柱进行分离。在级分中，把级分No.14至30的定名为蓝藻类酸性多糖组分-I(SSP-I)，把级分No.69至77的定名为蓝藻类酸性多糖组分-II(SSP-II)，把级分No.78至83的定名为蓝藻类酸性多糖组分-III(SSP-III)，把级分No.84至99的定名为蓝藻类酸性多糖组分-IV(SSP-IV)。使SSP-I、SSP-II、SSP-III以及SSP-VI对蒸馏水进行充分透析，冷冻干燥，分别是200mg、260mg、100mg和60mg。
参考例4把干燥的小球藻粉末20g放入到匀化器(日本精机公司制造)中，加入400ml丙酮，以8000rpm的转速匀化10分钟。用滤纸对匀化物进行过滤，得到残渣。进行与前述相同的操作，对残渣反复进行3次丙酮清洗，得到丙酮清洗的残渣。与用丙酮清洗一样，用90％乙醇对丙酮清洗残渣反复清洗4次，用80％乙醇反复清洗4次，得到乙醇清洗残渣。
在乙醇清洗残渣中加入600ml含100mM氯化钠和10％乙醇的30mM磷酸缓冲液(pH7.0)，在室温下搅拌18小时。以10000rpm转速对该混合物进行40分钟的离心分离，得到上清。用滤纸过滤除去混入在上清中的不溶物，得到粗提取物(滤液)。用安装有排阻分子量为1万的中空纤维的超滤装置对所得到的粗提取物进行浓缩，使其达到310ml.，一面添加3升含10％乙醇的100mM氯化钠，一面进行超滤。然后，将溶剂换成含10％乙醇和50mM氯化钠的10mM咪唑盐酸缓冲液(pH7.0)，得到小球藻高分子组分203ml。
把小球藻高分子组分添加到经含有10％乙醇和50mM氯化钠的10mM咪唑盐酸缓冲液(pH7.0)进行平衡处理的DEAE-Cellulofine A-800柱(φ3×14.2cm)中，用相同的缓冲液297ml对柱进行清洗后，用0.05M(200ml)至2M(200ml)的氯化钠进行梯度洗脱。洗脱液以10ml/柱进行分离。在洗脱组分中，把级分No.63至68的定名为小球藻硫酸化多糖组分-I(CPS-I)，把级分No.69至75的定名为小球藻硫酸化多糖组分-II(CPS-II)。使CSP-I和CSP-II对蒸馏水进行充分透析，冷冻干燥，分别是140mg和200mg。
参考例5把绿原酸溶解在100mM碳酸钠缓冲液(pH9)中，使浓度达到100mM。通过蠕动移液泵向该溶液中通入空气12小时，制备绿原酸的氧化处理物。
实施例1使人骨肉瘤细胞株Hu09悬浮在含有10％胎牛血清(バイオウィタカ公司制造)的DMEM培养基(バイオウィタカ公司制造)中，使之达到1×105细胞/ml。以0.1ml/孔接种在96孔平皿上，进行无菌培养。培养2天后，换成新的培养基中。在其中加入用参考例1-(1)得到的来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖作为试样，培养48小时。接着用酶免疫测定法(BMP-2 ImmunoassayGT公司制造)对培养液中骨形成蛋白质-2(BMP-2)的浓度进行测定。对照是不添加试样，以该细胞培养液中的BMP-2浓度(细胞的BMP-2产生量)作为100％，表示增强BMP-2产生的活性。试样的添加量如表1所示。该结果表明，用参考例1-(1)得到的来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖浓度依存性地增强BMP-2的产生。把该结果出示在表1中。
表1 来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖对BMP-2产生的增强作用

表中，对照的BMP-2产生量为0.120ng/ml。
实施例2用与实施例1相同的方法，对在参考例1-(1)中制备的来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖，在参考例1-(2)中制备的岩藻依聚糖I组分、岩藻依聚糖II组分、岩藻依聚糖III组分，在参考例2-(3)中制备的7-12SFd-F、在参考例3中制备的蓝藻类酸性多糖组分SSP-I、III、IV和肝素(和光纯药公司制造)，硫酸葡聚糖(シグマ公司制造)，硫酸软骨素B(生化学工业公司制造)，果胶酸(ナカライテスク公司制造)的BMP-2产生增强活性进行了研究。试样的添加量如表2、3所示。结果表明来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖、岩藻依聚糖I组分、岩藻依聚糖II组分、岩藻依聚糖III组分、7-12SFd-F、蓝藻类酸性多糖组分SSP-I、III、IV，肝素，硫酸葡聚糖，硫酸软骨素B，果胶酸对BMP产生的增强作用与其浓度有依赖关系。把该结果出示在表2、3中。
表2

表中，来源于北海道函馆产海带的岩藻依聚糖，岩藻依聚糖I组分，岩藻依聚糖II组分，岩藻依聚糖III组分、SSP-I、III、IV，肝素，硫酸葡聚糖的对照BMP-2产生量为0.110ng/ml。
表3

表中，7-12SFd-F的对照BMP-2产生量为0.201ng/ml，硫酸软骨素B、果胶酸的对照BMP-2产生量为0.130ng/ml。
实施例3用与实施例1相同的方法，对角叉菜聚糖λ(シグマ公司制造)，角叉菜聚糖κ(シグマ公司制造)，角叉菜聚糖ι(シグマ公司制造)、低分子肝素、(CELSUS LABORATORIES公司制造)的BMP-2产生增强活性进行了研究。试样的添加量如表4所示。结果表明角叉菜聚糖λ，角叉菜聚糖κ，角叉菜聚糖ι，低分子肝素对BMP-2产生的增强作用与其浓度有依赖关系。把该结果出示在表4中。
表4

表中，角叉菜聚糖λ，角叉莱聚糖κ，角叉菜聚糖ι的对照的BMP-2产生量为0.083ng/ml，低分子肝素的对照的BMP-2产生量为0.070ng/ml。
实施例4用与实施例1相同的方法对聚丙烯酸(平均分子量为5000、250000、1000000和光纯药公司制造)的BMP-2产生增强活性进行了研究。试样的添加量如表5所示。结果表明聚丙烯酸(平均分子量为5000、250000、1000000)对BMP-2产生的增强作用与其浓度有依赖关系。把该结果出示在表5中。
表5

表中，对照的BMP-2产生量为0.046ng/ml。
实施例5用与实施例1相同的方法对绿原酸(东京化成工业公司制造)和在参考例5中制备的绿原酸的氧化处理物的BMP-2产生增强活性进行了研究。试样的添加量如表6所示。结果表明绿原酸、绿原酸的氧化处理物对BMP-2产生的增强作用与其浓度有依赖关系。把该结果出示在表6中。
表6

表中，对照的BMP-2产生量为0.041ng/ml。
实施例6使小鼠胚细胞株C3H10T1/2悬浮在含有10％胎牛血清的DMEM培养基中，使之达到3×104细胞/ml。以0.1ml/孔接种在96孔平皿上，进行无菌培养。培养3天后，换成新培养基。往其中加入硫酸乙酰肝素、参考例4得到的小球藻硫酸化多糖组分CSP-1、CSP-1I作为试样，培养7天。接着以细胞中碱性磷酸酶活性的增加作为指标，测定C3H10T1/2细胞向成骨细胞的分化情况。用PBS对细胞清洗1次，添加反应基质液(100mM二乙醇胺缓冲液pH10.0，2mM氯化镁，1mM对硝基苯磷酸)100μl在37℃下反应30分钟。接着添加0.2N的氢氧化钠100μl终止反应，通过在405nm的吸光度测定游离的对硝基苯磷酸量，对照是不添加试样，以对照的碱性磷酸酶活性作为100％，表示添加试样时的碱性磷酸酶活性。该活性表示诱导分化成成骨细胞的活性。试样的添加量如表7所示。进行2组试验，取其平均值。结果表明硫酸乙酰肝素、CSP-I、CSP-II、诱导分化成成骨细胞与其浓度有依赖关系。把该结果出示在表7中。
表7

产业上的实用性通过本发明可以提供含有选自(a)酸性糖，(b)聚丙烯酸，(c)绿原酸和(d)绿原酸的氧化处理物中的至少一种化合物或来源于藻类的提取物作为有效成分的，治疗或预防需要增强BMP产生或促进骨形成的疾病用的(医)药品，BMP产生增强剂或骨形成促进剂，用于增强BMP产生或促进骨形成的食品，饮料或饲料。该(医)药品可用作治疗或预防骨质疏松症和骨折等与骨相关的疾病的治疗剂或预防剂。同时BMP产生增强剂或骨形成促进剂还可以作为治疗骨折和治疗牙齿的植入物和牙膏的成分使用。并且该制剂还可用于对于骨的功能进行研究，对治疗与骨有关的疾病的药物进行筛选。此外，该食品或饮料，还可以通过作为日常食品和饮料进行摄取，来改善需要增强BMP产生或促进骨形成的疾病的症状等。
权利要求
1.需要增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的疾病的治疗剂或预防剂，其特征是含有选自(a)酸性糖，(b)聚丙烯酸，(c)绿原酸和(d)绿原酸的氧化处理物中的至少一种化合物作为有效成分。
2.根据权利要求1中所述的治疗剂或预防剂，其中，酸性糖是选自酸性多糖、酸性寡糖、酸性单糖以及它们的分解物中的至少一种酸性糖。
3.根据权利要求1中所述的治疗剂或预防剂，其中，酸性糖是选自岩藻依聚糖、肝素、硫酸葡聚糖、硫酸软骨素B、果胶酸、来源于蓝藻类的酸性多糖、岩藻依聚糖分解物、角叉菜聚糖λ、角叉菜聚糖κ、角叉菜聚糖ι、低分子肝素、硫酸乙酰肝素以及来源于小球藻的酸性多糖中的至少一种酸性糖。
4.骨形成蛋白质产生增强剂或骨形成促进剂，其特征是含有选自(a)酸性糖，(b)聚丙烯酸，(c)绿原酸和(d)绿原酸的氧化处理物中的至少一种化合物作为有效成分。
5.根据权利要求4中所述的骨形成蛋白质产生增强剂或骨形成促进剂，其中，酸性糖是选自酸性多糖、酸性寡糖、酸性单糖以及它们的分解物中的至少一种酸性糖。
6.根据权利要求4中所述的骨形成蛋白质产生增强剂或骨形成促进剂，其中，酸性糖是选自岩藻依聚糖、肝素、硫酸葡聚糖、硫酸软骨素B、果胶酸、来源于蓝藻类的酸性多糖、岩藻依聚糖分解物、角叉菜聚糖λ、角叉菜聚糖κ、角叉菜聚糖ι、低分子肝素、硫酸乙酰肝素以及来源于小球藻的酸性多糖中的至少一种酸性糖。
7.用于增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的食品、饮料或饲料，其特征是含有选自(a)酸性糖，(b)聚丙烯酸，(c)绿原酸和(d)绿原酸的氧化处理物中的至少一种化合物作为有效成分。
8.根据权利要求7中所述的用于增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的食品、饮料或饲料，其中，酸性糖是选自酸性多糖、酸性寡糖、酸性单糖以及它们的分解物中的至少一种酸性糖。
9.根据权利要求7中所述的用于增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的食品、饮料或饲料，其中，酸性糖是选自岩藻依聚糖、肝素、硫酸葡聚糖、硫酸软骨素B、果胶酸、来源于蓝藻类的酸性多糖，岩藻依聚糖分解物，角叉菜聚糖λ，角叉菜聚糖κ，角叉菜聚糖ι，低分子肝素，硫酸乙酰肝素以及来源于小球藻的酸性多糖中选择的至少一种酸性糖。
10.需要增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的疾病的治疗剂或预防剂，其特征是含有来源于藻类的提取物作为有效成分。
11.骨形成蛋白质产生增强剂或骨形成促进剂，其特征是含有来源于藻类的提取物作为有效成分。
12.增强骨形成蛋白质产生用的或促进骨形成用的食品、饮料或饲料，其特征是含有来源于藻类的提取物作为有效成分。
全文摘要
本发明可以提供治疗或预防需要增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的疾病的治疗剂或预防剂；骨形成蛋白质产生增强剂或骨形成的促进剂，用于增强骨形成蛋白质产生或促进骨形成的食品、饮料或饲料，其特征在于含有选自(a)酸性糖，(b)聚丙烯酸，(c)绿原酸和(d)绿原酸的氧化处理物中的至少一种化合物或来源于藻类的提取物作为有效成分。
文档编号A61P43/00GK1720040SQ20038010522
公开日2006年1月11日 申请日期2003年12月5日 优先权日2002年12月5日
发明者大野木宏, 杉山胜美, 佐川裕章, 加藤郁之进 申请人:宝生物工程株式会社