专利名称：化合物大叶蒟素在制备药物组合物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属中药制药领域，涉及一种从植物大叶蒟中分离到的酰胺类化合物大叶蒟素在制备药物组合物中的应用。具体涉及大叶蒟素在制备抑制中枢神经系统单胺类递质重摄取相关疾病药物组合物中的用途。
背景技术：
随着人们的生活质量和健康水平的不断提高，神经、精神、心血管以及内分泌等系统疾患已成为当今世界危害人类健康的多发疾病，已经给人类社会带来沉重的负担。5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)为最主要的中枢神经系统单胺类递质。它们在大脑中的含量控制着人类的情感、情绪，调节着心血管和内分泌的机能，并同人类的体温、睡眠、摄食及运动系统有关。单胺类神经递质释放后的主要代谢途径是再摄取，从而控制脑内该类递质突触间隙的正常含量。由于单胺类递质的重摄取异常，导致中枢神经系统内5-HT、NE和DA含量的降低，从而引起神经系统、心血管系统、学习记忆功能、内分泌及运动系统的失调。包括躁狂或抑郁性精神障碍、睡眠失调、疼痛、运动障碍及性功能减退等方面。目前，各类有关化学药物仍不能满足日益增长的临床治疗的需要。
据报道，在我国天然药物中发掘抗抑郁和治疗精神障碍性疾病的药物已形成研究热点。有研究发现从中药大叶蒟中醇提取乙酸乙酯萃取之抽提物具镇痛、镇静和抗抑郁作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种从植物大叶蒟中分离到的酰胺类化合物大叶蒟素(Laetispicine)在制备药物组合物中的应用。具体涉及化合物大叶蒟素在制备抑制中枢神经系统单胺类递质5-HT、NE和DA的重摄取相关疾病药物组合物中的新用途。
本发明从胡椒科植物大叶蒟Piper laetispicum C.DC.中提取分离得到化合物大叶蒟素(Laetispicine)，通过用同位素标记的中枢神经系统单胺类递质重摄取试验的测试，证实它能抑制大鼠脑的突触体对5-羟色胺、多巴胺和去甲肾上腺素的重摄取。本发明所述化合物大叶蒟素可作为原料，制成抑制中枢神经系统单胺类递质重摄取相关疾病的药物组合物，或制成至少含一种赋形剂的抑制中枢神经系统单胺类递质重摄取相关疾病的药物组合物，包括胶囊、片剂、注射剂、口服液、吸入剂、缓释剂等制剂。用于治疗因中枢神经系统单胺类递质重摄取而引起的相关疾病。
所使用的生药材为胡椒科植物大叶蒟Piper laetispicumC.DC.的根、根茎、茎、叶、花或果实。
所述的相关疾病包括，因5-羟色胺重摄取或突触间隙5-HT含量降低而引起的抑郁症、强迫性精神症、恐惧症、焦虑症和高血压、失眠或疼痛等症状；因多巴胺重摄取或突触间隙DA含量降低而引起的抑郁症、焦虑症、强迫性精神症、运动功能障碍病、神经退行性病(帕金森氏症、震颤性麻痹)及性功能减退等；因去甲肾上腺素重摄取或突触间隙NE含量降低而引起的躁狂抑郁性精神障碍、焦虑症、嗜睡症、学习记忆功能障碍、早老性痴呆、摄食异常、肥胖及植物神经功能紊乱所致的心血管系统疾病(如交感神经强力过低引起的心动过缓、低血压)和因交感神经功能降低所致的感觉功能异常(如无痛症)、体温调节失常等。
本发明涉及的大叶蒟素(Laetispicine)化学名N-isobutyl-11-(3，4-methylend-ioxyphenyl)-2E，4E，9E-undecatrienamide，从胡椒科植物大叶蒟Piperlaetispicum C.DC.中提取分离得到。通过下述方法提取分离将生药材粉碎后，加入95％的工业酒精加热回流，冷却后过滤，残渣加95％工业酒精进行二次回流，冷却过滤，合并过滤液，减压浓缩至干，得乙醇浸膏。乙醇浸膏中加入适量水，分别用石油醚、苯、氯仿、乙酸乙酯进行1∶1萃取，加热回流，冷却分层，合并各有机相，减压浓缩分别得到石油醚浸膏、苯浸膏、氯仿浸膏、乙酸乙酯浸膏。乙酸乙酯浸膏进行硅胶柱层析，用环己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱，得到六个流分Fr.I、Fr.II、Fr.III、FrIII、Fr.V、Fr.VI，其中的Fr.IV进一步柱层析，用石油醚-丙酮进行梯度洗脱，收集到四个流分Fr.IV-1、Fr.IV-2、Fr.IV-3、Fr.IV-4，其中Fr.IV-3析出无色针晶，过滤得到晶体，经HRMS、EIMS、13CNMR、DEPT、1HNMR、HMQC、HMBC、COSY一系列波谱证明是N-isobutyl-11-(3，4-methylendioxyphenyl)-2E，4E，9E-undecatrienamide，即大叶蒟素(laetispicine)。结构式如下 本发明化合物大叶蒟素，通过用同位素标记的中枢神经系统单胺类递质重摄取试验的测试，证实它能抑制大鼠脑的突触体对5-羟色胺、多巴胺和去甲肾上腺素的重摄取。
图1是化合物大叶蒟素对大鼠中枢神经系统H3标记的5-HT重摄取的抑制作用。
图2是化合物大叶蒟素对大鼠中枢神经系统H3标记的去甲肾上腺素重摄取的抑制作用。
图3是化合物大叶蒟素对大鼠中枢神经系统H3标记的多巴胺重摄取的抑制作用。
具体实施例方式
实施例1提取分离大叶蒟素将1000g的生药材粉碎后，加入6倍量95％的工业酒精加热回流2小时，冷却后过滤，残渣加4倍量95％工业酒精进行二次回流，冷却过滤，合并两次的过滤液，减压浓缩至干，得到乙醇浸膏50g。乙醇浸膏中加入适量水，分别用五倍量的石油醚、苯、氯仿、乙酸乙酯进行1∶1萃取，少量多次，加热回流，冷却分层，合并各有机相，减压浓缩分别得到石油醚浸膏0.5g、苯浸膏8g、氯仿浸膏6g、乙酸乙酯浸膏10g。10g的乙酸乙酯浸膏进行硅胶柱层析，用环己烷一乙酸乙酯(5∶1～3.5∶1.5)进行梯度洗脱，得到六个流分Fr.I、Fr.II、Fr.III、Fr.IV、Fr.V、Fr.VI，其中的Fr.IV进一步柱层析，用石油醚-丙酮(6∶1～3∶1)进行梯度洗脱，收集到四个流分Fr.IV-1、Fr.IV-2、Fr.IV-3、Fr.IV-4，其中Fr.IV-3析出无色针晶，过滤得到晶体300mg，经HRMS、EIMS、13CNMR、DEPT、1HNMR、HMQC、HMBC、COSY一系列波谱证明是N-isobutyl-11-(3，4-methylendioxyphenyl)-2E，4E，9E-undecatrienamide，即大叶蒟素(laetispicine)。
实施例2同位素标记的中枢神经系统单胺类递质重摄取抑制试验取150-250g Sprague-Dawley雄性大鼠，断颈，取脑，剥离脑区，其中下丘脑用于5-HT及NE重摄取抑制实验，纹状体用于DA重摄取抑制实验，称重，加入25mL/g冰冷的0.32M蔗糖溶液，冰浴匀浆。匀浆液1000转/min冰冻离心10min，弃去沉淀，取上清液，10000-17000转/min冰冻离心20min。沉淀即为突触体。以前述0.32M蔗糖溶液以10mL/g比例(按脑区组织湿重计)混悬。测定蛋白含量。备用。
H3标记的单胺类递质，以新鲜配制的Krebs液稀释200倍。取800μL+20μL药物(或溶媒)，混合均匀。加入25μL突触体混悬液，开始计时。5min后以whatman GFB滤纸过滤，并以冰冷Krebs液洗涤。滤纸烘干后倾入闪烁液，测定每分钟内闪烁次数(CPM)。相同条件下37摄氏度CPM值减去0-4摄氏度CPM值即为中枢神经系统单胺类递质重摄取值。检测药物对单胺类递质重摄取的抑制情况。
上述蔗糖溶液含蔗糖0.32M，EDTA 0.0001M，glucose 1mg/mL，tris调节pH值至7.4。
所述重碳酸盐Krebs反应液其中成分是，成分 终浓度(mmol/L)NaCl 130KCl 2.74NaH2PO40.70MgCl20.50NaHCO330Glucose 10EDTA 0.171iproniazid0.10pH7.3其中(1).iproniazid为单胺氧化酶抑制剂(MAOI)，可以用其它代替，如pargyline。
(2).pH值一般用tris调节。
4.95％O2-5％CO2饱和。
所述闪烁液其中成分为，PPO 5g，POPOP 0.2g加二甲苯至1000ml。
表1是大叶蒟素对大鼠中枢神经系统H3标记的5-HT重摄取的抑制结果。其中膜CPM值为减去本底后3次闪烁计数的平均值。
表2是大叶蒟素对大鼠中枢神经系统H3标记的NE重摄取的抑制结果。其中膜CPM值为减去本底后3次闪烁计数的平均值。
表3是大叶蒟素对大鼠中枢神经系统H3标记的DA重摄取的抑制结果。其中膜CPM值为减去本底后3次闪烁计数的平均值。
表1
表2.
表3.
权利要求
1.化合物大叶蒟素在制备抑制中枢神经系统单胺类递质重摄取相关疾病药物组合物中的应用。
2.按权利要求1所述的应用，其中所述的化合物大叶蒟素通过下述方法提取分离，将生药材粉碎后，加入95％的工业酒精加热回流2小时，冷却后过滤，残渣加95％工业酒精进行二次回流，冷却过滤，合并两次的过滤液，减压浓缩至干，得到乙醇浸膏。乙醇浸膏中加入等量水，分别用石油醚、苯、氯仿、乙酸乙酯进行1∶1萃取，加热回流，冷却分层，合并各有机相，减压浓缩分别得石油醚浸膏、苯浸膏、氯仿浸膏、乙酸乙酯浸膏，其中乙酸乙酯浸膏进行硅胶柱层析，用环己烷-乙酸乙酯(5∶1～3.5∶1.5)梯度洗脱，得流分Fr.I、Fr.II、Fr.III、Fr.IV、Fr.V、Fr.VI，其中的Fr.IV进一步柱层析，用石油醚-丙酮6∶1～3∶1梯度洗脱，收集流分Fr.IV-1、Fr.IV-2、Fr.IV-3、Fr.IV-4，其中Fr.IV-3析出无色针晶，过滤得晶体即大叶蒟素。
3.根据权利要求1或2的应用，其特征在于所述的化合物大叶蒟素作为原料制成胶囊、片剂、注射剂、口服液、吸入剂或缓释剂。
4.权利要求2的应用，所述生药材是胡椒科植物大叶蒟Piper laetispicumC.DC.的根、根茎、茎、叶、花或果实。
5.权利要求1的应用，其中所述中枢神经系统单胺类递质是5-羟色胺或多巴胺或去甲肾上腺素。
6.权利要求1的应用，其中所述中枢神经系统单胺类递质重摄取相关疾病是因5-羟色胺重摄取或突触间隙5-HT含量降低而引起的抑郁症、强迫性精神症、恐惧症、焦虑症或高血压、失眠和疼痛症状。
7.权利要求1的应用，其中所述中枢神经系统单胺类递质重摄取相关疾病是因多巴胺重摄取或突触间隙DA含量降低而引起的抑郁症、焦虑症、强迫性精神症、运动功能障碍病、神经退行性病包括帕金森氏症、震颤性麻痹，或性功能减退。
8.权利要求1的应用，其中所述中枢神经系统单胺类递质重摄取相关疾病是因去甲肾上腺素重摄取或突触间隙NE含量降低而引起的躁狂抑郁性精神障碍、焦虑症、嗜睡症、学习记忆功能障碍、早老性痴呆、摄食异常、肥胖或植物神经功能紊乱所致的心血管系统疾病包括交感神经强力过低引起的心动过缓、低血压，或因交感神经功能降低所致的感觉功能异常包括无痛症，或体温调节失常。
全文摘要
本发明属中药制药领域，涉及化合物大叶蒟素(Laetispicine)在制备抑制中枢神经系统单胺类递质重摄取相关疾病药物组合物中的用途。本发明通过用同位素标记的中枢神经系统单胺类递质重摄取试验的测试，证实它能抑制大鼠脑的突触体对5－羟色胺、多巴胺和去甲肾上腺素的重摄取。本发明化合物大叶蒟素可作为原料，制成抑制中枢神经系统单胺类递质重摄取相关疾病的药物组合物，用于治疗因中枢神经系统单胺类递质重摄取而引起的相关疾病。
文档编号A61K31/357GK1593399SQ20041002549
公开日2005年3月16日 申请日期2004年6月25日 优先权日2004年6月25日
发明者潘胜利, 钱伏刚, 王峻, 孙凤艳, 解静, 邵衣慈 申请人:复旦大学