专利名称：一种苦瓜果实抗病毒原料药的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种苦瓜果实抗病毒原料药的制备方法，属于制药领域。
背景技术：
作为一种夏季时令蔬菜，苦瓜已有数百年食用和药用历史。苦瓜有清暑涤热、明目解毒的功能，主治热病烦渴引饮、中暑、痢疾、赤眼疼痛、痈肿丹毒、恶疮。现代药理学研究表明，苦瓜果实有两大明显的用途倍受大家关注，即苦瓜果实的治疗糖尿病和苦瓜籽的抗HIV的作用。尤其以苦瓜果实降糖尿病的作用已经被开发成相应的原料药和各类保健药品，上市销售，但对其抗病毒活性作用的应用开发却大大落后，至今并未出现相应的原料药和保健药品面世。
发明内容
为开发利用苦瓜果实的抗病毒活性作用，本发明提供了一种苦瓜果实抗病毒原料药的制备方法，该方法通过对苦瓜果实中抗多种病毒的活性部位群的提取分离制得可抗多种病毒的原料药。
本发明所采用的技术方案是一种苦瓜果实抗病毒原料药的制备方法，其具体步骤如下首先将苦瓜果实洗净、打浆、榨汁，然后将所得果汁经大孔吸附树脂富集，再将富集物用醇水溶液洗脱，最后收集醇水溶液，经浓缩、干燥，所得黄褐色粉末即为苦瓜果实抗病毒原料药。
制备中用于吸附果汁中抗病毒活性成分的大孔吸附树脂为D4006、AB8、D101，D301、NKA或S-9树脂，大孔吸附树脂/新鲜苦瓜果汁的用量比为10～100ml/L之间，最佳比例为50ml/L。洗脱富集物的醇水溶液为可以用甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙醇水溶液，最好为乙醇水溶液；醇水溶液体积百分比浓度为50％～100％，最好为75％，洗脱溶液体积为所用树脂体积的2～50倍，以10倍体积为宜。
本发明利用大孔吸附树脂选择性地吸附苦瓜果实中含有的抗多种病毒成分的活性部分，通过回收溶剂而得到抗病毒原料药。由于所得的干燥的苦瓜果实抗病毒原料药可在相关单方和复方制剂中的应用，因此本发明在目前现有技术只开发了苦瓜降糖原料药和相应产品的状况下，对苦瓜果实的多种抗病毒活性作用进行了有效的开发和利用。而且，本发明采用大孔吸附树脂吸附富集抗病毒成分，具有工艺简单稳定、容易中试放大、容易控制、重复性好、提取效率高。
具体实施例方式
将新鲜的苦瓜果实50公斤洗净、去籽打浆，用200目滤布压榨过滤，所得30升苦瓜果汁，于0～4℃保存备用。
实施例1取苦瓜果汁1升，让其流过装有10毫升D101大孔吸附树脂柱，然后用20毫升95％乙醇洗涤大孔树脂，收集洗脱液，浓缩干燥，得0.2克黄褐色粉末产品。
实施例2取苦瓜果汁1升，让其流过装有50毫升D101大孔吸附树脂柱，然后用500毫升75％乙醇洗涤大孔树脂，收集洗脱液，浓缩干燥，得0.95克黄褐色粉末产品。
实施例3取苦瓜果汁1升，让其流过装有100毫升D101大孔吸附树脂柱，然后用1000毫升50％乙醇洗涤大孔树脂，收集洗脱液，浓缩干燥，得1.05克黄褐色粉末产品。
实施例4取苦瓜果汁1升，让其流过装有50毫升D301大孔吸附树脂柱，然后用500毫升75％乙醇洗涤大孔树脂，收集洗脱液，浓缩干燥，得1.00克黄褐色粉末产品。
实施例5取苦瓜果汁1升，让其流过装有50毫升D4006大孔吸附树脂柱，然后用500毫升75％乙醇洗涤大孔树脂，收集洗脱液，浓缩干燥，得1.10克黄褐色粉末产品。
实施例6取苦瓜果汁1升，让其流过装有50毫升AB8大孔吸附树脂柱，然后用500毫升75％甲醇洗涤大孔树脂，收集洗脱液，浓缩干燥，得0.95克黄褐色粉末产品。
实施例7取苦瓜果汁1升，让其流过装有50毫升NKA大孔吸附树脂柱，然后用500毫升75％甲醇洗涤大孔树脂，收集洗脱液，浓缩干燥，得0.99克黄褐色粉末产品。
实施例8取苦瓜果汁1升，让其流过装有50毫升S-9大孔吸附树脂柱，然后用500毫升75％甲醇洗涤大孔树脂，收集洗脱液，浓缩干燥，得1.01克黄褐色粉末产品。
实施例9取苦瓜果汁20升，让其流过装有1000毫升4006大孔吸附树脂柱，然后用10000毫升75％乙醇洗涤大孔树脂，收集洗脱液，浓缩干燥，得22克黄褐色粉末产品，即抗病毒原料药。
对上述实施例所得的抗病毒原料药进行苦瓜提取物细胞毒性测定在24孔板上，加入0.8×103/ml浓度的Hep-2细胞1ml/孔，培养24h，弃上清液，加入含苦瓜抗病毒原料药的维持液。药物浓度分别为3、6、12、24、48、96、192μg/ml；37℃，5％CO2孵箱培养72h，以MMT法检测细胞存活率。每一药物剂量均重复4孔，同时设正常细胞对照。药物对Hep-2细胞的毒性表现为细胞增殖缓慢，颗粒增多，细胞大小不均，形态不规则，折光性增强。由于细胞代谢活性降低，MTT法检测到的细胞活率下降。本实验中检测得到苦瓜提取液对Hep-2细胞的TC50为75.8μg/ml。
分别将100TCID50/0.1ml的CVB3和ADV与含苦瓜抗病毒原料药的溶液等量混合，药物终浓度为3、6、12、24、48μg/ml加到已长满单层的Hep-2的细胞中，37℃，作用90min，加细胞维持液，37，5％CO2孵箱培养，ADV培养72h，CVB3培养30h，逐日观察CPE，最后用MMTT法检测细胞存活率。同时设正常细胞对照组、病毒对照组。在上述各浓度下，苦瓜提取物对CVB3的抑制率分别为3.92％、7.84％、12.8％、39.50％、66.90％，半数有效浓度[EC50(μg/ml)]35.4，治疗指数(TI)2.96；；对ADV的抑制率分别为3.92％、23.86％、48.80％、69.50％、84.90％，半数有效浓度[EC50(μg/ml)]8.6，治疗指数(TI)12.18。
将100TCID50/0.1ml的HSV-I、HSV-II与苦瓜提取液等量混合，药物终浓度为0.3、0.9、2.7、8.1、24.3μg/ml，37℃，作用90min，加到已长满单层的Hep-2细胞中，0.2ml/孔，37℃，吸附90min，弃上清，加细胞维持液，37℃，5％ CO2孵箱培养72h，逐日观察CPE，最后用MTT法检测细胞存活率。同时设立正常细胞对照组、病毒对照组。在上述各浓度下，苦瓜提取物对HSV-I的抑制率分别为5.5％、12.6％、20.0％、35.2％、56.3％，半数有效浓度[EC50(μg/ml)]11.1，治疗指数(TI)6.8；对HSV-II的抑制率分别为10.5％、13.0％、26.5％、36.4％、65.3％，半数有效浓度[EC50(μg/ml)]8.9，治疗指数(TI)8.5。
权利要求
1.一种苦瓜果实抗病毒原料药的制备方法，其特征在于采用如下具体步骤首先将苦瓜果实洗净、打浆、榨汁，然后将所得果汁经大孔吸附树脂富集，再将富集物用醇水溶液洗脱，最后收集醇水溶液，经浓缩、干燥，所得黄褐色粉末即为苦瓜果实抗病毒原料药。
2.根据权利要求1所述苦瓜果实抗病毒原料药的制备方法，其特征在于用于吸附果汁中抗病毒活性成分的大孔吸附树脂为D4006、AB8、D101，D301、NKA或S-9树脂，大孔吸附树脂/新鲜苦瓜果汁的用量比为10～100ml/L之间，最佳比例为50ml/L。
3.根据权利要求1或2所述苦瓜果实抗病毒原料药的制备方法，其特征在于洗脱富集物的醇水溶液为可以用甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙醇水溶液，最好为乙醇水溶液；醇水溶液体积百分比浓度为50％～100％，最好为75％，洗脱溶液体积为所用树脂体积的2～50倍，以10倍体积为宜。
全文摘要
本发明公开了一种苦瓜果实抗病毒原料药的制备方法，该方法先将苦瓜果实洗净、打浆、榨汁，所得果汁经大孔吸附树脂富集，富集物用醇水洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，所得残留物即为苦瓜果实抗病毒原料药。本发明在目前现有技术只开发了苦瓜降糖原料药和相应产品的状况下，对苦瓜果实的多种抗病毒活性作用进行了有效的开发和利用。而且该原料药的制备工艺采用大孔吸附树脂吸附富集抗病毒成分，具有工艺简单稳定、容易中试放大、容易控制、重复性好、提取效率高。
文档编号A61K131/00GK1823873SQ20051002006
公开日2006年8月30日 申请日期2005年12月16日 优先权日2005年12月16日
发明者邱国福, 胡先明, 杨占秋, 徐文缙, 吴腊梅, 苏江涛 申请人:武汉大学