专利名称：：产生储存稳定病毒及其免疫原性组合物的方法
技术领域：
：本发明一般涉及病毒学、病毒调配物和方法发展领域。更特定而言，本发明涉及产生储存稳定病毒组合物的方法，其中所述组合物作为冻干固体组合物或冷冻液体组合物的形式储存稳定。
背景技术：
：副粘病毒科的成员人类呼吸道合胞病毒(RSV)和副流感病毒(PIV)为在婴儿和幼儿中引起严重呼吸道疾病的主要病原体(Glezen等人，1981；Chanock等人，1992；Martin等人，1978)。两个RSV群组A组(RSV-A)和B组(RSV-B)在每年的冬天流行病期间同时传播，虽然通常注意到A组感染占主导地位(McConnochie等人，1990；Stark等人，1991)。3型PIV(PIV-3)为毛细支气管炎、肺炎和哮喘的常见起因。在婴儿和幼儿的呼吸道疾病的所有住院治疗中，RSV和PIV-3一起占到高达30％(Crowe，1995)。1型和2型PIV(PIV-1和PIV-2)也是哮喘的常见起因。也已报导RSV引起免疫受损个体和老年人的显著发病率。全球每年发生65,000,000例RSV感染，导致160,000例死亡(Robbins和Freeman，1988)。仅在美国，每年就有100,000名儿童因为由RSV感染所导致的肺炎和毛细支气管炎的严重病例而住院治疗(Glezen等人，1986；Katz，1985)。在1992年估计美国对于RSV感染儿童的住院和非卧床看护每年花费超过340,000,000美元(Wertz和Sullender，1992)。世界卫生组织(WHO)(Crowe，1995)和过敏及感染疾病国际研究所(NIAID)疫苗顾问委员会在疫苗开发上已将RSV评定为仅次于HIV，同时将有效PIV(例如3型PIV)疫苗的制剂评定为属于在疫苗开发上被视作优先的前10种疫苗内。因此，对设计能够在婴儿、幼儿、老年人和免疫受损者中预防严重呼吸道疾病的安全有效RSV和/或PIV疫苗的能力仍有强烈需求。使用活态减毒RSV和/或PIV控制呼吸道疾病为更有前途的方法之一。在过去20年里已开发出多种活态RSV菌株并在RSV-血清反应阴性儿童中加以测试。用于活态减毒RSV的最受推崇的方法为冷继代(cp)RSV、温度敏感性(ts)RSV突变体和冷继代温度敏感性(cpts)RSV突变体(Kneyber和Kimpen，2002)。诸如cpts-248、cpts-248/404、cpts-530的RSV突变体和PIV-3突变体cp-45当前正在实验室和临床试验中进行评估。除了需要确定和开发有效的活态减毒RSV、PIV或RSV/PIV组合免疫原性组合物之外，当前还需要产生储存稳定RSV和/或PIV组合物及其免疫原性组合物的方法。例如，RSV为热不稳定性病毒，其在-65℃到-86℃下储存期间于少于3个月内失活(Hambling，1964；Wulff等人，1964；Gupta等人，1996)。因此高度需要确定产生储存稳定的RSV、PIV或RSV/PIV免疫原性组合物的方法。此外，增强其他病毒免疫原性组合物的储存稳定性长期以来已被视作改良疫苗对世界卫生的影响的重要目标(Melnick和Wallis，1963；Rasmussen等人，1973；Ayra，2001；Hilleman，1989；Lemon和Milstein，1994)。因此在病毒调配物和方法发展的技术中需要产生诸如以下各病毒的储存稳定病毒组合物的方法单纯疱疹病毒、细胞肥大病毒、Epstein-Barr病毒、水痘-带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、流感病毒、脊髓灰质炎病毒、鼻病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、诺沃克病毒(Norwalkvirus)、披膜病毒、α病毒、风疹病毒、狂犬病病毒、马堡病毒(Marburgvirus)、伊波拉病毒(Ebolavirus)、乳头状瘤病毒、多瘤病毒、间质肺炎病毒(metapneumovirus)、冠状病毒、水疱性口炎病毒(vesicularstomatitisvirus)、委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelanequineencephalitisvirus)等等。
发明内容本发明广泛涉及产生储存稳定病毒组合物及其免疫原性组合物的方法。在某些实施例中，本发明涉及产生包含呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)或其组合的储存稳定病毒组合物的方法。更特定而言，在某些实施例中，本发明涉及一种或一种以上导致储存稳定病毒组合物的配方和方法步骤，其中所述病毒组合物作为冻干固体组合物或冷冻液体组合物的形式储存稳定。在一特定实施例中，本发明涉及一种或一种以上导致储存稳定RSV、PIV或RSV/PIV组合物的配方和方法步骤，其中所述RSV、PIV或RSV/PIV组合物作为冻干固体组合物或冷冻液体组合物的形式储存稳定。因此，在某些实施例中，本发明涉及产生小体积储存稳定病毒组合物的方法。在一特定实施例中，本发明涉及产生包含RSV、PIV或其组合的小体积储存稳定病毒组合物的方法，所述方法包含(a)于约60分钟或更少的时间内将病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度，和(b)冻干病毒组合物，其中冻干病毒组合物在约1℃到约10℃的储存温度下可稳定至少1年。在一实施例中，玻璃态转化温度为约-45℃的温度且在约60分钟或更少的时间内达到。在另一实施例中，玻璃态转化温度为约-35℃的温度且在约40分钟或更少的时间内达到。在另一实施例中，约-35℃的玻璃态转化温度在约20分钟或更少的时间内达到。在一实施例中，病毒组合物的体积为约0.2mL到约1.0mL。在某些实施例中，病毒组合物包含在合适的容器构件中，其中所述容器构件被进一步定义为小瓶、管或鼻喷雾装置。在一实施例中，RSV被进一步定义为A组RSV(RSV-A)、B组RSV(RSV-B)或包含一种或一种以上各群组A和B的抗原的嵌合重组RSV(RSV-AB)，且PIV被进一步定义为1型PIV(PIV-1)、2型PIV(PIV-2)或3型PIV(PIV-3)。在某些实施例中，在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配小体积储存稳定病毒组合物。在其他实施例中，所述5.0到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.25mM到约25mMN-羟乙基哌嗪-N’-2-乙烷磺酸(HEPES)。在某些其他实施例中，所述5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。在某些实施例中，在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配小体积储存稳定病毒组合物。在其他实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.25mM到约25mMHEPES。在某些其他实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。在一实施例中，包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液(pH值为约6.5到约7.8)进一步包含蔗糖、L(+)-谷氨酸、L(+)-谷氨酸单钠盐、L(+)-谷氨酸与L(+)-谷氨酸单钠盐的混合物、人类白蛋白(HA)和/或大豆蛋白胨。在其他实施例中，包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液(pH值为约6.5到约7.8)进一步包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约4.9mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约4.9mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物和约1.0g/L到约10.0g/LHA。在另一实施例中，所述约1.0g/L到约10.0g/LHA由约50g/L大豆蛋白胨替换。在其他实施例中，pH值为约6.5到约7.8的所述5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁、约0.01mM到约1mM氯化钙、约50g/L蔗糖、约0.049mM到约4.9mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约4.9mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约1.0g/L到约10.0g/LHA和约50g/L大豆蛋白胨。在一实施例中，包含约0.25mM到约12.5mMHEPES、约0.01mM到约0.5mM氯化镁和约0.01mM到约0.5mM氯化钙的10mM磷酸盐缓冲液溶液(pH值为约6.5到约7.8)进一步包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约4.9mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约4.9mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物和约1.0g/L到约10.0g/LHA。在其他实施例中，所述约1.0g/L到约10.0g/LHA由约50g/L大豆蛋白胨替换。在其他实施例中，pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液包含约0.25mM到约12.5mMHEPES、约0.01mM到约0.5mM氯化镁、约0.0lmM到约0.5mM氯化钙、约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约1.0g/L到约10.0g/LHA和约50g/L大豆蛋白胨。在一实施例中，小体积储存稳定病毒组合物的储存温度为约5℃。在某些其他实施例中，病毒组合物在约1℃到约10℃下储存1年后具有小于约1.0log的PFU损失。在另一实施例中，病毒组合物在约1℃到约10℃下储存1年后为每0.2mL至少4.0logPFU。在一实施例中，病毒组合物的冻干被进一步定义为(a)将约0.5mL到0.6mL病毒组合物放置于小瓶中并冷却到约5℃的温度；(b)将小瓶放置在冻干架上并以每分钟约-1.0℃到每分钟约-2.0℃的速率将架子温度从5℃降低到-50℃；(c)保持架子温度为约-50℃持续60分钟；(d)降低冻干室压力到0.10托并保持架子温度为约-50℃持续30-60分钟；(e)在约0.10托下以每分钟约1.0℃到约2.0℃的速率将架子温度从-50℃升高到0℃，并保持架子温度为约0℃持续约540分钟到约720分钟；(f)在约0.10托下以每分钟约0.5℃的速率将架子温度从0℃升高到15℃，并保持架子温度为约15℃持续约600分钟到约720分钟；和(g)用氮气充满小瓶并密封小瓶。在另一实施例中，病毒组合物的冻干被进一步定义为(a)将约0.5mL到0.6mL病毒组合物放置于小瓶中并冷却到约5℃的温度；(b)冷冻冻干架直到约-70℃的温度；(c)将小瓶放置在冻干架上并保持温度为约-70℃持续约60分钟；(d)降低冻干室压力到0.10托并以每分钟约1.0℃的速率将架子温度从-70℃升高到-50℃；(e)在约0.10托下以每分钟约1.0℃到每分钟约2.0℃的速率将架子温度从-50℃升高到0℃，并保持架子温度为约0℃持续约540分钟到约720分钟；(f)在约0.10托下以每分钟约0.5℃的速率将架子温度从0℃升高到15℃，并保持架子温度为约15℃持续约600分钟到约720分钟；和(g)用氮气充满小瓶并密封小瓶。在另一实施例中，本发明涉及产生大体积冻干稳定病毒组合物的方法。在一特定实施例中，本发明涉及产生包含RSV、PIV或其组合的大体积冻干稳定病毒组合物的方法，所述方法包含(a)将体积为至少50mL的液体病毒组合物放置于冻干盘中；(b)在液氮浴中冷冻病毒组合物至少20分钟；和(c)冻干病毒组合物，其中冻干病毒组合物相对于冻干前的病毒组合物具有小于约0.5log的PFU损失。在其他实施例中，大体积病毒组合物在冻干后每剂量为至少5.0logPFU。在一实施例中，玻璃态转化温度为约-35℃的温度。在另一实施例中，玻璃态转化温度为约-30℃到约-40℃的温度。在另一实施例中，冻干盘为Lyoguard冻干盘(W.L.GoreandAssociates；Newark，DE)。在一实施例中，病毒组合物的大体积为每冻干盘至少500mL。在其他实施例中，病毒组合物的大体积为每冻干盘至少1000mL。在一实施例中，RSV被进一步定义为RSV-A、RSV-B或包含一种或一种以上各群组A和B的抗原的嵌合重组RSV(RSV-AB)，且PIV被进一步定义为PIV-1、PIV-2或PIV-3。在一实施例中，在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配大体积病毒组合物。在其他实施例中，所述5.0到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约2.5mM到约25mMHEPES。在某些其他实施例中，所述5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.1mM到约1mM氯化镁和约0.1mM到约1mM氯化钙。在某些实施例中，在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配大体积病毒组合物。在其他实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约2.5mM到约25mMHEPES。在某些其他实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.1mM到约1mM氯化镁和约0.1mM到约1mM氯化钙。在一实施例中，包含约2.5mM到约25mMHEPES、约0.1mM到约1mM氯化镁和约0.1mM到约1mM氯化钙且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含蔗糖、L(+)-谷氨酸、L(+)-谷氨酸单钠盐、L(+)-谷氨酸与L(+)-谷氨酸单钠盐的混合物、人类白蛋白(HA)和/或大豆蛋白胨。在其他实施例中，包含约2.5mM到约25mMHEPES、约0.1mM到约1mM氯化镁和约0.1mM到约1mM氯化钙且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约4.9mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约4.9mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物和约1.0g/L到约10.0g/LHA。在一实施例中，所述约1.0g/L到约10.0g/LHA由约50g/L大豆蛋白胨替换。在其他实施例中，pH值为约6.5到约7.8的所述5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液包含约2.5mM到约25mMHEPES、约0.1mM到约1mM氯化镁、约0.1mM到约1mM氯化钙、约50g/L蔗糖、约0.049mM到约4.9mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约4.9mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约1.0g/L到约10.0g/LHA和约50g/L大豆蛋白胨。在其他实施例中，包含约2.5mM到约12.5mMHEPES、约0.1mM到约0.5mM氯化镁和约0.1mM到约0.5mM氯化钙且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物和约1.0g/L到约10.0g/LHA。在其他实施例中，所述约1.0g/L到约10.0g/LHA由约50g/L大豆蛋白胨替换。在其他实施例中，pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液包含约2.5mM到约12.5mMHEPES、约0.1mM到约0.5mM氯化镁、约0.1mM到约0.5mM氯化钙、约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约1.0g/L到约10.0g/LHA和约50g/L大豆蛋白胨。在某些其他实施例中，大体积病毒组合物的冻干被进一步定义为(a)在约-50℃的温度下将包含冷冻病毒组合物的冻干盘放置于预冷却到约-50℃的温度的冻干架上，并保持所述温度约60分钟；(b)降低冻干室压力到0.10托并在约0.10托下以每分钟约0.23℃的速率将架子温度从-50℃升高到-23℃；(c)保持架子温度为约-23℃持续约80小时到约100小时；(d)降低冻干室压力到0.02托并以每分钟约0.23℃的速率将架子温度从-23℃升高到15℃；(e)将架子温度保持在约15℃并保持在约0.02托，持续约30小时到约40小时；(f)在0.02托下以每分钟约0.17℃的速率将架子温度从15℃升高到25℃；(g)将架子温度保持在约25℃并保持在约0.02托，持续约10小时；和(h)用氮气充满冻干室并在氮气下将冻干盘密封于铝袋中。在其他实施例中，大体积病毒组合物的冻干被进一步定义为(a)在约-70℃的温度下将包含冷冻病毒组合物的冻干盘放置于预冷却到约-70℃的温度的冻干架上，并保持所述温度约60分钟；(b)降低冻干室压力到0.10托并以每分钟约0.23℃的速率将架子温度从-70℃升高到-23℃；(c)在约0.10托下保持架子温度为约-23℃持续约80到100小时；(d)降低冻干室压力到0.02托并以每分钟约0.23℃的速率将架子温度从-23℃升高到15℃；(e)将温度保持在约15℃并保持在约0.02托，持续约30到40小时；(f)在0.020托下以每分钟约0.17℃的速率将架子温度从15℃升高到25℃；(g)保持温度为约25℃持续约10小时；和(h)用氮气充满冻干室并在氮气下将冻干盘密封于铝袋中。在一实施例中，本发明涉及产生储存稳定冷冻液体病毒组合物的方法。在一特定实施例中，本发明涉及产生包含RSV、PIV或其组合的储存稳定冷冻液体病毒组合物的方法，所述方法包含(a)在液氮浴中平衡金属板；(b)将液体病毒组合物放置于合适的容器构件中；(c)将步骤(b)的容器插入金属固定器中；(d)将金属固定器放置于步骤(a)的经平衡金属板上持续约10分钟；(e)从金属固定器移除容器；和(f)将容器在约-20℃到约-70℃的温度下储存，其中步骤(a)到(f)后的病毒组合物在储存6个月后具有小于约0.5log的PFU损失。在某些实施例中，容器构件为鼻喷雾装置。在一实施例中，鼻喷雾装置为BDAccusprayTM鼻喷雾装置(BDMedicalPharmaceuticalSystems；FranklinLakes，NJ)。在另一实施例中，金属固定器为铝。在另一实施例中，金属固定器为不锈钢。在其他实施例中，病毒组合物在步骤(a)到(f)后为至少4.0logPFU/0.2mL。在另一实施例中，病毒组合物在-20℃的温度下储存6个月后为至少4.0logPFU/0.2mL。在其他实施例中，病毒组合物在-70℃的温度下储存6个月后为至少4.01ogPFU/0.2mL。在某些实施例中，在不存在蛋白质稳定剂的情况下调配液体病毒组合物。在一实施例中，RSV被进一步定义为RSV-A、RSV-B或包含一种或一种以上各群组A和B的抗原的嵌合重组RSV(RSV-AB)，且PIV被进一步定义为PIV-1、PIV-2或PIV-3。在某些其他实施例中，在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配液体病毒组合物。在其他实施例中，所述5.0到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.25mM到约25mMHEPES。在某些其他实施例中，所述5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。在某些实施例中，在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配液体病毒组合物。在其他实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.25mM到约25mMHEPES。在某些其他实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。在一实施例中，包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含蔗糖、L(+)-谷氨酸、L(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物。在其他实施例中，包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约75g/L蔗糖和约4.9mML(+)-谷氨酸或约4.9mML(+)-谷氨酸单钠盐或L(+)-谷氨酸与L(+)-谷氨酸单钠盐的约4.9mM混合物。在其他实施例中，包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约75g/L蔗糖和约4.9mML(+)-谷氨酸或约4.9mML(+)-谷氨酸单钠盐或L(+)-谷氨酸与L(+)-谷氨酸单钠盐的约4.9mM混合物。在另一实施例中，本发明涉及根据以下方法产生的小体积冻干病毒组合物于60分钟或更少的时间内将所述病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度并冻干病毒组合物，其中冻干病毒组合物在约1℃到约10℃的储存温度下可稳定至少1年。在另一实施例中，本发明涉及根据以下方法产生的大体积冻干病毒组合物将体积为至少50mL的液体病毒组合物放置于冻干盘中；在液氮浴中将所述病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度至少约20分钟；并冻干病毒组合物，其中冻干病毒组合物相对于冻干前的病毒组合物具有小于约0.5log的PFU损失。在另一实施例中，本发明涉及根据以下方法产生的储存稳定冷冻液体病毒组合物(a)在液氮浴中平衡金属板；(b)将液体病毒组合物放置于合适的容器构件中；(c)将步骤(b)的容器插入金属固定器中；(d)将金属固定器放置于步骤(a)的经平衡金属板上持续约10分钟；(e)从金属固定器移除容器；和(f)将容器在约-20℃到约-70℃的温度下储存，其中步骤(a)到(f)后的病毒组合物在储存6个月后具有小于约0.5log的PFU损失。在某些其他实施例中，本发明涉及免疫原性组合物，其包含根据本发明的冻干方法产生的病毒组合物，其中病毒于医药学上可接受的载剂中溶解、稀释或悬浮。在其他实施例中，本发明涉及免疫原性组合物，其包含根据本发明的方法产生的冷冻液体病毒组合物。本发明的其他特征和优势根据以下具体实施方式、其优选实施例和权利要求将显而易见。图2显示在-70℃冷冻器中冷冻调配物对比用液氮冷冻相同调配物的动力学。将液体调配物加入BDAccrsprayTM装置中并通过将铝固定器放置于经液氮冷却的金属表面上或通过将铝固定器放置于-70℃冷冻器的架子上来进行冷冻。在某些其他实施例中，本发明是针对此项技术中对储存稳定病毒组合物的产生方法的需要，所述组合物包含一种或一种以上诸如单纯疱疹病毒、细胞肥大病毒、Epstein-Barr病毒、水痘-带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、流感病毒、脊髓灰质炎病毒、鼻病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、诺沃克病毒、披膜病毒、α病毒、风疹病毒、狂犬病病毒、马堡病毒、伊波拉病毒、乳头状瘤病毒、多瘤病毒、间质肺炎病毒、冠状病毒、水疱性口炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒等等的病毒，所述组合物用于预防或改善由这些病毒中的一种或一种以上所引起的疾病的免疫原性组合物中。因此，在某些实施例中，本发明涉及产生小体积冻干病毒组合物的方法。在一特定实施例中，本发明涉及产生小体积冻干病毒组合物的方法，其中所述冻干组合物在约1℃到约10℃的储存温度下可稳定储存至少1年。在某些其他实施例中，本发明涉及产生大体积冻干病毒组合物的方法。在特定实施例中，本发明涉及产生大体积冻干病毒组合物的方法，其中所述冻干组合物相对于冻干前的组合物具有小于约0.5log的空斑形成单位(PFU)损失。在另一实施例中，本发明涉及产生冷冻液体病毒组合物的方法。在某些实施例中，本发明涉及产生冷冻液体病毒组合物的方法，其中所述组合物在储存6个月后具有小于约0.5log的PFU损失。在其他实施例中，本发明提供根据本发明的方法产生的储存稳定病毒组合物。在其他实施例中，本发明提供根据本发明的方法产生的免疫原性组合物。A.病毒组合物RSV属于肺病毒(Pneumoviridae)属，其归类于副粘病毒(Paramyxoviridae)科中。病毒粒子含有编码10种病毒蛋白质的15,222个碱基对的单链反义RNA。所述10种蛋白质包含三种包膜相关糖蛋白，其被称为G、F和SH；两种基质蛋白M和M2；三种核衣壳蛋白L、N和P；和非结构蛋白1B和1C。以G蛋白中的抗原差异且在较小程度上以F蛋白中的抗原差异为基础来鉴别两个RSV群组A组和B组。可在两个群组中发现抗原差异。G蛋白显示高度变异，其中A组与B组RSV之间仅有53％氨基酸同源性且A组RSV内的G蛋白序列有高达20％差异。下文中“A组RSV”被表示为“RSV-A”且“B组RSV”被表示为“RSV-B”。根据本发明的方法之一产生的储存稳定RSV组合物(或RSV/PIV组合)为任何减毒RSV(例如减毒RSV-A和减毒RSV-B)，其包括(但不限于)冷继代RSV突变体(cpRSV)、温度敏感性RSV突变体(tsRSV)、冷继代温度敏感性RSV突变体(cptsRSV)、冷适应RSV突变体(caRSV)、小空斑RSV突变体(spRSV)等等。例如，美国专利第5,882,651、5,932,222、5,993,824、6,077,514和6,284,254号(其各自以全文引用的方式并入本文中)描述产生各种减毒RSV表现型的方法。在一优选实施例中，本发明的减毒RSV为cptsRSV248/404(ATCCVR2452)，其也被称作LRSV-404且所有重组修饰是由包括重组RSV-AB菌株的所述菌株产生。本发明的其他例示性RSV菌株包括(a)rA2cp248/404ΔSH(也被称作LRSV-rA36)；(b)rA2cp248/404/1030ΔSH(也被称作LRSV-rA38)；(c)rA2cp248/404/1030(也被称作LRSV-rA39)；(d)rA2cp248/404ΔNS2(也被称作LRSV-rA41)；(e)rABcp248/404/1030(也被称作LRSV-rAB1)；(f)rABcp248/404ΔSH(也被称作LRSV-rAB2)；(g)rABcp248/404ΔNS2(也被称作LRSV-rAB4)；(h)cptsRSV530/1009(ATCCVR2451)和由包括诸如rA2cp530/1009ΔNS2(也被称作LRSV-rA42)、rA2cp530/1009/404(也被称作LRSV-rA43)、rABcp530/1009ΔNS2(也被称作LRSV-rAB3)和rABcp530/1009/404(也被称作LRSV-rAB6)的重组RSV-AB菌株的所述菌株产生的所有重组修饰。人类副流感3型病毒(PIV-3)为最近称作副粘病毒科的呼吸道病毒属的成员。其基因组为长度是15,462个核苷酸的单链反义RNA。PIV-3编码至少8种蛋白质核衣壳蛋白NP、磷蛋白P、非结构蛋白C、D蛋白、基质蛋白M、融合糖蛋白F、血球凝集素-神经氨酸酶蛋白HN和大聚合酶蛋白L。HN和F蛋白为包膜相关表面糖蛋白，其为主要中和抗原和保护抗原。PIV类型(例如1、2和3型)中相当的PIVHN或F蛋白之间的显著序列分歧被认为是保护性免疫力的型专一性的基础。人类副流感1型病毒(PIV-1)为副粘病毒科的呼吸道病毒属的另一成员。其基因组为长度是约15,600个核苷酸的单链反义RNA。由PIV-1编码的基因产物依次包括核衣壳蛋白NP、磷蛋白P(和由P开放阅读框编码的多种其他基因产物)、基质蛋白M、融合糖蛋白F、血球凝集素-神经氨酸酶蛋白HN和大聚合酶蛋白L。人类副流感2型病毒(PIV-2)为副粘病毒科的风疹病毒(Rubulavirus)属的另一成员。其基因组为长度是约15,654个核苷酸的单链反义RNA。由PIV-2编码的基因产物依次包括核衣壳蛋白NP、磷蛋白P、V蛋白、基质蛋白M、融合糖蛋白F、血球凝集素-神经氨酸酶蛋白HN和大聚合酶蛋白L。根据本发明的方法之一产生的储存稳定PIV组合物(或RSV/PIV组合)为任何减毒PIV，其包括(但不限于)冷继代PIV突变体(cpPIV)、温度敏感性PIV突变体(tsPIV)、冷继代温度敏感性PIV突变体(cptsPIV)、冷适应PIV突变体(caPIV)、小空斑PIV突变体(spPIV)等等。在一优选实施例中，本发明的减毒PIV为被指定为cp-45(或JScp45)的JS野生型菌株的冷继代PIV-3突变体。在其他优选实施例中，使用美国专利第6,410,023和5,869,036号(各自以引用的方式并入本文中)中所述的减毒PIV-3突变的“菜单”将PIV-3cp-45突变体进一步减毒。在其他实施例中，根据本发明的方法之一产生的储存稳定病毒组合物包括(但不限于)表1中所述的病毒或其载体中的一种或一种以上。表1病毒科表1(续)病毒科B.小体积储存稳定病毒在某些实施例中，本发明涉及产生小体积储存稳定病毒组合物的方法。在一实施例中，本发明涉及产生包含RSV、PIV或其组合的小体积储存稳定病毒组合物的方法。本发明包含于60分钟或更少的时间内将病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度(Tg)并冻干病毒组合物。为固体粉末或饼块的冻干病毒组合物在约1℃到约10℃的储存温度下可稳定至少1年。小体积储存稳定冻干病毒组合物作为单剂量或多剂量免疫原性组合物尤其有用，其中使冻干粉末储存给定时间量。病毒组合物的“小体积”介于约100μL到约5mL之间。在某些实施例中，小体积病毒组合物介于约200μL到约1mL之间。在一实施例中，病毒组合物的体积为500μL。因此在某些实施例中，小体积病毒组合物在合适的容器构件中冷冻并冻干。与小体积病毒组合物相关的合适容器构件通常为可经受住冷冻及冻干温度和真空压力的容器。例如，用于产生小体积储存稳定组合物的合适容器构件为小瓶、管、注射器、两阶段注射器或鼻喷雾装置。例如参见美国专利第5,489,266、5,732,837和4,084,330号，其各自以全文引用的方式并入本文中。用于冻干的额外容器构件对于所属领域技术人员是已知的且易于获得。1.小体积病毒调配物如下文所定义的“RSV组合物”、“PIV组合物”或“RSV/PIV组合物”包含病毒(意即RSV、PIV或RSV/PIV)、通常为每毫升约103到107PFU的减毒病毒和医药学上可接受的载剂。医药学上可接受的载剂包括缓冲液、盐水溶液、水、注射用水(WFI)、蛋白稳定剂、糖、氨基酸、防冻剂等等。在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配小体积病毒组合物。在某些调配物中，所述5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。在某些调配物中，在包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液(pH值为约6.5到约7.8)中调配的小体积病毒组合物进一步包含蔗糖、L(+)-谷氨酸、L(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、人类白蛋白(HA)和/或大豆蛋白胨。在某些其他调配物中，包含约0.25mM到约12.5mMHEPES、约0.01mM到约0.5mM氯化镁和约0.01mM到约0.5mM氯化钙的10mM磷酸盐缓冲液溶液(pH值为约6.5到约7.8)进一步包含约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约50g/L蔗糖和约1.0g/L到约10.0g/LHA。在其他某些调配物中，所述约1.0g/L到约10.0g/LHA由约50g/L大豆蛋白胨(也被称作Hy-Soy；QuestInternational；Chicago，IL)替换。在另一调配物中，在包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁、约0.01mM到约1mM氯化钙、约50g/L蔗糖、约0.049mM到约4.9mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约4.9mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约1.0g/L到约10.0g/LHA和约50g/L大豆蛋白胨的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液(pH值为约6.5到约7.8)中调配稳定小体积病毒组合物。2.小体积病毒冷冻速率和冻干如上文所述，产生小体积储存稳定病毒组合物的方法包含(a)于60分钟或更少的时间内将病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度(Tg)和(b)冻干病毒组合物，其中冻干病毒组合物在约1℃到约10℃的储存温度下可稳定至少1年。病毒组合物的Tg通常为约-35℃。病毒组合物的Tg在诸如氯化钠的“存留”盐存在下低于约-35℃(例如约-42℃)。例如，氯化钠为病毒生长培养基的组份，但不是小体积调配物的组份。因此，某些病毒调配物将含有残余数量(例如“存留”)的氯化钠，且因此Tg可低于约-35℃，但通常不低于约-50℃。术语“玻璃态转化温度”或“Tg”指的是发生液态到玻璃态的转化时所处的温度范围的大致中点。病毒组合物达到其Tg的速率对于冻干期间的病毒稳定性(例如参见实例2)和长期病毒储存稳定性(例如参见实例3)是关键的。以另一种方式来说，较快的冷冻速率导致较稳定的病毒组合物，从而导致病毒组合物较少的效力损失。术语“冷冻速率”指的是病毒组合物达到其Tg的速率。冷冻速率可作为冷冻期间温度降低的大致速率来计算。例如，如果病毒组合物的起始温度为5℃且其在40分钟时间内冷冻到其-35℃的Tg，那么“冷冻速率”为-1℃/分钟。在类似条件下冷冻动力学可根据个别容器各异，或在大体积的情况下其在不同点展示偏差。因此，冷冻速率为在容器中所观察到的或在托盘上所加载材料的不同位置处所测量的平均冷冻速率。小体积病毒组合物的冷冻速率为约-0.5℃/分钟到约-2.5℃/分钟。在一实施例中，Tg在60分钟或更少的时间内达到。在另一实施例中，Tg在40分钟或更少的时间内达到。在另一实施例中，Tg在20分钟或更少的时间内达到。病毒组合物的Tg易于由所属领域技术人员在不进行不当实验的情况下例如使用诸如差示扫描量热法(DSC)的热力学测量法来测定(Hatley，1992；Franks，1992；Carpenter，2002)。在一实施例中，包含小体积病毒组合物的冻干瓶预冷却到约5℃的温度。含有预冷却病毒组合物的小瓶然后放置于冻干架上并以约-1℃/分钟到约-2℃/分钟的速率冷冻到至少-50℃的温度。在其他实施例中，含有预冷却病毒组合物的小瓶直接放置于预冷冻到-70℃温度的冻干架上。冻干(或冷冻干燥)为脱水技术，其中冷冻样品溶液(例如RSV/PIV组合物)并通过施加高真空进行升华来移除溶剂(例如水或缓冲液)。冻干技术对于所属领域技术人员是熟知的(Rey和May，1999)。在一实施例中，如下制备冻干小体积病毒组合物(a)将约0.5mL到0.6mL病毒组合物放置于小瓶中并冷却到约5℃的温度；(b)将小瓶放置在冻干架上并以每分钟约-1.0℃到每分钟约-2.0℃的速率将架子温度从5℃降低到-50℃；(c)保持架子温度为约-50℃持续60分钟；(d)降低冻干室压力到0.10托并保持架子温度为约-50℃持续30-60分钟；(e)在约0.10托下以每分钟约1.0℃到约2.0℃的速率将架子温度从-50℃升高到0℃，并保持架子温度为约0℃持续约540分钟到约720分钟；(f)在约0.10托下以每分钟约0.5℃的速率将架子温度从0℃升高到15℃，并保持架子温度为约15℃持续约600分钟到约720分钟；和(g)用氮气充满小瓶并密封小瓶。在另一实施例中，如下进行病毒组合物的冻干(a)将约0.5mL到0.6mL病毒组合物放置于小瓶中并冷却到约5℃的温度；(b)冷冻冻干架直到约-70℃的温度；(c)将小瓶放置在冻干架上并保持温度为约-70℃持续约60分钟；(d)降低冻干室压力到0.10托并以每分钟约1.0℃的速率将架子温度从-70℃升高到-50℃；(e)在约0.10托下以每分钟约1.0℃到每分钟约2.0℃的速率将架子温度从-50℃升高到0℃，并保持架子温度为约0℃持续约540分钟到约720分钟；(f)在约0.10托下以每分钟约0.5℃的速率将架子温度从0℃升高到15℃，并保持架子温度为约15℃持续约600分钟到约720分钟；和(g)用氮气充满小瓶并密封小瓶。冻干小体积病毒组合物(意即冻干饼)具有小于约1.0log的由冻干导致的PFU损失且在约1℃到约10℃下储存1年后具有小于约1.0log的PFU损失(例如参见实例2、实例3、和表2及4-7)。在另一实施例中，冻干小体积病毒组合物在约1℃到约10℃下储存1年后每0.2mL为至少4.0logPFU。C.大体积冻干稳定病毒组合物在另一实施例中，本发明涉及产生大体积冻干稳定病毒组合物的方法。在一实施例中，本发明涉及产生包含RSV、PIV或其组合的大体积冻干稳定病毒组合物的方法。所述方法包含(a)将体积为至少50mL的液体病毒组合物放置于冻干盘中；(b)在液氮浴中于低于病毒组合物的Tg的温度下冷冻病毒组合物至少约20分钟；和(c)冻干病毒组合物。冻干病毒组合物相对于冻干方法之前的病毒组合物具有小于约0.5log的PFU损失。产生大体积冻干稳定病毒组合物的方法在大规模生产/制造所述病毒组合物期间尤其有用。如下文所定义的病毒组合物的“大”体积介于每冻干盘约50mL到约2L之间。在某些实施例中，大体积介于每冻干盘约250mL到约1mL之间。在一特定实施例中，大体积病毒组合物为每冻干盘1L。1.大体积病毒调配物以医药学上可接受的载剂调配大体积病毒组合物，所述载剂包括缓冲液、盐水溶液、水、注射用水(WFI)、蛋白稳定剂、糖、氨基酸、防冻剂等等。在一实施例中，在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐的磷酸盐缓冲液溶液中调配大体积病毒组合物。磷酸盐缓冲液的浓度为约5.0mM到约20mM且pH值范围为约6.5到约7.8。在其他实施例中，所述5.0到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约2.5mM到约25mMHEPES。在某些其他实施例中，所述5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.1mM到约1mM氯化镁和约0.1mM到约1mM氯化钙。在某些实施例中，在10mM磷酸盐缓冲液(pH值为约6.5到约7.8)中调配大体积病毒组合物且其进一步包含约2.5mM到约12.5mMHEPES。在某些其他实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.1mM到约0.5mM氯化镁和约0.1mM到约0.5mM氯化钙。在一实施例中，所述5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液(pH值为6.5到7.8，2.5-25mMHEPES，0.1-1.0mM氯化镁，0.1-1.0mM氯化钙)进一步包含蔗糖、L(+)-谷氨酸、L(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、人类白蛋白(HA)和/或大豆蛋白胨。在另一实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液(pH值为6.5到7.8，2.5-12.5mMHEPES，0.1-0.5mM氯化镁，0.1-0.5mM氯化钙)进一步包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物和约1.0g/L到约10.0g/LHA。在一实施例中，所述约1.0g/L到约10.0g/LHA由约50g/L大豆蛋白胨替换。在其他实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液(pH值为约6.5到约7.8)包含约2.5mM到约12.5mMHEPES、约0.1mM到约0.5mM氯化镁、约0.1mM到约0.5mM氯化钙、约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约1.0g/L到约10.0g/LHA和约50g/mL大豆蛋白胨。2.大体积病毒冷冻速率和冻干产生大体积冻干稳定病毒组合物的方法包含(a)将体积为至少50mL的液体病毒组合物放置于冻干盘中；(b)在液氮浴中于低于病毒组合物的Tg的温度下冷冻病毒组合物至少约20分钟；和(c)冻干病毒组合物，其中冻干病毒组合物相对于冻干前的病毒组合物具有小于约0.5log的PFU损失。如章节B.2中所述，小体积病毒组合物达到其Tg的速率对于病毒储存稳定性是关键的。类似地，大体积病毒组合物达到其Tg的速率对于病毒储存稳定性也是关键的。因此，制备大体积病毒的重要步骤为在液氮浴中将病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度至少约20分钟。达成大体积快速冷冻速率的另一重要参数为热传递性质、组合物和冻干盘的构造。例如，具有大表面积的冻干盘进一步降低大体积病毒组合物达到其Tg所花费的时间量。冻干盘在此项技术中是熟知的且包括不锈钢盘、玻璃盘、铝盘、塑料盘和Lyoguard盘。在一实施例中，冻干盘为Lyoguard冻干盘。将托盘特别设计成具有良好热传递性质以用于大体积冻干。其是由经设计用于防止固体颗粒在冻干循环中“滑出”托盘同时允许水蒸汽的良好质量传递的微孔薄膜组成。病毒组合物的Tg为约-35℃的温度。如先前所述，来自病毒生长培养基的残余数量(或“存留”)的氯化钠可进一步降低Tg但不会低于-50℃。在某些其他实施例中，病毒组合物的冻干被进一步定义为(a)在约-50℃的温度下将包含冷冻病毒组合物的冻干盘放置于预冷却到约-50℃的温度的冻干架上，并保持所述温度约60分钟；(b)降低冻干室压力到0.10托并在约0.10托下以每分钟约0.23℃的速率将架子温度从-50℃升高到-23℃；(c)保持架子温度为约-23℃持续约80小时到约100小时；(d)降低冻干室压力到0.02托并以每分钟约0.23℃的速率将架子温度从-23℃升高到15℃；(e)将架子温度保持在约15℃并保持在约0.02托，持续约30小时到约40小时；(f)在0.02托下以每分钟约0.17℃的速率将架子温度从15℃升高到25℃；(g)将架子温度保持在约25℃并保持在约0.02托，持续约10小时；和(h)用氮气充满冻干室并在氮气下将冻干盘密封于铝袋中。在其他实施例中，大体积病毒组合物的冻干被进一步定义为(a)在约-70℃的温度下将包含冷冻病毒组合物的冻干盘放置于预冷却到约-70℃的温度的冻干架上，并保持所述温度约60分钟；(b)降低冻干室压力到0.10托并以每分钟约0.23℃的速率将架子温度从-70℃升高到-23℃；(c)在约0.10托下保持架子温度为约-23℃持续约80到100小时；(d)降低冻干室压力到0.02托并以每分钟约0.23℃的速率将架子温度从-23℃升高到15℃；(e)将温度保持在约15℃并保持在约0.02托，持续约30到40小时；(f)在0.020托下以每分钟约0.17℃的速率将架子温度从15℃升高到25℃；(g)保持温度为约25℃持续约10小时；和(h)用氮气充满冻干室并在氮气下将冻干盘密封于铝袋中。冻干大体积病毒组合物(意即冻干饼)具有小于约1.0log的由冻干导致的PFU损失且在约1℃到约10℃下储存1年后具有小于约1.0log的PFU损失(例如参见实例4)。D.液体病毒组合物在另一实施例中，本发明涉及产生储存稳定液体病毒组合物的方法。在一实施例中，本发明涉及产生包含RSV、PIV或其组合的储存稳定液体病毒组合物的方法。所述方法包含(a)在液氮浴中平衡金属板；(b)将液体病毒组合物放置于合适的容器构件中；(c)将步骤(b)的容器插入金属容器固定器中；(d)将金属容器固定器放置于步骤(a)的经平衡金属板上持续约10分钟；(e)从金属容器固定器移除容器；和(f)将容器在约-20℃到约-70℃的温度下储存。1.液体病毒冷冻和解冻如步骤(f)中所述，包含冷冻病毒组合物的容器在约-20℃到约-70℃下储存。在室温下解冻病毒组合物可使病毒组合物返回液态，其中经解冻液体病毒组合物在储存6个月后具有小于约0.5log的PFU损失。在一实施例中，经解冻液体病毒组合物为至少4.0logPFU/0.2mL。在另一实施例中，经解冻液体病毒组合物在-20℃的温度下储存6个月后为至少4.0logPFU/0.2mL。在其他实施例中，经解冻液体病毒组合物在-70℃的温度下储存6个月后为至少4.0logPFU/0.2mL。与液体病毒组合物相关的合适容器构件通常为可经受住约-20℃到约-70℃范围内的温度的容器。例如，用于产生储存稳定液体组合物的合适容器构件为小瓶、管、注射器或鼻喷雾装置。在某些实施例中，容器为鼻喷雾装置。在一实施例中，鼻喷雾装置为购自BDPharmaceuticalSystems(FranklinLakes，NJ)的BDAccusprayTM鼻喷雾装置或类似鼻喷雾装置。液体病毒组合物冷冻的速率对病毒储存稳定性是关键的(例如参见实例5)。液氮浴用于快速冷冻病毒组合物。步骤(a)中的金属板为将热充分传递到液氮浴并从步骤(c)的金属容器固定器传递出热的任何金属。类似地，步骤(c)中的金属容器固定器为将热传递到金属板并从包含病毒的容器传递出热的任何金属。在一实施例中，金属容器固定器为铝。在另一实施例中，金属容器固定器为不锈钢。2.液体病毒调配物以医药学上可接受的载剂调配液体病毒组合物，所述载剂包括缓冲液、盐水溶液、水、注射用水(WFI)、糖、氨基酸、防冻剂等等。在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配如上文所述的液体病毒组合物。在一实施例中，所述5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.25mM到约25mMHEPES。在其他实施例中，所述5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。在某些实施例中，在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配液体病毒组合物。在其他实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.25mM到约25mMHEPES。在某些其他实施例中，所述10mM磷酸盐缓冲液溶液进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。在一实施例中，包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液(pH值为约6.5到约7.8)进一步包含蔗糖、L(+)-谷氨酸或L(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物和人类白蛋白(HA)。在其他实施例中，包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液(pH值为约6.5到约7.8)进一步包含约75g/L蔗糖和约4.9mML(+)-谷氨酸或约4.9mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物。在再其他实施例中，包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙的10mM磷酸盐缓冲液溶液(pH值为约6.5到约7.8)进一步包含约75g/L蔗糖和约4.9mML(+)-谷氨酸或约4.9mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物。液体冷冻病毒组合物(意即在喷雾装置或小瓶中冷冻)在“快速”冷冻后具有小于约0.5log的PFU损失，且在约-20℃到约-70℃下储存6个月后具有小于约0.5log的PFU损失(例如参见实例5和表9-12)。在另一实施例中，液体冷冻病毒组合物在约-20℃到约-70℃下储存6个月后为每0.2mL至少4.0logPFU。E.免疫原性病毒组合物在某些实施例中，本发明提供免疫原性组合物，其包含根据本发明的方法产生的包含RSV、PIV或其组合的储存稳定(冷冻)液体病毒组合物。在其他实施例中，本发明提供免疫原性组合物，其包含包含单纯疱疹病毒、细胞肥大病毒、Epstein-Barr病毒、水痘-带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、流感病毒、脊髓灰质炎病毒、鼻病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、诺沃克病毒、披膜病毒、α病毒、风疹病毒、狂犬病病毒、马堡病毒、伊波拉病毒、乳头状瘤病毒、多瘤病毒、间质肺炎病毒、冠状病毒、水疱性口炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒等等的储存稳定(冷冻)液体病毒组合物。在某些实施例中，冷冻液体免疫原性组合物包含于鼻喷雾装置中。通常使用本发明的液体配方和方法(例如参见章节D、实例1和实例5)调配并加工本发明的储存稳定(冷冻)液体病毒组合物以用于投与哺乳动物受检者，以冷冻液体形式储存并在投与所述哺乳动物受检者之前解冻。在某些实施例中，本发明的储存稳定病毒组合物为冻干固体(或冻干饼)组合物。在特定实施例中，储存稳定冻干病毒组合物在医药学上可接受的载剂中溶解、稀释或悬浮并作为适于投与哺乳动物受检者(例如人类)的免疫原性组合物形式提供。因此，所述冻干组合物通常包含“免疫原性”组合物(例如减毒RSV和/或减毒PIV病毒)和“医药学上可接受的载剂”。如下文所使用，术语“医药学上可接受的载剂”意欲包括此项技术中已知的与医药投与相容的任何和所有溶剂。所述介质和药剂用于医药学活性物质在此项技术中是熟知的。除去与活性化合物(例如RSV或PIV)不相容的任何常规介质或药剂，所述介质都用于本发明的组合物中。因此，本发明的免疫原性组合物经调配成与其意欲投与途径相容。投与途径的实例包括非经肠(例如静脉内、皮内、皮下、肌肉内、腹膜内)、经粘膜(例如经口、经直肠、鼻内、经口腔、经阴道、经呼吸道)和经皮(局部)。例如，有待作为鼻内喷雾投与的储存稳定冻干病毒免疫原性组合物包括以下组份中的一种或一种以上无菌稀释剂(诸如注射用水)、盐水溶液、缓冲液(例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐)和用于调节张力的药剂(诸如氯化钠或右旋糖)。用诸如盐酸或氢氧化钠的酸或碱调节pH值。免疫原性组合物密封于喷雾装置、安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的单剂量/多剂量小瓶中。以单位剂量形式调配非经肠组合物以便于投与和剂量均匀性是特别有利的。本文中所使用的单位剂量形式指的是适于作为用于待治疗受检者的单一剂量的物理上离散的单位，各单位都含有经计算用于与所需医药载剂联合产生所要治疗效果的预定数量的活性化合物。本发明的单位剂量形式的规格由活性化合物的独特特征和待达成的特定治疗效果以及用于治疗个体的所述活性化合物的化合技术中固有的限制指定且直接取决于其。医药学上可接受的媒剂应理解为表示具有以下特征的进入医药或免疫原性组合物中的化合物的组合其不会引起副作用且例如使得有利于活性化合物的投与、增加其在体内的寿命和/或功效、增加其在溶液中的溶解度或增强其保存成为可能。所述医药学上可接受的媒剂是熟知的且将由所属领域技术人员根据所选活性化合物的性质和投与模式加以调节。本文中所引用的所有专利和公开案都以引用的方式并入本文中。F.实例使用标准技术进行以下实例，所述标准技术除其中另外详细描述之处以外对所属领域技术人员而言是熟知且常规的。提供以下实例是用于说明目的，且不应解释为以任何方式限制本发明。实例1RSV和PIV调配物组份用如下被指定为“配方A1”到“配方E2”的以下磷酸盐缓冲配方之一调配本文所述的RSV和/或PIV样品配方A110mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含2.5mMHEPES、0.1mM氯化镁、0.1mM氯化钙、0.49mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖和1.0g/LHA。HA为Grifols20％(w/v)人类白蛋白(GrifolsUSA，LosAngeles，CA；目录号61953-0001-1)。配方A210mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含12.5mMHEPES、0.5mM氯化镁、0.5mM氯化钙、2.45mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖和1.0g/LHA。配方A310mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含2.5mMHEPES、0.1mM氯化镁、0.1mM氯化钙、0.49mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖和1.0g/L重组HA。重组HA为在酵母细胞中表达且以商品名Recombumin(DeltaBiotechnologyLtd.，Notttingham，UnitedKingdom)售卖的20％(w/v)人类白蛋白。配方A410mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含12.5mMHEPES、0.5mM氯化镁、0.5mM氯化钙、2.45mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖和1.0g/L重组HA。配方B110mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含2.5mMHEPES、0.1mM氯化镁、0.1mM氯化钙、0.49mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖和10g/LHA。配方B210mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含12.5mMHEPES、0.5mM氯化镁、0.5mM氯化钙、2.45mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖和10g/LHA。配方B310mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含2.5mMHEPES、0.1mM氯化镁、0.1mM氯化钙、0.49mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖和10g/L重组HA。配方B410mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含12.5mMHEPES、0.5mM氯化镁、0.1mM氯化钙、2.45mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖和10g/L重组HA。配方C110mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含2.5mMHEPES、0.1mM氯化镁、0.1mM氯化钙、0.49mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖、50g/L大豆蛋白胨(HySoy)和1.0g/LHA。C210mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含2.5mMHEPES、0.1mM氯化镁、0.1mM氯化钙、0.49mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖、50g/L大豆蛋白胨和约1.0g/L重组HA。配方C310mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含2.5mMHEPES、0.1mM氯化镁、0.1mM氯化钙、0.49mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖、50g/L大豆蛋白胨和约1.0g/L重组HA。配方C410mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含12.5mMHEPES、0.5mM氯化镁、0.1mM氯化钙、2.45mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖、50g/L大豆蛋白胨和约1.0g/LHA。配方D110mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含2.5mMHEPES、0.1mM氯化镁、0.1mM氯化钙、0.49mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖和50g/L大豆蛋白胨。配方D210mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)，其包含12.5mMHEPES、0.5mM氯化镁、0.5mM氯化钙、2.45mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖和50g/L大豆蛋白胨。实例2冷冻速率对冻干期间小体积RSV和/或PIV调配物的效力的影响在这个实例中，研究小体积RSV和/或PIV调配物的冷冻速率以测定使病毒效力损失降至最低所需的最佳冷冻条件。起初测试含有LRSV-404、PIV3-cp45和LRSV-404/PIV3-cp45组合的三种样品(表2)。将所述调配物中所用的病毒块制备成用于阶段1和阶段2人类临床试验的临床材料。使用如实例1中所述的“配方A1”调配各病毒样品。将样品填充入2mL小瓶中(每瓶0.6mL)，预冷却到约5℃的温度并随后放置于冻干机的预冷却(-50℃)架子上。病毒组合物的玻璃态转化温度(Tg)(约-35℃±5℃)在约40分钟内达到，其对应于每分钟约-1.0℃的冷冻速率。冷冻后应用冻干循环，其包括在0℃下初级干燥随后在15℃下二级干燥。表2小体积病毒调配物在冻干前后的效力(a)*＝以-1℃/分钟冷冻的样品。(b)LRSV-4041LRSV-4041的效力由组合LRSV-404/PIV-cp45调配物测定而来。(c)PIV-cp451PIV-cp451的效力由组合LRSV-404/PIV-cp45调配物测定而来。对初始病毒块、冷冻步骤后小瓶中的病毒材料和冻干样品(冻干后立即进行)进行病毒效力测试。使用空斑形成单位(PFU)检定和Vero细胞(ATCC目录号CCL-18)测试RSV。所述检定包括(a)在24孔板中制备细胞单层，(b)制备参考样品和测试样品的10倍稀释液，(c)感染细胞，(d)在32℃和5％CO2下将板培育约5天，和(e)固定细胞并免疫染色以显现空斑。使用空斑形成单位(PFU)检定和LCC-MK2细胞测试PIV，其包括(a)在24孔板中制备细胞单层，(b)制备参考样品和测试样品的10倍稀释液，(c)感染细胞，(d)在32℃和5％CO2下将板培育约4天，和(e)固定细胞并免疫染色以显现空斑。对于两种检定而言，如果自所述检定测定的参考样品的效力在登记值的+0.5logPFU内，那么效力测试结果被认为是可接受的。对RSV、PIV和RSV/PIV调配物进行的效力测试的结果展示于表2中。所述数据表明以每分钟约-1.0℃的速率冷冻的调配物的最小效力损失。所述实验的结果也证实RSV与PIV在组合调配物中相容。以更快(-2℃/分钟，表6)及更慢(-0.3℃/分钟，表3)的冷冻速率和各种浓度的重组HA(rHA)、HA、大豆蛋白胨及其组合进一步测试RSV和/或PIV稳定性。病毒样品包含经制备用于阶段1和阶段2人类临床试验的LRSV-404、LRSV-rA38、LRSV-rA42或PIV3-cp45液体病毒块。使用表3-6的第2列中所示的配方调配各病毒样品。将病毒样品填充至2mL小瓶中(每瓶0.5mL)，预冷却到约5℃的温度并随后放置于冻干机的架子上。使用包括在0℃下初级干燥随后在15℃下二级干燥的循环将冷冻样品冻干。对初始病毒块、冷冻后小瓶中的材料和冻干样品(冻干后立即进行)进行效力测试。效力测试结果表明以每分钟约-0.3℃(表3)冷冻的样品中的RSV或PIV效力显著降低且以每分钟-1℃(表4和表5)和每分钟-2℃(表6)的较快速率冷冻的调配物中的RSV或PIV稳定性高。表3以-0.3℃/分钟冷冻的小体积RSV调配物的效力配方1＝配方A1-A4、B1、B2、C3和D2在实例1中有所描述。表4以-1℃/分钟冷冻的小体积PIV调配物的效力配方1＝配方A1、A3、B1、B3、C1、C3和D1在实例1中有所描述。表5以-1℃/分钟冷冻的小体积RSV调配物的效力配方1＝配方A1、A2、B2、C1、C4和D2在实例1中有所描述。表6以-2℃/分钟冷冻的小体积RSV和PIV调配物的效力配方1＝配方B1、B2和B4在实例1中有所描述。实例3包含RSV或PIV的小体积调配物的储存稳定性通过在不同时间点进行效力测试来评估实例2中所述的调配物的储存稳定性，所述时间点包括在5℃下储存3个月、6个月、9个月和12个月。稳定性数据概括于下表7中，其中所述数据证明在5℃下储存长达1年的病毒组合物的最小效力损失。表7中的配方列表示实例1中所指定的配方。表7RSV和PIV组合物的配方、冷冻速率和储存稳定性Lyo＝冻干的缩写mo＝月的缩写S＝病毒在包含胎牛血清的培养基中生长SF＝使用“无血清”生长培养基繁殖病毒实例4冷冻速率对冻干期间大体积RSV和/或PIV调配物的效力的影响为最优化包含RSV、PIV或其组合的免疫原性组合物的大规模生产的冻干方法，测试大体积RSV或PIV调配物的不同冷冻速率。制备包含pH7.0的10mM磷酸盐缓冲液(2.5mMHEPES、0.1mM氯化镁、0.1mM氯化钙、0.49mML(+)-谷氨酸单钠盐、50g/L蔗糖和1g/LHA)的大体积RSV-404调配物并于1-LLyoguard冻干盘中冻干。通过在45分钟内将架子温度从5℃降低到-45℃而在冻干机架子上进行材料的冷冻。冻干盘在架子上(-45℃下)存留额外5小时以使调配物冷冻至低于其玻璃态转化温度。达到玻璃态转化温度(约-35℃)的实际时间为约2小时，其对应于每分钟约-0.3℃的冷冻速率。随后应用90小时冻干循环，其包括在0℃下初级干燥随后在15℃下二级干燥。通过PFU检定来测试初始调配的块状物和冻干材料的效力。在另一实验中，使用相同配方制备具有LRSV-rA39的调配物，例外为使用50mL容积的小尺寸铝盘冻干材料。通过在60分钟内将温度从5℃降低到-40℃而在冻干机架子上冷冻材料。达到材料的玻璃态转化温度(约-35℃)的实际时间为约1.5小时，其对应于每分钟约-0.4℃的冷冻速率。随后应用24小时冻干循环，其包括在0℃下初级干燥随后在15℃下二级干燥。通过PFU检定来测试初始调配的块状物和冻干材料的效力。或者，使用1-LLyoguard冻干盘中的大体积冻干来制备两种其他RSV调配物。用包含12.5mMHEPES、0.5mM氯化镁、0.5mM氯化钙、2.45mML(+)-谷氨酸、50g/L蔗糖和10g/LHA的10mM磷酸盐(pH7.0)分别调配LRSV-rA38和LRSV-404(在无血清培养基中生长)。通过将托盘沉入液氮浴中持续至少20分钟来冷冻病毒组合物。随后将冻干盘放置于预冷却(-50℃)冻干架上并使用120小时循环进行冻干，所述循环包括(a)在设定为0.10托的真空下开始初级干燥；(b)温度呈斜线上升(0.23℃/分钟)到-23℃的架子温度；(c)保持温度为-23℃持续80-100小时；(d)在设定为0.02托的真空下开始二级干燥；(e)温度呈斜线上升(0.13℃/分钟)到15℃的架子温度；(f)保持温度为15℃持续30-40小时；(g)使温度呈斜线上升(0.17℃/分钟)到25℃的架子温度；和(h)保持温度为25℃持续10小时。在PFU检定中测试经调配的病毒块状物样品和冻干材料样品的效力。证实冷冻速率对于冻干循环期间病毒效力的保持很关键的数据列于下表8中。在冻干架上冷冻托盘(“缓慢冷冻”)导致相对于以液氮冷冻托盘(“快速冷冻”)显著的冻干材料的效力损失(表8，第2列)，在以液氮冷冻托盘时效力损失是可忽略的(表8，第3列)。表8冷冻速率对大体积冻干期间RSV效力的影响ND*＝未测定实例5填充入鼻喷雾装置中的液体RSV调配物的快速冷冻在包含25mMHEPES、1.0mM氯化镁、1.0mM氯化钙、75g/L蔗糖和4.9mML(+)-谷氨酸的10mM磷酸盐缓冲液溶液(pH7.5)中制备LRSV-rA38(在无血清培养基中生长)的液体调配物。将调配物填充入BDAccusprayTM鼻喷雾装置中(每装置0.23mL)并将各鼻喷雾装置插入由申请人设计和制造的铝鼻喷雾固定器的孔中(例如参见图1)。鼻喷雾固定器是由具有96个孔的铝块制得，其中孔径比鼻喷雾装置的直径大0.5mm。所述孔足够深以便允许各鼻喷雾装置内的病毒样品低于固定器的上表面(图1)。在填充鼻喷雾装置时，将不锈钢板(尺寸为0.3m×0.2m×0.02m)放置于充满液氮的低温容器内并在液氮中平衡所述板(意即直到液氮停止沸腾)。平衡之后，调节低温容器内的液氮体积使得有足够体积接触金属板，但不接触鼻喷雾固定器。将含有充满态鼻喷雾装置的鼻喷雾固定器放置于低温容器内的“冷冻”板顶部，并使其“快速冷冻”至少10分钟。随后从鼻喷雾固定器移除鼻喷雾装置，其中一半鼻喷雾装置储存在设定为-70℃的冷冻器中且另一半鼻喷雾装置储存在设定为-20℃的冷冻器中。也在包含2.5mMHEPES、0.1mM氯化镁、0.1mM氯化钙、75g/L蔗糖和4.9mML(+)-谷氨酸的10mM磷酸盐缓冲液溶液(pH7.5)中制备LRSV-404(在无血清培养基中生长)的液体调配物。如上所述将调配物填充入BDAccusprayTM鼻喷雾装置中(每装置0.23mL)，“快速”冷冻并储存。或者，如上所述调配液体LRSV-rA38和液体LRSV-404样品并填充入鼻喷雾装置中，但通过将鼻喷雾固定器放置于在-70℃下冷却的常规冷冻器的架子上来进行冷冻并使其冷冻24小时(“缓慢”冷冻)。图2中的数据显示“快速”冷冻(图2，实心方块)和“缓慢”冷冻(图2，空心方块)的动力学。随后，将一半鼻喷雾装置储存在设定为-70℃的冷冻器中且另一半鼻喷雾装置储存在设定为-20℃的冷冻器中。通过在第0个月、第1个月、第3个月、第4个月和第6个月时间点的效力测试来评估样品的储存稳定性。在室温下将鼻喷雾装置(每各时间点3个装置)解冻约1小时。将各鼻喷雾装置的内容物释放入管中并随后使用PFU检定来测试效力。表9-12中所呈现的数据总结较快的冷冻速率对液体RSV调配物的稳定性的影响。表9在-196℃下冷冻并在-20℃或-70℃下储存的液体LRSV-rA38调配物的储存稳定性(效力)**在-196℃下冷冻之前液体LRSV-rA38调配物的效力为5.6(logPFU/mL)。表10在-70℃下冷冻并在-20℃或-70℃下储存的液体LRSV-rA38调配物的储存稳定性(效力)**在-70℃下冷冻之前液体LRSV-rA38调配物的效力为5.6(logPFU/mL)。表11在-196℃下冷冻并在-20℃或-70℃下储存的液体LRSV-404调配物的储存稳定性(效力)**在-196℃下冷冻之前液体LRSV-404调配物的效力为6.2(logPFU/mL)。表12在-70℃下冷冻并在-20℃或-70℃下储存的液体LRSV-404调配物的储存稳定性(效力)**在-70℃下冷冻之前液体LRSV-404调配物的效力为6.2(logPFU/mL)。从这些数据观察到用液氮(“快速”冷冻)冷冻的RSV调配物在两种储存温度(-20℃和-70℃)下都稳定(表9和表11)。在-70℃的冷冻器的架子上冷冻(“缓慢”冷冻)的RSV调配物显示效力降低和不同时间点处效力的高可变性(表10和表12)。通过使用MalvernSprayTec粒度分析仪测量液滴尺寸分布来评估冷冻对喷雾性能的影响。对充满上述液体LRSV-rA38调配物的喷雾装置进行所述分析。如下测量喷雾装置的液滴尺寸分布(每测试10个装置)(a)鼻喷雾装置充满RSV但不冷冻，(b)鼻喷雾装置充满RSV，在液氮中冷冻并在-70℃下储存3个月，(c)鼻喷雾装置充满RSV，在液氮中冷冻并在-20℃下储存3个月，(d)鼻喷雾装置充满RSV，在-70℃冷冻器下冷冻并在-70℃下储存3个月，和(e)鼻喷雾装置充满RSV，在-70℃冷冻器下冷冻并在-20℃下储存3个月。因为BDAccusprayTM鼻喷雾装置是设计用于通过2次连续喷雾(独立喷给各鼻孔)来进行鼻内接种，所以对各喷雾进行分析。使用粒度小于10μm的液滴部分的值(％)作为标准(粒度小于10μm的部分的质量增加是无法接受的)。分析结果总结于表13中。冷冻喷雾装置的冷冻和3个月储存并不影响喷雾性能。未观察到直径小于10μm的液滴的总质量增加。表13BDACCUSPRAYTM装置在不同条件下的喷雾性能参考文献美国专利第4,084,330号美国专利第5,489,266号美国专利第5,732,837号美国专利第5,882,651号美国专利第5,932,222号美国专利第5,993,824号美国专利第6,077,514号美国专利第6,284,254号美国专利第6,410,023号Ayra，Vaccine，19595-597，2001.Carpenter等人，“Rationaldesignofstablelyophilizedproteinformulationstheoryandpractice”.Pharm.Biotechnol.，13109-33，2002.Chanock等人，Pediatrics，90137-142.，1992.Crowe，“CurrentApproachestotheDevelopmentofvaccinesagainstdiseaseCausedbyRespiratorySyncytialVirus(RSV)andParainfluenzaVirus(PIV)AmeetingreportfromtheWHOProgrammeforVaccineDevelopment”，Vaccine，13415-421，1995.Franks，“Freeze-dryingfromempiricismtopredictability.Thesignificanceofglasstransitions”.Dev.Biol.Stand.，749-18，1992.Glezen等人，Am.J.Dis.Child140，143-146，1986.Glezen等人，J.Pediatr.，98708-715，1981.Gupta等人，“StabilizationofRSVagainstthermalinactivationandfreeze-thawcyclesfordevelopmentandcontrolofRSVvaccinesandimmuneglobulin，”Vaccine，141417-1420，1996.Hambling，“SurvivaloftheRSVduringstorageundervariousconditions”，Br.J.Exp.Pathol.，45647-655，1964.Hatley，“Theeffectiveuseofdifferentialscanningcalorimetryintheoptimisationoffreeze-dryingprocessesandformulations”.Dev.Biol.Stand.，74105-119，1992.Hilleman，Rev.Infect.Dis.，11(增刊3)S613-616，1989.Katz，“Newvaccinedevelopmentestablishingpriorities″，第1卷，WashingtonNationalAcademicPress.，第397-409，1985页.Kneyber和Kimpen，“CurrentConceptsonActiveImmunizationAgainstRespiratorySyncytialVirusForInfantsandYoungChildren”，Pediatr.Infect.Dis.J.，21685-696，2002.Lemon和Milstein，Int.J.Techno1.Assess.HealthCare，10177-184，1994.Martin等人，J.Lancet，1035-1038，1978.McConnochie等人，“Variationinseverityofrespiratorysyncytialvirusinfectionswithsubtype”，J.Pediatr.11752-62，1990.Mcintosh和Chanock，FieldsVirology(Fields和Knipe编)1045-1075，RavenPress，Ltd.，NewYork，1990.Melnick和Wallis，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，112894-897，1963.Rasmussen等人，Am.J.Dis.Child126465-469，1973.Rey和May，“Freeze-Drying/LyophilizationofPharmaceuticalandBiologicalProducts”，NewYorkMarcelDekker，1999.Robbins和Freeman，Sci.Am.，259126-133，1988.Stark等人，“OccurrenceofrespiratorysyncytialvirussubtypesinhospitalizedchildreninCleveland，Ohiofrom1985to1988，”Pediatr.Pulmonol.，1198-102，1991.Wertz和Sullender，Biotech，20151-176，1992.Wulff等人，“RSVPropertiesofstrainspropagatedinmonkeykidneycellcultures”，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，115458-462，1964.权利要求1.一种用于产生包含呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)或其组合的储存稳定病毒组合物的方法，所述方法包含(a)于60分钟或更少的时间内将所述病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度；和(b)冻干所述病毒组合物，其中所述冻干病毒组合物在约1℃到约10℃的储存温度下可稳定至少1年。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述玻璃态转化温度为约-40℃到约-50℃。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述玻璃态转化温度为约-30℃到约-40℃。4.根据权利要求3所述的方法，其中在40分钟或更少的时间内达到约-35℃的所述玻璃态转化温度。5.根据权利要求3所述的方法，其中在20分钟或更少的时间内达到约-35℃的所述玻璃态转化温度。6.根据权利要求1所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。7.根据权利要求6所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。8.根据权利要求7所述的方法，其进一步包含约0.25mM到约25mMN-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙烷磺酸(HEPES)。9.根据权利要求7所述的方法，其进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。10.根据权利要求7所述的方法，其进一步包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。11.根据权利要求10所述的方法，其进一步包含蔗糖、L(+)-谷氨酸或L(+)-谷氨酸单钠盐或L(+)-谷氨酸/L(+)-谷氨酸单钠盐的混合物和人类白蛋白(HA)。12.根据权利要求11所述的方法，其中HA为天然的或重组的。13.根据权利要求11所述的方法，其进一步包含大豆蛋白胨。14.根据权利要求11所述的方法，其进一步包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物和约1.0g/L到约10.0g/LHA。15.根据权利要求14所述的方法，其中约1.0g/L到约10.0g/LHA由约50g/L大豆蛋白胨替换。16.根据权利要求13所述的方法，其包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约1.0g/L到约10.0g/LHA和约50g/L大豆蛋白胨。17.根据权利要求1所述的方法，其中所述储存温度为5℃。18.根据权利要求1所述的方法，其中所述病毒组合物在约1℃到约10℃下储存1年后具有小于约1.0log的PFU损失。19.根据权利要求1所述的方法，其中所述病毒组合物在约1℃到约10℃下储存1年后为每0.2mL至少4.0logPFU。20.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(b)中冻干所述病毒组合物包含在合适容器构件中约0.2mL到约1.0mL的所述病毒组合物。21.根据权利要求20所述的方法，其中容器构件被进一步定义为小瓶、管或鼻喷雾装置。22.根据权利要求1所述的方法，其中冻干所述病毒组合物被进一步定义为(a)将约0.5mL到0.6mL的所述病毒组合物放置于小瓶中并冷却到约5℃的温度；(b)将所述小瓶放置在冻干架上并以每分钟约-1.0℃到每分钟约-2.0℃的速率将所述架子温度从5℃降低到-50℃；(c)保持所述架子温度为约-50℃持续60分钟；(d)降低冻干室压力到0.10托并保持所述架子温度为约-50℃持续30-60分钟；(e)在约0.10托下以每分钟约1.0℃到约2.0℃的速率将所述架子温度从-50℃升高到0℃，并保持所述架子温度为约0℃持续约540分钟到约720分钟；(f)在约0.10托下以每分钟约0.5℃的速率将所述架子温度从0℃升高到15℃，并保持所述架子温度为约15℃持续约600分钟到约720分钟；和(g)用氮气充满所述小瓶并密封所述小瓶。23.根据权利要求1所述的方法，其中冻干所述病毒组合物被进一步定义为(a)将约0.5mL到0.6mL的所述病毒组合物放置于小瓶中并冷却到约5℃的温度；(b)冷冻冻干架到约-70℃的温度；(c)将所述小瓶放置在所述冻干架上并保持温度为约-70℃持续约60分钟；(d)降低冻干室压力到0.10托并以每分钟约1.0℃的速率将所述架子温度从-70℃升高到-50℃；(e)在约0.10托下以每分钟约1.0℃到每分钟约2.0℃的速率将所述架子温度从-50℃升高到0℃，并保持所述架子温度为约0℃持续约540分钟到约720分钟；(f)在约0.10托下以每分钟约0.5℃的速率将所述架子温度从0℃升高到15℃，并保持所述架子温度为约15℃持续约600分钟到约720分钟；和(g)用氮气充满所述小瓶并密封所述小瓶。24.一种用于产生包含呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)或其组合的冻干稳定大体积病毒组合物的方法，所述方法包含(a)将体积为至少50mL的液体病毒组合物放置于冻干盘中；(b)在液氮浴中将所述病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度达至少约20分钟；和(c)冻干所述病毒组合物，其中所述冻干病毒组合物相对于冻干前的所述病毒组合物具有小于约0.5log的PFU损失。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述玻璃态转化温度为约-45℃。26.根据权利要求24所述的方法，其中所述玻璃态转化温度为约-35℃的温度。27.根据权利要求24所述的方法，其中所述冻干盘为Lyoguard冻干盘。28.根据权利要求24所述的方法，其中所述病毒组合物的体积为至少500mL。29.根据权利要求24所述的方法，其中所述病毒组合物的体积为至少1000mL。30.根据权利要求24所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。31.根据权利要求30所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。32.根据权利要求31所述的方法，其进一步包含约2.5mM到约25mMHEPES。33.根据权利要求31所述的方法，其进一步包含约0.1mM到约1mM氯化镁和约0.1mM到约1mM氯化钙。34.根据权利要求31所述的方法，其进一步包含约2.5mM到约25mMHEPES、约0.1mM到约1mM氯化镁和约0.1mM到约1mM氯化钙。35.根据权利要求34所述的方法，其进一步包含蔗糖、L(+)-谷氨酸或L(+)-谷氨酸单钠盐和人类白蛋白(HA)。36.根据权利要求35所述的方法，其中HA为天然的或重组的。37.根据权利要求35所述的方法，其进一步包含大豆蛋白胨。38.根据权利要求35所述的方法，其进一步包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物和约1.0g/L到约10.0g/LHA。39.根据权利要求38所述的方法，其中约1.0g/L到约10.0g/LHA由约50g/L大豆蛋白胨替换。40.根据权利要求37所述的方法，其包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约1.0g/LHA和约50g/L大豆蛋白胨。41.根据权利要求24所述的方法，其中冻干所述大体积病毒组合物被进一步定义为(a)在约-50℃的温度下将包含所述冷冻病毒组合物的冻干盘放置于预冷却到约-50℃的温度的冻干架上并保持所述温度约60分钟；(b)降低冻干室压力到0.10托并在约0.10托下以每分钟约0.23℃的速率将所述架子温度从-50℃升高到-23℃；(c)保持所述架子温度为约-23℃持续约80小时到约100小时；(d)降低冻干室压力到0.02托并以每分钟约0.23℃的速率将所述架子温度从-23℃升高到15℃；(e)将所述架子温度保持在约15℃并保持在约0.02托，持续约30小时到约40小时；(f)在0.02托下以每分钟约0.17℃的速率将所述架子温度从15℃升高到25℃；(g)将所述架子温度保持在约15℃并保持在约0.02托，持续约10小时；和(h)用氮气充满所述冻干室并在氮气下将所述冻干盘密封于铝袋中。42.根据权利要求24所述的方法，其中冻干所述大体积病毒组合物被进一步定义为(a)在约-70℃的温度下将包含所述冷冻病毒组合物的冻干盘放置于预冷却到约-70℃的温度的冻干架上并保持所述温度约60分钟；(b)降低冻干室压力到0.10托并以每分钟约0.23℃的速率将所述架子温度从-70℃升高到-23℃；(c)在约0.10托下保持所述架子温度为约-23℃持续约80到100小时；(d)降低冻干室压力到0.02托并以每分钟约0.23℃的速率将所述架子温度从-23℃升高到15℃；(e)将温度保持在约15℃并保持在约0.02托，持续约30到40小时；(f)在0.02托下以每分钟约0.17℃的速率将所述架子温度从15℃升高到25℃；(g)保持所述温度为约25℃持续约10小时；和(h)用氮气充满所述冻干室并在氮气下将所述冻干盘密封于铝袋中。43.一种用于产生包含呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)或其组合的储存稳定液体病毒组合物的方法，所述方法包含(a)在液氮浴中平衡金属板；(b)将液体病毒组合物放置于鼻喷雾装置中；(c)将步骤(b)的所述鼻喷雾装置插入金属固定器中；(d)将所述金属固定器放置于步骤(a)的所述经平衡的金属板上持续约10分钟；(e)从所述金属固定器中移除所述鼻喷雾装置；和(f)将所述鼻喷雾装置储存在约-20℃到约-70℃的温度下，其中步骤(a)到(f)后的所述病毒组合物在储存6个月后具有小于约0.5log的PFU损失。44.根据权利要求43所述的方法，其中所述金属固定器为铝。45.根据权利要求43所述的方法，其中所述金属固定器为不锈钢。46.根据权利要求43所述的方法，其中所述病毒组合物在步骤(a)到(f)之后为至少4.0logPFU/0.2mL。47.根据权利要求43所述的方法，其中所述病毒组合物在-20℃的温度下储存6个月后为至少4.0logPFU/0.2mL。48.根据权利要求43所述的方法，其中所述病毒组合物在-70℃的温度下储存6个月后为至少4.0logPFU/0.2mL。49.根据权利要求43所述的方法，其中在不存在蛋白稳定剂的情况下调配所述液体病毒组合物。50.根据权利要求43所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。51.根据权利要求43所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。52.根据权利要求51所述的方法，其进一步包含约0.25mM到约25mMHEPES。53.根据权利要求51所述的方法，其进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。54.根据权利要求51所述的方法，其进一步包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。55.根据权利要求54所述的方法，其进一步包含蔗糖和L(+)-谷氨酸、L(+)-谷氨酸单钠盐或L(+)-谷氨酸与L(+)-谷氨酸单钠盐的混合物。56.根据权利要求55所述的方法，其进一步包含约75g/L蔗糖和约4.9mML(+)-谷氨酸或约4.9mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物。57.一种根据权利要求1所述的方法产生的储存稳定病毒组合物。58.一种根据权利要求24所述的方法产生的冻干稳定大体积病毒组合物。59.一种根据权利要求43所述的方法产生的储存稳定冷冻液体病毒组合物。60.一种免疫原性组合物，其包含溶解于医药学上可接受的载剂中的通过权利要求1所述的方法产生的所述病毒组合物。61.一种免疫原性组合物，其包含溶解于医药学上可接受的载剂中的通过权利要求24所述的方法产生的所述病毒组合物。62.一种免疫原性组合物，其包含通过权利要求43所述的方法产生的所述鼻喷雾病毒组合物。63.一种用于产生储存稳定病毒组合物的方法，所述病毒组合物包含选自由单纯疱疹病毒(HSV)、细胞肥大病毒(CMV)、Epstein-Barr病毒、水痘-带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、流感病毒、脊髓灰质炎病毒、鼻病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、诺沃克病毒(Norwalkvirus)、披膜病毒、α病毒、风疹病毒、狂犬病病毒、马堡病毒(Marburgvirus)、伊波拉病毒(Ebolavirus)、乳头状瘤病毒、人乳头状瘤病毒(HPV)、多瘤病毒、间质肺炎病毒(metapneumovirus)、冠状病毒、水疱性口炎病毒(VSV)和委内瑞拉马脑炎病毒(VEE)组成的群组的病毒，所述方法包含(a)于60分钟或更少的时间内将所述病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度；和(b)冻干所述病毒组合物，其中所述冻干病毒组合物在约1℃到约10℃的储存温度下可稳定至少1年。64.根据权利要求63所述的方法，其中所述玻璃态转化温度为约-40℃到约-50℃。65.根据权利要求63所述的方法，其中所述玻璃态转化温度为约-30℃到约-40℃。66.根据权利要求65所述的方法，其中在40分钟或更少的时间内达到约-35℃的所述玻璃态转化温度。67.根据权利要求65所述的方法，其中在20分钟或更少的时间内达到约-35℃的所述玻璃态转化温度。68.根据权利要求63所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。69.根据权利要求68所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。70.根据权利要求69所述的方法，其进一步包含约0.25mM到约25mMN-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙烷磺酸(HEPES)。71.根据权利要求69所述的方法，其进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。72.根据权利要求69所述的方法，其进一步包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。73.根据权利要求72所述的方法，其进一步包含蔗糖、L(+)-谷氨酸或L(+)-谷氨酸单钠盐或L(+)-谷氨酸/L(+)-谷氨酸单钠盐的混合物和人类白蛋白(HA)。74.根据权利要求73所述的方法，其中HA为天然的或重组的。75.根据权利要求73所述的方法，其进一步包含大豆蛋白胨。76.根据权利要求73所述的方法，其进一步包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物和约1.0g/L到约10.0g/LHA。77.根据权利要求76所述的方法，其中约1.0g/L到约10.0g/LHA由约50g/L大豆蛋白胨替换。78.根据权利要求73所述的方法，其包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约1.0g/L到约10g/LHA和约50g/L大豆蛋白胨。79.根据权利要求63所述的方法，其中所述储存温度为5℃。80.根据权利要求63所述的方法，其中所述病毒组合物在约1℃到约10℃下储存1年后具有小于约1.0log的PFU损失。81.根据权利要求63所述的方法，其中所述病毒组合物在约1℃到约10℃下储存1年后为每0.2mL至少4.0logPFU。82.根据权利要求63所述的方法，其中步骤(b)中冻干所述病毒组合物包含在合适容器构件中约0.2mL到约1.0mL的所述病毒组合物。83.根据权利要求82所述的方法，其中容器构件被进一步定义为小瓶、管或鼻喷雾装置。84.根据权利要求63所述的方法，其中冻干所述病毒组合物被进一步定义为(a)将约0.5mL到0.6mL的所述病毒组合物放置于小瓶中并冷却到约5℃的温度；(b)将所述小瓶放置在冻干架上并以每分钟约-1.0℃到每分钟约-2.0℃的速率将所述架子温度从5℃降低到-50℃；(c)保持所述架子温度为约-50℃持续60分钟；(d)降低冻干室压力到0.10托并保持所述架子温度为约-50℃持续30-60分钟；(e)在约0.10托下以每分钟约1.0℃到约2.0℃的速率将所述架子温度从-50℃升高到0℃，并保持所述架子温度为约0℃持续约540分钟到约720分钟；(f)在约0.10托下以每分钟约0.5℃的速率将所述架子温度从0℃升高到15℃，并保持所述架子温度为约15℃持续约600分钟到约720分钟；和(g)用氮气充满所述小瓶并密封所述小瓶。85.根据权利要求63所述的方法，其中冻干所述病毒组合物被进一步定义为(a)将约0.5mL到0.6mL的所述病毒组合物放置于小瓶中并冷却到约5℃的温度；(b)冷冻冻干架到约-70℃的温度；(c)将所述小瓶放置在所述冻干架上并保持所述温度为约-70℃持续约60分钟；(d)降低冻干室压力到0.10托并以每分钟约1.0℃的速率将所述架子温度从-70℃升高到-50℃；(e)在约0.10托下以每分钟约1.0℃到每分钟约2.0℃的速率将所述架子温度从-50℃升高到0℃，并保持所述架子温度为约0℃持续约540分钟到约720分钟；(f)在约0.10托下以每分钟约0.5℃的速率将所述架子温度从0℃升高到15℃，并保持所述架子温度为约15℃持续约600分钟到约720分钟；和(g)用氮气充满所述小瓶并密封所述小瓶。86.一种用于产生冻干稳定大体积病毒组合物的方法，所述病毒组合物包含一选自由HSV、CMV、Epstein-Barr病毒、水痘-带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、流感病毒、脊髓灰质炎病毒、鼻病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、诺沃克病毒、披膜病毒、α病毒、风疹病毒、狂犬病病毒、马堡病毒、伊波拉病毒、乳头状瘤病毒、HPV、多瘤病毒、间质肺炎病毒、冠状病毒、VSV和VEE组成的群组的病毒，所述方法包含(a)将具有至少50mL体积的液体病毒组合物放置于冻干盘中；(b)在液氮浴中将所述病毒组合物冷冻至低于其玻璃态转化温度达至少约20分钟；和(c)冻干所述病毒组合物，其中所述冻干病毒组合物相对于冻干前的所述病毒组合物具有小于约0.5log的PFU损失。87.根据权利要求86所述的方法，其中所述玻璃态转化温度为约-45℃。88.根据权利要求86所述的方法，其中所述玻璃态转化温度为约-35℃的温度。89.根据权利要求86所述的方法，其中所述冻干盘为Lyoguard冻干盘。90.根据权利要求86所述的方法，其中所述病毒组合物的体积为至少500mL。91.根据权利要求86所述的方法，其中所述病毒组合物的体积为至少1000mL。92.根据权利要求86所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。93.根据权利要求92所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。94.根据权利要求93所述的方法，其进一步包含约2.5mM到约25mMHEPES。95.根据权利要求93所述的方法，其进一步包含约0.1mM到约1mM氯化镁和约0.1mM到约1mM氯化钙。96.根据权利要求93所述的方法，其进一步包含约2.5mM到约25mMHEPES、约0.1mM到约1mM氯化镁和约0.1mM到约1mM氯化钙。97.根据权利要求96所述的方法，其进一步包含蔗糖、L(+)-谷氨酸或L(+)-谷氨酸单钠盐和人类白蛋白(HA)。98.根据权利要求97所述的方法，其中HA为天然的或重组的。99.根据权利要求97所述的方法，其进一步包含大豆蛋白胨。100.根据权利要求97所述的方法，其进一步包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物和约1.0g/L到约10.0g/LHA。101.根据权利要求100所述的方法，其中约1.0g/L到约10.0g/LHA由约50g/L大豆蛋白胨替换。102.根据权利要求99所述的方法，其包含约50g/L蔗糖、约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸或约0.049mM到约2.45mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物、约1.0g/LHA和约50g/L大豆蛋白胨。103.根据权利要求86所述的方法，其中冻干所述大体积病毒组合物被进一步定义为(a)在约-50℃的温度下将包含所述冷冻病毒组合物的冻干盘放置于预冷却到约-50℃温度的冻干架上，并保持所述温度约60分钟；(b)降低冻干室压力到0.10托并在约0.10托下以每分钟约0.23℃的速率将所述架子温度从-50℃升高到-23℃；(c)保持所述架子温度为约-23℃持续约80小时到约100小时；(d)降低冻干室压力到0.02托并以每分钟约0.23℃的速率将所述架子温度从-23℃升高到15℃；(e)将架子温度保持在约15℃并保持在约0.02托，持续约30小时到约40小时；(f)在0.02托下以每分钟约0.17℃的速率将所述架子温度从15℃升高到25℃；(h)将架子温度保持在约25℃并保持在约0.02托，持续约10小时；和(i)用氮气充满所述冻干室并在氮气下将所述冻干盘密封于铝袋中。104.根据权利要求86所述的方法，其中冻干所述大体积病毒组合物被进一步定义为(a)在约-70℃的温度下将包含所述冷冻病毒组合物的冻干盘放置于预冷却到约-70℃的温度的冻干架上并保持所述温度约60分钟；(b)降低冻干室压力到0.10托并以每分钟约0.23℃的速率将所述架子温度从-70℃升高到-23℃；(c)在约0.10托下保持所述架子温度为约-23℃持续约80到100小时；(d)降低冻干室压力到0.02托并以每分钟约0.23℃的速率将所述架子温度从-23℃升高到15℃；(e)将温度保持在约15℃并保持在约0.02托，持续约30到40小时；(f)在0.02托下以每分钟约0.17℃的速率将所述架子温度从15℃升高到25℃；(g)保持所述温度为约25℃持续约10小时；和(h)用氮气充满冻干室并在氮气下将所述冻干盘密封于铝袋中。105.一种用于产生储存稳定液体病毒组合物的方法，所述病毒组合物包含选自由HSV、CMV、Epstein-Barr病毒、水痘-带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、流感病毒、脊髓灰质炎病毒、鼻病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、诺沃克病毒、披膜病毒、α病毒、风疹病毒、狂犬病病毒、马堡病毒、伊波拉病毒、乳头状瘤病毒、HPV、多瘤病毒、间质肺炎病毒、冠状病毒、VSV和VEE组成的群组的病毒，所述方法包含(a)在液氮浴中平衡金属板；(b)将液体病毒组合物放置于鼻喷雾装置中；(c)将步骤(b)的所述鼻喷雾装置插入金属固定器中；(d)将所述金属固定器放置于步骤(a)的所述经平衡的金属板上持续约10分钟；(e)从所述金属固定器中移除所述鼻喷雾装置；和(f)将所述鼻喷雾装置储存在约-20℃到约-70℃的温度下，其中步骤(a)到(f)后的所述病毒组合物在储存6个月后具有小于约0.5log的PFU损失。106.根据权利要求105所述的方法，其中所述金属固定器为铝。107.根据权利要求105所述的方法，其中所述金属固定器为不锈钢。108.根据权利要求105所述的方法，其中所述病毒组合物在步骤(a)到(f)之后为至少4.0logPFU/0.2mL。109.根据权利要求105所述的方法，其中所述病毒组合物在-20℃的温度下储存6个月后为至少4.0logPFU/0.2mL。110.根据权利要求105所述的方法，其中所述病毒组合物在-70℃的温度下储存6个月后为至少4.0logPFU/0.2mL。111.根据权利要求105所述的方法，其中在不存在蛋白稳定剂的情况下调配所述液体病毒组合物。112.根据权利要求105所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的5.0mM到约20mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。113.根据权利要求105所述的方法，其中在包含钠和/或钾单碱价盐和二碱价盐且pH值为约6.5到约7.8的10mM磷酸盐缓冲液溶液中调配所述病毒组合物。114.根据权利要求113所述的方法，其进一步包含约0.25mM到约25mMHEPES。115.根据权利要求113所述的方法，其进一步包含约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。116.根据权利要求113所述的方法，其进一步包含约0.25mM到约25mMHEPES、约0.01mM到约1mM氯化镁和约0.01mM到约1mM氯化钙。117.根据权利要求116所述的方法，其进一步包含蔗糖和L(+)-谷氨酸、L(+)-谷氨酸单钠盐或L(+)-谷氨酸与L(+)-谷氨酸单钠盐的混合物。118.根据权利要求117所述的方法，其进一步包含约75g/L蔗糖和约4.9mML(+)-谷氨酸或约4.9mML(+)-谷氨酸单钠盐或其混合物。119.一种根据权利要求63所述的方法产生的储存稳定病毒组合物。120.一种根据权利要求86所述的方法产生的冻干稳定大体积病毒组合物。121.一种根据权利要求105所述的方法产生的储存稳定冷冻液体病毒组合物。122.一种免疫原性组合物，其包含溶解于医药学上可接受的载剂中的通过权利要求63所述的方法产生的所述病毒组合物。123.一种免疫原性组合物，其包含溶解于医药学上可接受的载剂中的通过权利要求86所述的方法产生的所述病毒组合物。124.一种免疫原性组合物，其包含通过权利要求105所述的方法产生的所述鼻喷雾病毒组合物。全文摘要本发明涉及用于产生储存稳定病毒组合物的方法。在某些实施例中，本发明涉及一种或一种以上产生储存稳定病毒组合物的配方和方法步骤，其中所述组合物作为冻干固体组合物或冷冻液体组合物的形式储存稳定。文档编号A61K39/155GK1893973SQ200480037725公开日2007年1月10日申请日期2004年12月10日优先权日2003年12月17日发明者吉·隆·卢克,弗拉迪米尔·G·弗洛罗夫,南迪尼·克纳申请人:惠氏公司