维生素d的制作方法

专利名称：维生素d的制作方法
技术领域：
本发明涉及可用作药品的维生素D3内酰胺衍生物或其可药用溶剂化物。本发明进一步涉及对治疗选自骨质疏松症、高钙血症和骨Peget病中的一种或多种疾病有效的维生素D3内酰胺衍生物或其可药用溶剂化物。
背景技术：
骨Peget病是一种由骨盆、大腿骨、头盖骨等处骨吸收异常亢进引起骨变形和骨痛等症状的原因不明的疾病。当前使用的骨Peget病治疗剂为也用作骨质疏松症治疗剂的双膦酸酯制剂、降钙素制剂等等，然而前者的用量必须为对骨质疏松症患者的用量的4～5倍，导致存在用药顺应性的问题；后者则存在不能充分发挥骨吸收抑制作用的问题。并且，由于这些制剂是立足于药物的骨吸收抑制作用的对症治疗剂，不能期望根治疾病。
近年来，已发现从骨Peget病患者身上收集的破骨细胞前体细胞含有1α，25-二羟基维生素D3受体，并且其对1α，25-二羟基维生素D3的敏感度为正常人的破骨细胞前体细胞的10～100倍(J.Bone Miner.Res.，15卷，228～236页，2000年)。进一步地，由于骨Peget病患者血中的1α，25-二羟基维生素D3的浓度与正常人的相同，可以推测出由内源性1α，25-二羟基维生素D3导致的骨吸收亢进在骨Peget病的发作中扮演重要的角色。因此，抑制1α，25-二羟基维生素D3对破骨细胞前体细胞的作用的化合物，即维生素D的拮抗剂样化合物，可以根本地抑制骨Peget病患者骨吸收的加速，还可以期望比现有的骨吸收抑制剂具有更好的治疗效果。
另一方面，由各种疾病，例如淋巴瘤(Blood，82卷，1383～1394页，1993年)、结核(N.Ingl.J.Med.，311卷，1683～1685页，1984年)、肉样瘤病(J.Clin.Endocrinol.Metab.，60卷，960～966页，1985年)、念珠菌病(Am.J.Med.，74卷，721～724页，1983年)、肉芽肿(Am.J.Nephrol.，13卷，275～277页，1993年)、麻风病(Ann.Intern Med.，105卷，890～891页，1986年)、原发性甲状旁腺机能亢进症、恶性肿瘤等疾病引起的维生素D产生亢进导致高钙血症的发生。由于已知是活性维生素D3的作用而使得血钙浓度上升，因此可以认为对活性维生素D3拮抗的化合物，即维生素D3的拮抗剂，对于高钙血症的治疗是有效的。
进一步地，认为维生素D3拮抗剂作为骨质疏松症的治疗剂也是有效的。该疾病中骨吸收超过骨形成从而导致骨重量的减少，该疾病多在绝经后或随着年龄的增长而发生。双膦酸酯制剂、维生素D3衍生物、雌激素、降钙素等可以作为治疗药物使用。并且近年来，具有迄今为止最强的骨形成促进作用的甲状旁腺激素(PTH)进入临床，使得更有效的药物治疗成为可能。但是，PTH为注射剂，使得其在便利性、药物顺应性、价格等方面存在问题。因此，如果便宜的口服制剂可以达到与PTH相同的效果，这种药物是有用的。此外，PTH的分泌受血钙或活性维生素D3即1α，25-二羟基维生素D3等的控制，伴随这些成分浓度的下降PTH的分泌增加。因此，对1α，25-二羟基维生素D3有拮抗作用的化合物，即维生素D3拮抗剂可以促进PTH的分泌，可以期望其能发挥与上述PTH制剂相同的作用。
此外，在第22届医药化学专题讨论会暨第11届日本药学会医药化学部会年会(其核心内容于2002年11月5日出版)中，已经公开了下述式(1)中R1＝R2＝Me的化合物和R1＝Bn并且R2＝Me的化合物。但是，这些化合物不包括在本发明范围内。而且，其中并没有关于维生素D3拮抗活性的启示。
另外，国际公开WO 00/24712号说明书中公开了维生素D3侧链上具有内酰胺结构的衍生物。但是，与本发明化合物的化学结构相比，有下列不同点该化合物内酯环上的氮原子未取代，并且25位上的取代基不包含羟基。其中也没有关于维生素D3拮抗活性的启示。
已知国际公开WO 95/33716号说明书、国际公开WO 03/070716号说明书、国际公开WO 94/07853号说明书、国际公开WO 97/00242号说明书和国际公开WO 97/41096号说明书中记载了作为具有维生素D3拮抗活性的维生素D3衍生物的化合物。然而，与本发明化合物相比，化学结构上有明显不同前二者侧链上具有α-外甲内酯(methylenelactone)结构，后三者侧链上具有22-烯-24-羟基结构。
此外，国际公开WO 03/000634号说明书中虽然也公开了具有维生素D3拮抗活性的维生素D3衍生物，但是与本发明的化合物不同，其1位结合有酯基。
已知维生素D3衍生物具有各种各样非常有趣的生物活性，迄今为止众多的研究者可以合成出各式各样的维生素D3衍生物。不管怎样，已经发现维生素D3拮抗活性的仅仅是三种相互没有共通性、覆盖范围狭小的衍生物中。即，可以说对于维生素D3衍生物的化学结构与维生素D3拮抗活性之间的关系还没有知识的积累。即使发现了一个维生素D3化合物具有维生素D3拮抗活性，也不能预料与之相比结构上仅有稍许变化的化合物也具有维生素D3拮抗活性。

发明内容
本发明的目的是提供一种对活性维生素D3的作用拮抗的化合物，即维生素D3拮抗剂。这种维生素D3拮抗剂被用作骨Peget病、高钙血症或骨质疏松症的治疗剂的有效成分。
本发明人针对上述目的进行研究，结果获得了以下发明。
也就是说，本发明为下式(1)表示的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物。
式(1)中，R1为C2～C10的烷基，或者芳环上可以被C1～C6的烷基、C1～C6的烷氧基、羟基、卤素原子、或三氟甲基取代的C7～C15的芳烷基；R2为C1～C10的烷基，或者芳环上可以被C1～C6的烷基、C1～C6的烷氧基、羟基、卤素原子、或三氟甲基取代的C7～C15的芳烷基；但R1为苄基并且R2为甲基的上述式(1)表示的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物除外。
23位和25位的立体构型可以分别独立地为(S)、(R)构型。本发明还包括这些立体异构体任意比例的混合物。
此外，本发明还包括含有上述式(1)表示的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物作为有效成分，治疗选自高钙血症、骨Peget病和骨质疏松症中的一种或多种疾病的治疗剂。而且，此处包括以R1为苄基并且R2为甲基的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物为有效成分的治疗剂。
具体实施例方式
本发明中的术语定义如下。
烷基是指直链、支链、或者环状的脂肪族烃基。C2～C10的烷基是指碳原子数为2～10的烷基，具体实例为乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、异戊基、己基、辛基、癸基、环丙基、环丙基甲基和环己基等。同样地，C1～C6的烷基的具体实例为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、异戊基、己基、环丙基、环丙基甲基和环己基等；C1～C10的烷基的具体实例为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、异戊基、己基、辛基、癸基、环丙基、环丙基甲基和环己基等。
C1～C6的烷氧基表示碳原子数为1～6的直链、支链或者环状的脂肪族烃氧基。例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、戊氧基、异戊氧基、己氧基、环丙氧基、环丙基甲氧基、环己氧基等。
C7～C15的芳烷基为芳香烃基取代的直链、支链、或者环状的脂肪族烃基，其总碳原子数为7～15。例如，苄基、苯乙基、3-苯基丙基、4-苯基丁基、5-苯基戊基、1-萘基甲基、2-萘基甲基、2-(1-萘基)乙基、2-(2-萘基)乙基、3-(1-萘基)丙基、3-(2-萘基)丙基、4-(1-萘基)丁基、4-(2-萘基)丁基、5-(1-萘基)戊基、5-(2-萘基)戊基等。
在本说明书中，苄基有时用“Bn”表示。
上述式(1)中，R1为C2～C10的烷基，或者芳环上可以被C1～C6的烷基、C1～C6的烷氧基、羟基、卤素原子、或三氟甲基取代的C7～C15的芳烷基。其中优选异丙基、丁基、己基、辛基、苄基、苯乙基、3-苯基丙基、4-苯基丁基、2-萘基甲基或者4-甲氧基苄基，特别优选苄基、苯乙基、4-苯基丁基或者4-甲氧基苄基。
上述式(1)中，R2为C1～C10的烷基，或者芳环上可以被C1～C6的烷基、C1～C6的烷氧基、羟基、卤素原子、或三氟甲基取代的C7～C15的芳烷基。其中优选甲基、乙基、丙基或者苄基，特别优选甲基、乙基或者丙基。
上述式(1)中，23位和25位的立体构型虽然可以分别独立地为(S)、(R)构型，但是优选23(R)、25(R)构型的化合物以及23(S)、25(S)构型的化合物，特别优选23(S)、25(S)构型的化合物。
作为本发明式(1)表示的维生素D3衍生物的优选具体实例，可以例举出下表中的化合物。其中，如果没有特别说明的话，表中化合物的23位和25位的立体构型可以为(S)构型或者(R)构型。



上述式(1)表示的维生素D3衍生物可由任何方法制备，例如可以根据反应流程

图1所示进行。即，由维生素D2通过文献已知的方法(例如，国际公开WO 2004/067525号说明书)获得的化合物(2)与结合了R1的羟胺在三乙基胺的存在下进行反应获得硝酸灵(nitron)(3)。R2取代的丙烯酸酯(4)加成到硝酸灵(3)中获得异唑烷衍生物(5)。当R不是甲基时，将R先转变为甲基；接着还原N-O键形成内酰胺环；最后TBS基团脱保护后获得目标产物(1)。
反应流程图1 目标产物还可以由反应流程图2所示的方法获得。即，使用由维生素D2通过文献已知的方法(例如国际公开WO 95/33716号说明书)获得的化合物(6)，进行与反应流程图1相同的反应，内酰胺环的羟基用TMS保护，从而获得具有内酰胺环的溴亚甲基衍生物(9)。该化合物利用Trost等的方法(J.Am.Chem.Soc.，1992年，114卷，9836～9845页)与烯炔化合物(10)(例如按照Tetrahedron Lett.，1994年，35卷，8119～8122页记载的方法得到)在钯催化剂的存在下进行偶联反应，接着脱保护除去TBS基团获得目标产物(1)。
反应流程图2 通过上述方法得到的维生素D3必要时可以转变为相应的前面提及的可药用溶剂化物。这种溶剂的实例为水、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、丁醇、2-甲基-2-丙醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、叔丁基甲基醚、苯、甲苯、DMF、DMSO等。特别优选水、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、乙腈、丙酮、甲乙酮和乙酸乙酯。
作为药物有效成分，本发明化合物可以制成通常的药物制剂，可以口服的方式，或者通过静脉、皮下、肌肉、经皮、经鼻、直肠等非口服的方式或者吸入的方式给药。本发明化合物的有效成分的治疗有效量因给药方式、患者年龄、性别、疾病程度而异，但通常约为0.001～1000μg/天，优选约0.01～100μg/天，给药次数通常为1～3次/天。优选制成满足这些条件的制剂。
实施例下面，通过实施例进一步详细说明本发明，但是本发明并不受此限制。各个实施例中的化合物编号与上述表中所示的化合物编号、或者上述反应流程图1或2中的化合物编号对应。
参考例12-苯基乙基羟胺的制备
在氮气氛围中，在0℃下向BH3-THF的THF溶液1.1mL(1.0M，1.1mmol)中滴入160.0mg反式-β-硝基苯乙烯(1.1mmol)的THF溶液(2.2mL)。加入3.3mg的NaBH4(0.087mmol)，室温下搅拌20分钟。在0℃下加入5mL水，加入2M的HCl水溶液使溶液为酸性，在65℃下搅拌4小时。用乙酸乙酯萃取后，向水层中加入15％的NaOH水溶液和NaCl，进一步用乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸镁干燥后，过滤，蒸去溶剂。残渣用闪蒸柱色谱(フラツシユカラムクロマトグラフイ一)(氯仿∶甲醇＝1∶0→10∶1)纯化得到白色结晶目标产物(62.7mg，43％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.47(brs，1H)，7.31-7.20(m，5H)，3.26(t，J＝7.3Hz，2H)，2.97(t，J＝7.3Hz，2H)。
参考例23-苯基丙基羟胺的制备 (1)向0.16mL的3-苯基丙醛(1.20mmol)的二氯甲烷溶液5.0mL中加入166.7mg羟胺盐酸盐(2.40mmol)和0.7mL的Et3N(5.05mmol)，室温搅拌2小时。在0℃下加入饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取。用无水硫酸镁干燥后，过滤，蒸去溶剂。残渣用闪蒸柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)纯化得到白色结晶化合物A(190.0mg，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.47(t，J＝6.0Hz，1H)，7.32-7.19(m，5H)，6.80(brs，1H)，2.83(dd，J＝7.3，15.0Hz，2H)，2.74(m，1H)，2.54(m，1H)。
(2)在室温下向46.8mg的化合物A(0.31mmol)的甲醇溶液2.0mL中加入13.8mg的NaBH3CN(0.22mmol)。加入2M的HCl-MeOH溶液，维持pH＝3，在室温下搅拌2小时。加入15％的NaOH水溶液使之成为碱性后，加入氯化钠，用苯萃取。用无水硫酸镁干燥后，过滤，蒸去溶剂。残渣用闪蒸柱色谱(氯仿∶甲醇＝1∶0→10∶1)纯化得到白色结晶目标产物(30.7mg，65％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.18(m，5H)，5.06(brs，2H)，2.97(t，J＝7.2Hz，2H)，2.67(t，J＝7.7Hz，2H)，1.89(m，2H)。
参考例34-苯基丁基羟胺的制备 (1)在氮气氛围中，向CH3NO2(8.1mL)中加入0.27mL的Et3N(1.95mmol)，0℃下搅拌5分钟。在0℃下加入2.0mL的3-苯基丙醛(15.08mmol)，搅拌20小时。用乙酸乙酯稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤。用无水硫酸镁干燥后，过滤，蒸去溶剂。残渣用闪蒸柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)纯化得到白色结晶化合物B(2.72g，93％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.32-7.17(m，5H)，4.40(m，2H)，4.32(m，1H)，2.89-2.72(m，2H)，2.60(brs，1H)，1.96-1.76(m，2H)。
(2)在氮气氛围中，向500.0mg化合物B(2.55mmol)的二氯甲烷溶液10.0mL中加入1.4mL的Et3N(10.1mmol)后，于0℃下滴入0.6mL的MsCl(7.7mmol)，0℃下搅拌3小时。加水后，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后，蒸去溶剂。残渣用闪蒸柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝20∶1)纯化得到白色结晶化合物C(396.1mg，88％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.34-7.23(m，5H)，7.18(d，J＝7.7Hz，1H)，6.96(d，J＝13.3Hz，1H)，2.84(t，J＝7.5Hz，2H)，2.60(dd，J＝7.5，14.7Hz，2H)。
(3)在氮气氛围中，在0℃下向1.02M的BH3-THF的2.2mL溶液(2.24mmol)中滴入396.1mg化合物C(2.24mmol)的THF溶液20.0mL。加入3.0mg的NaBH4(0.08mmol)，在室温下搅拌1小时。在0℃下加入20mL水后，加入2M的HCl水溶液使之成为酸性，在65℃下搅拌2小时。用乙酸乙酯萃取后，向水层中加入15％的NaOH水溶液和氯化钠，进一步用乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸镁干燥后，过滤，蒸去溶剂。残渣用闪蒸柱色谱(氯仿∶甲醇＝10∶1)纯化得到白色结晶目标产物(286.2mg，77％)。
1H NMR(CDCl3)δ9.88(brs，2H)，7.28-7.14(m，5H)，3.28(brs，2H)，2.63(t，J＝7.6Hz，2H)，1.89(m，2H)，1.70(m，2H)。
参考例44-甲氧基苄羟胺的制备 (1)向1.4mL 4-甲氧基苯甲醛(11.57mmol)的二氯甲烷溶液50.0mL中加入1.39g羟胺盐酸盐(20mmol)和5.5mL的Et3N(39.68mmol)，室温搅拌24小时。在0℃下加入饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取。用无水硫酸镁干燥后，过滤，蒸去溶剂。残渣用闪蒸柱色谱(氯仿)纯化得到白色结晶化合物D(1.87g，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ8.10(s，1H)，7.52(d，J＝8.8Hz，2H)，6.91(d，J＝8.8Hz，2H)，3.84(s，3H)。
(2)在室温下向77.8mg化合物D(0.52mmol)的甲醇溶液1.0mL中加入22.7mg的NaBH3CN(0.36mmol)。加入2M的HCl-MeOH溶液，维持pH＝3，在室温下搅拌3小时。加入15％的NaOH水溶液使之成为碱性后，加入氯化钠，用乙酸乙酯萃取。用无水硫酸镁干燥后，过滤，蒸去溶剂。残渣用闪蒸柱色谱(氯仿∶甲醇＝1∶0→10∶1)纯化得到白色结晶目标产物(73.5mg，92％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.25(d，J＝8.6Hz，2H)，6.87(d，J＝8.6Hz，2H)，4.73(brs，2H)，3.97(s，2H)，3.80(s，3H)。
参考例52-乙基丙烯酸邻苯二甲酰亚氨基甲酯的制备(反应流程图1的化合物(4)(R2＝Et，R＝Pim)) 将250mg的2-乙基丙烯酸(2.5mmol)溶于8.0mL的无水二甲苯甲酰胺中，加入660.0mg的N-溴代甲基邻苯二甲酰亚胺(2.8mmol)和291.0mg的氟化钾(5.0mmol)，在氮气氛围中，在80℃搅拌12小时。往反应液减压浓缩所得的残渣中加入80mL水，用二氯甲烷萃取，有机层用硫酸镁干燥。减压浓缩所得残渣用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)纯化得到目标产物(463.1mg，72％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.94(dd，J＝5.4，3.2Hz，2H)，7.79(dd，J＝2.8，1.4Hz，2H)，6.16(d，J＝1.0Hz，1H)，5.80(s，2H)，5.57(d，J＝1.5Hz，1H)，2.35-2.25(m，2H)，1.06(t，J＝7.4Hz，3H)。
参考例62-丙基丙烯酸邻苯二甲酰亚氨基甲酯的制备(反应流程图1的化合物(4)(R2＝Pr，R＝Pim)) 使用2-丙基丙烯酸(300mg，2.63mmol)按照与参考例5同样的方法进行反应，得到目标产物(643.2mg，90％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.94(dd，J＝5.4，2.7Hz，2H)，7.79(dd，J＝5.4，2.7Hz，2H)，6.16(d，J＝0.7Hz，1H)，5.80(s，2H)，5.57(d，J＝1.5Hz，1H)，2.32-2.23(m，2H)，1.55-1.43(m，2H)，0.96-0.89(m，3H)。
实施例11α，25-二羟基维生素D3-26，23-内酰胺-N-异丙基(化合物11)的制备
(1)在氮气氛围中，往通过文献记载的方法(例如国际公开WO2004/067525号说明书)得到的化合物(2)53.7mg(0.092mmol)的二氯甲烷溶液2.0mL中加入20.5mg异丙基羟胺(0.18mmol)和0.05mL的Et3N(0.36mmol)，在室温下搅拌2小时。反应液冷却到0℃，加入饱和NH4Cl水溶液，用二氯甲烷萃取。用无水硫酸镁干燥后，过滤，蒸去溶剂。残渣用闪蒸柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝10∶1→氯仿∶甲醇＝10∶1)纯化得到无色透明的油状化合物(3)(R1＝iPr)(47.1mg，80％)。
1H NMR(CDCl3)δ6.74(t，J＝5.9Hz，1H)，6.23(d，J＝11.0Hz，1H)，6.01(d，J＝11.5Hz，1H)，5.17(d，J＝1.5Hz，1H)，4.85(d，J＝2.4Hz，1H)，4.36(dd，J＝3.4，6.3Hz，1H)，4.18(m，1H)，4.02(m，1H)，2.82(d，J＝12.2Hz，1H)，2.57(m，1H)，2.44(d，J＝12.9Hz，1H)，2.31(m，1H)，2.21(dd，J＝7.6，12.9Hz，1H)，2.01-1.25(m，14H)，1.41(d，J＝6.3Hz，6H)，0.99(d，J＝6.6Hz，3H)，0.87(m，18H)，0.55(s，3H)，0.06(m，12H)。
(2)在氮气氛围中，向上述所得的化合物(3)(R1＝iPr)(47.1mg，0.073mmol)的甲苯溶液3.0mL中加入0.078mL甲基丙烯酸甲酯(化合物(4)(R2＝R＝Me)，0.73mmol)，在90℃下搅拌24小时。冷却到室温后，蒸去溶剂，残渣用闪蒸柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝50∶1→10∶1)纯化，得到无色透明的油状化合物(5)(R1＝iPr，R2＝R＝Me)(51.8mg，95％)。
1H NMR(CDCl3)δ6.24(d，J＝11.0Hz)，6.02(d，J＝11.2H)，5.18(brs)，4.86(d，J＝2.4Hz)，4.37(m)，4.20(m)，3.74(m)，3.25(m)，3.12(dd，J＝7.3，12.7Hz)，3.01-2.93(m)，2.80(m)，2.45(m)，2.22(dd，J＝7.6，12.9Hz)，2.02-0.94(m)，1.51(m)，0.89(m)0.55(m)，0.07(m)。
(3)将上述得到的化合物(5)(R1＝iPr，R2＝R＝Me)51.8mg(0.070mmol)溶于乙腈-水混合溶剂(7∶1，3.5mL)中，并加入66.7mg六羰基钼(0.25mmol)和0.5mg的NaBH4(0.013mmol)，90℃下加热回流4小时。硅藻土过滤后，蒸去溶剂，残渣用闪蒸柱色谱(氯仿∶甲醇＝1∶0→10∶1)纯化，得到无色透明的油状内酰胺环化物(23.9mg，48％)。
1H NMR(CDCl3)δ6.24(d，J＝11.0Hz)，6.02(d，J＝10.7Hz)，5.18(s)，4.86(s)，4.38(m)，4.19(m)，3.96-3.16(m)，2.83(d，J＝12.2Hz)，2.45(d，J＝13.4Hz)，2.36-1.26(m)，1.00(m)，0.88(m)，0.54(m)，0.07(m)。
在0℃下向所得的内酰胺环化物40.5mg(0.083mmol)的THF溶液3.0mL中加入2mL的HF·Py，搅拌3小时。用乙酸乙酯稀释后，加入固体碳酸氢钠和饱和碳酸氢钠水溶液。用乙酸乙酯萃取后，用饱和食盐水洗涤。用无水硫酸镁干燥后，过滤，蒸去溶剂。残渣用闪蒸柱色谱(氯仿∶甲醇＝1∶0→10∶1)纯化，得到无色透明的油状化合物11(16.6mg，60％)。将18.8mg这样得到的化合物11用反相HPLC(ODS柱，流动相A＝95％H2O/CH3CN，B ＝0.5％H2O/60％CH3CN/MeOH，B＝75％)分离纯化非对映异构体，得到化合物11a(23S，25S体)1.6mg(5.1％)，化合物11b(23R，25R体)1.8mg(5.8％)，化合物11c(23S，25R体)1.9mg(6.1％)，化合物11d(23R，25S体)2.2mg(7.1％)。
化合物11a1H-NMR(CDCl3)δ6.38(d，J＝11.5Hz，1H)，6.03(d，J＝11.2Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，4.02-3.92(m，1H)，3.73-3.63(m，1H)，2.87-2.80(m，1H)，2.64-2.21(m，4H)，2.07-1.22(m，25H)，1.00(d，J＝5.9Hz，3H)，0.59(s，3H)。
化合物11b1H NMR(CDCl3)δ6.38(D，J＝11.2Hz，1H)，6.03(d，J＝10.7Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，3.95-3.84(m，1H)，3.66-3.55(m，1H)，2.88-2.80(m，1H)，2.65-2.26(m，4H)，2.08-1.08(m，25H)，1.02(d，J＝6.3Hz，3H)，0.65(s，3H)。
化合物11c
1H-NMR(CDCl3)δ6.38(D，J＝11.2Hz，1H)，6.02(d，J＝11.5Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，3.97-3.88(m，1H)，3.60-3.49(m，1H)，2.87-2.80(m，1H)，2.63-2.53(m，2H)，2.32(dd，J＝12.6，6.7Hz，1H)，2.20(dd，J＝12.6，6.7Hz，1H)，2.05-1.20(m，25H)，0.99(d，J＝6.3Hz，3H)，0.57(s，3H)。
化合物11d1H-NMR(CDCl3)δ6.38(d，J＝11.2Hz，1H)，6.03(d，J＝11.2Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.43(brs，1H)，4.23(brs，1H)，3.89-3.80(m，1H)，3.48-3.40(m，1H)，2.87-2.80(m，1H)，2.63-2.50(m，2H)，2.32(dd，J＝12.7，6.5Hz，1H)，2.25(dd，J＝12.7，6.8Hz，1H)，2.10-1.15(m，25H)，1.03(d，J＝6.6Hz，3H)，0.57(s，3H)。
参考例71α，25-二羟基维生素D3-26，23-内酰胺-N-苄基(化合物51)的制备 (1)使用化合物(2)63.3mg(0.11mmol)和苄羟胺35.0mg(0.22mmol)按照与实施例1(1)同样的方法得到无色透明的油状化合物(3)(R1＝Bn)(77.7mg，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.39-7.32(m，5H)，6.78(brs，1H)，6.22(d，J＝11.0Hz，1H)，6.00(d，J＝11.0Hz，1H)，5.17(s，1H)，4.94(brs，2H)，4.85(m，1H)，4.36(m，1H)，4.18(m，1H)，2.81(d，J＝11.2Hz，1H)，2.43(d，J＝12.8Hz，1H)，2.21(m，1H)，1.96-1.19(m，16H)，0.94-0.87(m，21H)，0.51(s，3H)，0.05(s，12H)。
(2)使用如上得到的化合物(3)(R1＝Bn)77.7mg(0.12mmol)按照与实施例1(2)相同的方法得到无色透明的油状化合物(5)(R1＝Bn，R2＝R＝Me)(68.0mg，77％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.40-7.31(m)，6.23(d，J＝10.0Hz)，6.01(d，J＝10.8Hz)，5.18(m)，4.86(m)，4.38(m)，4.19(m)，4.13-3.88(m)，3.76(s)，3.13-1.26(m)，0.89(s)，0.69(d，J＝6.1Hz)，0.54-0.50(m)，0.06(s)。
(3)使用如上得到的化合物(5)(R1＝Bn，R2＝R＝Me)41.0mg(0.052mmol)按照与实施例1(3)相同的方法得到无色透明的油状内酰胺环化物(21.7mg，55％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.38-7.20(m)，6.23-6.21(m)，6.02-5.99(m)，5.18(s)，4.86(m)，4.37(m)，4.19(m)，4.09(d，J＝15.0Hz)，3.98(d，J＝15.0Hz)，3.52(m)，3.30(m)，2.81(m)，2.43(m)，2.27-1.25(m)，1.10-0.87(m)，0.54-0.46(m)，0.10-0.06(m)。
使用如上得到的内酰胺环化物21.7mg(0.029mmol)按照与实施例1(3)同样的方法(非对映异构体分离用正相HPLC(硅胶柱，流动相己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝35/52/13，或者己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝51/45/4)进行)，分别得到化合物51a(23S，25S体)2.3mg(15％)，化合物51b(23R，25R体)2.3mg(15％)，化合物51c(23S，25R体)1.5mg(9.9％)，化合物51d(23R，25S体)0.6mg(3.8％)。
化合物51a[α]24D＝+3.54(c0.20，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.33-7.22(m，5H)，6.37(d，J＝11.5Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.32(s，1H)，4.99(s，1H)，4.97(d，J＝11.1Hz，1H)，4.43(m，1H)，4.23(m，1H)，3.97(d，J＝12.0Hz，1H)，3.51(m，1H)，2.82(d，J ＝12.4Hz，1H)，2.59(d，J＝10.3Hz，1H)，2.32(dd，J＝6.4，13.7Hz，1H)，2.27(dd，J＝7.7，13.7Hz，1H)，2.05-1.84(m，5H)，1.66(dd，J＝5.1，13.3Hz，1H)，1.68-1.17(m，12H)，1.49(s，3H)，0.88(m，2H)，0.77(d，J＝6.0Hz，3H)，0.53(s，3H)。
化合物51b[α]24D＝+13.73(c0.32，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.33-7.18(m，5H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.00(d，J＝11.1Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.00(s，1H)，4.98(d，J＝15.0Hz，1H)，4.44(m，1H)，4.23(m，1H)，4.06(d，J＝15.4Hz，1H)，3.50(m，1H)，2.81(d，J＝12.8Hz，1H)，2.60(d，J＝9.8Hz，1H)，2.48(brs，1H)，2.36(dd，J＝7.7，13.3Hz，1H)，2.31(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.04(m，1H)，1.92(m，3H)，1.77(dd，J＝5.1，13.3Hz，1H)，1.66-1.20(m，11H)，1.50(s，3H)，1.03(m，2H)，0.88(m，1H)，0.86(d，J＝6.4Hz，3H)，0.48(s，3H)。
化合物51c[α]24D＝+13.75(c0.155，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.34-7.18(m，5H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.00(d，J＝11.5Hz，1H)，5.32(s，1H)，5.00(d，J＝14.5Hz，1H)，4.99(s，1H)，4.43(m，1H)，4.23(m，1H)，4.06(d，J＝15.2Hz，1H)，3.27(m，1H)，2.82(d，J＝12.4Hz，1H)，2.76(brs，1H)，2.60(d，J＝13.5Hz，1H)，2.33(m，1H)，2.21(dd，J＝6.4，12.8Hz，1H)，2.19-1.95(m，5H)，1.73(dd，J＝8.1，12.8Hz，1H)，1.68-1.20(m，12H)，1.35(s，3H)，0.88(m，4H)，0.76(d，J＝6.4Hz，3H)，0.51(s，3H)。
化合物51d[α]24D＝-11.38(c0.058，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.33-7.14(m，5H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.00(d，J＝11.5Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.01(d，J＝15.0Hz，1H)，4.99(s，1H)，4.43(m，1H)，4.23(m，1H)，4.06(d，J＝15.2Hz，1H)，3.28(m，1H)，2.81(d，J＝12.8Hz，1H)，2.68(brs，1H)，2.60(d，J＝16.7Hz，1H)，2.32(m，1H)，2.27(dd，J＝6.4，12.8Hz，1H)，2.17-1.92(m，5H)，1.87(dd，J＝8.1，12.8Hz，1H)，1.75-1.22(m，11H)，1.39(s，3H)，1.06(m，2H)，0.87(d，J＝6.4Hz，3H)，0.48(s，3H)。
实施例21α，25-二羟基维生素D3-26，23-内酰胺-N-(2-苯乙基)(化合物61)的制备 (1)使用化合物(2)27.4mg(0.047mmol)和参考例1所得的2-苯乙基羟胺13.0mg(0.095mmol)按照与实施例1(1)同样的方法得到无色透明的油状化合物(3)(R1＝Ph(CH2)2)(33.5mg，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.30-7.20(m，5H)，6.38(brs，1H)，6.23(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.18(s，1H)，4.86(d，J＝2.6Hz，1H)，4.37(dd，J＝3.4，6.8Hz，1H)，4.19(m，1H)，3.96(t，J＝6.6Hz，2H)，3.21(m，2H)，2.82(d，J＝12.4Hz，1H)，2.44(m，2H)，2.23(m，2H)，1.95-1.17(m，14H)，0.87(s，18H)，0.79(d，J＝6.8Hz，3H)，0.50(s，3H)，0.06(s，12H)。
(2)使用如上得到的化合物(3)(R1＝Ph(CH2)2)73.5mg(0.104mmol)按照与实施例1(2)同样的方法得到无色透明的油状化合物(5)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝R＝Me)(75.7mg，90％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.28-7.19(m)，6.23(d，J＝11.1Hz)，6.02(d，J＝11.1Hz)，5.18(s)，4.86(s)，4.38(m)，4.19(m)，3.78-3.76(m)，3.08-1.24(m)，0.94-0.88(m)0.53-0.50(m)，0.06(s)。
(3)使用如上得到的化合物(5)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝R＝Me)75.7mg(0.094mmol)按照与实施例1(3)相同的方法得到无色透明的油状内酰胺环化物(28.8mg，40％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.19(m)，6.23(d，J＝10.7Hz)，6.02-6.00(m)，5.19-5.18(m)，4.87-4.86(m)，4.38(m)，4.19(m)，4.01-3.76(m)，3.49(m)，3.28(m)，3.20-3.07(m)，2.93-2.72(m)，2.45(d，J＝11.3Hz)，2.35-1.14(m)，0.98-0.87(m)，0.56-0.52(m)，0.08-0.06(m)。
使用如上得到的内酰胺环化物28.8mg(0.037mmol)按照与实施例1(3)同样的方法(非对映异构体分离用正相HPLC(硅胶柱，流动相己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝35/52/13，或者己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝14/81/5)进行)，分别得到化合物61a(23S，25S体)5.2mg(26％)，化合物61b(23R，25R体)5.7mg(28％)，化合物61c(23S，25R体)1.6mg(7.9％)，化合物61d(23R，25S体)2.2mg(11％)。
化合物61a[α]24D＝+11.78(c0.52，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.21(m，5H)，6.37(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.32(s，1H)，4.99(s，1H)，4.43(dd，J＝4.3，7.7Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.79(m，1H)，3.47(m，1H)，3.19(m，1H)，2.90(m，1H)，2.85-2.77(m，2H)，2.60(d，J＝9.8Hz，1H)，2.32(dd，J＝6.8，13.3Hz，1H)，2.23(dd，J＝7.3，13.3Hz，1H)，2.01-1.21(m，20H)，1.41(s，3H)，0.87(d，J＝5.6Hz，3H)，0.55(s，3H)。
化合物61b[α]24D＝+32.12(c0.57，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.20(m，5H)，6.37(d，J＝11.1Hz，1H)，6.02(d，J＝11.1Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(dd，J＝4.3，7.7Hz，1H))，4.24(m，1H)，3.83(m，1H)，3.48(m，1H)，3.18(m，1H)，2.91(m，1H)，2.85-2.76(m，2H)，2.60(dd，J＝3.0，13.3Hz，1H)，2.53(brs，1H)，2.32(dd，J＝7.7，13.3Hz，1H)，2.02-1.20(m，19H)，1.69(dd，J＝5.1，13.3Hz，1H)，1.49(s，3H)，0.96(d，J＝6.8Hz，3H)，0.56(s，3H)。
化合物61c[α]24D＝+56.13(c0.16，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.30-7.19(m，5H)，6.37(d，J＝11.5Hz，1H)，6.02(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.44(dd，J＝4.3，7.7Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.97(m，1H)，3.26(m，1H)，3.19(m，1H)，2.90(m，1H)，2.83(d，J＝13.3Hz，1H)，2.76(m，1H)，2.61(d，J＝13.3Hz，1H)，2.31(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.14(dd，J＝6.4，12.8Hz，1H)，2.01-1.13(m，19H)，1.62(dd，J＝8.1，12.8Hz，1H)，1.25(s，3H)，0.89(d，J＝6.0Hz，3H)，0.54(s，3H)。
化合物61d 24D＝+1.81(c0.22，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.28-7.16(m，5H)，6.36(d，J＝11.5Hz，1H)，6.01(d，J＝11.5Hz，1H)，5.32(s，1H)，4.99(s，1H)，4.43(m，1H)，4.22(m，1H)，3.96(m，1H)，3.26(m，1H)，3.18(m，1H)，2.89(m，1H)，2.81(m，1H)，2.72(m，1H)，2.58(m，1H)，2.57-2.27(m，2H)，2.17(dd，J＝6.4，12.4Hz，1H)，2.02-1.13(m，18H)，1.75(dd，J＝8.1，12.4Hz，1H)，1.23(s，3H)，0.96(d，J＝6.4Hz，3H)，0.55(s，3H)。
实施例31α，25-二羟基维生素D3-26，23-内酰胺-N-(3-苯基)丙基(化合物71)的制备 (1)使用化合物(2)120.7mg(0.206mmol)和参考例2所得的3-苯基丙羟胺(63.0mg，0.42mmol)按照与实施例1(1)同样的方法得到无色透明的油状化合物(3)(R1＝Ph(CH2)3)(166.0mg，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.30-7.18(m，5H)，6.65(t，J＝5.7Hz，1H)，6.24(d，J＝11.2Hz，1H)，6.02(d，J＝11.2Hz，1H)，5.18(d，J＝1.5Hz，1H)，4.86(d，J＝2.4Hz，1H)，4.37(m，1H)，4.21(m，1H)，3.77(m，1H)，2.87-2.81(m，2H)，2.68(t，J＝7.4Hz，2H)，2.61-2.43(m，3H)，2.27(m，2H)，2.00-1.32(m，14H)，1.01(d，J＝6.6Hz，3H)，0.88(m，18H)，0.56(s，3H)，0.07(s，12H)。
(2)使用如上得到的化合物(3)(R1＝Ph(CH2)3)166.0mg(0.23mmol)按照与实施例1(2)同样的方法得到无色透明的油状化合物(5)(R1＝Ph(CH2)3，R2＝R＝Me)(151.2mg，90％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.30-7.14(m)，6.24(d，J＝11.2Hz)，6.02(d，J＝11.2Hz)，5.19(m)，4.87(m)，4.38(m)，4.20(m)，3.76-3.72(m)，2.85-2.44(m)，2.24(dd，J＝7.7，12.7Hz)，1.97-1.26(m)，0.90-0.88(m)，0.54-0.51(m)，0.07(m)。
(3)使用如上得到的化合物(5)(R1＝Ph(CH2)3，R2＝R＝Me)151.2mg(0.184mmol)按照与实施例1(3)相同的方法得到无色透明的油状内酰胺环化物(109.4mg，75％)。
1H NMR(CDClx)δ7.35-7.18(m)，6.26(d，J＝11.2Hz)，6.05(d，J＝11.2Hz)，5.23(s)，5.21(s)，4.91(s)，4.90(s)，4.41(m)，4.23(m)，3.72-3.44(m)，3.03(m)，2.86(d，J＝12.9Hz)，2.61(m)，2.48(d，J＝11.5Hz)，2.43-2.22(m)，2.01-1.27(m)，0.92(m)，0.59-0.55(m)，0.08(m)。
使用如上得到的内酰胺环化物95.0mg(0.12mmol)按照与实施例1(3)同样的方法(非对映异构体分离用正相HPLC(硅胶柱，流动相己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝32/58/10，或者己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝19/78/3)进行)，分别得到化合物71a(23S，25S体)14.2mg(21％)，化合物71b(23R，25R体)14.4mg(21％)，化合物71c(23S，25R体)9.2mg(14％)，化合物71d(23R，25S体)7.6mg(11％)。
化合物71a[α]24D＝+10.47(c0.45，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.28(m，2H)，7.19(m，3H)，6.37(d，J＝11.1Hz，1H)，6.02(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.43(dd，J＝4.3，7.7，Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.68(m，1H)，3.60(m，1H)，3.01(m，1H)，2.83(d，J＝12.8Hz，1H)，2.63(m，3H)，2.32(m，1H)，2.29(dd，J＝7.3，13.3Hz，1H)，2.07-1.25(m，21H)，1.60(dd，J＝5.6，13.3Hz，1H)，1.43(s，3H)，0.95(d，J＝5.6Hz，3H)，0.57(s，3H)。
化合物71b[α]24D＝+26.19(c0.57，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.27(m，2H)，7.18(m，3H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H))，6.02(d，J＝11.5Hz，1H)，5.35(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(m，1H)，4.24(m，1H)，3.61(m，2H)，3.00(m，1H)，2.83(m，1H)，2.61(m，3H)，2.37(dd，J＝7.7，13.3Hz，1H)，2.32(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.04-1.25(m，21H)，1.71(dd，J＝5.1，13.3Hz，1H)，1.43(s，3H)，0.97(d，J＝6.8Hz，3H)，0.53(s，3H)。
化合物71c[α]24D＝+56.21(c0.65，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.29(m，2H)，7.19(m，3H)，6.37(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.43(dd，J＝4.3，7.7Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.63(m，1H)，3.48(m，1H)，3.01(m，1H)，2.83(d，J＝12.8Hz，1H)，2.60(m，3H)，2.31(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.23(m，1H)，2.04-1.24(m，22H)，1.33(s，3H)，0.95(d，J＝6.0Hz，3H)，0.55(s，3H)。
化合物71d 24D＝+3.58(c0.24，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.29(m，2H)，7.18(m，3H)，6.38(d，J＝11.1Hz，1H)，6.03(d，J＝11.1Hz，1H)，5.35(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(m，1H)，4.24(m，1H)，3.66(m，1H)，3.43(m，1H)，3.02(m，1H)，2.83(d，J＝12.8Hz，1H)，2.60(m，3H)，2.32(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.27(dd，J＝6.4，12.8Hz，1H)，2.08-1.06(m，21H)，1.81(dd，J＝7.3，12.8Hz，1H)，1.33(s，3H)，1.00(d，J＝6.4Hz，3H)，0.54(s，3H)。
实施例41α，25-二羟基维生素D3-26，23-内酰胺-N-(4-苯基)丁基(化合物81)的制备 (1)使用化合物(2)112.0mg(0.19mmol)和参考例3所得的4-苯基丁羟胺63.0mg(0.38mmol)按照与实施例1(1)同样的方法得到无色透明的油状化合物(3)(R1＝Ph(CH2)4)(143mg，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.29-7.15(m，5H)，6.66(m，1H)，6.23(d，J＝11.2Hz，1H)，6.01(d，J＝11.2Hz，1H)，5.18(d，J＝1.5Hz，1H)，4.86(d，J＝2.2Hz，1H)，4.37(m，1H)，4.19(m，1H)，3.76(t，J＝6.8Hz，2H)，2.83(d，J＝11.7Hz，1H)，2.66(t，J＝7.7Hz，2H)，2.55(d，J＝18.3Hz，1H)，2.45(d，J＝12.9Hz，1H)，2.35(m，1H)，2.22(dd，J＝7.8，13.2Hz，1H)，1.97(m，2H)，1.91-1.30(m，14H)，1.66(m，2H)，0.99(d，J＝6.6Hz，3H)，0.89(s，9H)，0.88(s，9H)，0.55(s，3H)，0.06(s，12H)。
(2)使用如上得到的化合物(3)(R1＝Ph(CH2)4)143.0mg(0.19mmol)按照与实施例1(2)同样的方法得到无色透明的油状化合物(5)(R1＝Ph(CH2)4，R2＝R＝Me)(113.8mg，72％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.29-7.16(m)，6.24(d，J＝11.0Hz)，6.02(d，J＝11.0Hz)，5.18(s)，4.87(s)，4.38(m)，4.19(m)，3.73(m)，3.00-1.26(m)，0.95-0.88(m)，0.54(s)，0.06(s)。
(3)使用如上得到的化合物(5)(R1＝Ph(CH2)4，R2＝R＝Me)113.8mg(0.14mmol)按照与实施例1(3)相同的方法得到无色透明的油状内酰胺环化物(93.6mg，85％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.16(m)，6.24(d，J＝11.2Hz)，6.03(d，J＝10.8Hz)，5.20(m)，4.89(m)，4.39(m)，4.20(m)，3.66-2.94(m)，2.85(d，J＝11.2Hz)，2.67-2.61(m)，2.46(d，J＝9.9Hz)，2.37-1.27(m)，0.99-0.89(m)，0.57-0.54(m)，0.08(m)。
使用如上得到的内酰胺环化物93.6mg(0.12mmol)按照与实施例1(3)同样的方法(非对映异构体分离用正相HPLC(硅胶柱，流动相己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝30/60/10，或者己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝15/82/3)进行)，分别得到化合物81a(23S，25S体)11.3mg(17％)，化合物81b(23R，25R体)11.5mg(17％)，化合物81c(23S，25R体)8.3mg(12％)，化合物81d(23R，25S体)6.9mg(10％)。
化合物81a[α]24D＝+12.89(c0.94，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.27(m，2H)，7.17(m，3H)，6.37(d，J＝11.1Hz，1H)，6.02(d，J＝11.5Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.43(m，1H)，4.23(m，1H)，3.64-3.56(m，2H)，2.96(m，1H)，2.84(d，J＝12.8Hz，1H)，2.69-2.59(m，3H)，2.32(dd，J＝6.8，14.5Hz，1H)，2.29(m，1H)，2.01-1.25(m，24H)，1.42(s，3H)，0.92(brs，3H)，0.57(s，3H)。
化合物81b[α]24D＝+24.27(c1.05，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.26(m，2H)，7.16(m，3H)，6.37(d，J＝11.5Hz，1H)，6.03(d，J＝11.5Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(m，1H)，4.23(m，1H)，3.63(m，1H)，3.58(m，1H)，3.00(m，1H)，2.96(m，1H)，2.83(d，J＝12.4Hz，1H)，2.62(m，3H)，2.36(dd，J＝7.7，13.3Hz，1H)，2.32(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.05-1.17(m，23H)，1.70(dd，J＝5.6，13.3Hz，1H)，1.42(s，3H)，0.97(d，J＝6.4Hz，3H)，0.54(s，3H)。
化合物81c1H NMR(CDCl3)δ7.27(m，2H)，7.17(m，3H)，6.37(d，J＝11.1Hz，1H)，6.02(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.44(m，1H)，4.23(m，1H)，3.62(m，1H)，3.41(m，1H)，2.97(m，1H)，2.83(d，J＝12.5Hz，1H)，2.70-2.57(m，3H)，2.31(dd，J＝6.4，13.3Hz，1H)，2.22(dd，J＝6.4，12.4Hz，1H)，2.01-1.20(m，25H)，1.68(dd，J＝7.7，12.4Hz，1H)，1.33(s，3H)，0.91(d，J＝6.0Hz，3H)，0.55(s，3H)。
化合物81d 24D＝-5.87(c0.41，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.28(m，2H)，7.17(m，3H)，6.38(d，J＝11.5Hz，1H)，6.03(d，J＝11.1Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(m，1H)，4.23(m，1H)，3.68(m，1H)，3.37(m1H)，2.98(m，1H)，2.83(d，J＝12.8Hz，1H)，2.68-2.59(m，3H)，2.33(m，1H)，2.27(dd，J＝6.4，12.4Hz，1H)，2.04-1.25(m，23H)，1.81(dd，J＝7.7，12.4Hz，1H)，1.33(s，3H)，0.98(d，J＝6.4Hz，3H)，0.55(s，3H)。
实施例51α，25-二羟基维生素D3-26，23-内酰胺-N-(4-甲氧基)苄基(化合物101)的制备 (1)使用化合物(2)107.6mg(0.18mmol)和参考例4所得的4-甲氧基苄羟胺56.0mg(0.37mmol)按照与实施例1(1)同样的方法得到无色透明的油状化合物(3)(R1＝4-MeO(C6H4)CH2)(164.6mg，100％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.32(d，J＝8.8Hz，2H)，6.91(d，J＝8.8Hz，2H)，6.60(t，J＝5.5Hz，1H)，6.22(d，J＝11.2Hz，1H)，6.00(d，J＝11.2Hz，1H)，5.17(d，J＝1.7Hz，1H)，4.85(s，1H)，4.36(dd，J＝3.4，6.6Hz，1H)，4.19(m，1H)，3.81(m，3H)，2.82(d，J＝12.0Hz，1H)，2.55(d，J＝17.1Hz，1H)，2.44(d，J＝13.1Hz，1H)，2.35(m，1H)，2.22(dd，J＝7.6，13.1Hz，1H)，1.98-1.28(m，16H)，0.92(d，J＝6.6Hz，3H)，0.87(s，18H)，0.52(s，3H)，0.06(m，12H)。
(2)使用如上得到的化合物(3)(R1＝4-MeO(C6H4)CH2)164.6mg(0.23mmol)按照与实施例1(2)同样的方法得到无色透明的油状化合物(5)(R1＝4-MeO(C6H4)CH2，R2＝R＝Me)(103.0mg，68％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.35-7.28(m)，6.86-6.82(m)，6.23(d，J＝11.0Hz)，6.01(d，J＝11.0Hz)，5.18(s)，4.86(s)，4.37(dd，J＝3.2，6.3Hz)，4.19(m)，4.13-3.87(m)，3.80-3.76(m)，3.13-2.89(m)，2.82(d，J＝12.4Hz)，2.61-1.19(m)，2.45(d，J＝13.4Hz)，0.91-0.88(m)，0.54-0.50(m)，0.07(m)。
(3)使用如上得到的化合物(5)(R1＝4-MeO(C6H4)CH2，R2＝R＝Me)103.0mg(0.13mmol)按照与实施例1(3)相同的方法得到无色透明的油状内酰胺环化物(65.9mg，66％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.17-7.08(m)，6.84(d，J＝8.5Hz)，6.23(d，J＝11.2Hz)，6.02(d，J＝11.2Hz)，5.19(s)，4.98-4.87(m)，4.38(m)，4.20(m)，4.01-3.86(m)，3.81-3.79(m)，3.51(m)，3.26(m)，2.82(d，J＝12.7Hz)，2.45(d，J＝12.9Hz)，2.35-1.27(m)，0.90-0.89(m)，0.54-0.50(m)，0.08(m)。
使用如上得到的内酰胺环化物65.9mg(0.083mmol)按照与实施例1(3)同样的方法(非对映异构体分离用正相HPLC(硅胶柱，流动相己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝35/52/13，或者己烷/乙酸乙酯/2-丙醇＝15/82/3)进行)，分别得到化合物101a(23S，25S体)8.2mg(17％)，化合物101b(23R，25R体)11.9mg(25％)，化合物101c(23S，25R体)6.4mg(14％)，化合物101d(23R，25S体)6.6mg(14％)。
化合物101a[α]24D＝-11.68(c0.68，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.15(d，J＝8.6Hz，2H)，6.84(d，J＝8.6Hz，2H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.32(s，1H)，4.99(s，1H)，4.92(d，J＝15.0Hz，1H)，4.43(m，1H)，4.23(m，1H)，3.90(d，J＝15.0Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.48(m，1H)，2.82(d，J＝12.4Hz，1H)，2.59(d，J＝13.7Hz，1H)，2.32(m，1H)，2.25(dd，J＝7.7，13.3Hz，1H)，2.08-1.25(m，15H)，1.48(s，3H)，0.89-0.84(m，5H)，0.79(d，J＝6.4Hz，3H)，0.53(s，3H)。
化合物101b[α]24D＝+17.00(c1.10，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.12(d，J＝8.6Hz，2H)，6.85(d，J＝8.6Hz，2H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.93(d，J＝15.0Hz，1H)，4.44(dd，J＝4.3，7.7Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.97(d，J＝15.4Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.47(m，1H)，2.82(d，J＝12.4Hz，1H)，2.59(d，J＝13.3Hz，1H)，2.34(dd，J＝8.1，13.7Hz，1H)，2.32(dd，J＝6.4，12.8Hz，1H)，2.08-1.89(m，5H)，1.76(dd，J＝5.1，13.3Hz，1H)，1.69-0.99(m，14H)，1.49(s，3H)，0.87(d，J＝6.9Hz，3H)，0.50(s，3H)。
化合物101c[α]24D＝+15.58(c0.46，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.11(d，J＝8.6Hz，2H)，6.84(d，J＝8.6Hz，2H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.94(d，J＝14.5Hz，1H)，4.43(dd，J＝4.3，7.7Hz，1H)，4.23(m，1H)，3.90(d，J＝15.0Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.26(m，1H)，2.82(d，J＝12.4Hz，1H)，2.59(dd，J＝3.0，13.7Hz，1H)，2.31(m，1H)，2.19(dd，J＝6.4，12.8Hz，1H)，2.02-1.14(m，20H)，1.71(dd，J＝7.8，12.8Hz，1H)，1.33(s，3H)，0.88(m，1H)，0.78(d，J＝6.4Hz，3H)，0.52(s，3H)。
化合物101d 24D＝+3.49(c0.53，CHCl3)1H NMR(CDCl3)δ7.08(d，J＝8.6Hz，2H)，6.85(d，J＝8.6Hz，2H)，6.36(d，J＝11.1Hz，1H)，6.01(d，J＝11.1Hz，1H)，5.33(s，1H)，4.99(s，1H)，4.95(d，J＝15.0Hz，1H)，4.44(m 1H)，4.22(m，1H)，3.98(d，J＝15.0Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.25(m，1H)，2.82(d，J＝12.4Hz，1H)，2.59(d，J＝14.1Hz，1H)，2.32(m，1H)，2.24(dd，J＝6.4，12.4Hz，1H)，2.13-1.22(m，21H)，1.86(dd，J＝7.7，12.4Hz，1H)，1.36(s，3H)，1.09(m，2H)，0.88(d，J＝6.5Hz，3H)，0.50(s，3H)。
实施例61α，25-二羟基维生素D3-27-高(homo)-26，23-内酰胺-N-(2-苯乙基)(化合物62)的制备 (1)使用按照文献记载的方法(例如国际公开WO95/33716号说明书)得到的化合物(5)788.2mg(2.64mmol)和按照参考例1得到的2-苯乙基羟胺722.0mg(5.26mmol)，按照与实施例1(1)同样的方法得到无色透明的油状化合物(7)(R1＝Ph(CH2)2)(1.28g，100％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.31-7.20(m，5H)，6.38(t，J＝5.7Hz，1H)，5.64(s，1H)，3.97(t，J＝6.7Hz，2H)，3.23-3.19(m，2H)，2.88-2.86(m，1H)，2.46(dt，J＝17.2，4.4Hz，1H)，2.28-2.19(m，1H)，1.97-1.13(m，12H)，0.79(d，J＝6.6Hz，3H)，0.53(s，3H)。
(2)将如上得到的化合物(7)(R1＝Ph(CH2)2)577.0mg(1.43mmol)溶于10.0mL的无水甲苯中，向其中加入按照参考例5得到化合物(4)(R2＝Et，R＝Pim(邻苯二甲酰亚氨基甲基(phthalimidemethyl)))463.1mg(1.79mmol)的无水甲苯溶液5.0mL。在氮气氛围中、90℃下搅拌12小时。减压浓缩所得的残渣用硅胶柱色谱(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)粗纯化。所得的化合物用25.0mL正丁醇溶解，加入3.3mL乙二胺，在90℃下搅拌1小时。向反应液中加入30mL水，减压浓缩。所得残渣用乙酸乙酯稀释后，用1M盐酸洗涤，有机层用硫酸镁干燥。减压浓缩所得的残渣用硅胶柱色谱(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)粗纯化。所得化合物溶于4.5mL苯与0.5mL甲醇的混合溶剂中，加入1.0mL三甲基甲硅烷基重氮甲烷1.0mL(0.59mmol)，室温搅拌15分钟。减压浓缩得到化合物(8)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Et，R＝Me)(269.1mg，41％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.15(m，5H)，5.64(brs，1H)，3.79-3.75(m，3H)，3.10-0.72(m，30H)，0.57-0.52(m，3H)。
(3)将如上得到的化合物(8)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Et，R＝Me)269.1mg(0.50mmol)溶于7.0mL乙腈与1.0mL水的混合溶剂中，加入六羰基钼205.0mg(0.78mmol)，在90℃下搅拌12小时。反应液用硅藻土过滤后减压浓缩。所得的残渣用硅胶柱色谱(正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化，得到内酰胺环化物(132.2mg，53％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.16(m，5H)，5.66(brs，1H)，3.85-3.73(m，1H)，3.55-3.46(m，1H)，3.32-3.16(m，1H)，2.94-2.64(m，3H)，2.28-0.82(m，24H)，0.61-0.56(m，3H)。
将所得内酰胺环化物(132.2mg，0.26mmol)溶于5.0mL无水二氯甲烷，加入三甲基甲硅烷基咪唑0.2mL(1.30mmol)，在氮气氛围中室温下搅拌12小时。在0℃下向反应液中加水搅拌后用二氯甲烷萃取，有机层用硫酸镁干燥。减压浓缩所得的残渣用硅胶薄层色谱(正己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)纯化，得到化合物(9)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Et)(133.3mg，89％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.16(m，5H)，5.68-5.64(m，1H)，3.77-3.50(m，2H)，3.28-3.10(m，1H)，2.92-2.75(m，3H)，2.23-0.75(m，24H)，0.58(d，J＝4.6Hz，3H)，0.16-0.10(m，9H)。
(4)将三苯基膦37.0mg(0.14mmol)与三(二亚苄基酮)二钯(O)-氯仿加合物22.0mg(0.021mmol)溶于1.8mL无水甲苯与1.8mL三乙胺的混合溶剂中，室温下搅拌10分钟。向反应液中加入如上所得的化合物(9)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Et)67.0mg(0.12mmol)以及按照Trost等的方法(Tetrahedron Lett.，1994年，35卷，44号，8119-8122页)合成的化合物(10)52.0mg(0.14mmol)的无水甲苯溶液1.8mL。在氩气氛围中，120℃下搅拌2小时。反应液中加入饱和氯化铵水溶液后用乙酸乙酯洗涤。在水层中加入饱和碳酸氢钠水溶液使其为弱碱性后，用乙酸乙酯萃取。合并有机层并用饱和食盐水洗涤，用硫酸镁干燥。减压浓缩所得的残渣用硅胶薄层色谱(正己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)粗纯化，将所得的残渣92.5mg溶于3.0mL无水四氢呋喃，加入氯化四丁基铵的四氢呋喃溶液0.44mL(1M，0.44mmol)，在氮气氛围中、50℃下搅拌2小时。反应液中加入饱和氯化铵水溶液后用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，用硫酸镁干燥。减压浓缩所得的残渣用硅胶薄层色谱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)纯化，得到22.5mg的化合物62。所得化合物62用正相HPLC(CHIRALPAK AD柱，流动相30％乙醇/正己烷)和反相HPLC(ODS柱，流动相A＝95％H2O/CH3CN，B＝CH3CN/MeOH＝6/4(0.5％H2O)，B＝70％)以及正相HPLC(CHIRALPAK AD柱，流动相15％乙醇/正己烷)纯化，分别得到化合物62a(23S，25S体)1.2mg(2％)，化合物62b(23R，25R体)2.2mg(3％)，化合物62d(23R，25S体)0.6mg(1％)。
化合物62a1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.18(m，5H)，6.38(d，J＝11.5Hz，1H)，6.02(d，J＝11.0Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.43(brs，1H)，4.23(brs，1H)，3.80-3.70(m，1H)，3.55-3.45(m，1H)，3.25-3.15(m，1H)，2.93-2.75(m，3H)，2.63-2.55(m，1H)，2.32(dd，J＝13.7，6.7Hz，1H)，2.11(dd，J＝13.7，7.3Hz，1H)，2.04-1.10(m，19H)，0.96(t，J＝7.4Hz，3H)，0.88(d，J＝5.6Hz，3H)，0.56(s，3H)。
化合物62b1H-NMR(CDCl3)δ7.34-7.19(m，5H)，6.38(d，J＝11.2Hz，1H)，6.03(d，J＝11.2Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.25(brs，1H)，3.85-3.77(m，1H)，3.55-3.47(m，1H)，3.25-3.15(m，1H)，2.95-2.74(m，3H)，2.61(dd，J＝13.7，3.4Hz，1H)，2.32(dd，J＝13.4，6.7Hz，1H)，2.20(dd，J＝13.5，7.7Hz，1H)，2.12-1.15(m，19H)，1.05-0.91(m，6H)，0.56(s，3H)。
化合物62d1H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.16(m，5H)，6.38(d，J＝11.0Hz，1H)，6.03(d，J＝11.2Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，4.06-3.95(m，1H)，3.35-3.27(m，1H)，3.24-3.14(m，1H)，2.95-2.69(m，3H)，2.64-2.57(m，1H)，2.42(s，1H)，2.36-2.23(m，2H)，2.04-1.06(m，18H)，1.00(d，J＝6.3Hz，3H)，0.85(t，J＝7.4Hz，3H)，0.58(s，3H)。
实施例71α，25-二羟基维生素D3-27-二高(bishomo)-26，23-内酰胺-N-(2-苯乙基)(化合物63)的制备
(1)使用实施例7中得到的化合物(7)700.0mg(1.74mmol)与参考例6得到化合物(4)(R2＝Pr，R＝Pim(邻苯二甲酰亚氨基甲基))643.2mg(2.35mmol)，按照与实施例6(2)同样的方法得到化合物(8)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Pr，R＝Me)(269.0mg，34％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.16(m，5H)，5.64(brs，1H)，3.78-3.74(m，3H)，3.10-0.80(m，32H)，0.57-0.51(m，3H)。
(2)使用如上得到的化合物(8)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Pr，R＝Me)307.3mg(0.56mmol)按照与实施例6(3)同样的方法得到内酰胺环化物(170.6mg，59％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.17(m，5H)，5.66(brs，1H)，3.84-3.72(m，1H))，3.55-3.47(m，1H)，3.25-3.15(m，1H)，2.95-2.73(m，3H)，2.29-0.83(m，26H)，0.60-0.55(m，3H)。
所得内酰胺环化物170.6mg(0.33mmol)按照与实施例5(3)同样的方法得到化合物(9)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Pr)(73.8mg，90％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.17(m，5H)，5.68-5.64(m，1H)，3.76-3.52(m，2H)，3.26-3.10(m，1H)，2.92-2.73(m，3H)，2.23-0.86(m，26H)，0.58(d，J＝5.1Hz，3H)，0.15-0.11(m，9H)。
(3)使用如上得到的化合物(9)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Pr)86.9mg(0.15mmol)按照与实施例6(4)同样的方法得到29.0mg化合物63。用反相HPLC(ODS柱，流动相A＝95％H2O/CH3CN，B＝CH3CN/MeOH＝6/4(0.5％H2O)，B＝70％)以及正相HPLC(CHIRALPAK AD柱，流动相30％乙醇/正己烷)纯化该化合物63，分别得到化合物63a(23S，25S体)4.5mg(5％)，化合物63b(23R，25R体)5.1mg(6％)，化合物63c(23S，25R体)1.6mg(2％)，化合物63d(23R，25S体)2.7mg(3％)。
化合物63a1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.18(m，5H)，6.38(d，J＝11.0Hz，1H)，6.02(d，J＝11.2Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.43(brs，1H)，4.23(brs，1H)，3.81-3.70(m，1H)，3.55-3.45(m，1H)，3.25-3.16(m，1H)，2.93-2.75(m，3H)，2.63-2.56(m，1H)，2.32(dd，J＝13.4，6.6Hz，1H)，2.20-1.10(m，22H)，0.96(t，J＝7.0Hz，3H)，0.88(d，J＝5.6Hz，3H)，0.56(s，3H)。
化合物63b1H-NMR(CDCl3)δ7.34-7.19(m，5H)，6.38(d，J＝11.2Hz，1H)，6.03(d，J＝11.2Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，3.85-3.75(m，1H)，3.54-3.46(m，1H)，3.25-3.14(m，1H)，2.94-2.72(m，3H)，2.61(dd，J＝13.5，3.3Hz，1H)，2.32(dd，J＝13.4，6.7Hz，1H)，2.25-2.15(m，2H)，2.06-1.11(m，20H)，1.00-0.93(m，6H)，0.56(s，3H)。
化合物63c1H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.17(m，5H)，6.37(d，J＝11.2Hz，1H)，6.01(d，J＝11.5Hz，1H)，5.33(s，1H)，5.00(s，1H)，4.43(brs，1H)，4.23(brs，1H)，4.06-3.96(m，1H)，3.33-3.25(m，1H)，3.22-3.13(m，1H)，2.93-2.70(m，3H)，2.64-2.56(m，1H)，2.49(s，1H)，2.32(dd，J＝13.3，7.0Hz，1H)，2.21(dd，J＝13.1，6.4Hz，1H)，2.04-1.10(m，19H)，0.91(d，J＝6.3Hz，3H)，0.86(t，J＝7.0Hz，3H)，0.55(s，3H)。
化合物63d1H-NMR(CDCl3)δ7.31-7.15(m，5H)，6.38(d，J＝11.0Hz，1H)，6.03(d，J＝11.2Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，4.07-3.97(m，1H)，3.35-3.28(m，1H)，3.23-3.14(m，1H)，2.95-2.69(m，3H)，2.64-2.57(m，1H)，2.49(s，1H)，2.36-2.23(m，2H)，2.06-1.05(m，19H)，1.00(d，J＝6.6Hz，3H)，0.87(t，J＝7.0Hz，3H)，0.58(s，3H)。
实施例81α，25-二羟基维生素D3-27-苯基-26，23-内酰胺-N-(2-苯乙基)(化合物64)的制备
(1)将实施例7中得到的化合物(7)239.7mg(0.93mmol)溶于5.0mL脱水甲苯中，向其中加入按照Basavaiah等的方法(Tetrahedron Lett.，2001年，42卷，477～479页)合成的化合物(4)(R2＝Bn，R＝Me)530mg(3.0mmol)，在氮气氛围中、60℃下搅拌12小时后，再在90℃搅拌2小时。减压浓缩反应液所得的残渣用硅胶柱色谱(正己烷∶乙酸乙酯＝20∶1)纯化，得到粗制化合物(8)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Bn，R＝Me)。
(2)将所得的粗制化合物(8)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Bn，R＝Me)溶于10.5mL乙腈与1.5mL水的混合溶剂中，往其中加入六羰基钼240mg(0.91mmol)，在90℃下搅拌12小时。反应液用硅藻土过滤后减压浓缩。所得的残渣用硅胶柱色谱(正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化得到内酰胺环化物(178.1mg，52％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.31-7.18(m，10H)，5.65(s，1H)，3.80-3.68(m，1H)，3.44-3.43(m，1H)，3.20-3.16(m，1H)，3.05-2.73(m，5H)，2.17-1.00(m，16H)，0.86-0.82(m，3H)，0.54-0.50(m，3H)。
将所得内酰胺环化物178.1mg(0.315mmol)溶于3.5mL脱水二氯甲烷中，在氮气氛围中、0℃下加入2，6-二甲基吡啶55μL(0.473mmol)和三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯70μL(0.388mmol)，相同温度下搅拌1小时。往反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液、搅拌后，用二氯甲烷萃取。有机层用硫酸镁干燥。减压浓缩所得的残渣用硅胶柱色谱(正己烷∶乙酸乙酯＝20∶1)纯化，得到化合物(9)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Bn)(189.9mg，95％)。
1H-NMR(CDCl3)δ7.33-7.15(m，10H)，5.65(brs，1H)，3.75-3.44(m，2H)，3.30-3.18(m，1H)，3.14-2.54(m，5H)，2.12-1.02(m，16H)，0.94-0.82(m，3H)，0.55-0.43(m，3H)，0.26-0.15(m，9H)。
(3)使用如上得到的化合物(9)(R1＝Ph(CH2)2，R2＝Bn)99.1mg(0.16mmol)按照与实施例6(4)同样的方法得到28.4mg化合物64。用正相HPLC(CHIRALPAK AD柱，流动相20％乙醇/正己烷)以及反相HPLC(ODS柱，流动相A＝95％H2O/CH3CN，B＝CH3CN/MeOH＝6/4(0.5％H2O)，B＝75％)纯化该化合物64，分别得到化合物64a(23S，25S体)3.0mg(4％)，化合物64b(23R，25R体)4.4mg(5％)。
化合物64a1H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.17(m，10H)，6.38(d，J＝11.2Hz，1H)，6.02(d，J＝11.2Hz，1H)，5.35(s，1H)，5.01(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.24(brs，1H)，3.76-3.66(m，1H)，3.50-3.40(m，1H)，3.24-3.16(m，1H)，3.05-2.58(m，6H)，2.38-1.12(m，19H)，0.80(d，J＝5.1Hz，3H)，0.51(s，3H)。
化合物64b1H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.18(m，10H)，6.37(d，J＝11.2Hz，1H)，6.01(d，J＝11.0Hz，1H)，5.34(s，1H)，5.00(s，1H)，4.44(brs，1H)，4.23(brs，1H)，3.80-3.69(m，1H)，3.50-3.40(m，1H)，3.23-3.12(m，1H)，3.05-2.70(m，5H)，2.64-2.55(m，1H)，2.45(s，1H)，2.36-2.27(m，1H)，2.15-1.05(m，17H)，0.84(d，J＝6.6Hz，3H)，0.51(s，3H)。
实施例9对鸡小肠粘膜细胞内1α，25-二羟基维生素D3受体(VDR)的结合亲和性按照石塚等在Steroids，37卷，33～43页，1982年中记载的方法进行。即在12×75mm的聚丙烯试管中加入15000dpm的[26、27-甲基-3H]1α，25-二羟基维生素D3(180Ci/mmol)的10μl乙醇溶液，以及本发明化合物的40μl乙醇溶液。向其中加入溶有0.2mg鸡小肠粘膜细胞内1α，25-二羟基维生素D3受体蛋白和1mg凝胶的1ml磷酸缓冲液(pH7.4)，在25℃下反应1小时。向试管中加入40％聚乙二醇6000溶液1ml，激烈搅拌后，在4℃、2260×g下离心分离60分钟。用切刀切取包含沉淀部分的试管放入液体闪烁用管形瓶中，加入10ml二烷闪光剂，然后用液体闪烁计数器测定放射能力。通过测定值求得使受体与[26、27-甲基-3H]1α，25-二羟基维生素D3的结合被抑制50％的本发明化合物的浓度，该浓度以1α，25-二羟基维生素D3的50％抑制浓度为1的相对强度表示。结果如下表所示。
本发明化合物对鸡小肠粘膜细胞内1α，25-二羟基维生素D3受体的结合亲和性

(*)1α，25-二羟基维生素D3＝1由上述结果可知，本发明的化合物明显具有很高的与VDR的结合亲和性。因此，考虑到下述的本发明化合物的抗体作用，可以期待其具有高的维生素D3拮抗作用，并且表现出作为骨Peget病、高钙血症或骨质疏松症的治疗剂是有效的。
实施例10以1α，25-二羟基维生素D3引起的HL-60细胞分化诱导作用为指标的维生素D3拮抗作用(1)HL-60细胞由细胞库(Japanese Cancer Research ResourceBank，细胞编号JCRB0085)购入使用。为了防止由继代培养引起的细胞特性的变化，将细胞冷冻保存，在实验前解冻进行继代培养。实验中使用继代培养一个月到约半年的细胞。继代培养通过离心分离回收悬浮培养状态的细胞，并用新鲜的培养液稀释到1/100左右的浓度(1～2×104个细胞/ml)而实现。使用含有10％胎牛血清的RPMI-1640培养基作为培养液。
(2)离心分离回收由(1)继代培养了的细胞，并以2×104个细胞/ml分散到培养液中，在24孔培养板上以1ml/孔接种。向该体系中以1μl/孔加入1×10-5M的1α，25-二羟基维生素D3的乙醇溶液、1×10-4M～3×10-3M的本发明化合物的乙醇溶液(最终浓度1α，25-二羟基维生素D31×10-8M，本发明化合物1×10-7M～3×10-6M)。作为对照组每孔加入1μL乙醇。在37℃、5％CO2存在下培养4天后，离心分离回收细胞。
(3)使用氮蓝四唑(下称NBT)还原活性的诱导作为HL-60细胞的分化诱导作用的指标。按照下面的步骤测定NBT还原活性。即将离心分离得到的细胞悬浮在新鲜的培养液中后，依次加入0.1％NBT、100ng/ml的12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯，在37℃下培养25分钟后制成cytospin标本。风干后，用Kernechrot染色，在光学显微镜下测定NBT还原活性阳性细胞的比率。由1×10-8M的1α，25-二羟基维生素D3和1×10-7M～3×10-6M的本发明化合物同时处理得到的阳性细胞的比率相对于由1×10-8M的1α，25-二羟基维生素D3单独处理的阳性细胞比率获得百分比，用该百分比对本发明化合物的处理浓度作图，计算出百分比为50％的本发明化合物的处理浓度作为IC50值(nM)。结果如下表所示。
对HL-60细胞的NBT还原活性诱导效果(本发明化合物对1α，25-二羟基维生素D3引起的细胞分化诱导的抑制效果)

由上述结果可知，本发明的化合物可以抑制1α，25-二羟基维生素D3引起的细胞分化诱导作用。即本发明的化合物显示出对于1α，25-二羟基维生素D3的拮抗作用。
由于骨Peget病、高钙血症是活性维生素D3的作用亢进引起的，因此本发明的化合物可以作为这种疾病的治疗剂。此外，由于PTH随着活性维生素D3在活体内浓度的下降而上升，并且PTH有骨形成作用，因此本发明的化合物可以作为骨质疏松症的治疗剂。
产业应用领域本发明化合物可以作为药物的有效成分。以本发明化合物作为有效成分的药物组合物可以作为治疗选自骨Peget病、高钙血症和骨质疏松症中的一种或多种疾病的治疗剂。
权利要求
1.下式(1)表示的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物 式(1)中，R1为C2～C10的烷基，或者芳环上可以被C1～C6的烷基、C1～C6的烷氧基、羟基、卤素原子、或三氟甲基取代的C7～C15的芳烷基；R2为C1～C10的烷基，或者芳环上可以被C1～C6的烷基、C1～C6的烷氧基、羟基、卤素原子、或三氟甲基取代的C7～C15的芳烷基；但是，R1为苄基并且R2为甲基的上述式(1)表示的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物除外。
2.权利要求1所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，其中R1为异丙基、丁基、己基、辛基、苄基、苯乙基、3-苯基丙基、4-苯基丁基、2-萘基甲基或者4-甲氧基苄基。
3.权利要求1所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，其中R1为苄基、苯乙基、4-苯基丁基或者4-甲氧基苄基。
4.权利要求1～3中中任一项所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，其中R2为甲基、乙基、丙基或者苄基。
5.权利要求1所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，其中R1为苯乙基并且R2为甲基。
6.权利要求1所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，其中R1为4-苯基丁基并且R2为甲基。
7.权利要求1所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，其中R1为4-甲氧基苄基并且R2为甲基。
8.权利要求1所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，其中R1为苯乙基并且R2为乙基。
9.权利要求1所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，其中R1为苯乙基并且R2为丙基。
10.权利要求1～9中任一项所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，其中上述式(1)中23位和25位的立体构型分别为23(R)和25(R)。
11.权利要求1～9中任一项所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，其中上述式(1)中23位和25位的立体构型分别为23(S)和25(S)。
12.权利要求1～11中任一项所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，其具有维生素D3拮抗活性。
13.一种治疗选自高钙血症、骨Peget病和骨质疏松症中的一种或多种疾病的治疗剂，其含有权利要求1～12中任一项所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，或者上述式(1)中R1为苄基并且R2为甲基的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物作为有效成分。
14.一种治疗高钙血症的治疗剂，其含有权利要求1～12中任一项所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，或者上述式(1)中R1为苄基并且R2为甲基的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物作为有效成分。
15.一种治疗骨Peget病的治疗剂，其含有权利要求1～12中任一项所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，或者上述式(1)中R1为苄基并且R2为甲基的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物作为有效成分。
16.一种治疗骨质疏松症的治疗剂，其含有权利要求1～12中任一项所述的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物，或者上述式(1)中R1为苄基并且R2为甲基的维生素D3衍生物或其可药用溶剂化物作为有效成分。
全文摘要
下式(1)表示的化合物或其可药用溶剂化物，其对骨Peget病、高钙血症或骨质疏松症的治疗有效。式中，R
文档编号A61P19/00GK1902173SQ20048003983
公开日2007年1月24日 申请日期2004年11月4日 优先权日2003年11月4日
发明者长泽和夫, 桥本祐一, 加藤优子 申请人:帝人制药株式会社