粘蛋白合成抑制剂的制作方法

专利名称：粘蛋白合成抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一些邻氨基苯甲酸的类似物和衍生物、2-氨基-烟酸的衍生物和类似物、和2-氨基-苯乙酸的类似物和衍生物。尤其是，本发明涉及它们的对映体形式、它们的制备方法、含有它们的药用组合物和它们治疗用途、尤其是，用于调节粘蛋白合成和化合物在控制与疾病相关的粘蛋白过量生成中的治疗应用，所述疾病例如包括哮喘、慢性支气管炎、炎性肺病、囊性纤维化、急性或慢性呼吸感染疾病、慢性阻塞性肺病和慢性胃肠道疾病。
背景技术：
众所周知气道上皮通过粘液纤毛系统和机械屏障组织在构成气道防御机制中起必需的作用。近来研究表明，气道上皮细胞(AEC)可被激活以产生和释放生物介质，该介质在多种气道紊乱的发病机理是重要的(Polito和Proud，1998；Takizawa，1998)。有证据表明，在慢性气道病症如哮喘、慢性支气管炎、肺气肿、和囊性纤维化中上皮组织是根本性地失调。(Holgate等人，1999；Jeffery PK，1991；Salvato，1968；Glynn和Michaels，1960)。
这些气道病症的特点之一是由AEC的粘液的过量生成。粘液的主要大分子成分是被称为粘蛋白的大糖蛋白。近来，至少7种人类粘蛋白的分子结构得到测定。已知粘蛋白转录子是不同种类的，其基因间无序列同源性(Voynow和Rose，1994)，尽管它们在整体所有重复结构上相似。
已知有毒的刺激物能活化AEC。这些刺激物从过敏疾病的抗原到药物或环境污染物、烟草的烟、和与慢性阻塞肺病的形成相关的感染剂。AEC活化导致铁运输的改变、睫状颤动的变化、和粘蛋白增加的产量和分泌导致增加的粘液。在对AEC活化的反应中产生的介质包括促进炎症细胞流入的趋化因子(Takizawa，1998)。这些炎症细胞能依次产生可能损伤AEC的介质。AEC的损伤刺激细胞内增生(杯状细胞和黏膜下层腺细胞增生)，其导致膨胀的和前-炎症产物的连续源头，包括蛋白酶和使得气道壁重塑的生长因子，这种重塑导致对肺的破坏和功能丧失(Holgate等人，1999)。
粘液的过量生成和其生理化学特性的改变能导致多种方面的肺部病症。过量产生的粘蛋白对生理粘液纤毛清除的破坏，能导致粘液堵塞、空气滞留、和肺膨胀不全，其通常由感染而更加恶化。
哮喘是一种慢性阻塞肺部病症，表现为渐增的流行性和严重性(Gergen和Weiss，1992)。估计人群中30-40％患有特应性过敏，而人群中15％的儿童和5％的成人患有哮喘(Gergen和Weiss，1992)。
哮喘中，由抗原活化免疫系统导致过敏性炎症。当这种类型的免疫活化发生时通常伴有肺部炎症、支气管高反应性(hyperresponsiveness)、杯状细胞和黏膜下层腺细胞增生、粘蛋白过量生成和分泌过多(Basle等人.，1989)(Paillasse，1989)(Bosque等人.，1990)。伴有杯状细胞和黏膜下层腺细胞增生的粘液过量生成和堵塞是哮喘病症的重要部分，并在对轻微哮喘和因哮喘而死的个体的气道检查中已有描述(Earle，1953)(Cardell和Pearson，1959)(Dunnill，1960)(Dunnill等人，1969)(Aikawa等人，1992)(Cutz等人，1978)。在这种反应中某些炎症细胞是重要的，包括T细胞、抗原递呈细胞、产生IgE的B细胞、结合IgE的嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。这些炎症细胞在过敏炎症位点累积，它们释放的有毒产物导致对AEC和与这些紊乱相关的其它组织的破坏。
在上述提到的相关专利申请中，申请人已经证明，白介素-9(IL9)、它的受体和受IL9影响的活性是对特应性过敏、哮喘和相关紊乱中的合适介入治疗目标。过敏原导致介质从肥大细胞的释放一直认为是过敏反应中重要的起始事件。IL9起初鉴定为肥大细胞生长因子，已经证明IL9上调肥大细胞蛋白酶的表达，所述蛋白酶包括MCP-1、MCP-2、MCP-4(Eklund等人，1993)和粒酶B(Louahed等人，1995)。因此，IL9表现为在肥大细胞增生和分化中起作用。而且，IL9上调高亲和性IgE受体α链的表达(Dugas等人，1993)。此外，体外研究和体内研究都表明IL9加强IgE从原始B细胞的释放(Petit-Frere等人，1993)。
近来，IL9表现为刺激粘蛋白合成并可能负责过敏气道疾病中肺液的50-60％的粘蛋白-刺激活性(Longpre等人，1999)。与来自背景品系的鼠相比，在IL9转基因鼠中粘蛋白合成和粘液过量生成得到显著上调IL9在体外和体内特异地上调MUC2和MUC5AC基因和蛋白(Louahed等人，2000)。而且，在哮喘的动物模型中，IL9的中和抗体完全抑制抗原刺激的反应中的粘蛋白的上调(Mclane等人，2000)。
当前哮喘治疗有许多缺点。主要的治疗药物，β-受体激动剂，减轻症状从而短暂地提高肺功能，但即不能作用于潜在的炎症也不能抑制粘蛋白生成。此外，持续地使用β-受体激动剂导致脱敏作用，其能降低它们的效力和安全性(Molinoff等人，1995)。能减轻潜在的炎症并从而减少粘蛋白生成的药物，例如抗-炎症类固醇，有其自身的从免疫抑制到骨质流失(bone loss)一系列缺点(Molinoff等人，1995)。
慢性支气管炎是另一种形式的慢性阻塞肺部病症。近5％的成人患有这种肺部病症。慢性支气管炎定义为慢性的痰过量生成。粘液的过量生成通常伴有导气道的炎症。包括中型粒细胞和巨噬细胞的炎症细胞的介质可能伴有在这种病症中粘蛋白基因表达的增加(Voynow等人，1999；Borchers等人，1999)。粘液生成的增加伴有气道阻塞，这是这种肺部病症的主要特征之一。治疗是主要对症的并集中于控制感染和阻止肺功能的进一步丧失。减充血剂、祛痰药和这些药剂的组合，这些通常用于治疗支气管炎症状，不认为能改变粘蛋白生成。粘液溶解剂可促进粘液纤毛清除并产生症状缓解，该缓解通过降低气道分泌物的粘度和/或弹性但不能抑制粘蛋白合成或粘液过量生成(Takahashi等人，1998)。
囊性纤维化(CF)是另一种影响气道和胃肠系统的疾病，伴有导致气道阻塞和随后吸入的致病微生物的移生和感染的粘稠分泌物(Eng等人，1996)。DNA水平在CF肺中显著升高并能增加痰的粘度。尽管重组雾化脱氧核糖核酸酶(DNAse)是对这些病人有益处，然而对病理性粘液的过量生成没有有效的治疗。这样，在本领域对识别药物有特定的未满足的需要，所述药剂能抑制CF中气道上皮细胞的粘蛋白过量生成。除了粘蛋白分泌导致的气道阻塞之外，CF病人也患有胰腺管的黏液堵塞，其阻止消化酶向GI道的输送。结果是吸收障碍综合症、脂肪痢和腹泻。
慢性非过敏性窦炎是通常伴有数量和质量上的黏液生成的改变，其促进所述疾病。这些改变包括形成粘蛋白的胶如MUC2、MUC5A/C和MUC5B的分泌过多。此外，患有慢性窦炎的病人时常主诉粘液状的或粘液浓性的鼻溢。近来的研究表明，慢性窦炎中的分泌过多可能是此处粘蛋白合成增加的结果(Shinogi等人，Laryngoscope 111(2)240-245，2001)。
尽管粘液过量生成是多种慢性阻塞肺部病症的特征之一，本领域缺少任何阻滞伴有这些肺部病症的粘蛋白的合成或过量生成的方法。因此，在本领域对抑制粘蛋白的过量生成和使这些病人的分泌物变少以促进粘液纤毛清除和维持肺的功能有特定需要。
发明概述本发明的一个方面是涉及选自对映体纯的或光学富含的(+)-他尼氟酯(talniflumate)和(-)-他尼氟酯、其前药(prodrug)、及所述化合物和前药的药物学可接受的盐的化合物。
本发明的一个方面涉及治疗患伴有粘蛋白合成或分泌的疾病的患者的方法，包括向患者施用有效量的药用组合物，所述药用组合物包括对映体纯的或光学富含的(+)-他尼氟酯和(-)-他尼氟酯、其前药、及所述化合物和前药的药物学上可接受的盐。
在一个实施方案中，粘蛋白生成是氯通道依赖性的。优选地，氯化物通道是钙活化的并且是CLCA氯通道。
在一个实施方案中，药用组合物是由吸入而施用的。在一个优选的实施方案中，组合物是可被雾化的液体的形式，或一种粉末。
在一个实施方案中，治疗患伴有粘蛋白合成或分泌的疾病的患者的方法，包括向患者施用有效量的药用组合物，所述药用组合物包括对映体纯的或光学富含的(+)-他尼氟酯和(-)-他尼氟酯、其前药、及所述化合物和前药的药物学上可接受的盐，进一步包括至少一种另外的治疗剂。优选的治疗剂包括祛痰药、粘液溶解剂、抗生素和减充血剂。在优选实施方案中，祛痰药是愈创甘油醚。
在本发明的另一个方面，所述药用组合物进一步包括至少一种赋形剂，其选自表面活性剂、稳定剂、吸收加强剂、芳香剂和药物上可接受载体。在优选实施方案中，稳定剂是环状糊精，而吸收加强剂是壳聚糖。
在本发明的另一个方面，疾病状况选自慢性阻塞肺部疾病(COPD)、炎症肺病、囊性纤维化和感染性疾病。在一个优选实施方案中，COPD是选自肺气肿、慢性支气管炎和哮喘。
在本发明的另一个方面，所述药用组合物配制为由吸入方式输送至肺部，其包括有效降低粘蛋白合成或分泌的量的对映体纯的或光学富含的(+)-他尼氟酯和(-)-他尼氟酯、其前药、及所述化合物和前药的药物学上可接受的盐。在一个优选的实施例中，所述药物组合物包括(+)-他尼氟酯、(+)-他尼氟酯衍生物、其盐或其前药。在优选实施方案中，所述药用组合物进一步包括至少一种祛痰药、粘液溶解剂、抗生素或减充血剂。
本发明的另一个方面是涉及包括对映体纯的或光学富含(+)-他尼氟酯和(-)-他尼氟酯、其前药、及所述化合物和前药的药物学上可接受的盐的药用组合物的吸入装置。
在本发明的另一个方面，配制包括对映体纯的或光学富含(+)-他尼氟酯和(-)-他尼氟酯、其前药、以及所述化合物的盐和前药的药物学上可接受的盐的所述药用组合物以提高其生物利用度。在优选实施方案中，将所述组合物微粉化。
本发明的另一个方面涉及慢性窦炎患者的治疗方法，其包括向患者施用包括有效量的对映体纯的或光学富含(+)-他尼氟酯和(-)-他尼氟酯、其前药、以及所述化合物和前药的药物学上可接受的盐的药用组合物。
附图简要说明

图1表示NFA对粘蛋白生成的作用。NFA抑制剂在体外阻滞粘蛋白过量生成。
图2表示NFA和多种化合物在活化的Caco2细胞中抑制粘蛋白过量生成的能力。此图表示芬那酯(fenamate)在活化的Caco2细胞中抑制粘蛋白生成。
图3表示用NFA治疗活化的Caco2细胞系对它们的存活度无影响。此图表示NFA不影响上皮细胞增生。
图4表示对上皮细胞的趋化因子嗜酸性细胞趋化因子(eotaxin)生成的抑制。此图表示NFA阻滞上皮细胞的活化包括趋化因子生成。
图5表示与磷酸缓冲盐(PBS)相比，气管内施用NFA抑制抗原-诱导的气道高反应性(Af+NFA)。此图表示NFA阻滞上皮细胞的抗原反应包括气道高反应性。
图6表示气管内施用NFA的结果。此图表示NFA减少体内的抗原-诱导的肺嗜酸性粒细胞。这可由比较在NFA(Af+NFA)存在时以曲霉菌(Aspergillus)活化后的嗜酸性粒细胞与在NFA磷酸缓冲盐(Af+PBS)存在时活化后的嗜酸性粒细胞而看出。
图7表示与磷酸缓冲盐(PBS)相比气管内施用NFA对抗原-诱导的粘液(粘蛋白糖-配体)增加(Af+NFA)的结果。此图表示由于暴露鼠肺的抗原，NFA阻滞增加粘蛋白表达。
图8表示与对照FVB鼠相比，IL9转基因鼠在气道中组成型地过量生成粘蛋白。
图9表示与背景品系(FVB/NJ)的鼠相比，IL9转基因鼠肺里组成型地过量生成粘蛋白，该鼠伴有特异性上调的MUC2和MUC5AC稳定态转录物。此图表示在IL9转基因鼠肺里特定粘蛋白基因是上调的。
图10表示抗-IL-9抗体在暴露于抗原的鼠肺中对粘蛋白过量表达的作用。此图表示中和的IL-9抗体在暴露于抗原的鼠中阻止粘蛋白过量表达。
图11表示阻滞粘蛋白生成的通式I化合物，其中X1至X9是独立地选自碳、硫、氧和氮；R1至R11是独立地选自氢、烷基、芳基、三氟甲基、取代烷基、取代芳基、卤素、卤代烷基、卤代芳基、环烷基、羟基、烷基醚、芳基醚、胺、烷基胺、芳基胺、烷基酯、芳基酯、烷基氨磺酰、芳基氨磺酰、硫羟、烷基硫醚、芳基硫醚、烷基砜、芳基砜、烷基亚砜、芳基亚砜或氨磺酰；R1和R2、或R2和R3、或R3和R4、或R4和R5、或R6和R7、或R7和R8、或R8和R9与它们相连的原子一起形成环烷基环、芳基环或杂芳基环；Y是一个取代基选自C(O)R(其中R是选自烷基、膦酸根、苯乙烯基、和3H-异苯并呋喃-1-酮-3-氧基和3H-异苯并呋喃-1-酮-3-基的取代基)、氢、羧基、烷基羧基、硫酸酯基、磺酸酯基、磷酸酯基、膦酸酯基、羧酸的酰胺、羧酸的酯、磷酸的酰胺、磷酸的酯、磺酸的酰胺、磺酸的酯、膦酸的酰胺、膦酸的酯、氨磺酰、膦酸酰胺(phosphonamide)、四唑和羟肟酸；R11和Y可以形成环状氨磺酰；Z是选自氧、氮、硫、碳、亚砜和砜，需要理解的是当所述原子是硫、亚砜或砜时，基团R10和R11不存在，而当所述原子是氮时，只有R10存在；m是0或1；而且n是1或2，其中所述的通式为I的化合物降低患者的粘蛋白合成或粘蛋白水平。
图12表示hCLCA1在NCI-H292细胞中诱导的粘蛋白表达。
图13表示在过量表达hCLCA1的NCI-H292细胞中粘液的过量生成。
图14表示他尼氟酯对粘蛋白产生的抑制。
图15A&B表示如果口服他尼氟酯对鼠粘蛋白过量产生的抑制。图15A表示用烟色曲霉菌(Aspergillus fumigatus)敏化并允许接触通常的鼠食(chow)的鼠肺(标为H&E)的一部分。图15B表示用烟色曲霉菌(Aspergillus fumigatus)敏化并允许接触通常的含有他尼氟酯的鼠食的鼠肺(标为H&E)的一部分。
图16表示如果口服他尼氟酯对鼠肺中嗜酸性粒细胞的抑制。此图表示为AHR373此图表示他尼氟酯鼠食对烟色曲霉菌(Aspergillus fumigatus)敏化的BAL的B6D2F1/J雄性鼠的效果。
图17表示尼美舒利抑制MUC5A/C分泌。
图18表示MSI-2079抑制MUC5A/C分泌。
图19表示MSI-2079的结构。
图20表示他尼氟酯对CF鼠的效果。
图21表示MSI-2214-2217的结构。
图22表示他尼氟酯对脂磷壁酸依赖性(lipoteichoic acid)的MUC2诱导的效果。
图23是氯化物电流在表达hCLCA1的细胞中作为电压的功能图。
图24是他尼氟酯的两种对映体的第一次色谱鉴定。
图25表示他尼氟酯的对映体。
图26表示他尼氟酯对映体在ELLA细胞中对MUC5AC的效果。
图27表示他尼氟酯对映体在Alamar Blue Assay中的效果。
发明详述本发明部分源于发现肺部非纤毛上皮细胞的活化所致粘液过量生成是由诱导包括MUC2和MUC5AC的粘蛋白基因造成的。因此，本发明的一个方面是抑制上皮细胞活化。对上皮细胞活化的抑制下调了趋化因子产生、支气管反应性和粘蛋白基因表达及从而作为结果提供化学保护(chemoprotection)。降低或抑制上皮细胞活化并从而下调炎症的毒性刺激和粘蛋白合成或粘蛋白水平的分子，是本发明的一部分。
降低粘蛋白合成或水平的药物如此处描述的，本发明的制剂和组合物包括能降低粘蛋白合成或水平、或在某些方式降低粘蛋白的过量生成的药物。如在此处使用的，“降低”定义为粘蛋白水平、活化、功能、稳定性、或合成的下调。优选的药物降低粘蛋白依赖的氯通道的水平、活化、功能、稳定性、或合成。如在此处使用的，“氯化物通道”是指，但并不限于，ICACC氯通道和WO99/44620里所指的相关通道，其在这里以其全部引入作为参考。符合这些定义的药物通过在实施例中描述的试验筛选可用来鉴定或证明它们的活性。例如，描述于实施例7和8的体外和体内试验可用于筛选、鉴定或证明药物的活性。
本发明的优选实施方案的能降低粘蛋白合成或粘蛋白水平的化合物是通式I的化合物 其中X1至X9是独立地选自碳、硫、氧和氮；R1至R11是独立地选自氢、烷基、芳基、三氟甲基、取代烷基、取代芳基、卤素、卤代烷基、卤代芳基、环烷基、羟基、烷基醚、芳基醚、胺、烷基胺、芳基胺、烷基酯、芳基酯、烷基氨磺酰、芳基氨磺酰、硫羟、烷基硫醚、芳基硫醚、烷基砜、芳基砜、烷基亚砜、芳基亚砜和氨磺酰；R1和R2、或R2和R3、或R3和R4、或R4和R5、或R6和R7、或R7和R8、或R8和R9，与它们相连的原子一起形成环烷基环、芳基环或杂芳基环；Y是一个取代基，其选自C(O)R(其中R是选自芳基、膦酸酯基、苯乙烯基、和3H-异苯并呋喃-1-酮-3-氧基和3H-异苯并呋喃-1-酮-3-基的取代基)、氢、羧基、烷基羧基、硫酸酯基、磺酸酯基、磷酸酯基、膦酸酯基、羧酸的酰胺、羧酸的酯、磷酸的酰胺、磷酸的酯、磺酸的酰胺、磺酸的酯、膦酸的酰胺、膦酸的酯、氨磺酰、膦酸酰胺(phosphonamide)、四唑和羟肟酸(hydroxamic acid)；R11和Y可以形成环状氨磺酰；Z是选自氧、氮、硫、碳、亚砜和砜的原子，可以理解的是当所述原子是硫、亚砜或砜时，基团R10和R11不存在，而当所述原子是氮时，只有R10存在；m是0或1；而且n是1或2，其中所述的通式I化合物降低受患者的粘蛋白合成或粘蛋白水平。
在优选的实施方案中，Y是C(O)R(其中R是选自芳基、膦酸酯基、苯乙烯基、和3H-异苯并呋喃-1-酮-3-氧基和3H-异苯并呋喃-1-酮-3-基的取代基)或羧基，R1至R11是三氟甲基或烷基，而X6是碳或氮。
在另一个优选的实施例中，n＝2，一个Z是NR10，而另一个Z基团是CR10R11，其中R10是氢、R11是氨基基团，而Y是砜，这样Y与R11形成环氨磺酰。
在一优选实施方案中，能降低粘蛋白合成或水平的通式I化合物包括邻氨基苯甲酸(2-氨基苯甲酸)的类似物和衍生物。在一些优选的实施方案中，该分子可以是N-衍生的邻氨基苯甲酸。在一些优选的实施方案中，邻氨基苯甲酸的所述氨基基团可以用一个或多个基团修饰。在一些实施方案中，该基团可以是一个芳族基团。在优选的实施方案中，所述基团可以是三氟甲基-苯基基团，优选为3-三氟甲基-苯基基团，而且所述降低粘蛋白合成或水平的分子是氟芬那酸。在另一个优选的实施方案中，所述氨基基团可以由2，3-二甲基-苯基衍生，而降低粘蛋白合成或水平的分子是甲芬那酸。
本领域技术人员可以理解，邻氨基苯甲酸的其它苯基衍生物可用于本发明。在其它优选的实施方案中，苯甲酸环可以包括一个或多个取代基。在优选的实施方案中，苯甲酸环和氨基基团都可以被修饰。其它优选的实施方案，包括在苯甲酸环和连接于氨基基团的芳族基团上有取代基的分子。
在一些实施方案中，能降低粘蛋白合成或水平的通式I化合物包括2-氨基-烟酸的类似物和衍生物。在一些实施方案中，环外氨基基团可以被修饰以包括一个或多个基团。在一些优选的实施方案中，环外胺基团可用芳基基团修饰。适合的芳基基团包括，但不限于，苯基基团、修饰的苯基基团、苄基基团、修饰的苄基基团和类似物。在优选的实施方案中，芳基基团可是3-三氟甲基-苯基基团，而2-氨基-烟酸的衍生物是尼氟酸。
在一些实施方案中，能降低粘蛋白合成或水平的通式I化合物可以是2-氨基-苯乙酸的类似物和衍生物。在一些实施例中，所述氨基基团可以被修饰以包括一个或多个基团。在一些实施方案中，氨基基团可用芳基基团修饰。适合的芳基基团包括，但不限于，苯基基团、修饰的苯基基团、苄基基团、修饰的苄基基团和类似物。在优选的实施方案中，2-氨基-苯乙酸是由2，6-二氯苯基进行N-修饰，而降低粘蛋白合成或水平的分子是他尼氟酯。在另一个优选的实施方案中，他尼氟酯的两种对映体形式用于调节上皮细胞活性、上皮细胞炎症和粘蛋白合成。
他尼氟酯及其对映体形式的盐、溶剂化物、和悬浮液包括在这个实施方案中。在一些实施方案中，每种对映体基本上游离于另一种形式，或可以组合成混合物。优选地，本发明的一特定对映体含有低于10％，例如，低于5％，且在某些期望特定效果的情况下，低于1％的其相对的对映体。在其它一些实施方案中，(+)和(-)对映体的等量组合的混合物用于上皮细胞抗炎症和粘蛋白合成调节，其中混合物可含有等量的每种对映体，一种对映体低于50％的且相对的对映体比例上略高，这取决于每种对映体的期望效果。
他尼氟酯在所示的8号碳原子拥有一个手性中心，所以有分离两种立体异构体的可能。也可以理解的是，根据本发明的一种对映体，例如他尼 他尼氟酯氟酯的(+)-对映体，也可以一种基本上游离于其相应的(-)-对映体的形式使用，并且反之亦然，或以一种混合物的形式使用，其中每种对映体提供对气道或胃肠系统中活化的上皮细胞特定的的抗炎症和/或粘蛋白调节活性。
在一些实施方案中，能降低粘蛋白合成或水平的通式I化合物可以是苄氟噻嗪。
本发明的一个方面涉及具有通式I I结构的新化学实体其中 X是硫、氮、氧或CR；Y是CRR’、氧、NR6、CRR’-CRR’或CR＝CR；Z是NR6、氧、硫、CRR’或CRR’-CRR’；R1-R3是独立地选自氢、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、氨基、羟基、卤代烷基和卤素；R4是氢、
或 Q是CR、NR6、或 R5是氢或苄基；R6是氢、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、OH或卤；和R和R’是独立地氢、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、OH或卤素。
通式II化合物可用于治疗特征为产生粘蛋白的疾病的方法中。包括通式II化合物的药用组合物也如此。本发明也提供了治疗患有选自慢性窦炎、哮喘、慢性支气管炎、炎症肺病、囊性纤维化和急性或慢性的呼吸感染疾病和慢性阻塞肺病疾病的病人的方法，所述方法包括向需要这种治疗的患者施用有效量的通式II化合物。
本发明也可使用一种或多种降低粘蛋白合成或水平的上述分子的前药。如在此处定义的，前药是一种分子，其以不同于上述的一种形式施用并在患者的体内转化为所述的形式。优选的前药包括，但不限于，芬那酯的前药。一些优选的前药是降低粘蛋白合成或水平的分子的酸形式的酯。优选的酯类包括，但不限于，NFA的酯类，例如，β-吗啉代乙酯、吗尼氟酯、和2-苯并呋喃酮基酯、他尼氟酯。
定义“烷基”是指饱和的脂肪族烃类包括直链、支链或环基团。优选地，烷基基团有1至20个碳原子(无论何时此处指出的数目范围；例如，“1-20”，意味着该基团，在这种情况下的烷基基团，可含有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，直到并包括20个碳原子)。更优选地，是一个中等大小的烷基有1至10个碳原子。更加优选地，是一个低级烷基有1至4个碳原子。所述烷基基团可以是取代的或未取代的。当被取代时，每个取代基基团优选地是1个或多个单独选自卤素、羟基和膦酸酯基。
“苯乙烯基”基团是指-CH＝CH-芳基基团。
“三氟甲基”基团是指-CF3基团。
“芳基”基团是指全-碳的单环或有一个完全共轭的π-电子系统的稠环聚环(即，共用相邻碳原子的电子对的环)基团。芳基的例子是，不限于，苯基、萘基和蒽基。芳基基团可被取代或未被取代。当被取代时，每个取代基基团优选地是一个或多个选自卤、羟基、烷氧基、芳氧基(aryloxy)和烷基酯。
“卤素”基团是指氟、氯、溴和碘。
“环烷基”基团是指全-碳的单环或稠环的(即，共用相邻碳原子的电子对的环)基团，其中一个或多个环没有一个完全共轭的π-电子系统。环烷基的例子是，不限于，环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、金刚烷、环己二烯、环庚烷和环庚三烯(cycloheptatriene)。环烷基基团可被取代或未被取代。当被取代时，每个取代基基团优选地是一个或多个单独选自卤素和羟基。
如在此处使用的，“杂芳基”是指单环或在环中有一个或多个原子选自氮、氧和硫的稠合环(即，共用相邻碳原子的电子对的环)，而且此外有一个完全共轭的π-电子系统。杂芳基的例子是，不限于，吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、嘧啶、喹啉、异喹啉、嘌呤和咔唑。所述的杂芳基基团可被取代或未被取代。当被取代时，每个取代基基团优选地是一个或多个选自卤素和羟基。
“羟基”基团是-OH。
“烷基醚”基团是-O-烷基基团，其中术语“烷基”如以上定义的。
“芳基醚”基团或“芳氧基”基团是-O-芳基基团，其中术语“芳基”如以上定义的。
“胺”基团是-NH2基团或-NH-基团。
“烷基胺”基团是一个-NH烷基基团，其中术语“烷基”如以上定义的。
“芳基胺”基团是一个-NH芳基基团，其中术语“芳基”如以上定义的。
“烷基酯”基团是一个-C(O)O烷基，其中术语“烷基”如以上定义的。
“芳基酯”基团是一个-C(O)O芳基，其中术语“芳基”如以上定义的。
“烷基氨磺酰”基团是一个-SO2NH烷基，其中术语“烷基”如以上定义的。
“芳基氨磺酰”基团是一个-SO2NH芳基，其中术语“芳基”如以上定义的。
“硫羟”基团是-SH基团。
“烷基硫醚”是-S-烷基基团，其中术语“烷基”如以上定义的。
“芳基硫醚”是-S-芳基基团，其中术语“芳基”如以上定义的。
“亚砜”基团是-SO-基团。
“砜”基团是-SO2-基团。
“烷基砜”是一个-SO2烷基，其中术语“烷基”如以上定义的。
“芳基砜”是一个-SO2芳基，其中术语“芳基”如以上定义的。
“烷基亚砜”是一个-S(O)烷基，其中术语“烷基”如以上定义的。
“芳基亚砜”是一个-S(O)芳基，其中术语“芳基”如以上定义的。
“羧基”基团是-CO2H基团。
“烷基羧基”基团是-烷基-CO2H基团。
“硫酸酯基”基团是-OSO3基团。
“磺酸酯基”基团是-SO(OR)2基团。
“磷酸酯基”基团是-OPO3基团。
“膦酸酯基”基团是-P(O)(OR)2基团，其中R是氢、烷基或芳基。
“羧酸的酰胺”基团是-CO2NR’R”基团，其中R’和R”是独立地氢、烷基或芳基。
“羧酸的酯”基团是-CO2R’基团，其中R’是烷基或芳基。
“磷酸的酰胺”基团是-OPO2NR’R”基团，其中R’和R”是独立地氢、烷基或芳基。
“磷酸的酯”基团是-OPO2OR’基团，其中R’是烷基或芳基。
“磺酸的酰胺”基团是-OSO2NR’R”基团，其中R’和R”是独立地氢、烷基或芳基。
“磺酸的酯”基团是-OSO2OR’基团，其中R’是烷基或芳基。
“膦酸的酰胺”基团是-PO2NR’R”基团，其中R’和R”是独立地氢、烷基或芳基。
“膦酸的酯”基团是-PO2OR’基团，其中R’是氢、烷基或芳基。
“氨磺酰”基团是-SO2NR’R”基团，其中R’和R”是独立地氢、烷基或芳基。
“膦酸酰胺”基团是-NR’-PO3H。
“羟肟酸(hydroxamic acid)”基团是-C(O)NHOH基团。
用作粘蛋白抑制剂的特定化合物如下化合物已经制备出并已确定有粘蛋白合成抑制剂的活性。
如在实例中提供的，调节、降低或下调粘蛋白表达的药物可用于调节伴随粘蛋白产生的生物和病理学过程。
申请人已经观察到，IL9选择性地诱导粘蛋白基因产物的表达。因此，对许多抗原-诱导反应是重要的IL9多效作用部分地依赖于AEC中粘蛋白的上调。当IL9的功能被中性抗体治疗下调时，动物肺中能完全地被保护免受抗原-诱导反应。这些反应包括伴随着粘液的过量生成的支气管高反应性、嗜酸性粒细胞和支气管灌洗中的细胞数目增加、血清IgE的增加、肺中伴随炎症的组织学变化、和杯状细胞和黏膜下层腺细胞增生。IL9的下调和类似气喘的反应伴随着粘蛋白表达的下调(图10)。因此，通过下调粘蛋白生成来治疗上述反应的方法在本发明保护范围之内，所述反应是哮喘发病的基础并以伴随这种紊乱的过敏炎症为特征。
对IL9转基因鼠气道的组织学分析表明粘蛋白在非纤毛的上皮细胞中过量生成(Temann等人，1998；Louahed等人，2000)。粘蛋白在IL9转基因鼠肺中的诱导说明IL9促进这些细胞的粘液产生(见图8)。活化Caco2细胞中表达MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5B和MUC5AC的mRNA，已经生产并用于测试粘液生成的抑制剂。这些细胞能用过碘酸席夫染色反应(PAS)染色。如图1A所示，未处理的活化Caco2细胞明显地染色为PAS阳性粘蛋白糖配体。对照和活化的细胞在尼氟酸(NFA)或4，4’-二异硫氰-2，2’-二磺酸芪(DIDS)存在下培养。与未处理的细胞比较(图1D与1B比较)，抑制剂处理的活化细胞经PAS染色显示阳性染色糖配体显著减少。
随着证明了哮喘中对粘蛋白下调的治疗可能性，申请人也认识到在囊性纤维化中对粘蛋白下调的治疗可能性。患有囊性纤维化的病人特征为粘稠分泌物的肺病紊乱，其能导致气道堵塞和吸入的致病微生物的随后移生和感染(Eng等人，1996)。申请人因此提供由下调肺里粘蛋白产生而治疗囊性纤维化的一种方法。
在囊性纤维化里粘蛋白的过量产生也存在于胰腺管的堵塞，其阻止消化酶向GI道的输送而导致吸收障碍综合症、脂肪痢和腹泻。因此申请人也提供通过下调胰腺里粘蛋白产生而治疗囊性纤维化的方法。
申请人也证明在慢性支气管炎和肺气肿中对粘蛋白下调的治疗可能性。患有慢性支气管炎和肺气肿的病人特征为粘稠分泌物的肺病，其能导致气道堵塞和吸入的致病微生物的随后移生和感染(Eng等人，1996)。申请人因此提供通过下调肺里粘蛋白产生而治疗慢性支气管炎和肺气肿的方法。
如在此处使用的，受试者可以是任何哺乳动物，只要所述哺乳动物需要调节由粘蛋白生成介导的病理学和生物学过程。术语“哺乳动物”是指属于哺乳类纲的个体。本发明对治疗人类患者尤其有用。
病理学过程是指生物学过程的产生有害效果的一种类型。例如，本发明的粘蛋白过量产生可能伴随着呼吸疾病，包括慢性阻塞肺部疾病(COPD)、炎症肺病、囊性纤维化和一种急性或慢性的传染病。COPD包括，但不限于支气管炎、哮喘和肺气肿。粘蛋白过量生成也可能伴随着胃肠疾病例如归因于胆汁郁积的肝脏衰竭、胃肠堵塞、存在于囊性纤维化的吸收障碍综合症、脂肪痢和腹泻和其它紊乱。
如在此处使用的，当所述药剂降低所述过程的水平或其严重度时，药物认为是调节病理学过程的。例如，以某种方式施用药物降低或调节粘蛋白的合成、水平和/或过量产生，气道堵塞可预防或疾病的发展受到调节。
药用组合物本发明的药物能单独地提供、或与其它调节特定病理过程的药物组合提供。例如，本发明的药物能与抗哮喘药物组合施用。在另一个实施方案中，药物能与祛痰药、粘液溶解剂、抗生素、抗组胺药或减充血剂组合施用。在另一个实施方案中，药物能与表面活性剂、稳定剂、吸收强化剂、β-肾上腺受体或嘌呤受体拮抗剂或芳香剂或其它增加组合物适口性的药物组合施用。作为例子，除了活性组分以外，本发明的组分可含有诸如愈创甘油醚等的祛痰药、诸如环状糊精等的稳定剂和/或诸如壳聚糖等的吸收强化剂。任何这种药剂可用在本发明的治疗组合物中。
如在此处使用的，当药物同时施用或以药物同时起效的方式独立地施用，两种或多种药物称为组合施用。
在本发明的治疗方法中使用的化合物可以是全身施用或局部施用，这取决于要治疗的病症、特定位置治疗的需要、将要施用药物的量等考虑和类似的需要考虑的事项。例如，本发明的药物能通过非肠道、皮下、肌内、腹膜内、透皮、局部、或口腔途径施用。可选地，或同时地，由口部或鼻部途径或直接向肺部施用。在优选的实施方案中，本发明的化合物可通过吸入而施用。对吸入治疗的化合物可在用于以液体气雾剂施用的溶液中、压力定量气雾剂中，或合适形式的干粉吸入器中。施用剂量取决于接受者的年纪、健康、和体重、同时治疗的类型，如果有也取决于治疗的频率、和期望效果的性质。
在一些优选的实施方案中，本发明的药物可被制成气雾剂。药物气雾剂制剂对本领域技术人员是常规的(例如参见，Sciarra，J.in雷氏药学理论与实践(RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy)，20thEdition，Mack Publishing Company，Easton，PA)。药物可制备成溶液气雾剂、分散或悬浮干粉气雾剂、乳胶或半固体制剂。气雾剂可以用本领域技术人员熟知的任何推进系统来运输。气雾剂可以应用于上呼吸道、例如由鼻部吸入，或应用于下呼吸道或应用于两者。
在本发明的其它优选实施方案中，治疗药剂可以制成颗粒或微粉化以提高生物利用度和消化吸收。特别是，他尼氟酯可以使用本领域的标准技术制成颗粒或微粉化，所述技术包括讨论于Chaumeil，J.C.等人，MethodsFind.Exp.Clin.Pharmacol.20(3)211-215(1998)的方法。在这个过程中，本发明的他尼氟酯或其它药剂的磨碎可在常规类型的球磨机或锤磨机进行。这些步骤也可由在气态喷射微粉器的微粉化实现，其优点是不对待微粉化的物质加热。
在其它实施方案中，可以采用任何常用的局部制剂例如溶液、悬浮液、凝胶、软膏或油膏及类似物。这些局部制剂的制备详尽描述于药物制剂领域如举例说明于雷氏药学大全(Remington’s Pharmaceutical Sciences)。对局部应用，这些化合物也可以颗粒或喷涂、尤其是以气雾剂形式施用。
活性成分可通过适合全身施用的药用组合物来施用。如众所周知的，如果药物要被全身施用，它可以被配制为散剂、丸剂、片剂、胶囊、或类似物或口服的糖浆或酊剂。为了静脉内、腹膜内或损害部内的施用，化合物将制备为能由注射施用的溶液或悬浮液。在一些情况下，这些化合物制备成栓剂形式或作为以沉积在皮下或肌内注射的缓释制剂。
组合物或药物含有的有效量是将减少、降低或下调粘蛋白活化、通道的粘蛋白活化、功能、稳定或合成，包括依赖ICACC氯通道的粘蛋白活化、功能、稳定或合成。所给的有效量将因情况而改变，在一定范围内可以随着被治疗病情的严重度和所治疗病人对治疗的敏感性而变动。因此，所给有效的量将最好通过常规实验而在当时当地确定。然而，预期在根据本发明对慢性阻塞肺部障碍的治疗中，含有重量百分比0.001至5，优选大约0.01至1％的制剂，通常将构成治疗有效量。当全身施用时，每千克体重每天0.01至100毫克，但优选地大约0.1至10mg/kg/天的量将在多数情况下有治疗效果。
当由吸入施用时，每千克体重每天0.01至100毫克，但优选大约0.1至10mg/kg/天的量将在多数情况下有治疗效果。在一些情况下，一个定量气雾剂单位含有大约0.8毫克的本发明化合物，如他尼氟酯。在这种制剂中，对成年人的维持剂量是大约每次2个吸入剂量单位(大约1.6毫克)，每天两次(大约3.2毫克)。
本发明也包括含有本发明的所述化合物及药物上可接受的载体的药用组合物。药物上可接受的载体可以是无菌液体，例如水和油，油包括石油、动物或合成来源的，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油和类似物。当药用组合物静脉内或由吸入施用时水是优选的载体。盐或磷酸缓冲盐也可以采用作为载体，尤其是由气雾剂吸入。乳酸盐溶液和含水的葡萄糖以及甘油溶液也能可用作液体载体，尤其是为注射液。适合的药物载体描述于书雷氏药学理论与实践(Remington，The Science and Practice ofPharmacy)，20thEdition，Mack Publishing Company，Easton，PA中。
除了药物学活性的药物，本发明的组合物可以含有适合的药物上可接受的载体，所述载体包括能促进活性化合物进入制剂的过程的赋形剂和辅助物，所述制剂能用于药物上向作用位点传输。适合非肠道施用的制剂包括活性化合物在水溶形式的含水溶液，例如水溶盐。此外，作为合适的含油的注射悬浮液的活性化合物的悬浮液可被施用。适合的亲脂溶剂或媒介包括油脂例如芝麻油、或合成的脂肪酸酯例如油酸乙酯或甘油三酯。含水的注射悬浮液可以含能提高悬浮液的粘度的物质，所述悬浮液包括例如羟甲基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖。任意地，所述悬浮液也可以含有如上所述的稳定剂。脂质体也能被用于包裹所述药剂以运输进入细胞。
如以上讨论的，根据本发明的用于全身施用的药物制剂可配制成以肠道、非肠道或局部施用。事实上，所有三种类型的制剂可以同时使用以达到活性成分的全身施用。
用于口服的合适制剂包括硬或软明胶胶囊、剂丸、片剂、包括包衣片、酊剂、悬浮液、糖浆或吸入物和其控释形式。用于口部吸入或鼻部吸入的适合的制剂包括带有或不带有本领域中熟知赋形剂的水性溶液。
本发明的治疗或药用的组合物或制剂可与说明书和标签包装在容器、药瓶、吸入装置等中，该说明书或标签指出所述组合物或制剂能通过减轻支气管分泌、经增加黏液流动来润滑受刺激的呼吸道膜和/或促进粘性的、浓厚的粘液的减少产生和移除来促进下部呼吸道的排除。所述标签或指示也指出适应症或用法如维持此处描述的多种病症的症状缓解，所述病症包括但不限于，调节严重哮喘、慢性支气管炎、囊性纤维化、上下呼吸道感染、粘蛋白相关的胃肠道病症、和其它由呼吸道、胃肠系统或体内其它地方存在的粘性粘液的持续而并发的症状。
本发明的装置可以是任何适用于将一种或多种治疗组合物引入上部和/或下部呼吸道的装置。在一些优选的实施方案中，本发明的装置可以是定量吸入器。该装置可以适用于本发明的治疗组合物，以均匀分散的液体、泡沫或粉末的雾形式的的运输。该装置可以使用任何本领域技术人员熟知的推进系统包括但不限于泵、液化气、压缩气和类似系统。本发明的装置典型地包括带有一个或多个阀们的容器和控制流动的调节器，药用组合物流动通过阀们。适合用在本发明的装置可见于，例如书雷氏药学理论与实践(RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy)，19thEdition，Chapter 95，pp.1676-1692，Mack Publishing Co.，Easton，PA 1995中。
本发明的操作可采用分子生物学、药物学、免疫和生物化学的常规方式和技术，这些属于本领域技术人员的普通技能。例如，见于书Sambrook等人，分子克隆实验指南(Molecular CloningA Laboratory Manual)，3ndEdition，Cold Spring Harbor Laboratory Press，2001中。
不需要进一步的描述，相信一个本领域普通技术人员使用上述的描述和下面的说明性实例，能制造和使用本发明的所述化合物和操作要求的方法。因此下述的操作例子特定地指出本发明的优选实施例，而并不应理解为以任何方式限制所述公开的范围。
合成实施例实施例1从邻氨基苯甲酸或2-氨基烟酸合成粘蛋白合成抑制剂这类粘蛋白合成抑制剂的制备通过以下方案完成 这类粘蛋白合成抑制剂的制备由以下通用方案实现。主要不同在于制备β-酮膦酸酯。制备环酐以得到含二芳基胺的类似物。从甲基酯直接制备膦酸酯的尝试结果相当差。收率不稳定且低。从靛红酸酐制备膦酸酯的结果有改进。对其它二芳基醚和硫醚类似物，甲基酯得到满意的结果。
这些化合物的通用合成方案如下
实施例3 制备β-酮膦酸酯-78℃时在TNF中制备二甲基甲基膦酸根的阴离子。丁基锂加入膦酸酯的溶液中，其中添加痕量三苯甲烷作为指示剂。用注射器缓慢加入丁基锂直到出现微弱的红-粉红色。保持反应温度在-78℃下甲基酯或酐逐滴地由添加漏斗添加到反应中。反应在-78℃下搅拌直到用薄层色谱分析法(TLC)测试不再显现酐酯。通过反复萃取膦酸酯分离到多种有机物中。由于这些化合物的极性通常需要从含水层盐析它们以获得满意的回收。有机物层用Na2SO4干燥，且真空除去溶剂。以这种方式分离的粗产物在多数情况下的纯度足以继续而不必进一步的纯化。
实施例4制备α，β-不饱和酮在THF中从酮膦酸酯里制备膦酸酯负碳离子，通常使用NaOtBu作为碱。在0℃至室温下在THF里预混合膦酸酯和碱。在碱溶解之后，添加醛之前，反应在室温搅拌大约5分钟。反应通常在室温下持续24小时至完成。
实施例5内酯和游离酸的制备内酯优选地从苯甲酸2-甲醛(carboxaldehyde)的4-甲氧苄基酯制备。内酯溶解在少量的CH2Cl2/TFA 50/50中。溶液随着反应进行，迅速呈现红-紫色。在多数例子中裂解在最初15分钟内完成。环的闭合在反应和操作(workup)中自发地进行。所述操作包括把反应内容物倒入含有H2O和适当有机物的分液漏斗中。用水反复洗涤有机物以除去大量的TFA。Na2SO4干燥有机物并过滤。真空除去溶剂。残余物通常能从任何量的溶剂中重结晶，以分离得到满意产量纯度的内酯。
如实施例1从苄基酯产生游离酸。与苄基酯的氢化作用相比，由于相对比例的烯烃氢化作用的功能，这种途径既提供内酯又提供游离酸。该反应通常在乙醇乙酸乙酯混合物回流中进行。如果甲酸用作还原剂，且碳上的钯作为催化剂，内酯只有缓慢地还原为饱和游离酸。如果在类似条件下用甲酸铵作还原剂，反应会更猛烈，而且内酯会被进一步还原为饱和游离酸，但如果烟酸酯系统存在不应该被还原。
实施例6氨磺酰类似物的制备氨磺酰类似物由实施例1和5中使用的化学类似物来制备。主要区别是氨磺酰取代2-苯甲酸甲醛的羧酸酯官能团。从邻磺酰苯甲酰亚胺通过如下表示的途径制备类似物构建单元(building block)
实施例7他尼氟酯对映体的分离这个研究的目标是通过使用普通相的手性色谱法分离，第一次鉴定他尼氟酯的立体异构体(图25)。使用多种市售的柱子，测试不同的流动相，这些流动相含有不同比例的一种或多种流动相包括己烷、氯仿、和异丙醇。
实验用材料和方法试剂己烷(Burdick和Jackson Lot BP804)、异丙醇(Burdick和Jackson，Lot BQ125)、氯仿(G.J Chemical Company，Lot 2883)、他尼氟酯参考标准(Batch E001)材料使用了下述的Phenomenex的Chirex柱。柱的尺寸是50mm×4.6mm。
流动相使用己烷、氯仿、和异丙醇以不同比例制备多种流动相。
测试样品的制备以1.1mg/ml的浓度制备他尼氟酯母液。稀释溶剂是己烷和氯仿1∶1的混合物。从这种母液制备两种不同测试浓度。一种是0.11mg/ml，另一种是0.055mg/ml。
结果他尼氟酯的分离取决于可变相组分、流动率和柱的类型。对测试的5种柱，只有OOB-3020-EO柱((S)-亮氨酸和(R)-萘基甘氨酸)得到了对(+)(-)他尼氟酯对映体的适合的分离。色谱分析图样品显示在图24。流动相由己烷∶氯仿∶异丙醇(37.5∶37.5∶24)组成。流动率是0.2mL/min。在287nM检测。注射体积是5微升。他尼氟酯的浓度是0.055mg/mL。每个峰相应的峰面积和峰高度是等强度的与注射的他尼氟酯是外消旋混合物一致。测试了其它的柱和条件，包括不同流动相条件，在每种情况下观察到单独的他尼氟酯色谱峰。
结论我们已经成功地分离了他尼氟酯的对映体。
生物学实例实施例1在为过量产生粘蛋白活化的Caco2细胞中NFA抑制粘蛋白生成表达MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5B和MUC5AC的mRNA的活化的Caco2细胞已经产生，并用于测试粘蛋白生成抑制剂。这些细胞能够用过碘酸席夫染色反应(PAS)对粘蛋白染色。如图1所示，尽管Caco2对照细胞系表现出基本的PAS染色带有分散的少量配糖体小泡(板A)，Caco2细胞的活化显著地增加PAS阳性粘蛋白配糖体的数目和强度(板B)。活化的Caco2对照细胞在尼氟酸(NFA)或4，4’-二异硫氰-2，2’-二磺酸芪(DIDS)存在下培养。在指示浓度(NFA100μm和DIDS300μm)，抑制剂处理的活化Caco2细胞的PAS染色显示与未处理的细胞比较，阳性染色粘蛋白配糖体显著减少(图1D与1B比较)。此外，在对照细胞中看到微弱染色也被抑制了(图1C与1A比较)。活化Caco2细胞的粘蛋白产生也被其它芬那酯如氟芬那酸酯(Flufenamate)(FFA)、托芬那酸酯(Tolfenamate)(TFLA)抑制和部分地被美芬那酸酯(Mefenamate)(MFA)和甲氯芬那酸酯(Meclofenamate)(MLFA)抑制(图2)。相关的化合物萘普生(Naproxen)和舒林酸(Sulindac)无效。在NFA处理的细胞中粘蛋白生成的减少不归因于细胞生理状态的显著改变，因为它们的存活度并不受影响，即使在更高的NFA浓度下(图3)。总之，结果是与这些药物抑制上皮细胞活性是一致的。而且，结果清楚地证明NFA和其类似物(图11表示的苯基邻氨基苯甲酸衍生物)、DIDS、和SIDS对粘液过量生成的直接效果，粘液过量生成是多种慢性阻塞肺部病症的特征。
实施例2通过为过量产生粘蛋白活化的Caco2细胞，NFA抑制嗜酸细胞活化趋化因子(eotaxin)产生表达并分泌嗜酸细胞活化趋化因子的活化LHL4细胞已经产生并用于测试嗜酸细胞活化趋化因子生成的抑制剂。这些细胞在体外用本领域熟知的ELISA技术(R&D Systems)对嗜酸细胞活化趋化因子测定。如图4所示，活化的LHL4细胞在缺乏(对照)或存在浓度增加的尼氟酸(NFA)中培养。注意到嗜酸细胞活化趋化因子伴随着NFA浓度的增加产生的显著抑制。在对DIDS和SIDS相同实验中，可观察到同样的抑制。Mad/C3细胞表现出NFA、DIDS和SIDS的对嗜酸性细胞趋化因子产生的抑制。总之，这些结果清楚证明NFA对嗜酸细胞活化趋化因子产生的直接效果。
实施例3在鼠哮喘模型中由NFA抑制粘蛋白过量生成证明为无病毒的雄性和雌性以下株系DBA、C57B6和B6D2F1的鼠购自国家癌症研究院(National Cancer Institute)或JacksonLaboratories(Bar Harbor ME)。IL-9转基因鼠(Tg5)和它们的亲本株系(FVB)，从Ludwig Institute(Brussels，Belgium)得到。动物被圈养在高密度的、充满颗粒的空气场所，并在实验操作前允许自由地接触食物和水3至7天。动物场所保持在22℃并且光黑暗周期被自动控制(10∶14小时光∶黑暗)。
表现型和预处理的功效动物或不预处理或者鼻部吸入烟色曲霉菌(Aspergillus fumigatus)抗原而致敏以评价对支气管高反应性的预处理、支气管肺泡灌洗(Bronchoalveolar Lavage)液的组合物、粘蛋白产生和血清IgE的效果。鼠以曲霉菌或盐，鼻内激发(在第0、7、14、21和22天)并在最后给药24小时后观察表现型。致敏鼠在0-21天以PBS或100μgNFA气管内滴注(IT)治疗。在肺中粘液产生和粘蛋白表达的抑制被用来评价NFA治疗效果，或能用于评价其它待选药物的治疗效果。为了确定支气管收缩(bronchoconstrictor)反应，在使用药物之前和过程中，在气管测定并记录呼吸系统压。鼠被麻醉并如前所述的操作。(Levitt等人，1988；Levitt和Mitzner，1989；Kleeberger等人，1990；Levitt，1991；Levitt和Ewart，1995；Ewart等人，1995)。气道的反应性由以下的一种或多种测量5-羟基色胺、乙酰胆碱、阿曲库铵(atracurium)或P物质类似物。在支气管收缩刺激之后对峰值呼吸压改变的简单可重复的测量得到使用，这种方法已经被定义为气道压力时间指数(APTI)(Levitt等人，1988；Levitt和Mitzner，1989)。APTI通过峰值呼吸压从注射时间到峰值压力回到基线或稳定水平的变化来评价。APTI可与气道阻力相比较，然而，APTI包括涉及从支气管收缩复原的额外组分。
在处死之前，在麻醉动物的下方腔静脉针刺收集全血以测量血清IgE。样品离心以分离细胞，收集血清并用于测量总IgE水平。未测量的样品立即冻于-20℃。
所有IgE血清样品使用一种ELISA抗体-三明治试验测量。微孔板由在碳酸钠-碳酸氢钠以及叠氮化钠包被缓冲液中的浓度为2.5μg/ml的鼠抗鼠IgE抗体(Southern Biotechnolo)来包被，每孔50μl。板被保鲜膜覆盖并在4℃培养16小时。板用磷酸缓冲盐中的0.05％Tween-20清洗缓冲液冲洗3次，每次冲洗培养5分钟。非特异结合位点的固定由添加200μl每孔5％磷酸缓冲盐中的牛血清白蛋白、保鲜膜覆盖并在37℃下培养2小时实现。在用清洗缓冲液洗了3次之后，重复的50μl测试样品添加到每个孔。测试样品用清洗缓冲液中的5％牛血清白蛋白稀释1∶10、1∶50和1∶100之后测定。除了测试样品之外，清洗缓冲液中的5％牛血清白蛋白中浓度从0.8ng/ml到200ng/ml的一套IgE标准(PharMingen)，也被测定以得到一个标准曲线。无样品或标准的空白被用来对读板器(背景)调零。在添加样品和标准品后，板用保鲜膜覆盖并在室温下培养2小时。在用清洗缓冲液洗3次之后，50μl二抗鼠抗鼠IgE-辣根(horseradish)过氧化物酶配体以250ng/ml的浓度添加到5％牛血清白蛋白的清洗缓冲液中。板用保鲜膜覆盖并在室温下培养2小时。在用清洗缓冲液洗3次之后，100μl底物0.1M柠檬酸盐中的0.5mg/ml o-苯二胺添加到每个孔。在反应5-10分钟后用50μl 12.5％硫酸终止，用MR5000读板器(Dynatech)测量490nm的吸光度。标准曲线通过标准IgE浓度和抗原浓度在x轴(尺度取对数)而吸光度在y轴(尺度为线性)来构建。样品中IgE的浓度从标准曲线得到。
如前所述的支气管肺泡灌洗(Bronchoalveolar Lavage)(BAL)和细胞内分析已经预先形成(Kleeberger等人，1990)。肺部组织学的研究或者在肺部在原位充满固定液和置于福尔马林中后，或者在取出并立即冻在液氮里之后。因为之前的操作可以带来人为影响，对这些研究使用不同的动物。因此，一小组动物与接受不同预处理的群体受到完全平行的对待，除了这些动物不用于支气管反应性试验之外的其它试验。在支气管反应性试验后，取出肺部并如上所述的沉入液氮中。以对本领域技术人员显而易见的方式进行冻干切片、染色和组织学检查。
NFA，能在体外阻滞上皮细胞活化和下调粘蛋白和嗜酸性细胞趋化因子的生成，治疗上用于由BAL评估上皮细胞在体内活化的重要性，对鼠的抗原-诱导的粘蛋白产生、支气管反应性、血清IgE、和气道发炎。NFA治疗的效果，对气道反应性、BAL、粘液产生、和血清IgE水平，相对于介质治疗的对应对照得到确定。图5和6表示NFA能够分别抑制气道高反应性和BAL肺部嗜酸性粒细胞，然而，对血清IgE水平没有效果。此外NFA也能抑制由暴露于抗原导致的肺中粘液过量产生(图7)。
实施例4由IL9在转基因鼠的上皮活化产生粘液过量产生和粘蛋白基因上调药物筛选模型证明为无病毒的雄性和雌性5-6周龄IL9转基因鼠(IL9TG5-FVB/N)由本实验室繁殖。5-6周龄雄性和雌性FVB/N鼠购自JacksonLaboratories(Bar Harbor ME)。动物被圈养在高密度的、充满颗粒的空气场所，并在实验操作前允许自由地接触食物和水3至7天。动物场所保持在22℃并且光黑暗周期被自动控制(10∶14小时光∶黑暗)。
表现型和治疗功效动物是显型的、无处理的、或经过接受气道内(IT)shame(介质)治疗之后24小时或与同样治疗的对照中使用同样介质的药物后24小时。鼠每天一次IT治疗，治疗3天。NFA(100μg)或IL-9的抗体施用于PBSIT。治疗反应用组织学检查(多于10个部分的PAS染色穿过治疗的和对照肺部或来自同一肺部的表达MUC1、MUC2和MUC3的Western blot)测量粘蛋白抑制来计算。
图8表示与对照FVB鼠比较IL-9转基因鼠组成型地过量表达粘蛋白。从发生在哮喘的IL-9转基因(图8)(无处理和介质对照)中组成型粘蛋白产生的高水平向FVB/N肺部(普通阳性对照)中相比而言较低的基线粘蛋白产生的降低，认为对任何药物都是显著的。在IL9转基因中粘液生成的上调是特定地伴随着MUC2和MUC5AC增加的稳定态mRNA水平，如RT-PCR所示(图9)。
中性的IL-9抗体表现为在IL9转基因肺部的粘蛋白生成上造成的明显的降低(图10)。NFA也在这个模型中降低粘蛋白生成。
实施例5他尼氟酯在鼠哮喘模型中对粘蛋白过量生成的抑制证明为无病毒的雄5-6周龄性B6D2F1鼠购自Jackson Laboratories(Bar Harbor ME)。动物被圈养在高密度的、充满颗粒的空气场所，并在实验操作前允许自由地接触食物和水5至7天。动物场所保持在22℃并且光∶黑暗周期被自动控制(12∶12小时光∶黑暗)。
表现型和治疗功效动物被任意地喂含有他尼氟酯的鼠食或常规的鼠食。动物或不致敏或者鼻部吸入烟色曲霉菌(Aspergillus fumigatus)抗原而致敏来评价对支气管高反应性的预处理、支气管肺泡灌洗(Bronchoalveolar Lavage)液组合物、粘蛋白产生和血清IgE的效果。鼠以曲霉菌或盐，鼻内激发(在第0、7、16和17天)并在最后给药24小时后观察表现型。在肺中粘液生成的抑制用来评价他尼氟酯治疗效果，或用于评价其它待选药物的治疗效果。为了确定支气管收缩反应，在使用药物之前和过程中，在气管测定并记录呼吸系统压。鼠被麻醉并如前所述的操作。(Levitt等人，1988；Levitt and Mitzner，1989；Kleeberger等人，1990；Levitt，1991；Levitt和Ewart，1995；Ewart等人.，1995)。
气道的反应性由以下的一种或多种测量5-羟基色胺、乙酰胆碱、阿曲库铵或P物质类似物。简单可重复的在支气管收缩刺激之后对峰值呼吸压改变的测量得到使用，这种方法已经被定义为气道压力时间指数(APTI)(Levitt等人，1988；Levitt and Mitzner，1989)。APTI通过峰值呼吸压从注射时间直到峰值压力回到基础线或稳定水平的变化评价。APTI可与气道阻力相比较，然而，APTI包括涉及从支气管收缩复原额外的组分。如前所述的支气管肺泡灌洗(Bronchoalveolar Lavage)(BAL)和细胞内分析已经预先形成(Kleeberger等人，1990)。肺部组织学的研究或者在肺部在原位充满固定液和置于福尔马林中后，或者在取出并立即冻在液氮里之后。在支气管反应性试验后，取出肺部并如上所述的沉入液氮中。以本领域技术人员显而易见的方式进行冻干切片、染色和组织学检查。治疗反应由测定组织学试验(对治疗和对照肺部的PAS染色)的粘蛋白抑制而测量。
他尼氟酯的口部治疗减少粘蛋白染色。图15A显示从喂食常规鼠食的致敏(Asp-sens)鼠得到的鼠肺PAS染色。图15B显示从喂食含有他尼氟酯的鼠食的致敏(Asp-sens)鼠得到的结果。图16表示由支气管肺泡灌洗(Bronchoalveolar Lavage)得到的喂食包被他尼氟酯的鼠食对肺部嗜酸性粒细胞的结果。与喂标准鼠食的致敏鼠相比，他尼氟酯减少由烟色曲霉菌(Aspergillus fumigatus)致敏的鼠中嗜酸性粒细胞的数目。
实施例6CLCA1在上皮细胞系中的过量表达增强粘蛋白生成NCI-H292细胞系，人类肺部粘液表皮样癌(mucoepidermoidcarcinoma)细胞系，购自American Type Culture Collection(ManassasVA)并培养在补充10％FBS和1％青霉素/链霉素(Gibco/BRL)的RPMI1640培养基上。细胞生长于潮湿的、含有空气的培养箱中，并在37℃补充5％CO2。过量表达hCLCA1的稳定NCI-H292细胞系由根据Fujin转染试剂盒(FujinTransfection Kit)制造商(Boehringer-Mannheim)的说明书的转染pcDNA3-hCLCA1而建立。对照细胞系NCI-H292/ctl由使用同样步骤转染pcDNA3(ctl)到NCI-H292细胞系而产生。hCLCA1基因的表达通过对pcDNA3-hCLCA1转染子的Northern分析而确定。
为了s-ELLA(特定酶联凝集素测定)，细胞被置于24-孔的组织培养板上并培养72小时以聚集。上清液被转到96-孔的板上，所述板预先包被以1μg/ml抗-MUC5A/C抗体(New marker，Fremont CA)并以1％BSA阻塞。结合MUC5A/C的抗体随后以HRP-凝集素(Sigma)检测。
为了RT-PCR从细胞系提取总RNA，根据制造商的步骤使用Trizol试剂(Gibco/BRL)。RT-PCR由反转录1μg总RNA和以PCR用适当的引物复制cDNA而实现。产物由2％琼脂糖胶电泳分离并用溴化乙锭染色观察。用于产生人类CLCA1信息的引物对为有义链5’-GGCACAGATCTTTTCATTGCTA-3’、反义链5’-GTGAATGCCAGGAATGGTGCT-3’，其产生182bp的产物。用于产生粘蛋白信息的引物在表1列出。
表1(括号中的数字是指包含在已公开的cDNA中的寡核苷酸位点)
NCI-H292细胞组成型地表达MUC1，而MUC2和MUC5A/C mRNA的表达低于基线可检测的水平。图12A表示pcDNA3-hCLCA1转染细胞Northernblot的结果，显示ICACC mRNA增加的表达水平。对来自CLCA1过量表达克隆系的完整细胞的Western blot分析表明MUC2蛋白的生成增加(图12B)。在CLCA1过量表达细胞中MUC5A/C表达显著增加，而MUC1在RT-PCR分析中无变化(图12C)。特定ELLA分析也表明MUC5A/C蛋白在CLCA1表达的克隆系中比未转染的NCI-H292细胞或以空载体转染的细胞过量生成(图12D)。
实施例7在过量表达hCLCA1的NCI-H292细胞中抑制粘液过量生成和MUC5A/C表达为了测定粘液配糖体的生成，NCI-H292/ctl和NCI-H292/hCLCA1(AAF15)细胞在24-孔的板中培养3天。细胞随后用福尔马林固定而粘液配糖体以AB/PAS染色(Sigma)显现。尽管NCI-H292对照细胞以一些分散的颗粒表现基本的PAS染色(图13A)，CLCA1的过量表达显著地增加PAS阳性的粘液配糖体的数目和密度(图13B)。为了氯通道阻碍研究，细胞被培养在存在100μM浓度的尼氟酸(NFA)(Sigma)、125或250μM浓度的美芬那酸(MFA)或12.5、25或50μM浓度的他尼氟酯、或仅有培养基的条件下。与未处理的细胞比较(图13C&D和图14的插页)，用NFA、MFA或他尼氟酯处理的细胞的PAS染色表明阳性染色粘液配糖体的显著减少。抑制剂处理的对照细胞的PAS染色表示与未处理的细胞事实上无区别(图13A&C)。
他尼氟酯(图14)、尼美舒利(图17)和MSI-2079(图18、MSI-2079的结构示于图19)的IC50值基于在表达hCLCA1的H292细胞中对MUC5A/C的抑制而确定。抑制剂以在OPTI MEM中从0到250μM的浓度处理融合细胞。分泌的MUC5A/C在添加抑制剂48小时后以实施例5中描述的ELLA检测方法来测量。IC50值用数据分析软件GraphPad Prism确定。图14的内图表示他尼氟酯处理作出反应的细胞内粘蛋白水平，通过PAS染色测定。
实施例8他尼氟酯和类似物在CF检测的效果CF鼠(CF敲除鼠和CFΔF508鼠)，不表达功能性CFTR蛋白，被断奶并靠施用渗透剂以存活。在断奶的两周内，渗透剂治疗中断，鼠或者被置于含有他尼氟酯的食物或对照食物。服用对照食物的CF鼠体重减轻10-15％并死亡(CF敲除的)或被处死(CFΔF508)因为动物在渗透剂后7天内的垂死状态。相比之下，服用他尼氟酯(大约100mg/kg每os的剂量)的CF鼠体重增加8-12％并存活至少26天，在此时他们被麻醉以分析组织病理学(见图20)。
他尼氟酯衍生物对粘蛋白产生的效果也用上面描述的方法以ELLA和IC50的变化来测定(表2)。
表2
说明(+)＝抑制(-)＝无抑制他尼氟酯的期望的类似物(见图21)通过以下表示的反应过程合成。甲基膦酸二甲基酯的阴离子由添加丁基锂向在-78℃的四氢呋喃中的膦酸酯而产生。尼氟酸甲基酯(1，MSI 2213)加入到膦酸酯阴碳离子的这种溶液中以产生β-酮膦酸酯(2，MSI 2215)。在下一个反应步骤中，(2，MSI 2215)的膦酸酯阴碳离子由添加碱叔丁醇钠到(2，MSI 2215)四氢呋喃溶液中产生。苯甲酸2-甲醛(carboxaldehyde)的苄基酯添加到含有膦酸酯负碳离子的反应容器中以产生α，β不饱和酮(3，MSI 2214)。使用甲酸和C载Pd催化剂的(3，MSI 2214)交换氢化作用得到两种产物，主要产物是期望的内酯(4，MSI 2216)和更少量的还原产物(5，MSI 2217)。
实施例9他尼氟酯在COPD检测的效果按照描述于Li等人(1998)Proc.Nat1.Acad. Sci.，USA，Vol.95，pp.5718-5723的方法对MUC2转录进行检测。简略地说，上皮细胞系转染含有来自克隆于荧光素酶(luciferase)报告基因上游的MUC2基因的启动子区域的报告构建体。转染的细胞以单独的无血清培养基(SFM)处理或，如指出的，含有来自金黄色葡萄球菌(S.aureus)的脂磷壁酸的(LTA)、腺苷(aden)、或他尼氟酯的(MSI)处理。细胞随后被裂解，裂解物中荧光素酶活性被测量(RLU)。他尼氟酯调节脂磷壁酸对MUC2的诱导(见图22)。这也是对CF的适合模型。
实施例10他尼氟酯对氯通道活性的作用图23表示对转染了表达氯化物通道的质粒的细胞膜片钳实验结果。转染了表达人类氯化物通道hCLCA1的质粒的NCI-H292细胞被膜片钳住而氯电流(I)由电压(V)范围内测量。与基线(方块)相比基本氯化物电流由添加2μM离子霉素(ionomycin)和2mM钙(圆圈)引起，表示hCLCA1的活化。添加5微摩尔的他尼氟酯(三角)产生在阳性电压氯化物电流的降低，表示通道活性的抑制。
与他尼氟酯观察到的结果相比，双氯芬酸(diclofenac)不抑制氯化物通道活性。转染了表达鼠氯化物通道mCLCA1的HEK293细胞，被膜片钳住而氯电流由电压(V，左柱状)范围内测量，结果展示于下面的表3。每一列列出在特定阳性电压并存在一种指定浓度的双氯芬酸(μM)时不存在(-)或存在(+)离子霉素和钙引起的电流。基本电流由添加2μM离子霉素和2mM钙引起一比较前2个柱一表明离子霉素/钙处理导致mCLCA1的活化。例如，在阳极电压100mV时，氯化物电流从39nA/pF增加到105nA/pF。双氯芬酸在浓度5μM到50μM之间没有观察到对通道活性的抑制。相比于不存在双氯芬酸时105nA/pF的电流，在100mV的阳极电压下5μM双氯芬酸导致115nA/pF的电流，20μM双氯芬酸导致109nA/pF的电流，50μM双氯芬酸导致106nA/pF的电流。
表3.双氯芬酸对氯化物通道活性的效果
实施例11他尼氟酯、化合物2216和化合物1-15的IC50和LD50值ELLA(酶联凝集素测定)用来确定化合物对H292克隆系15个细胞的粘液产生的抑制效果。H292克隆系15个细胞，是过量表达hCLCA1的人类肺部粘液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma)细胞系，培养至聚集，随后与增加浓度的化合物培养48小时。条件培养基被收集，MUC5AC(肺中主要的分泌粘蛋白)含量由以下所述的ELLA试验测定。96孔的微孔板由抗人MUC5AC的鼠单克隆抗体(1-13M1，NeoMarkers)包被，随后以测试条件培养基培养。结合的MUC5AC由辣根过氧化物酶-配体的大豆凝集素测定，其对高度糖苷化的蛋白如MUC5AC有高亲和力。过氧化物酶底物TMB(四甲基联苯胺碱)的变化由在450nm读数而定量。O.D.(分光度)读数对化合物浓度做图。使用线性回归(regression)推导出与载体处理的细胞相比，O.D.减少50％对应的浓度(IC50)。
为了确定化合物的细胞毒性，重要的染料Alamar Blue，其能被存活细胞中的呼吸酶如NAPDH、FADH和细胞色素还原，将其以1％的终浓度2小时添加到化合物处理的细胞中(见上述)。氧化的Alamar Blue的还原导致荧光发射，其数值(cab)能在530nm(激发波长)和590nm(发射波长)测量。LD50定义为荧光读数与载体处理的细胞相比减少50％的浓度。理想的化合物应该有低的IC50和高的LD50。
为了确定化合物对细胞内(储存的)粘蛋白的抑制效果，化合物处理的细胞以PAS染色，其是对糖蛋白染色的。因为粘蛋白是呼吸细胞中主要的糖蛋白，这种染色给出了对细胞内粘蛋白的非直接定量评估。
*3次实验的平均值实施例12他尼氟酯对映体在NCI-292/hCLCA1细胞中对粘液过量产生和MUC5A/C表达的效果为了确定粘液糖配体的产生，NCI-292/hCLCA1细胞在24-孔板上培养3天，板带有0-150μM的他尼氟酯对映体或仅有培养基(对照)。细胞随后用福尔马林固定而粘液糖配体以AB/PAS染色(Sigma)呈现。与未处理的细胞比较，在他尼氟酯对映体处理的细胞的PAS染色观察到粘液糖配体。在这个实验中两种对映体的浓度大于40μM时，可观察到对粘液糖配体产生的抑制。
他尼氟酯的对映体的IC50数值基于它们在NCI-292/hCLCA1细胞中对MUC5A/C分泌的抑制并与他尼氟酯外消旋体数值的比较。以在OPTI MEM中浓度为0-150μM的抑制剂处理融合细胞。分泌的MUC5A/C在添加抑制剂48小时后以实施例5中描述的ELLA检测来测量。IC50值用数据分析软件GraphPad Prism确定。如图26所示，相对于外消旋体IC50为36μM，对映体1不是抑制性的而对映体2IC50为40μM。对映体1定义为在分离外消旋混合物时第一个从HPLC柱中洗脱的对映体，而对映体2为较迟的洗脱化合物，如在合成实施例7中描述的。
为了确定化合物的细胞毒性，重要的染料Alamar Blue，其能被存活细胞中的呼吸酶如NAPDH、FADH和细胞色素还原，将其以1％的终浓度添加到化合物处理的细胞中2小时(见上述)。氧化的Alamar Blue的还原导致荧光发射，其数值(cab)能在530nm(激发波长)和590nm(发射波长)测量。LD50定义为荧光读数与载体处理的细胞相比减少50％的浓度。对每种对映体或外消旋体直到150μM没有LD50能被计算，因为荧光读数没有减少50％(图27)。
实施例13他尼氟酯对映体和类似物在CF检测的效果CF鼠(CF敲除鼠和CFΔF508鼠)，不表达功能性CFTR蛋白，被断奶并靠施用渗透剂以存活。在断奶的两周内，渗透药剂治疗中断，鼠或者被置于含有基本上纯的(+)或(-)他尼氟酯对映体的混合物的食物或对照食物。服用对照食物的CF鼠检查体重并当体重下降10％或更多时处死。相比之下，服用他尼氟酯异构体的CF鼠也检查体重并存活。在28天后，所有动物被处死以评估组织病理学。
本发明已经在此处用多种特定材料、步骤和实施例引作参考来描述和说明，可以理解的是本发明并不限于为此目的的材料和步骤的特定组合。这些细节的多种改变能被本领域技术人员理解的方式暗示。在本申请中引用的所有专利、专利申请和其它参考文件以其全部在此引入作为参考。
参考文献下列参考文件在此全部引入作为参考，如本申请中提到的所有参考文件、专利或专利申请
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权利要求
1.一种化合物，选自由对映体纯的或光学富含(+)-他尼氟酯和(-)-他尼氟酯、其前药、和所述化合物和前药的药物学上可接受的盐组成的组。
2.权利要求1所述的化合物，其中所述的化合物是(+)-他尼氟酯。
3.权利要求1所述的化合物，其中所述的化合物是(-)-他尼氟酯。
4.患有与粘蛋白合成或分泌相关的疾病的患者的治疗方法，包括向患者施用有效量的药用组合物，该药用组合物包括根据权利要求1的化合物。
5.权利要求4所述的方法，其中粘蛋白生成是氯通道依赖性的。
6.权利要求5所述的方法，其中所述氯通道是CLCA氯通道。
7.权利要求4所述的方法，其中所述组合物是由吸入施用。
8.权利要求7所述的方法，其中所述组合物是液体形式。
9.权利要求7所述的方法，其中所述组合物是粉末形式。
10.权利要求8所述的方法，其中所述液体为烟雾化的。
11.权利要求4所述的方法，其中所述组合物进一步包括至少一种另外的治疗剂。
12.权利要求11所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗剂选自祛痰药、粘液溶解剂、抗生素和减充血剂。
13.权利要求12所述的方法，其中所述祛痰药是愈创甘油醚。
14.权利要求4所述的方法，其中所述药合物进一步包括至少一种赋形剂，其选自表面活性剂、稳定剂、吸收加强剂、芳香剂和药学上可接受的载体。
15.权利要求14所述的方法，其中所述稳定剂是环状糊精。
16.权利要求14所述的方法，其中所述吸收加强剂是壳聚糖。
17.权利要求1所述的方法，其中所述疾病是选自慢性阻塞肺部疾病(COPD)、炎症肺病、囊性纤维化和传染性疾病。
18.权利要求17所述的方法，其中所述COPD是选自肺气肿、慢性支气管炎和哮喘。
19.一种药用组合物，其配制成以吸入方式输送至肺部，其包括有效降低粘蛋白合成或分泌的量的权利要求1的化合物、其盐、其衍生物和其前药。
20.权利要求19所述的组合物，其中所述组合物包括(+)-他尼氟酯、(+)-他尼氟酯衍生物、其盐或其前药。
21.权利要求19所述的组合物，其中所述组合物包括(-)-他尼氟酯、(-)-他尼氟酯衍生物、其盐或其前药。
22.权利要求19所述的组合物，其中所述组合物进一步包括至少一种祛痰药、粘液溶解剂、抗生素或减充血剂。
23.含有权利要求19药用组合物的吸入装置。
24.权利要求4所述的方法，其中配制所述组合物以提高生物利用度。
25.权利要求24所述的方法，其中将所述组合物微粉化。
26.一种治疗有慢性窦炎的患者的方法，包括向患者施用有效量的包含权利要求1的化合物的药用组合物。
全文摘要
本发明涉及调节粘蛋白合成的方法和化合物在控制与疾病相关的粘蛋白过量产生中的治疗应用，所述疾病例如包括哮喘和慢性支气管炎的慢性阻塞肺病(COPD)、炎症肺病、囊性纤维化和急性或慢性的呼吸感染疾病。
文档编号A61K31/4433GK1835942SQ200480023617
公开日2006年9月20日 申请日期2004年6月21日 优先权日2003年6月19日
发明者洪笑玲, 艾瑞克·查尔奎斯特, 罗伊·C·里维特, 迈克尔·麦克岚 申请人:金纳莱公司