专利名称：紫金标提取物在制备抗病毒及抗菌药物方面的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种纯中药植物提取物的用途，尤其是涉及紫金标植物提取物在制备抗病毒及抗菌药物方面的用途。
背景技术：
紫金标(ceratostigma minus)为蓝雪科紫金标属小灌木，分布于我国西南地区，其中又以西藏自治区资源最为丰富。
据《架棚中酚类化合物的研究》——《植物学报》1998，40(11)1035-1039及《架棚化学成分的研究》——《云南植物研究》1994，16(181-84)等相关文献的记载，紫金标化学成份的分离、结构鉴定主要采用的方法如下将紫金标干燥粉未用95％乙醇浸提得到浸膏后，分别用石油醚、乙醇乙酯、正丁醇、己烷萃取，通过一定的层析溶剂配比、一系列新型分离材料(如RP-18、MCI-gel CHP20P等)及现代波谱技术(如1HNMR、13CNMR等)和化学方法，共得到23个化合物，它们是plumbasidesA-C、plumbocatechinsA和B、麦芽酚甙plumbolactoneA、maltol-0-glucoside、蓝雪醌plumbagin、槲皮素quercetin、杨梅黄素myricetin、异槲皮甙quercetin3-0-glucoside、杨梅甙myricetin-3-0-rhamnoside、蓝雪酸plumbagic acid、isoshinanolone、epiisoshinanolon、N-trans-caf feoytyramine、N-trans-furuloyltyramine、香荚兰乙酮apocynin、香荚兰酸vanillic acid、丁香酸syringic acid、没食子儿茶精gallocatechin、(+)-儿茶精(+)-atechin和1，2，6-三-O-没食子酰葡萄糖1，2，6-tri-o-galloylglucoside，其中蓝雪醌plumbagin与蓝雪酸plumbagic acid是主要成份。
虽然紫金标入药在民间就有悠久的历史，除在公元17世纪的藏医名著《晶珠本草》中有记载外，在《中医药大辞典》(1988)、《中药大辞典》(1979)、《云南中草药选》(1970)、《藏药志》(1996)、《西藏常用中草药》(1971)、《全国中草药名鉴》(1996)等书中亦有对其用途的描述，即紫金标具有通经活络、祛风湿、消炎止痛、续筋接骨之功效，主要用于治疗风湿病、跌打损伤、骨折、脉管炎、腮腺炎、慢性腰腿痛、月经不调、头痛头晕等。同时，通过西藏自治区重点科研项目(1998-71)对紫金标浸膏的抗炎、镇痛、止血作用模型的研究发现紫金标浸膏具有抑制小鼠耳水肿、抑制小鼠热板反应的效应及缩短小鼠断尾出血时间与凝血时间的作用，从而进一步证明了紫金标在祛风湿、消炎止痛、止血等方面的作用。但是，紫金标具有抑制病毒基因复制、转录及转译等多环节的作用却未曾见国内外报道。
目前临床应用的抗病毒药物虽然较多，但大多为核苷类衍生物，如ACV等，其作用靶点为病毒DNA聚合酶，它们以酶反应底物类似物的形式与正常底物竞争，直接降低或阻断病毒DNA聚合酶活性，其共同的缺点是易产生耐药毒株，抗病毒谱窄，毒副作用大，价格高昂或药理特性不理想。
发明内容
本发明的目的在于提供紫金标植物提取物在制备抗病毒及抗菌药物方面的用途。本发明对中药紫金标发挥了新的医疗用途，开辟了一个新应用领域，与现有合成药相比不但具有低毒高效的优点，而且还兼有抗病毒和抗菌的双重作用，其安全可靠，药效作用强，有很好的药用前景，且紫金标原料丰富、价廉、萃取工艺简单、制成中成药成本低，并可做成各种剂型。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下本发明的特征在于紫金标植物提取物在制备抗病毒及抗菌药物方面的用途。
所述紫金标植物提取物在制备抗病毒及抗菌药物中以单味或者复方方式应用。
所述紫金标植物提取物以其抑制病毒基因复制、转录及转译等多环节的方式作为在制备抗病毒药物中的应用。
所述紫金标植物提取物在制备抗病毒和抗菌双重功效药物中的应用。
所述的紫金标提取物以软胶囊、或硬胶囊、或滴丸、或片剂、或分散片、或颗粒剂、或注射液、或口服液、或栓剂经口服或皮肤或粘膜或直肠方式给药。
本发明的优点在于1、紫金标为纯中药，其入药的安全性很高；2、具有明显抗HSV-1(单纯疱疹病毒I型)的作用；3、抑菌、抗菌作用强，尤其对金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌耐药株、流感嗜血杆菌等有良好的抑制和杀灭作用；
4、具有抗病毒和抗菌的双重作用，有很好的药用前景；5、原料丰富、价廉、萃取工艺简单、制成中成药成本低，并可做成各种剂型。
具体实施例方式实施例1无机及有益成份含量分析将粉碎处理后的紫金标样品，用日立L-8800型氨基酸自动分析仪测试其氨基酸种类及含量值(W％)；同时参照国家卫生部的有关标准对紫金标样品的脂肪、总糖、矿物质(铁、铅、镁、钙、锌、汞、铜、砷)含量进行测定。
结果表明，受检紫金标样品中共含有18种常见氨基酸，其中以甘氨酸含量最高，达1.25E+00(单位W％)，含总糖28.3％、脂肪1.52％、钙221.4mg/kg、镁62.0mg/kg、锌0.70mg/kg、铜0.50mg/kg、铁5.42mg/kg，而有害成份的含量却十分低，其中铅＜0.10mg/kg、砷＜0.53mg/kg、汞＜0.01mg/kg，远远低于国家保健(功能)食品通用标准GB16740-1997中规定的铅、砷、汞在固体产品中的含量分别不超过2.0mg/kg、1.0mg/kg、0.3mg/kg的标准。表明紫金标入药的安全性很高。
实施例2小白鼠急性毒性试验取20只小鼠，每日一次用紫金标浸膏灌胃150g/kg(相当于原生药含量)，观察给药7日内动物的中毒情况。结果表明动物在给药15分钟后出现行动减慢、嗜睡现象，约4小时恢复正常。试验期间动物未出现死亡。试验结束时解剖动物肉眼观察亦无明显异常，测得小鼠一次灌胃紫金标醇提物最大耐受量相当于原生药150g/kg，此剂量相当于临床用药量(按每个人所用原生药克数，每人50kg计)的600倍以上，表明其毒性较小。
实施例3抗菌药效学研究试验采用MH肉汤培养基，将紫金标浸膏作连续稀释成1∶2～1∶128的浓度后，再分别加入到相应的各菌株的培养基中，观测培养基中有无细菌生长，可以测定出最小抑菌浓度(MIC)。然后，把无细菌生长的培养基液，转种到平板培养基，观测平板培养基中有无细菌生长，可以测定出最小杀菌浓度(MBC)。
结果表明紫金标浸膏在抗菌方面表现出了较强的作用，对金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌耐药株、流感嗜血杆菌等有良好的抑制和杀灭作用，其抑菌MIC、MBC分别达1∶32及1∶16。
实施例4抗病毒药效学研究试验1、体外药效学试验以HSV-1攻击Vero细胞为细胞模型，采用CPE抑制法和MTT法研究了紫金标流浸膏的体外抗HSV-1的药物效应。实验证明紫金标与ACV对HSV-1的治疗指数无显著性差异，同时用透射电镜观察发现用625mg·L-1的紫金标给药后病毒被明显抑制。体外试验表明紫金标控制在无毒剂量范围时有抗HSV-1效果，剂量越大作用越明显，并且有直接杀灭病毒颗粒、阻断病毒侵入细胞和抑制病毒在细胞内复制的作用。
2、体内药效学试验通过对小鼠进行HSV-1的角膜局部接种、尾静脉全身接种制成两种HSV-1致病模型。
A、单纯疱疹性角膜炎模型用4号针头在小鼠右眼角膜上皮划“#”字，滴HSV-1病毒悬液(TCID50＝105)1滴，闭眼按摩30s，左眼对照，每日滴药3次。接种36h后，滴加2％荧光素，用放大镜观察角膜病变情况。每日记录角膜病变面积。
B、小鼠尾静脉接种HSV-1感染模型70只小鼠分为七组，每组10只。试验组从尾静脉注射HSV-1后，第二天开始皮下注射紫金标药液，共治疗10天；分别于接种后的第2、4、8、12、16、20、30天每组处死1只，于无菌条件下取肝脏、肾脏、脾脏、心脏和脑组织。脏器组织一部分放入10％福尔马林溶液中，用来做常规病理组织切片(HE染色)。无毒剂量的紫金标可不同程度减轻脏器的病理变化，高剂量组(0.3g/kg/d)明显减少或消除脏器内的病毒抗原。实验表明紫金标可减轻脏器的病理变化，明显减少或消除脏器内的病毒抗原。
通过实验发现，紫金标稀释液滴眼的剂量为0.2mg/只/天时病变面积减少缓慢；剂量为0.4mg/只/天病变面积减少较快；用最大无毒剂量0.8mg/只/天来治疗，病变面积减少最快，其疗效仅比ACV滴眼药略微逊色。说明紫金标对HSV-1局部感染同样有效，对疱疹性角膜炎有治疗作用。由此说明紫金标对病毒HSV-1有明显的对抗作用，其效果与传统抗病毒药物无环鸟苷1mg.ml-1相似。虽然紫金标为有毒中药，但当其小鼠皮下注射的剂量低至0.3g/kg/d时，临床和病理方面均未出现异常，由此提示紫金标在抗病毒领域具有一定的开发应用前景。
实施例5药理学试验1996年Montgomery[10]等人证实了易感细胞表面特异性受体HVEM直接与HSV-1糖蛋白gD特异结合介导HSV进入宿主细胞。本试验通过自制的对应于HSV-1糖蛋白gD基因序列的DNA探针，进行了斑点杂交和Northern杂交，发现了不同浓度的紫金标对HSV-1糖蛋白gD基因复制和转录的影响，同时经RT-PCR和细胞靶片的原位杂交对其作了进一步的验证。
A、蚀斑法证实用625mg·L-1紫金标预处理细胞，可显著抑制HSV-1对Vero细胞的吸附；扫描电镜进一步证实用625mg·L-1紫金标预处理细胞，可显著抑制HSV-1对Vero细胞的吸附。
B、自制地高辛gD基因DNA探针进行斑点杂交，结果显示紫金标对HSV-1gD基因复制有抑制作用；根据细胞DNA与HSV-1DNA浮力密度不同，进一步用氯化铯密度梯度法与3H-TdR掺入法直观证实随着紫金标浓度的增加，HSV-1DNA峰逐步降低，40mg·L-1的紫金标可64.88％抑制HSV-1DNA的合成，625mg·L-1的紫金标可96.54％抑制HSV-1DNA的合成，由此说明紫金标对HSV-1DNA的合成有明显的选择性抑制作用。
RT-PCR和Northern杂交的结果均显示紫金标能够抑制HSV-1糖蛋白gD mRNA的表达。细胞靶片的原位杂交结果显示不同剂量紫金标作用的HSV-1感染组，其糖蛋白gD mRNA的表达低于阳性对照组，且随药物浓度的增加其抑制率明显增高。HSV-1通过蔗糖密度梯度的离心纯化，对纯化后的HSV-1经对流免疫电泳后，用3H-UTP掺入法证实紫金标能明显抑制HSV-1体外RNA的合成。
权利要求
1.紫金标植物提取物在制备抗病毒及抗菌药物方面的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述紫金标植物提取物在制备抗病毒和抗菌双重功效药物中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述紫金标植物提取物在制备抗病毒及抗菌药物中以单味或者复方方式应用。
4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述紫金标植物提取物以其抑制病毒基因复制、转录及转译等多环节的方式作为在制备抗病毒药物中的应用。
5.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的紫金标提取物以软胶囊、或硬胶囊、或滴丸、或片剂、或分散片、或颗粒剂、或注射液、或口服液、或栓剂经口服或皮肤或粘膜或直肠方式给药。
全文摘要
本发明公开了紫金标植物提取物在制备抗病毒及抗菌药物方面的用途，它以抑制病毒基因复制、转录及转译等多环节的方式作为在制备抗病毒药物中的应用，其抑菌、抗菌作用强，尤其对金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌耐药株、流感嗜血杆菌等有良好的抑制和杀灭作用，具有抗病毒和抗菌的双重作用，有很好的药用前景；同时，其原料丰富、价廉、萃取工艺简单，制成中成药成本低，并可做成各种剂型。
文档编号A61P31/04GK1631422SQ20041008140
公开日2005年6月29日 申请日期2004年12月7日 优先权日2004年12月7日
发明者李晖, 贾文祥, 陈恬, 蒋思萍, 陈金瑞, 张再容 申请人:西藏自治区高原生物研究所