专利名称：从天然植物中药有效成分中提取复方镇痛制品药物的方法
技术领域：
本发明涉及从天然植物中药有效成份中提取复方镇痛制品药物的方法，属于天然产物药理活性和分离与提纯天然产物方法。其商品名为“元胡”。
背景技术：
在本发明问世之前，元胡止痛片是止痛类中药中的常用药。本发明是替代元胡止痛片的原料药，是一种高纯度的原料药。
(二)发明内容技术方案包括处方新工艺、工艺流程图及各种毒理、药理综述。
技术解决方案是本发明的目的公开一种从天然植物中药有效成份中提取复方镇痛制品药物的方法，提供一种高纯度的原料药。
本发明处方是将延胡索(醋制)、白芷植物原料，每100kg加入65％乙醇300kg、200kg、100kg，在85℃条件下，回流提取3小时、2小时、1小时，合并乙醇提取的滤液，在85℃条件下，回收乙醇，并将滤液浓缩后，每100kg的浓缩滤液加入100kg水，在常温条件下，静置6小时，吸取上清液，通过大孔树脂填充的柱子，用大孔树脂吸附，用65％乙醇将吸附在大孔树脂上的成分洗脱至乙醇中，回收乙醇后在85℃条件下，喷雾干燥，用高效液相色谱仪进行指痕图谱定量测定后，制成标准原料药。
延胡索(醋制)、白芷植物复方镇痛制品的制造方法和药理活性。延胡索(醋制)、白芷植物复方镇痛制品，是经过细心、严格控制条件下，用大孔树脂吸附技术，吸附、洗脱、分离、纯化延胡索(醋制)、白芷植物成分，用高效液相色谱仪，进行指痕图谱的定量测定。药理活性实验结果表明，复方制品具有明显的镇痛作用，该作用与脑内DA、5羟色胺的水平相关，具有非麻醉性和无成瘾性，临床用于各种疼痛治疗，是更待进一步研发的，有前途的植物镇痛药。
图1 本发明的工艺流程图。
图2 利血平对复方制品镇痛作用的影响(痛阈提高％)。
其工艺流程描述如下(1)元胡止痛处方延胡索(醋制)445g、白芷223g。
元胡止痛处方及吸附工艺大孔树脂吸附、洗脱操作过程a.树脂装柱将树脂用水搅拌后装于玻璃钢柱中。
b.药液吸附取静置沉降后的上清液，使药液流经树脂柱，流速控制在20L/分钟以内，流出液弃掉。待药液全部流尽后，即完成了吸附过程。
c.洗脱用60～70％浓度的乙醇流入树脂柱，流速控制在10L/分钟以内，收集流出液(洗脱液)，直至全部乙醇流尽后，即完成了洗脱过程。
e.清洗树脂用水冲洗树脂直到流出液澄清为止。
(2)溶剂65％乙醇溶液。
(3)提取液黄色液体。
(4)物理参数65％乙醇回流提取、树脂吸附、喷雾干燥的压力均为常压，减压回收的压力为真空度0.02-0.04MPa；其中，65％乙醇回流提取的温度为80-85℃，树脂吸附的温度为常温，喷雾干燥的温度为80-85℃，减压回收的温度为80-85℃。
(5)操作过程①2味药材加3倍量65％乙醇回流提取3小时，滤过，得滤液(1)；药渣加2倍量65％乙醇回流提取2小时，滤过，得滤液(2)；药渣加1倍量65％乙醇回流提取1小时，滤过，得滤液(3)。
②合并滤液(1)、(2)、(3)静置，取上清液，得提取液(4)。
③减压回收提取液(4)，得浓缩液(5)。
④浓缩液(5)加入1倍量水，静置6小时，取上清液用大孔树脂进行吸附。
⑤用65％乙醇将吸附在树脂上的化学成分洗脱至乙醇中，得洗脱液(6)。
⑥减压回收洗脱液(6)，得浓缩液(7)。
⑦浓缩液(7)进行喷雾干燥，得药粉。
具体实施方式
延胡索(醋制)445g、白芷223g。将延胡索(醋制)、白芷植物原料，每100kg加入65％乙醇300kg、200kg、100kg，在85℃条件下，回流提取3小时、2小时、1小时，合并乙醇提取的滤液，在85℃条件下，回收乙醇，并将滤液浓缩后，每100kg的浓缩滤液加入100kg水，在常温条件下，静置6小时，吸取上清液，通过大孔树脂填充的柱子，用大孔树脂吸附，用65％的乙醇将吸附在大孔树脂的成分洗脱至乙醇中，回收乙醇后在85℃条件下，喷雾干燥，用高效液相色谱仪进行指痕图谱定量测定后，制成标准原料药。
本发明的创造性通过毒理、药理临床来体现，实审时补充提供现简介如下从天然植物中药有效成份中提取复方镇痛制品药物的方法药理作用1.延胡索(醋制)、白芷植物复方镇痛制品(简称复方制品)对大鼠的镇痛作用与神经递质关系的分析选用体重200～300g大鼠，雌雄不拘，每组10只。置于特制的大鼠固定器，30分钟后进行试验。实验前于距尾1/3处用酒精擦干净，待酒精挥发后涂上黑墨汁，作为光照射部位及增加光的吸收。辐射热采用输出电压12V，50W聚光灯泡。使焦点落在照射部位。以尾巴移动或甩尾为疼痛反应指标。用秒表记录自照射开始到尾巴移动或甩尾的时间作为痛阈。以6秒为限，给药复方制品前痛阈大于4秒的大鼠弃去。给药复方制品前测痛二次，取其均值作为基础痛阈。腹腔给药复方制品后每15分钟一次。求出各个时间痛阈均值，计算给药复方制品后痛阈提高百分率，用自身t测验检查差异显著性。每次试验设对照组。
结果(1)丙烯吗啡的影响大鼠二组。一组腹腔注射Nal 5mg/kg5分钟后腹腔注射复方制品，另一组腹腔注射等量复方制品结果。二组大鼠痛阈均明显提高，但组间无明显差异。说明丙烯吗啡不能对抗复方制品镇痛作用，其镇痛作用与吗啡受体无关。
(2)利血平的影响大鼠二组。一组腹腔注射利血平4mg/kg，4小时后脑室注射复方制品200μg/kg，另一组icv等量复方制品可见，复方制品痛阈明显提高，利血平+复方制品痛阈则无明显变化，两组间有明显差异。说明利血平有对抗复方制品的镇痛作用，其镇痛作用与脑内单胺类递质有关。
·I.复方制品II.复方制品+利血平 痛阈提高％时间(min)(3)5-HTP的影响大鼠4组。生理盐水(NS)组(1)，dl-5-HTP组(2)，复方制品组(3)，dl-5-HTP+复方制品(4)，各组腹腔注射R0-4-4602 400mg/kg，45分钟后第1～3组分别腹腔注射NS、dl-5-HTP(56mg/kg)，注射给药复方制品200μg/kg，第4组于30分钟后腹腔注射dl-5-HTP，15分钟后注射复方制品。结果，第1、2组痛阈无明显变化，经3、4组痛阈明显提高，两组间有明显差异，说明dl-5-HTP能明显增强复方制品的镇痛作用。
(4)1-dopa的影响大鼠4组，NS组(1)，1-dopa组(2)，复方制品(3)，1-dopa+复方制品组(4)。各组腹腔注射R0-4-4602 400mg/kg，45分钟后第1～3组分别腹腔注射NS、1-dopa(50mg/kg)，注射给药复方制品200μg/kg，第4组于30分钟后腹腔注射器-dopa，15分钟后，注射复方制品200μg/kg。结果，第1、2组痛阈无明显变化，第3、4组痛阈明显提高，两组间有明显差异，说明1-dopa能强化复方制品镇痛作用。
(5)DDC的影响大鼠4组，NS组(1)，DDC组(2)，复方制品(3)，DDC+复方制品(4)。第4组于腹腔注射DDC(250mg/kg)2小时后注射复方制品200μg/kg。结果，DDC能明显增强复方制品的镇痛作用。
(6)APO及Hal的影响大鼠6组。NS组(1)，APO组(2)，Hal组(3)，复方制品(4)，APO+复方制品(5)，Hal+复方制品(6)，第5、6组分别于腹腔注射APO(5mg/kg)、Hal(2.5mg/kg)30分钟后，注射复方制品200μg/kg。结果，APO及Hal对复方制品的镇痛作用无明显影响。
从天然植物中药有效成份中提取复方镇痛制品药物的方法药效学试验资料复方制品为《中国药典》90年版收载的复方制品改变剂型制成的混悬型冲剂，其制备工艺完全遵从了原片剂的工艺，只是加入了适量的蔗糖作为矫味剂，使之更便于服用，制成冲剂有利于更快的发挥疗效。为了证实新剂型与原剂型的疗效关系，根据其原片剂的功能主治，我们进行了以下主要药效学试验，报告如下实验材料
1.动物健康小白鼠，体重18～23g，由中国医科大学实验动物中心提供2.复方制品由沈阳飞龙制药有限公司提供3.元胡止痛片由南通中药厂生产，批号9110254.苯甲酸雌二醇注射液由上海第九制药厂生产，批号9202035.缩宫素注射液由马鞍山生化制药厂生产，批号911225一、复方制品对醋酸所致疼痛的影响取健康小鼠40只，雌雄兼用，随机分成四组，每组10只，(1)空白对照组(给常水)；(2)元胡止痛片组(2.0g/kg)；(3)复方制品大剂量组(2.0g/kg)；(4)小剂量组(1.0g/kg)(以上剂量均按生药材量计算)。每日灌胃一次，连续给药4天，于末次给药30分钟后，由腹腔注射0.3％的醋酸溶液(0.2ml/只)，观察15分钟内各组动物出现的扭体数，并进行统计学处理。
实验结果表明腹腔注射醋酸后可引起小鼠腹部疼痛，出现扭体反应(伸展后肢，腹部收缩内凹，同时躯体扭曲)，给药各组均显著的抑制了小鼠腹腔疼痛反应，复方制品大剂量组、小剂量组及元胡止痛片组作用均极显著(P＜0.001)。以上各给药组的扭体数均值均低于空白对照组，表明复方制品有明显的抑制醋酸所致疼痛作用，其作用强度与元胡止痛片剂组一致。结果见表1表1 复方制品对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响
*P＜0.001 与空白对照组比较二、复方制品对热板法所致小鼠反应时间的影响取雌性健康小鼠，随机分为四组，每组10只(1)空白对照组(给常水)；(2)元胡止痛片组(2.0g/kg)；(3)复方制品大剂量组(2.0g/kg)；(4)复方制品小剂量组(1.0g/kg)；每日灌胃一次，连续给药4天，于末次给药30分钟后进行实验，热板保持在55±1℃，将小鼠置于热板上，记录小鼠置于热板至出现舔后足的反应时间(秒)。实验前先做预实验，剔除反应时间超过30秒及跳跃者，反应时间超过60秒者，按60秒计算。
实验结果表明复方制品大、小剂量组及元胡止痛片剂组均可明显延长小鼠舔足反应时间，与对照组比较有显著性差异(分别为P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01)，复方制品与片剂同等剂量下作用一致。结果见表2
表2 复方制品对小鼠热板法反应时间的影响
*P＜0.05 **P＜0.01 与空白对照组比较三、复方对缩宫素所致小鼠疼痛的影响取雌性健康小鼠48只，按体重分为四组，每组12只(1)空白对照组(给常水)；(2)元胡止痛片组(2.0g/kg)；(3)复方制品大剂量组(2.0g/kg)；(4)复方制品小剂量组(1.0g/kg)，每日灌胃一次，连续给药四天，第2、3天给药后，各鼠皮下注射本甲酸雌二醇2μg/只，以提高子宫肌对缩宫素的敏感性。末次给药后40分钟腹腔注射缩宫素0.5μg/只，观察20分钟内各鼠扭体次数。
实验结果表明复方制品大、小剂量组及元胡止痛片剂均可显著抑制缩宫素所致小鼠扭体反应次数，具有显著的镇痛作用，与空白对照组比较均有显著性差异(P＜0.01)，复方制品与片剂作用基本一致。结果见表3表3 复方制品对缩宫素所致小鼠疼痛的影响
**P＜0.01 与空白对照组比较讨论元胡止痛片剂为《中国药典》1990年版收载的纯中药制剂，处方由延胡索和白芷两味药组成，具有“理气、活血、止痛”功能，“用于气滞血瘀的胃痛、胁痛、头痛及月经痛等”。改变剂型后的复方制品，通过对醋酸所致小鼠疼痛反应的影响、对热板法所致小鼠疼痛反应时间的影响及对缩宫素所致小鼠疼痛的影响等三项实验证明，该药止痛作用是显著的，主要药理作用与原片剂比较一致。
权利要求
1.从天然植物中药有效成份中提取复方镇痛制品药物的方法，其特征在于将以下2位天然产物延胡索(醋制)、白芷，采用先进的大孔树脂吸附有效成份，并使用气相指痕光谱定量。其重量百分比为由延胡索(醋制)66.62％、白芷33.38％。将延胡索(醋制)、白芷植物原料，每100kg加入65％乙醇300kg、200kg、100kg，在85℃条件下，回流提取3小时、2小时、1小时，合并乙醇提取的滤液，在85℃条件下，回收乙醇，并将滤液浓缩后，每100kg的浓缩滤液加入100kg水，在常温条件下，静置6小时，吸取上清液，通过大孔树脂填充的柱子，用大孔树脂吸附，用65％乙醇将吸附在大孔树脂上的成分洗脱至乙醇中，回收乙醇后在85℃条件下，喷雾干燥，用高效液相色谱仪进行指痕图谱定量测定后，制成标准原料药；
2.按照权利要求所述1从天然植物中药有效成份中提取复方镇痛制品药物的方法，其特征在于所述的原料药可以制备成片剂、丸剂、胶囊、口服液及针剂。
全文摘要
本发明涉及从天然植物中药有效成分中提取复方镇痛制品药物的方法。其处方是延胡索(醋制)66.62％、白芷33.38％。其工艺将延胡索(醋制)、白芷植物原料，每100kg加入65％乙醇300kg、200kg、100kg，在85℃条件下，回流提取3小时、2小时、1小时，合并乙醇提取的滤液，在85℃条件下，回收乙醇，并将滤液浓缩后，每100kg的浓缩滤液加入100kg水，在常温条件下，静置6小时，吸取上清液，通过大孔树脂填充的柱子，用大孔树脂吸附，用65％乙醇将吸附在大孔树脂上的成分洗脱至乙醇中，回收乙醇后在85℃条件下，喷雾干燥，用高效液相色谱仪进行指痕图谱定量测定后，制成标准原料药。积极效果是复方制剂中提取复方镇痛制品药物的方法采用先进的大孔树脂吸附有效成分并使用液相指痕光谱定量，保证药品的稳定性和高质量。
文档编号A61K9/20GK1650899SQ20041000115
公开日2005年8月10日 申请日期2004年2月2日 优先权日2004年2月2日
发明者姜伟 申请人:姜伟