专利名称：微脂粒及其制备方法
技术领域：
本发明是关于一种可提高药物安定性与皮肤穿透率的微脂粒组成及其制备方法，尤指一种适用于包覆疏水性药物维他命A酸的微脂粒组成与其制备方法。
背景技术：
维他命A酸(All-Trans Retinoic Acid，RA)为目前治疗青春痘最有效的药物之一。其作用机制为此药物在体内代谢后，产生活性物质，进而促进上皮细胞增生，改善其角质化过程，并使角化细胞迅速脱落，于是青春痘会松动脱出，达到良好的治疗效果。然而一般在使用RA时，皮肤会呈现脱皮、红肿、龟裂等严重的副作用，因此我们希望藉由微脂粒的包覆来减低RA对皮肤的刺激性，进而增进药物停留在皮肤内的时间，以增进治疗效果。但是RA的水溶性低，因此以微脂粒包覆时无法达到有效的药物浓度，从而必须使用不增加皮肤刺激性的助溶剂。对于广泛使用于针对皮肤癌的4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid)和穿透皮肤达到炎症区域，缓减急慢性炎症反应，具有抗炎、镇痛作用的2-[(2，6-二氯苯基)氨基]苯乙酸钠(Diclofenac Diethylamine)所可能出现过敏或非过敏性皮炎，如丘疹、皮肤发红、水肿、瘙痒、小水疱、大水疱或鳞屑等的现象，我们希望也藉由微脂粒的包覆来减低对皮肤的刺激性，进而增进药物停留在皮肤内的时间，以增进治疗效果，减少用药量。而微脂粒(liposome)是目前最有前景的药物传输载体之一，由其磷脂质双层包覆构造，使其表面双层结构具有亲油性，然而内部可以水性核心包覆一水溶性生物活性物质(药剂)，或者由一界面活性剂的作用而包覆一油溶性生物活性物质，将此生物活性物质经由口服、皮下注射等方式传递至活体内，再由循环方式达到病灶。本发明特征之一为由用微脂粒包覆疏水药物主要期望能增加皮肤的相容性，可以增加皮肤穿透率。
由于单纯的磷脂质双层包覆在活体内的半生期并不长，因此目前除了单纯的磷脂质双层包覆外，更有在其构造中加入空间稳定物质，以延长微脂粒在体内循环的时间。更进一步地，也有在微脂粒外表做修饰，加上一导引物质，可将微脂粒藉由此导引物质的作用而专一地标的(target)至表现有此导引物质的受体的细胞，更精确地达到传递生物活性物质的目的。
先前曾有以水溶性维生素E(水溶性维生素E，d-α tocopherylpolyethylene glycol 1000 succinate；以下简称为TPGS)作为紫杉醇(paclitaxel)口服配方的助溶剂，或是以TPGS作为制备化妆品、皮肤医药或者药剂成分的成分，甚至用作止血成分，然其与本发明并无相关，本发明中TPGS是作为粘膜给药剂型的吸收促进剂以及难溶性药物的增溶剂等，又展示出其作为药用辅助性。因此，需要一种能够提升疏水性药物RA的类疏水性药物溶解度、同时又能够将疏水性药物包覆于微脂粒内的微脂粒成分，以发挥疏水性药物的临床药效。
发明内容
本发明的主要目的是在提供一种微脂粒的制备方法，以便能将疏水性药物包覆于此微脂粒内，并提高疏水性药物在酒精溶剂中的溶解度，同时维持疏水性药物长期包覆于微脂粒内的稳定性。
本发明的另一目的是在提供一种含有疏水性药物的微脂粒，以便能提高疏水性药物的皮肤穿透率，并且提高疏水性药物于此微脂粒中的包覆率，以及将疏水性药物长时间稳定地包覆于此微脂粒中，同时利用含TPGS的微脂粒来包覆疏水性药物，以达到皮肤的局部给药及减少皮肤刺激性。
为达成上述目的，本发明提供一种微脂粒的制备方法，该微脂粒包括一磷脂质双层包覆构造及一核心，该核心中包括一疏水性药物及水溶性维生素E，其特征在于，该制备方法主要包括(1)将该该生物活性物质疏水性药物加入一含有该酒精-水溶性维生素E的溶液中，得到一混合液；以及(2)将至少一磷脂胆碱加入该、胆固醇、以及维他命E加入步骤混合液，水合并经超音波震荡后，得到该微脂粒。
其中该步骤(1)还包括该含有水溶性维生素溶液的制作步骤(1a)将水溶性维生素E溶解于酒精中，得到一酒精-水溶性维生素E溶液。
其中在该酒精-水溶性维生素E溶液中的该水溶性维生素E含量为1％-50％重量百分比。
其中该步骤(1a)之后还包括步骤(1b)将维他命E加入该酒精-TPGS溶液，而得到一酒精-TPGS-维他命E溶液。
其中该酒精-TPGS-维他命E溶液中的维他命E含量为5％-20％重量百分比。
其中该磷脂胆碱是至少一选自由氢化天然磷脂质、长碳链饱和磷脂质、长碳链不饱和磷脂质、短碳链饱和磷脂质及其组合者所组成的群组。
其中该长碳链饱和磷脂质是为磷脂基胆碱、磷脂基甘油、磷脂基丝氨酸或磷脂基乙醇胺。
其中该磷脂基胆碱是为氢化卵磷脂基胆碱或氢化大豆磷脂基胆碱。
其中该长碳链饱和磷脂基胆碱是为二棕榈酸酯磷脂基胆碱或二硬脂酸酯磷脂基胆碱。
其中该不饱和磷脂质是为卵磷脂基胆碱、大豆磷脂基胆碱、人工合成不饱和磷脂基胆碱或天然不饱和磷脂基胆碱。
其中该短碳链饱和磷脂质是为二月桂酸酯磷脂基胆碱。
其中该疏水性药物是选自一群组包括维他命A酸、4-苯基丁酸及2-[(2，6-二氯苯基)氨基]苯乙酸钠。
本发明一种聚合微脂粒，其特征在于，主要包括一磷脂质双层包覆构造及一核心，该核心中包括一疏水性药物及水溶性维生素E。
其中该疏水性药物是选自一群组包括维他命A酸、4-苯基丁酸及2-[(2，6-二氯苯基)氨基]苯乙酸钠。
其中该水溶性维生素E的含量是为0.1％-5％。
其中该磷脂质双层包覆构造是由磷脂胆碱、胆固醇以及维他命E所构成。
其中该磷脂胆碱是至少一选自一由氢化天然磷脂质、长碳链饱和磷脂质、长碳链不饱和磷脂质、短碳链饱和磷脂质及以其组合者所组成的群组。
其中该长碳链饱和磷脂质是为磷脂基胆碱、磷脂基甘油、磷脂基丝氨酸或磷脂基乙醇胺。
其中该磷脂基胆碱是为氢化卵磷脂基胆碱或氢化大豆磷脂基胆碱。
其中该长碳链饱和磷脂基胆碱是为二棕榈酸酯磷脂基胆碱或二硬脂酸酯磷脂基胆碱。
其中该不饱和磷脂质是为卵磷脂基胆碱、大豆磷脂基胆碱、人工合成不饱和磷脂基胆碱或天然不饱和磷脂基胆碱。
其中该短碳链饱和磷脂质是为二月桂酸酯磷脂基胆碱。
本发明一种微脂粒的制备方法，该微脂粒包括一磷脂质双层包覆构造、一水性核心、以及一疏水性药物，该制备方法包括先将定量的TPGS溶解于适当的溶剂绝对酒精中，得到一酒精-TPGS溶液；接着将该疏水性药物维他命A酸加入该酒精-TPGS溶液中，搅拌溶解；以及将磷脂胆碱视需要添加其他的添加剂，例如胆固醇以及可抗氧化，防止因氧化反应产生的微脂粒或药物的不安定性的维他命E；依照一特定比例加入上述溶液，水合并经超音波震荡(sonication)后，得到该微脂粒。
本发明同时提供一种聚合微脂粒，主要包括一磷脂质双层包覆构造及一核心，该核心中包括一疏水性药物及TPGS。
TPGS是由d-α-tocopheryl acid succinate的酸基与polyethyleneglycol 1000进行酯化反应而得的产物，其为一水溶性的维他命E在一般条件下相当稳定且不容易水解。由于其HLB(hydrophile-lipophile balance)值介于15-19之间，是一个水溶性佳，但却可以乳化疏水性药物的界面活性剂，因此本发明实施例中选用在乙醇为溶剂中加入TPGS以期增加疏水性药物的溶解度。以维生素A酸为例，测试结果如表1所示，其中加入20％(w/w)TPGS可提高约10倍维生素A酸(简称RA)在乙醇中的溶解度。若再添加10％(w/w)油溶性维他命E不仅提供抗氧化，防止因氧化反应产生的微脂粒或药物的不安定性，更可提高RA的溶解度约17倍。
表1维生素A酸(RA)于不同溶剂中的溶解度
PBSphosphate buffer saline(自行配制混合溶液)的确定组成(Na2HPO4+NaH2PO4+NaCl)于去离子水浓度为10mM因此本发明在以微脂粒包覆维生素A酸之外，更在溶剂酒精的中加入不同比例的TPGS，用以提高维生素A酸(简称RA)RA在微脂粒水性核心中的溶解度，达到一有效剂量。
为能让审查员能更了解本发明的技术内容，特举三十六较佳具体实施例并配合
如下，其中图1是本发明实施例三、七、八、九的RA微脂粒包覆率对储存时间变化图。
图2是本发明实施例十三至二十的RA包覆率对储存时间变化图。
图3是本发明实施例二十一至二十五的RA包覆率对储存时间变化图。
图4是本发明实施例二十六至二十八的PBA微脂粒包覆率对储存时间变化图。
具体实施例方式
实施例一、大豆磷脂基胆碱(Soybean phosphatidyl choline；以下简称SPC)为主的微脂粒配方；本实施例中的配方如下表2
表2实施例一的各成分组成
先将0.1g SPC、1.12g胆固醇(Cholesterol)、0.05g维他命Vitamin E溶于绝对酒精中，搅拌溶解。
再加入0.2gTPGS和0.01gg RA于绝对酒精中，使其搅拌完全溶解。
吸取8.4mL的含2.25的甘油水溶液于hydration cell内控温在25℃的循环水，再将含有SPC、胆固醇Cholesterol、维他命VitaminE、TPGS、At-T(all-trans retinoic acid)的酒精溶液注入，进行水合一小时。
最后将制备好的多层状球体(multi-lamellar vesicles，MLVs)微脂粒进行超音波震荡sonication。溶液成微透明黄色，此即是At-T微脂粒。
实施例二至十二根据实施例一的制备方法，并依照下表3的配方制备微脂粒，各实施例的配方及性质同时列于表3中，在本实施例及后续实施例的各配方表中，溶剂10％E是指含酒精占全部溶液中体积百分比为10％的溶剂；10％IPA是指2-丙醇占全部溶液中体积百分比为10％的溶剂。
表3实施例二至十二的组成及性质
10％E10％ ethanol(v/v)in total solution.
10％IPA10％ 2-propanol(v/v)in total solution.
图1中所示为实施例三、七、八、九的药物包覆率对储存时间变化图，由图中可知，本发明以TPGS作为含RA微脂粒的成分，除了大幅提高RA的包覆率之外，亦能长时间(180天)维持稳定的微脂粒药物包覆率。
实施例十三至二十、以卵磷脂基胆碱(egg phosphatidyl choline；EPC)为主的微脂粒配方；实施例十三至二十中的微脂粒制备方法与实施例一相同，仅将SPC换成E60(纯度60％的卵磷脂基胆碱)。此八个实施例的配方组成以及微脂粒性质列如表4。
表4实施例十三至二十的组成与性质
该些实施例的结果如图2所示。图2中所示为实施例十三至二十的药物包覆率对储存时间变化图，由图中可知，本发明以TPGS作为含RA微脂粒成分除了大幅提高RA的包覆率之外，亦能长时间(180天)维持稳定的微脂粒药物包覆率。
实施例二十一至二十五实施例二十一至二十五中的微脂粒制备方法与实施例一相同，仅将实施例中的大豆磷脂基胆碱soybean PC置换为氢化大豆磷脂基胆碱(hydrogenated soy phosphatidyl choline；HSPC)与大豆磷脂基胆碱，或二者同时使用并且不使用Vitamin维他命E助溶。各实施例的微脂粒的组成与性质如表5。
表5实施例二十一至二十五的组成与性质
图3中所示为实施例二十一至二十五的药物包覆率对储存时间变化图，由图中可知，本发明以TPGS作为含RA微脂粒成分除了大幅提高RA的包覆率之外，亦能长时间(180天70天)维持稳定的微脂粒药物包覆率。
本发明各实施例所制备的RA微脂粒，经兔子实验其对皮肤的刺激性实施例一，对照Johnson&Johnson的RA药物以及瑞安大药厂的Tretinoincream，本发明RA微脂粒对皮肤的刺激性极低，证实利用TPGS作为微脂粒配方的方式有助于减低RA对于皮肤的刺激性。
实施例二十六至二十九、Soybean PC为主的微脂粒配方包覆4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid；以下简称PBA)药物。
根据实施例一的制备方法，并依照下表6的配方制备微脂粒，各实施例的配方及性质同时列于表6中。
表6实施例二十六至三十一组成与性质
图4中所示为实施例二十六至二十八的药物包覆率对储存时间变化图，由图中可知，本发明以TPGS作为含4-苯基丁酸微脂粒成分除了大幅提高药物的包覆率之外，亦能稳定微脂粒包覆4-苯基丁酸的安定性。
实施例三十、Soybean PC为主的微脂粒配方包覆2-[(2，6-二氯苯基)氨基]苯乙酸钠(Diclofenac diethylamine；简称为Diclofenac)药物。
本实施例中的配方如下表7表7实施例三十的各成分组成
先将0.042g SPC、0.02g胆固醇、0.0653g TPGS溶于0.5mL的1％2-[(2，6-二氯苯基)氨基]苯乙酸钠溶液中，利用研磨的方式将其完全溶解成膏状物。
将膏状物取出，以溶质/水＝1∶1(v/v)的比例，加入PBS溶液，在室温下搅拌一小时，进行水合。水合完毕，溶液成乳黄色，此即是2-[(2，6-二氯苯基)氨基]苯乙酸钠微脂粒。
实施例三十一至三十三根据实施例三十的制备方法，并依照下表8的配方制备微脂粒，各实施例的配方及性质同时列于表8中。
表8实施例三十五至三十七的组成及性质
从上述实施例中可发现，加入TPGS除了可以提高RA的溶解度以及微脂粒包覆率、增加微脂粒包覆RA的安定性之外，在使用不同来源的磷脂胆碱制备微脂粒时依然可以达到上述效果，可知本发明在微脂粒配方中加入TPGS的方法可以泛用至习知微脂粒配方的中，而非仅受限于实施例所提及的磷脂胆碱来源。
需注意的是，本发明的制备方法中，该酒精-TPGS溶液中，该TPGS的含量为并无限制，较佳为100.5％-50％重量百分比之间；该TPGS溶液中可因需要选择性的加入0.1-5％重量百分的维他命E该酒精-TPGS-维他命E溶液中的维他命E含量并无限制，较佳为5％-20％重量；适合本发明微脂粒的磷脂质磷脂质包括但不限于饱和磷脂基胆碱或不饱和磷脂基胆碱，如氢化天然磷脂质或长碳链饱和的磷脂质、不饱和磷脂质或短碳链饱和的磷脂质；较佳的长碳链饱和磷脂质可举例如磷脂基胆碱(phosphatidyl choline；PC)、磷脂基甘油(phosphatidylglycerol；PG)、磷脂基丝氨酸(phosphatidyl serine；PS)或磷脂基乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine；PE)。较佳的磷脂基胆碱包含，但不限于，氢化卵磷脂基胆碱(hydrogenated egg phosphatidyl choline；HEPC)，氢化大豆磷脂基胆碱(hydrogenated soy phosphatidyl choline；HSPC)；较佳的长碳链饱和的磷脂基胆碱，如二棕榈酸酯磷脂基胆碱(dipalmitoyl phosphatidyl choline；DPPC)及二硬脂酸酯磷脂基胆碱(distearyloyl phosphatidyl choline；DSPC)，或者其中任两种或两种以上的组合。不饱和磷脂基胆碱的实例包含但不限于，卵磷脂基胆碱(eggphosphatidyl choline；EPC)、大豆磷脂基胆碱(soy phosphatidylcholine；SPC)、其他人工合成不饱和PC以及天然不饱和PC；较佳的短碳链饱和磷脂基胆碱，包括但不限于如二月桂酸酯磷脂基胆碱(dilauroylphosphatidyl choline；DLPC)。
上述实施例仅是为了方便说明而举例而已，本发明所主张的权利范围自应以申请专利范围所述为准，而非仅限于上述实施例。
权利要求
1.一种微脂粒的制备方法，该微脂粒包括一磷脂质双层包覆构造及一核心，该核心中包括一疏水性药物及水溶性维生素E，其特征在于，该制备方法主要包括(1)将该该生物活性物质疏水性药物加入一含有该酒精-水溶性维生素E的溶液中，得到一混合液；以及(2)将至少一磷脂胆碱加入该、胆固醇、以及维他命E加入步骤混合液，水合并经超音波震荡后，得到该微脂粒。
2.如权利要求1所述的微脂粒的制备方法，其特征在于，其中该步骤(1)还包括该含有水溶性维生素溶液的制作步骤(1a)将水溶性维生素E溶解于酒精中，得到一酒精-水溶性维生素E溶液。
3.如权利要求2所述的微脂粒的制备方法，其特征在于，其中在该酒精-水溶性维生素E溶液中的该水溶性维生素E含量为1％-50％重量百分比。
4.如权利要求2所述的微脂粒的制备方法，其特征在于，其中该步骤(1a)之后还包括步骤(1b)将维他命E加入该酒精-TPGS溶液，而得到一酒精-TPGS-维他命E溶液。
5.如权利要求4所述的微脂粒的制备方法，其特征在于，其中该酒精-TPGS-维他命E溶液中的维他命E含量为5％-20％重量百分比。
6.如权利要求1所述的微脂粒的制备方法，其特征在于，其中该磷脂胆碱是至少一选自由氢化天然磷脂质、长碳链饱和磷脂质、长碳链不饱和磷脂质、短碳链饱和磷脂质及其组合者所组成的群组。
7.如权利要求6所述的微脂粒的制备方法，其特征在于，其中该长碳链饱和磷脂质是为磷脂基胆碱、磷脂基甘油、磷脂基丝氨酸或磷脂基乙醇胺。
8.如权利要求7所述的微脂粒的制备方法，其特征在于，其中该磷脂基胆碱是为氢化卵磷脂基胆碱或氢化大豆磷脂基胆碱。
9.如权利要求7所述的微脂粒的制备方法，其特征在于，其中该长碳链饱和磷脂基胆碱是为二棕榈酸酯磷脂基胆碱或二硬脂酸酯磷脂基胆碱。
10.如权利要求6所述的微脂粒的制备方法，其特征在于，其中该不饱和磷脂质是为卵磷脂基胆碱、大豆磷脂基胆碱、人工合成不饱和磷脂基胆碱或天然不饱和磷脂基胆碱。
11.如权利要求6所述的微脂粒的制备方法，其特征在于，其中该短碳链饱和磷脂质是为二月桂酸酯磷脂基胆碱。
12.如权利要求1所述的微脂粒的制备方法，其特征在于，其中该疏水性药物是选自一群组包括维他命A酸、4-苯基丁酸及2-[(2，6-二氯苯基)氨基]苯乙酸钠。
13.一种聚合微脂粒，其特征在于，主要包括一磷脂质双层包覆构造及一核心，该核心中包括一疏水性药物及水溶性维生素E。
14.如权利要求13所述的聚合微脂粒，其特征在于，其中该疏水性药物是选自一群组包括维他命A酸、4-苯基丁酸及2-[(2，6-二氯苯基)氨基]苯乙酸钠。
15.如权利要求13所述的聚合微脂粒，其特征在于，其中该水溶性维生素E的含量是为0.1％-5％。
16.如权利要求13所述的聚合微脂粒，其特征在于，其中该磷脂质双层包覆构造是由磷脂胆碱、胆固醇以及维他命E所构成。
17.如权利要求13所述的聚合微脂粒，其特征在于，其中该磷脂胆碱是至少一选自一由氢化天然磷脂质、长碳链饱和磷脂质、长碳链不饱和磷脂质、短碳链饱和磷脂质及以其组合者所组成的群组。
18.如权利要求16所述的聚合微脂粒，其特征在于，其中该长碳链饱和磷脂质是为磷脂基胆碱、磷脂基甘油、磷脂基丝氨酸或磷脂基乙醇胺。
19.如权利要求17所述的聚合微脂粒，其特征在于，其中该磷脂基胆碱是为氢化卵磷脂基胆碱或氢化大豆磷脂基胆碱。
20.如权利要求17所述的聚合微脂粒，其特征在于，其中该长碳链饱和磷脂基胆碱是为二棕榈酸酯磷脂基胆碱或二硬脂酸酯磷脂基胆碱。
21.如权利要求16所述的聚合微脂粒，其特征在于，其中该不饱和磷脂质是为卵磷脂基胆碱、大豆磷脂基胆碱、人工合成不饱和磷脂基胆碱或天然不饱和磷脂基胆碱。
22.如权利要求16所述的聚合微脂粒，其特征在于，其中该短碳链饱和磷脂质是为二月桂酸酯磷脂基胆碱。
全文摘要
本发明是有关于一种微脂粒的制备方法，该微脂粒包括一磷脂质双层包覆构造及一核心，该双层脂质结构包括一疏水性药物及水溶性维生素E(d－α tocopheryl polyethylene glycol 1000 succinate；TPGS)，该制备方法主要包括(1)将该疏水性药物加入一含有该酒精－水溶性维生素E的溶液中，得到一混合液；以及(2)将至少一磷脂胆碱加入该混合液中，水合并经超音波震荡(sonication)后，得到该微脂粒。
文档编号A61K9/14GK1704046SQ200410045989
公开日2005年12月7日 申请日期2004年5月28日 优先权日2004年5月28日
发明者王蔼君, 王蓓林, 陈宛珂 申请人:财团法人工业技术研究院