专利名称：中药鹿血晶及制备方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域。具体涉及中药鹿血晶及制备方法。
背景技术：
鹿血为名贵的中药材，历代草本均有记载。随着养鹿业的迅速发展，鹿血资源丰富，在鹿血中富含多肽类成分，《本草纲目》记载了“血〔主治〕阳痿，补虚，止腰痛、鼻衄、折伤、狂犬伤。苏恭和酒服，治肺痿吐血，及崩中带下。日华诸气痛欲危者，饮之立愈。汪颖大补虚损，益精血，解豆毒、药毒。时珍”。鹿血为鹿科动物梅花鹿或马鹿的新鲜血。
鹿血晶为鹿血经炮制加工干燥后制得的产品。
鹿血具有增强免疫、调整肠道菌群、降低血压和抗创伤作用，其药理作用如下1.增强免疫给小鼠灌服鹿血，0.6ml/日，分两次给药，连续7天，发现可提高机体非特异性吞噬细胞免疫功能，B细胞产生抗体的免疫能力、T淋巴细胞转化率以及NK细胞活性试验均明显增强。
2.调整肠道菌群由林可霉素灌胃造成抗生素菌群失调的程度，鹿血对动物粪便标本菌群有调整作用，强度与丽珠肠乐相符。
3.对血压的影响给麻醉猫静脉注射鹿茸血精制剂和鹿茸精制剂，均能使猫血压降低34％-37％。
4.抗创伤作用给家兔放血10％和从左侧胸腰区削下皮肉0.72-0.75g，造成兔兔衰弱和外伤。然后对照组注射生理盐水，给药组皮下注射鹿茸血精0.5ml/kg，每日给药1次，连续给药18天，结果表明，给药组体重增长明显超过对照组，血浆蛋白含量和红细胞数也较对照组高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于设计鹿血的炮制加工方法和质量标准的检测方法，提供高品质的鹿血晶。
本发明提供了中药鹿血晶的制备方法，该方法包括下列步骤(1)采血以人用含抗凝剂的安全采血袋，在经过血液生化检验确认健康的雄鹿，由颈静脉采集鹿血，均匀摇动采血袋内血液使之与抗凝剂混匀。
(2)冷却将刚采集的带有体温之鹿血，互不重叠地放置于平面上，使之自然冷却。
(3)倾倒将玻璃平板以酒精彻底消毒，以500g新鲜鹿血、平铺于1m2盘面、血层厚度1-2mm的比例，将鹿血平铺于干净、光洁的平板板面。
(4)阴干在30万级洁净度环境中，使鹿血自然阴干24小时。
(5)采集鹿血晶待鹿血在玻璃平板上干燥后，以消毒之玻璃片轻轻刮除贴于平板上的鹿血干燥薄层，干燥之鹿血晶随即呈片状脱落，且表面光洁、色泽闪亮、质感均匀。
(6)干燥上一步工艺得到之鹿血薄片的含水量经测试为12％左右，进一步采用机械干燥设备，将含水量调整为5-6％，制得鹿血晶。
本发明的另一目的是提供了鹿血晶的质量标准检测方法。
本发明鹿血晶质量标准检测方法基于下列原理〔本草考证〕本品始载于《千金食治》，《新修本草》、《本草纲目》等均有记载。《本草纲目》记载“血〔主治〕阴痿，补虚，止腰痛、鼻衄、折伤、狂犬伤。苏恭和酒服，治肺痿吐血，及崩中带下。日华诸气痛欲危者，饮之立愈。汪颖大补虚损，益精血，解豆毒、药毒。时珍”。
〔来源〕为鹿科动物梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿Cervuselaphus Linnaeus的新鲜血。主产于吉林、辽宁、河北、江苏、四川、黑龙江等省。
〔采收加工〕采自先进行血液检验为合格健康的鹿的静脉血，或锯鹿茸时的血，置洁净的不锈钢容器中，高约5mm，凉凝后，风干。再置石灰缸中干燥20小时，捣碎，在超净工作台中分装，即得。
〔成品性状〕按除去包装后的三批样品外观性状描述。
〔化学成分〕血清中含γ-谷酰氨转移酶(γ-glutamyltransferase)、天冬氨酸转氨酶(glutamicoxalacetic transaminase)、肌酸磷酸激酶(creatinephosphokinase)，血浆中含胃蛋白酶原(pepsinogen)、血尿氮(blood ureaN)，葡萄糖，磷、碳、镁、钾及钠等。
〔鉴别〕原理是根据大多数蛋白都能与阴离子表面活性剂SDS(十二烷基硫酸钠)按重量比结合成复合物，使蛋白分子所带电荷远远超过天然蛋白分子的净电荷，消除了不同蛋白分子的电荷效应，使蛋白分子按分子大小分离。在惰性支持介质聚丙烯酰胺凝胶中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自速度进行电泳，使组分分离成狭窄的区带。
注垂直板电泳胶片厚度低于1mm，染色前后胶片长度基本不变。鉴别方法参照文献[3-5]试验。供试品各成分的迁移率与对照药材各成分的迁移率一致。
本发明的鹿血晶质量标准检测方法包括下列步骤〔来源〕为鹿科动物梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿Cervuselaphus Linnaeus的新鲜血；〔炮制〕静脉采血或锯鹿茸时取血，凉凝后风干，置石灰缸中放置20小时；〔成品性状〕呈不规则小薄片状，紫黑色，有角样光泽。质坚实、酥脆，气微腥，味甘、微咸；〔鉴别〕试剂(1)30％丙烯酰胺溶液取甲叉双丙烯酰胺0.8g与丙烯酰胺30g，加水至100ml，滤过，避光保存；(2)分离胶缓冲液取三羟甲基氨基甲烷18.15g，加水70ml，用1mol/L盐酸调节pH值至8.8，加水至100ml。4℃贮存；(3)浓缩胶缓冲液取三羟甲基氨基甲烷6g，加水30ml，用1mol/L盐酸调节pH值至6.8，加水至100ml，4℃贮存；(4)电极缓冲液5倍浓缩液取三羟甲基氨基甲烷45g，甘氨酸216g，十二烷基硫酸钠15g，用1mol/L盐酸调pH为8.3，加水定容至3L。使用前稀释5倍；(5)样品缓冲液还原性，2倍浓缩液取浓缩胶缓冲液12.5ml，甘油20.0ml，10％十二烷基硫酸钠40.0ml，巯基乙醇10.0ml，0.05％(w/v)溴酚蓝10.0ml，用1mol/L盐酸调节pH为6.8，加水至100ml，室温保存，使用前稀释2倍，封底胶为1％琼脂糖；制胶垂直板电泳槽中的玻璃用乙醇擦净，用1.55mm的胶带于两边将其隔开，用夹子固定，用封底胶封底高1cm，注入12％分离胶为30％丙烯酰胺溶液6ml、分离缓冲液4.5ml、水7.32ml、10％过硫酸铵溶液40μl、四甲基乙二胺10μl、10％十二烷基硫酸钠溶液180μl，达玻璃高度的2/3，加水0.5-1cm高封顶，于两玻璃之间插入1.5mm厚的梳子，注入5％浓缩胶为30％丙烯酰胺溶液0.8ml、浓缩缓冲溶液1.5ml、水3.54ml，20过硫酸铵溶液10μl、10％十二烷基硫酸钠60μl，待胶聚合后，小心拔出梳子，并用注射器抽取电极缓冲液冲洗梳子孔；取本样品细粉0.5g，加巴比妥缓冲液pH为8.62ml，超声处理20分钟，离心20分钟4000r/分。取上清液100μl，加水100μl，混匀，作为供试品溶液；另取鹿血对照药材，同法制成对照药材溶液。分别取上述两种溶液各10μl，用中国药典2000年版二部附录VF第五法电泳法，待示踪剂溴酚蓝进入分辨胶5cm后，关闭电源，全程约2小时，将凝胶置染色缸中，染色5-6小时，换脱色液，至脱色清晰，供试品各成分的迁移率与对照药材各成分迁移率一致；〔检查〕水分不得过7.0％；灰分不得过8.0％；〔微生物检查〕细菌数≤500个/g；霉菌数≤100个/g大肠杆菌不得检出沙门氏菌不得检出；〔性昧与归经〕甘、咸，温。归肾、肝经；〔功能与主治〕补血养颜、益肾壮阳，主治精血不足，血虚心悸，虚损腰痛，阳痿遗精，肺痿吐血，术后康复等症；〔用法与用量〕酒调，3-6g；或入丸、散或用于膏方收膏；〔注意事项〕阴虚火旺者慎用；〔贮藏〕密封，置阴凉干燥处。
用本发明方法制得的鹿血晶即为全项鹿血干燥品，其成品呈晶片状，故定名为鹿血晶，它符合下列标准在制定鹿血晶生产工艺流程中，本发明增加了4项内容，(1)生产全过程在30万级卫生条件下进行；(2)在鉴别方法上，采用先进的电泳分析法；(3)采用健康人血生物标准项目对采集之新鲜鹿血进行健康鹿血标准的制定，以保证鹿血晶原料的安全性；(4)在检查项中制定成品的水分限量以确保产品质量的稳定性，提高了产品的品质和用药安全，从而使传统的鹿血产品更加标准化、规范化。
图1鹿血晶电泳图具体实施方式
采血对八十头四岁梅花公鹿作空腹静脉抽血。采用人体抽血袋500g装，共抽取160袋，重80kg。
均质，冷却80kg鲜鹿血分若干次放在振动机上作均质处理。同时冷却到自然温度，约24℃左右进冷藏室。在2℃的条件下保鲜。
安全检测对80kg160袋鲜鹿血按健康鹿血生物学检验标准(本标准以人血健康标准为标准)作十五项检测，检测报告一式四份，公司质检部门一份，检验检测室一份，生产车间一份，冷库一份。
生产用具洁净处理二○○四年九月十四日晨8:30开启车间内紫外线灯，二十分钟后生产人员按洁净程序进入车间，用85％度食用酒精，对所有生产用具二次消毒，对盛血板作三次消毒处理。
生产对80kg鲜鹿血作常温化冻处理，一小时后恢复到20℃左右，用洁净剪剪开血袋，将血倒在盛血板上，厚度为2mm。1kg占面积约1m3左右，关上成品柜门，打开抽湿机工作二十四小时。
二○○四年九月十五日上午，关闭成品柜电源，打开柜门，用括晶工具，采集鹿血晶。
按中药饮片鹿血晶标准作各项检测电咏检测作二次，设四份报告留六份样品。将晶体放入吸湿柜内，将湿度控制在5-6％左右。对80kg鹿血晶分装，用符合GMP标准的安装瓶装2g鹿血晶，上丁基盖，铝质封口，包说明书，装盒，封箱进仓。
权利要求
1.一种鹿血晶的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)采血以人用含抗凝剂的安全采血袋，在经过血液生化检验确认健康的雄鹿，由颈静脉采集鹿血，均匀摇动采血袋内血液使之与抗凝剂混匀；(2)冷却将刚采集的带有体温之鹿血，互不重叠地放置于平面上，使之自然冷却；(3)倾倒将玻璃平板以酒精彻底消毒，以500g新鲜鹿血、平铺于1m2盘面、血层厚度1-2mm的比例，将鹿血平铺于干净、光洁的平板板面；(4)阴干在30万级洁净度环境中，使鹿血自然阴干24小时；(5)采集鹿血晶待鹿血在玻璃平板上干燥后，以消毒之玻璃片轻轻刮除贴于平板上的鹿血干燥薄层，干燥之鹿血晶随即呈片状脱落，且表面光洁、色泽闪亮、质感均匀；(6)干燥上一步工艺得到之鹿血薄片的含水量经测试为12％左右，进一步采用机械干燥设备，将含水量调整为5-6％，制得鹿血晶。
2.一种鹿血晶的质量检测方法，其特征在于该方法包括下列步骤来源为鹿科动物梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿Cervuselaphus Linnaeus的新鲜血；炮制静脉采血或锯鹿茸时取血，凉凝后风干，置石灰缸中放置20小时；成品性状呈不规则小薄片状，紫黑色，有角样光泽，质坚实、酥脆，气微腥，味甘、微咸；鉴别试剂(1)30％丙烯酰胺溶液取甲叉双丙烯酰胺0.8g与丙烯酰胺30g，加水至100ml，滤过，避光保存；(2)分离胶缓冲液取三羟甲基氨基甲烷18.15g，加水70ml，用1mol/L盐酸调节pH值至8.8，加水至100ml，4℃贮存；(3)浓缩胶缓冲液取三羟甲基氨基甲烷6g，加水30ml，用1mol/L盐酸调节pH值至6.8，加水至100ml，4℃贮存；(4)电极缓冲液5倍浓缩液取三羟甲基氨基甲烷45g，甘氨酸216g，十二烷基硫酸钠15g，用1mol/L盐酸调pH为8.3，加水定容至3L，使用前稀释5倍；(5)样品缓冲液还原性，2倍浓缩液取浓缩胶缓冲液12.5ml，甘油20.0ml，10％十二烷基硫酸钠40.0ml，巯基乙醇10.0ml，0.05％(w/v)溴酚蓝10.0ml，用1mol/L盐酸调节pH为6.8，加水至100ml，室温保存，使用前稀释2倍，封底胶为1％琼脂糖；制胶垂直板电泳槽中的玻璃用乙醇擦净，用1.55mm的胶带于两边将其隔开，用夹子固定，用封底胶封底高1cm，注入12％分离胶为30％丙烯酰胺溶液6ml、分离缓冲液4.5ml、水7.32ml、10％过硫酸铵溶液40μl、四甲基乙二胺10μl、10％十二烷基硫酸钠溶液180μl，达玻璃高度的2/3，加水0.5-1cm高封顶，于两玻璃之间插入1.5mm厚的梳子，注入5％浓缩胶为30％丙烯酰胺溶液0.8ml、浓缩缓冲溶液1.5ml、水3.54ml，20过硫酸铵溶液10μl、10％十二烷基硫酸钠60μl，待胶聚合后，小心拔出梳子，并用注射器抽取电极缓冲液冲洗梳子孔；取本样品细粉0.5g，加巴比妥缓冲液pH为8.62ml，超声处理20分钟，离心20分钟4000r/分，取上清液100μl，加水100μl，混匀，作为供试品溶液；另取鹿血对照药材，同法制成对照药材溶液，分别取上述两种溶液各10μl，用中国药典2000年版二部附录VF第五法电泳法，待示踪剂溴酚蓝进入分辨胶5cm后，关闭电源，全程约2小时，将凝胶置染色缸中，染色5-6小时，换脱色液，至脱色清晰，供试品各成分的迁移率与对照药材各成分迁移率一致；检查水分不得过7.0％；灰分不得过8.0％；微生物检查细菌数≤500个/g；霉菌数≤100个/g大肠杆菌不得检出沙门氏菌不得检出；性昧与归经甘、咸，温，归肾、肝经；功能与主治补血养颜、益肾壮阳，主治精血不足，血虚心悸，虚损腰痛，阳痿遗精，肺痿吐血，术后康复等症；用法与用量酒调，3-6g；或入丸、散或用于膏方收膏；注意事项阴虚火旺者慎用；贮藏密封，置阴凉干燥处。
全文摘要
本发明属于中药技术领域。本发明提供了中药鹿血晶的制备方法和鹿血晶的质量标准检测方法。通过本发明的制备方法和质量控制，确保鹿血晶原料的安全性，提高了产品质量的稳定性，使鹿血产品更标准化和规范化。
文档编号A61P37/00GK1803149SQ20051002336
公开日2006年7月19日 申请日期2005年1月14日 优先权日2005年1月14日
发明者周翠霞, 杨彦鹏 申请人:苏州市红冠庄国药饮片有限公司