专利名称：抗栓胶囊的检测方法
技术领域：
本发明属于药品检验技术领域，尤指抗栓胶囊的检测方法。
背景技术：
抗栓胶囊集9虫7草3香共19位天然药物，具有良好的活血化淤，抗栓通脉功效。抗栓胶囊以虫类为主组成，其中，水蛭有很强的溶栓作用，地龙则有很强的通经络作用。草类药中以“当归”为首，加之马钱子、延胡索，携众草方可以活血化瘀，补血生血，当归“一味顶四汤”，具有超强的活血补血作用；延胡索，能行血中气滞，气中血滞，专治一身上下诸痛；制马钱子散结消肿，功专通痹止痛。香类药中有蜂房、麝香、蟾酥、抗菌消炎，其中麝香有超强的穿透力，可以穿透血脑屏障，使众药直达病灶，药到病除。虫类药药力宏大，迅速起效，可以治标草类药渐入病源，巩固疗效，可以治本香类药的麝香可以穿透血脑屏障，直达病所。
抗栓胶囊组方复杂，疗效受药材的品质和含量影响大，然而现有法定质量标准只及粉末显微特征鉴别及胶囊剂检测，定性检测不全面，且不涉及定量检测，无法保证药品的质量，进而对药品使用的安全性和有效性构成威胁。
发明内容
本发明为解决上述现有技术的不足，提供一套全面有效的检测方法，以弥补现有标准的不足，严格控制抗栓胶囊的质量稳定性。
本发明是这样实现的抗栓胶囊的检测方法，步骤是a)粉末显微特征鉴别；b)薄层色谱法鉴别方中当归药材；c)薄层色谱法鉴别方中地龙药材；d)气相色谱法鉴别方中麝香药材；e)高效液相色谱法鉴别方中蟾酥药材；f)薄层色谱法鉴别方中甘草药材；g)薄层色谱法鉴别方中延胡索药材；
h)按《中国药典》2000年版一部附录制剂通则中胶囊剂项下规定进行水分、装量差异、崩解时限、重金属检查、砷盐检查、微生物限度检查；i)高效液相色谱法法测定方中丹参酮IIA的含量；j)高效液相色谱法法测定方中士的宁的含量。
图1当归尾药材薄层色谱图；图2地龙药材薄层色谱图；图3麝香酮气相色谱图；图4蟾酥高效液相色谱图；图5甘草次算薄层色谱图；图6延胡索乙素薄层色谱图；图7丹参酮IIA高效液相色谱图；图8士的宁高效液相色谱图。
具体实施例方式
通过下面给出的本发明的具体实施例可以进一步清楚地了解本发明，但它们不是对本发明的限定。
I鉴别1)薄层色谱法鉴别方中当归药材，如图1所示。
取本品内容物3g，加正己烷20ml超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液，另取当归尾对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2)薄层色谱法鉴别方中地龙药材，如图2所示。
取本品内容物10g，加水250ml加热微沸回流1小时，滤过，滤液置水浴上浓缩至浸膏，加甲醇8ml，搅拌，放置1小时，滤过，滤液浓缩至0.6～0.8ml，加苯0.6ml，振摇，分取苯层作为供试品溶液。另取地龙对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3)气相色谱法鉴别方中麝香药材，如图3所示。
取本品内容物8g，置500ml圆底烧瓶中，加水200ml，苯1.0ml，混匀，连接挥发油测定器及回流冷凝管，加热至沸，并保持微沸2小时，放冷，分取苯层作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加苯制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法(中国药典2000年版一部附录VIE)，用100％甲基硅酮(OV-1)为固定相；FID检测器；弹性石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.32μm)；程序升温200℃-1min-3℃/min-240℃-0min-20℃/min-260℃-5min。分别吸取上述两种溶液各4μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰。
4)高效液相色谱法鉴别方中蟾酥药材，如图4所示。
取本品内容物20g，加石油醚(30～60℃)50ml冷浸30分钟，时时振摇，弃去石油醚液，药渣挥干，加氯仿80ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇40ml溶解，滤过，滤液浓缩至约2ml，用中性氧化铝(100～200目)4g在水浴上搅拌干燥，装入中性氧化铝柱(1.5×20cm)，用氯仿50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取华蟾酥毒基、酯蟾毒配基对照品各适量，加甲醇制成每1ml含华蟾酥毒基7μg、酯蟾毒配基18μg的混合溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈(60∶40)为流动相；流速1.0ml/min；检测波长296nm；柱温40℃。理论板数以华蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰计，应分别不低于4000。分别吸取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，应有与对照品色谱相同保留时间的色谱峰。
5)薄层色谱法鉴别方中甘草药材，如图5所示。
取本品内容物10g，加水40ml，盐酸3ml加热微沸回流1.5小时，滤过，弃去滤液，药渣挥干，加乙醚30ml回流提取1小时，弃去乙醚液，药渣挥干，加氯仿30ml回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
6)薄层色谱法鉴别方中延胡索药材，如图6所示。
取本品内容物5g，加氨水适量搅拌湿润后，加乙醚40ml放置24小时，时时振摇，滤取上清液，置分液漏斗中，用10％醋酸50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并醋酸层，用氨水调pH10～11，再以氯仿50ml分三次提取(20、20、10ml)，合并氯仿液，用水洗至中性，加适量无水硫酸钠，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(2∶1.7)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，碘熏数秒后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
II含量测定1)丹参酮IIA照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。如图7所示。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相 甲醇-水(85∶15)；流速 1.0ml/min；柱温 40℃；检测波长 270nm。
理论板数以丹参酮IIA(C19H18O3)峰计，应不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取丹参酮IIA对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含丹参酮IIA16μg)。
供试品溶液的制备取本品内容物3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液用滤膜(0.45μm)滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每粒含丹参以丹参酮IIA(C19H18O3)计不得少于52μg。
2)士的宁照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。如图8所示。
色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂； 氯仿-环己烷-二乙胺(75∶25∶2)流动相；流速 1.0ml/min；柱温 40℃；检测波长 254nm。
理论板数按士的宁峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取士的宁对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品内容物10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿50ml与浓氨试液8ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，超声处理20分钟，放冷，再称定，再称定重量，用提取液补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取7次，每次25ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH值至9～10，用氯仿提取7次，每次30ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每粒含马钱子以士的宁(C21H22N2O2)计为47～86μg。
综上，本发明提供了抗栓胶囊的全面检测方法，在原有标准基础上增加了针对方中主药的定量、定性鉴别方法薄层色谱法鉴别方中当归药材；薄层色谱法鉴别方中地龙药材；气相色谱法鉴别方中麝香药材；高效液相色谱法鉴别方中蟾酥药材；薄层色谱法鉴别方中甘草药材；薄层色谱法鉴别方中延胡索药材；高效液相色谱法法测定方中丹参酮IIA的含量；高效液相色谱法法测定方中士的宁的含量。有效保证了药物的安全性有效性。
权利要求
1.抗栓胶囊的检测方法，步骤是a)粉末显微特征鉴别；b)薄层色谱法鉴别方中当归药材；c)薄层色谱法鉴别方中地龙药材；d)气相色谱法鉴别方中麝香药材；e)高效液相色谱法鉴别方中蟾酥药材；f)薄层色谱法鉴别方中甘草药材；g)薄层色谱法鉴别方中延胡索药材；h)对胶囊剂进行水分、装量差异、崩解时限、重金属检查、砷盐检查、微生物限度检查；i)高效液相色谱法法测定方中丹参酮IIA的含量；j)高效液相色谱法法测定方中士的宁的含量。
全文摘要
本发明属于药品检验技术领域，尤指抗栓胶囊的检测方法。在原有标准基础上增加了针对方中主药的定量、定性鉴别方法薄层色谱法鉴别方中当归药材；薄层色谱法鉴别方中地龙药材；气相色谱法鉴别方中麝香药材；高效液相色谱法鉴别方中蟾酥药材；薄层色谱法鉴别方中甘草药材；薄层色谱法鉴别方中延胡索药材；高效液相色谱法法测定方中丹参酮IIA的含量；高效液相色谱法法测定方中士的宁的含量。有效保证了药物的安全性有效性。
文档编号A61K36/50GK1951407SQ200510030620
公开日2007年4月25日 申请日期2005年10月18日 优先权日2005年10月18日
发明者刘华 申请人:上海佰加壹医药有限公司