专利名称：苦碟子药用提取物的制备方法及其药物制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及苦碟子药用提取物的制备方法及其药物制剂。具有涉及以黄酮类化合物及腺苷为主的药用提取物的制备方法以及以该方法得到的药用提取物为活性成分的苦碟子药物制剂。
背景技术：
苦碟子，又名抱茎苦荬菜，具有活血止痛、清热祛瘀、扩张冠状血管、改善心肌血氧供应、增加纤维蛋白溶解酶活性、抑制血栓形成等功效，其主要药用成分为黄酮和腺苷，其中尤以黄酮类化合物含量最高，目前报道的苦碟子药物制剂是以苦碟子为原料，进行简单初步提取后所制备的水针剂和片剂等各种药物制剂，主要用于治疗脑血栓形成、冠心病、心绞痛、视神经萎缩和眼底疾病。现有的苦碟子药物制剂生产工艺中，存在着苦碟子药用成分提取率低且提取工艺复杂、杂质含量高等缺陷。例如中国专利申请CN 1346648A公开的苦碟子水提取液的制备方法为加水煎煮→合并煎液→浓缩→加氧化钙、离心、沉淀→加乙醇、悬浮、离心→加硫酸中和、挥醇→加注射用水稀释→高压灭菌→冷冻→膜分离技术超滤→稀释→灌封→灭菌。该提取工艺复杂，其中中空纤维膜分离超滤技术虽然可以去掉大分子杂质和细菌，但超滤膜价格较昂贵，且易被堵塞，有些药物还能使膜的性质发生变化，影响超滤的保护与再生，不适合工业化大生产。中国专利CN 1377689A介绍的苦碟子水提物的制备工艺流程为加水煎煮→粗滤、微滤→浓缩→加氧化钙、过滤→加乙醇、悬浮→加硫酸中和、过滤→加注射用水稀释→-8℃冷藏过滤→活性炭煮沸→灌封→灭菌，该提取工艺与CN 1346648A基本一致，只是采用活性炭煮沸法过滤以替代膜分离技术超滤，其缺点是活性炭在吸附细菌和杂质的同时，还吸附了有效药用成分。
发明内容
本发明的目的在于提供一种苦碟子药用提取物的制备方法，该提取方法工艺简单，提取工艺质量可控，黄酮、腺苷等药用成分提取率高且稳定性好。
本发明的另一个目的在于提供苦碟子药物制剂，该制剂以利用本发明方法所制备的苦碟子药用提取物为活性成分。
本发明所述的苦碟子药用提取物制备方法的特点在于采用了大孔吸附树脂来分离纯化黄酮类化合物、腺苷等组成的苦碟子药用提取物，大孔树脂是吸附性和筛选性相结合的一种层析方法，具有物理化学稳定性高、不受无机物存在的影响，再生简便，使用周期长，宜于构成闭路循环，节省费用等诸多优点，适合企业的规模化生产。本发明方法包括如下步骤苦碟子加乙醇回流→药渣水煎煮→滤过→浓缩→醇沉→滤过浓缩→大孔树脂吸附→水洗脱→乙醇洗脱→减压浓缩→苦碟子药用提取物。
其具体操作方法为取洁净的苦碟子，用20～40倍量乙醇回流提取2～4次，每次2～4小时；再将经乙醇回流提取过的苦碟子药渣用20～50倍的水煎煮2～4次，每次2～4小时；滤过，滤液浓缩至稠膏状后进行2～3次醇沉，每次使含醇量达50％～75％；然后取上清液滤过，合并滤液及乙醇提取液，冷藏36～48小时；取上清液滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原生药0.5g；上大孔树脂，控制流速为3～5ml/min；当滤液全部吸附后，用蒸馏水洗脱至流出液无色，洗脱速度为3ml/min；再用70％乙醇进行洗脱，控制流速为3～5ml/min；洗脱完全后，收集乙醇洗脱液，减压、浓缩，即得苦碟子药用提取物。
本发明中，冷藏采用常规的4℃冷藏保藏，乙醇洗脱过程中用薄层色谱检查流出液中的总黄酮来以判断洗脱是否完全，薄层色谱所采用的展开剂为氯仿-甲醇(8∶2，V/V)，在365nm荧光灯下检视，若没有荧光斑点检出，即表明洗脱完全。
苦碟子药用提取物的质量控制方法如下苦碟子黄酮类化合物、腺苷为苦碟子药用提取物的主要有效成分，其中苦碟子黄酮类化合物含量最高，总黄酮含量可以作为质量控制的指标。按重量百分比计，总黄酮的含量应达到50％以上，采用紫外分光光度法进行分析，以芦丁为对照品，测定500nm波长处的吸光值。
以本发明方法所制备的苦碟子药用提取物作为活性成分加赋形剂或药学上可以接受的其它辅料，按常规方法制成各种药物制剂，如供注射使用的注射剂或片剂、胶囊、口服液、颗粒剂等口服制剂。
本发明中，注射剂中苦碟子总黄酮的含量应大于等于5mg/ml，腺苷的含量应大于等于30μg/ml；口服制剂中总黄酮的含量应大于等于5mg/克，腺苷的含量应大于等于30μg/克。本发明苦碟子药物制剂具有良好的稳定性。
下面通过比较实验来说明本发明方法对苦碟子药用提取物的提取效果(一)苦碟子药用提取物制备方法1、本发明方法取洁净的苦碟子25kg，用30倍量的乙醇回流提取3次，每次3小时；再将乙醇回流提取过的苦碟子药渣用40倍量的水煎煮3次，每次3小时；滤过，滤液浓缩后进行2次醇沉，每次使含醇量达60％；然后取上清液滤过，合并滤液及乙醇提取液，冷藏48小时；取上清液滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原生药0.5g；上AB-8型大孔树脂，控制流速为4ml/min；当滤液全部吸附后，用蒸馏水洗脱至流出液无色，洗脱速度为3ml/min；再用70％乙醇进行洗脱，控制流速为4ml/min；洗脱过程中用薄层色谱检查流出液中的总黄酮，以判断洗脱是否完全[展开剂氯仿-甲醇(8∶2)，在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点]；收集乙醇洗脱液，减压、浓缩，即得苦碟子药用提取物。
2、中国专利申请CN 1346648A方法称取洁净的苦碟子25kg，加水煎煮2次，第一次加12～15倍量水煎煮1小时，第二次加8～10倍量水煎煮0.5小时，合并煎煮液，浓缩至每1ml相当于原生药0.5g，冷却至40℃以下，边加10％氧化钙乳边搅拌，调节pH值至10，放置12小时，离心，沉淀物称重，悬浮于5.0～5.5倍的乙醇中，加50％硫酸溶液调节pH值3～4，充分搅拌，离心，澄明液加40％氢氧化钠溶液调节pH值至7～8，滤过，滤液回收乙醇并挥尽乙醇，加注射用水稀释至每1ml相当于原生药4.0g，115℃～120℃加入高压灭菌15分钟，放冷，再于-5℃下放24小时以上，自然融化，用5万分子量中空纤维超滤，调pH7.6～7.8，用1万分子量中空纤维超滤，微孔滤膜滤过，即得苦碟子药用提取物。
以上每种处理方法均重复3次。
(二)测定以上各处理方法所得到的提取物中的总黄酮含量和腺苷含量。总黄酮和腺苷的含量测定方法如下总黄酮的含量采用紫外分光光度法测定，以芦丁为对照品，测定500nm波长处的吸光值。
腺苷的含量采用高效液相色谱法测定，测定条件如下色谱柱DimonsilTMC18柱(46mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇乙腈水(体积比5∶4∶91)；流速1mL·min-1；进样量20μL；检测波长259nm。
(三)实验结果表1黄酮总量和腺苷含量
从表1所示的实验结果可以看出，本发明方法具有良好的提取效果，苦碟子黄酮类化合物、腺苷等有效成分的提取量明显优于现有技术方法。
有益效果1、本发明方法具有提取工艺简单，成本低、提取工艺质量可控等优点。
2、本发明方法采用大孔吸附树脂来分离纯化黄酮，提取过程中苦碟子药用成分损失小，提取率高，所得到的苦碟子药用提取物中有效成分苦碟子黄酮类化合物及腺苷含量高。
3、本发明药物制剂稳定性良好。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。
实施例1制备苦碟子药用提取物取洁净的苦碟子30kg，用20倍量乙醇回流提取4次，每次3小时；再将乙醇回流提取过的苦碟子药渣用35倍量的水煎煮4次，每次4小时；滤过，滤液浓缩至稠膏状后进行2次醇沉，每次使含醇量达75％；然后取上清液滤过，合并滤液及乙醇提取液，冷藏48小时；取上清液滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原生药0.5g；上AB-6型大孔树脂，控制流速为5ml/min；当滤液全部吸附后，用蒸馏水洗脱至流出液无色，洗脱速度为3ml/min；再用70％乙醇进行洗脱，控制流速为3ml/min；洗脱过程中用薄层色谱检查流出液中的总黄酮，以判断洗脱是否完全[展开剂氯仿-甲醇(8∶2)，在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点]；收集乙醇洗脱液，减压、浓缩，即得苦碟子药用提取物。
实施例2制备苦碟子药用提取物取洁净的苦碟子25kg，用30倍量乙醇回流提取3次，每次3小时；再将乙醇回流提取过的苦碟子药渣用50倍量的水煎煮2次，每次2小时；滤过，滤液浓缩至稠膏状后进行3次醇沉，每次使含醇量达65％；然后取上清液滤过，合并滤液及乙醇提取液，冷藏36小时；取上清液滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原生药0.5g；上AB-8型大孔树脂，控制流速为4ml/min；当滤液全部吸附后，用蒸馏水洗脱至流出液无色，洗脱速度为3ml/min；再用70％乙醇进行洗脱，控制流速为4ml/min；洗脱过程中用薄层色谱检查流出液中的总黄酮，以判断洗脱是否完全[展开剂氯仿-甲醇(8∶2)，在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点]；收集乙醇洗脱液，减压、浓缩，即得苦碟子药用提取物。
实施例3苦碟子药物冻干粉针剂处方组成苦碟子 30kg甘露醇 1kg注射用水 适量制成 10000ml制备方法取洁净的苦碟30kg，用40倍量乙醇回流提取2次，每次3小时；再将乙醇回流提取过的苦碟子药渣用50倍量的水煎煮2次，每次2小时；滤过，滤液浓缩至稠膏状后进行2次醇沉，每次使含醇量达75％；然后取上清液滤过，合并滤液及乙醇提取液，冷藏48小时；取上清液滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原生药0.5g；上D101型大孔树脂，控制流速为5ml/min；当滤液全部吸附后，用蒸馏水洗脱至流出液无色，洗脱速度为3ml/min；再用70％乙醇进行洗脱，控制流速为5ml/min；洗脱过程中用薄层色谱检查流出液中的总黄酮，以判断洗脱是否完全[展开剂氯仿-甲醇(8∶2)，在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点]；收集乙醇洗脱液，减压、浓缩，即得苦碟子药用提取液；加入甘露醇1kg，搅拌，溶解，滤过，并加注射用水制成每1ml含7mg总黄酮的水溶液，再调节pH值至8，即得该注射剂冻干所用苦碟子药用提取物溶液；将上述苦碟子注射剂冻干所用苦碟子药用提取物溶液按每瓶10ml分装后，未封口放入与冻干箱尺寸相应的金属盘内，对冻干箱进行灭菌处理，并将其搁板的温度降低至-30℃，迅速将装有制剂的金属盘放入冻干箱内，维持2小时，然后对冻干箱进行真空处理，使箱内的真空度为0.2Pa，再将搁板升温，并严格控制在共熔点-2℃以下，保持12小时，最后升温至40℃，并保持一定时间，使制剂温度与搁板温度重合，放入无菌的过滤气体，控制制剂的含水量在2％，迅速封口即可。本粉针剂中总黄酮含量为7mg/ml，腺苷含量为58μg/ml。
实施例4苦碟子药物注射针剂处方组成苦碟子 25kg氯化钠 90g注射用水适量制成10000ml制备方法
取洁净的苦碟子25kg，用20倍量乙醇回流提取4次，每次2小时；再将乙醇回流提取过的苦碟子药渣用20倍量的水煎煮4次，每次2小时；滤过，滤液浓缩至稠膏状后进行3次醇沉，每次使含醇量达50％；然后取上清液滤过，合并滤液及乙醇提取液，冷藏48小时；取上清液滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原生药0.5g；上聚酰胺型大孔树脂，控制流速为3ml/min；当滤液全部吸附后，用蒸馏水洗脱至流出液无色，洗脱速度为3ml/min；再用70％乙醇进行洗脱，控制流速为3ml/min；洗脱过程中用薄层色谱检查流出液中的总黄酮，以判断洗脱是否完全[展开剂氯仿-甲醇(8∶2)，在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点]；收集乙醇洗脱液，减压、浓缩，即得苦碟子药用成分提取液；加入氯化钠90g，搅拌，溶解，滤过，并加注射用水制成每1ml含7.5mg总黄酮的水溶液，再调节pH值至7.5，即得该注射剂所用苦碟子药用提取物溶液；将上述苦碟子注射剂所用苦碟子药用提取物溶液按每瓶10ml分装后，迅速封口，灭菌即可。本注射针剂中总黄酮含量为7.5mg/ml，腺苷含量为45μg/ml。
实施例5苦碟子药物冻干粉针剂处方组成苦碟子 35kg水解明胶0.5kg葡萄糖 0.5kg注射用水适量制成10000ml制备方法取洁净的苦碟子35kg，用30倍量乙醇回流提取3次，每次3小时；再将乙醇回流提取过的苦碟子药渣用40倍量的水煎煮3次，每次3小时；滤过，滤液浓缩至稠膏状后进行2次醇沉，每次使含醇量达60％；然后取上清液滤过，合并滤液及乙醇提取液，冷藏36小时；取上清液滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原生药0.5g；上AB-8型大孔树脂，控制流速为4ml/min；当滤液全部吸附后，用蒸馏水洗脱至流出液无色，洗脱速度为3ml/min；再用70％乙醇进行洗脱，控制流速为4ml/min；洗脱过程中用薄层色谱检查流出液中的总黄酮，以判断洗脱是否完全[展开剂氯仿-甲醇(8∶2)，在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点]；收集乙醇洗脱液，减压、浓缩，即得苦碟子药用成分提取液；加入水解明胶和葡萄糖各0.5kg，搅拌，溶解，滤过，并加注射用水制成每1ml含6mg总黄酮的水溶液，再调节pH值至7，即得该注射剂冻干所用苦碟子药用提取物溶液；将上述苦碟子注射剂冻干所用苦碟子药用提取物溶液按每瓶10ml分装后，未封口放入与冻干箱尺寸相应的金属盘内，对冻干箱进行灭菌处理，并将其搁板的温度降低至-30℃，迅速将装有制剂的金属盘放入冻干箱内，维持3小时，然后对冻干箱进行真空处理，使箱内的真空度为0.2Pa，再将搁板升温，并严格控制在共熔点-2℃以下，保持11小时，最后升温至40℃，并保持一定时间，使制剂温度与搁板温度重合，放入无菌的过滤气体，控制制剂的含水量在2％，迅速封口即可。本粉针剂中总黄酮含量为6mg/ml，腺苷含量为37μg/ml。
实施例6苦碟子药物片剂处方组成苦碟子40kg淀粉浆适量微晶纤维素15kg注射用水 适量制成 10000片制备方法取洁净的苦碟子40kg，用25倍量乙醇回流提取4次，每次2.5小时；再将乙醇回流提取过的苦碟子药渣用30倍的水煎煮3次，每次2.5小时；滤过，滤液浓缩至稠膏状后进行3次醇沉，每次使含醇量达70％；然后取上清液滤过，合并滤液及乙醇提取液，冷藏48小时；取上清液滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原生药0.5g；上D201型大孔树脂，控制流速为5ml/min；当滤液全部吸附后，用蒸馏水洗脱至流出液无色，洗脱速度为3ml/min；再用70％乙醇进行洗脱，控制流速为3ml/min；洗脱过程中用薄层色谱检查流出液中的总黄酮，以判断洗脱是否完全[展开剂氯仿-甲醇(8∶2)，在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点]；收集乙醇洗脱液，减压、浓缩，即得苦碟子药用提取提取液。
将上述药用提取提取液与淀粉混合，用淀粉浆制粒，干燥，整粒，测含量，按每片含6mg总黄酮压片，即得。本片剂，每片片重200mg，每片含腺苷20微克。
实施例7苦碟子药物粉针剂的稳定性实验按实施例3方法制备苦碟子药物粉针剂，苦碟子药物粉针剂置于37℃恒温恒湿箱中存放。定时抽样检查，共3个月，检查项目如下外观检查是否变形萎缩，颜色是否变深；澄明度检查取一瓶加10ml注射用水，观察溶解时间，20秒内为速溶，视为合格，灯检是否有沉淀物析出；
药液pH值检查取一瓶加10ml蒸馏水溶解后，用25型pH计测定药液pH值；主要成分腺苷和黄酮的含量测定。
将苦碟子药物粉针剂置于37℃连续考察3个月，实验结果见表2。
表2苦碟子药物粉针剂37℃加速试验结果
如表2所示，本发明药物粉针剂的外观、色泽、水溶性、pH值及腺苷和黄酮的含量均无明显变化，质量稳定，另外每批含水量测定，均在2％以下。
实施例8苦碟子药物口服液处方组成苦碟子 27kg水 适量制成10000ml制备方法取洁净的苦碟子27kg，用25倍量乙醇回流提取4次，每次2小时；再将乙醇回流提取过的苦碟子药渣用20倍量的水煎煮4次，每次2小时；滤过，滤液浓缩至稠膏状后进行3次醇沉，每次使含醇量达65％；然后取上清液滤过，合并滤液及乙醇提取液，冷藏48小时；取上清液滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原生药0.5g；上聚酰胺型大孔树脂，控制流速为3ml/min；当滤液全部吸附后，用蒸馏水洗脱至流出液无色，洗脱速度为3ml/min；再用70％乙醇进行洗脱，控制流速为3ml/min；洗脱过程中用薄层色谱检查流出液中的总黄酮，以判断洗脱是否完全[展开剂氯仿-甲醇(8∶2)，在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点]；收集乙醇洗脱液，减压、浓缩，即得苦碟子药用成分提取液；加水制成每1ml含6.5mg总黄酮的水溶液，再调节pH值至7.0，即得该口服液所用苦碟子药用提取物溶液；将上述苦碟子口服液所用苦碟子药用提取物溶液按每瓶10ml分装后，迅速封口，灭菌即可。本注射针剂中总黄酮含量为6.5mg/ml，腺苷含量为55μg/ml。
实施例9苦碟子药物颗粒剂处方组成苦碟子30kg淀粉浆适量微晶纤维素47kg制成 10000包制备方法取洁净的苦碟子30kg，用20倍量乙醇回流提取3次，每次2小时；再将乙醇回流提取过的苦碟子药渣用20倍量的水煎煮3次，每次2小时；滤过，滤液浓缩至稠膏状后进行3次醇沉，每次使含醇量达60％；然后取上清液滤过，合并滤液及乙醇提取液，冷藏48小时；取上清液滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原生药0.5g；上聚酰胺型大孔树脂，控制流速为3ml/min；当滤液全部吸附后，用蒸馏水洗脱至流出液无色，洗脱速度为3ml/min；再用70％乙醇进行洗脱，控制流速为3ml/min；洗脱过程中用薄层色谱检查流出液中的总黄酮，以判断洗脱是否完全[展开剂氯仿-甲醇(8∶2)，在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点]；收集乙醇洗脱液，减压、浓缩，即得苦碟子药用成分提取液；将上述苦碟子药用成分提取液与微晶纤维素混合，用淀粉浆制粒，干燥，整粒，测含量，分装，即得。本颗粒剂，每包重5g，含腺苷300微克，总黄酮28mg。
实施例10苦碟子药物胶囊剂处方组成苦碟子 30kg淀粉浆 适量微晶纤维素 12kg制成10000粒制备方法取洁净的苦碟子30kg，用20倍量乙醇回流提取3次，每次2小时；再将乙醇回流提取过的苦碟子药渣用20倍量的水煎煮3次，每次2小时；滤过，滤液浓缩至稠膏状后进行3次醇沉，每次使含醇量达60％；然后取上清液滤过，合并滤液及乙醇提取液，冷藏48小时；取上清液滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原生药0.5g；上聚酰胺型大孔树脂，控制流速为3ml/min；当滤液全部吸附后，用蒸馏水洗脱至流出液无色，洗脱速度为3ml/min；再用70％乙醇进行洗脱，控制流速为3ml/min；洗脱过程中用薄层色谱检查流出液中的总黄酮，以判断洗脱是否完全[展开剂氯仿-甲醇(8∶2)，在365nm荧光灯下检视，不得有荧光斑点]；收集乙醇洗脱液，减压、浓缩，即得苦碟子药用成分提取液；将上述苦碟子药用成分提取液与微晶纤维素混合，用淀粉浆制粒，干燥，整粒，测含量，分装，即得。本胶囊剂，每粒重150mg，含腺苷70微克，总黄酮6mg。
权利要求
1.一种苦碟子药用提取物的制备方法，其特征在于采用大孔吸附树脂来分离纯化苦碟子药用提取物，包括以下步骤苦碟子加乙醇回流、药渣水煎煮、滤过、浓缩、醇沉、滤过浓缩、大孔树脂吸附、水洗脱、乙醇洗脱、减压浓缩得到药用提取物。
2.根据权利要求1所述的苦碟子药用提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤取洁净的苦碟子，用20～40倍量乙醇回流提取2～4次，每次2～4小时；再将经乙醇回流提取过的苦碟子药渣用20～50倍的水煎煮2～4次，每次2～4小时；滤过，滤液浓缩至稠膏状后进行2～3次醇沉，每次使含醇量达50％～75％；然后取上清液滤过，合并滤液及乙醇提取液，冷藏36～48小时；取上清液滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原生药0.5g；上大孔树脂，控制流速为3～5ml/min；当滤液全部吸附后，用蒸馏水洗脱至流出液无色，洗脱速度为3ml/min；再用70％乙醇进行洗脱，控制流速为3～5ml/min；洗脱完全后，收集乙醇洗脱液，减压、浓缩，即得苦碟子药用提取物。
3.权利要求1所述的制备方法所得到的苦碟子药用提取物进一步制成的药物制剂。
4.根据权利要求3所述的苦碟子药物制剂，其特征在于为注射剂或口服剂。
5.根据权利要求3或4所述的苦碟子药物制剂，其特征在于所述注射剂中苦碟子总黄酮的含量大于等于5mg/ml，腺苷的含量大于等于30μg/ml；所述口服制剂中总黄酮的含量大于等于5mg/克，腺苷的含量大于等于30μg/克。
全文摘要
本发明涉及一种苦碟子药用提取物的制备方法及其药物制剂，本发明方法的工艺为苦碟子加乙醇回流→药渣水煎煮→滤过→浓缩→醇沉→滤过浓缩→大孔树脂吸附→水洗脱→乙醇洗脱→减压浓缩→苦碟子药用提取物。苦碟子药用提取物可进一步制成供注射使用的注射剂或片剂、胶囊、口服液、颗粒剂等口服制剂。本发明方法具有提取工艺质量可控、药用成分提取率高等优点，所制备的苦碟子药物制剂具有良好的稳定性。
文档编号A61P9/00GK1817351SQ20051002390
公开日2006年8月16日 申请日期2005年2月7日 优先权日2005年2月7日
发明者李亚平, 顾王文, 任武贤, 冯伟 申请人:中国科学院上海药物研究所