专利名称：吡柔比星脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种吡柔比星脂质体及其制备方法。
背景技术：
吡柔比星，别名吡喃阿霉素。2002年在抗肿瘤药物销售额排名中，吡柔比星排名第五，是最主要的抗肿瘤品种之一。本药显示了很强的抗肿瘤活性和广泛的抗癌谱，如对小鼠Lewis肺癌的转移，乳腺癌CCMT，实体瘤180、结肠癌Colon38、白血病L1210、白血病P388等实验性肿瘤疗效显著；本药与Ara-C、Cyclo-C、6-MP、MTX、5-FU、EX等联合使用，显示了很高的抗癌效果。本药对耐阿霉素的肿瘤亦有杀灭作用。吡柔比星能迅速进入癌细胞，通过直接抑制核酸合成，在细胞分裂的G2期阻断细胞周期，从而杀灭癌细胞，本药在鼠类白血病L5178y细胞中的吸收速度比阿霉素快170倍。在临床上，吡柔比星具有较强的抗肿瘤活性，单用、联合用药或结合手术治疗，适用于多种癌症的治疗，如膀胱癌、白血病、乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、恶性淋巴癌等多种癌症，具有较好的疗效。但是现有的吡柔比星制剂对机体正常组织和病理部位无选择性，在杀伤癌细胞的同时，也会对机体正常组织造成很大伤害，主要表现为白细胞减少、血小板减少、轻度至中度的贫血、恶心和呕吐等。
脂质体属于靶向给药系统的一种新剂型。它可以将药物粉末或溶液包埋在直径为纳米级的脂质微粒中，这种脂质微粒具有类细胞结构，其脂质双分子层与生物膜有较大的相似性与组织相溶性，进入人体内主要被网状内皮系统的巨噬细胞吞噬，主要聚集于肝、脾、肺和骨髓等富含巨噬细胞的组织器官内。现有脂质体的这种自然聚集，主要是靠巨噬细胞吞噬被动完成的，可以称为被动靶向性，只能无选择地聚集于富含巨噬细胞的组织器官内，且还存在脂质体粒径较大，不适宜静脉注射、包封率低、稳定性差，易出现药物渗漏等缺陷。
发明内容
本发明要解决的技术问题是如何克服现有技术的上述缺陷，提供一种疗效显著、毒副作用小、靶向性好的吡柔比星脂质体及其制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明吡柔比星脂质体由原料药与辅料制成，其中，原料药为吡柔比星或盐酸吡柔比星，辅料包括磷脂和胆固醇，其剂型可以是针剂，也可以是冻干剂。
本发明吡柔比星脂质体外部为类似细胞膜的双层磷脂膜。磷脂和胆固醇都具亲水和疏水两种基团，其分子相互间定向排列形成疏水基向内、亲水基向外的类脂双分子层。
本发明吡柔比星脂质体在生物体内与细胞的相互作用有多种方式如脂质体被吸附在细胞表面；脂质体与细胞相接触的部位发生磷脂交换；脂质体的膜与细胞膜相融合或脂质体被细胞吞噬，将脂质体内包封的药物或脂质体吸咐的药物送入细胞。由于本发明吡柔比星脂质体的以上特点，以其作为吡柔比星的载体，可以增强吡柔比星与癌细胞的亲和力、克服了癌细胞的耐药性、增加了癌细胞对药物的摄取量、减少用药剂量、提高疗效、减少毒副作用。
其特殊之处在于辅料还包括氢化卵磷脂和豆甾醇糖苷。
其特殊之处在于辅料还包括大豆磷脂和豆甾醇糖苷。
其特殊之处在于辅料还包括聚乙二醇-硬脂酰磷脂酰胺。这样可以减少单核巨噬细胞对吡柔比星脂质体的识别和吞噬，使其在患者体内循环的时间更长，使其更具有隐形性和长效性。
其特殊之处在于其重量比为吡柔比星或盐酸吡柔比星1份、磷脂1～50份、胆固醇1～40份。
其特殊之处在于所述磷脂由大豆磷脂与二棕榈酰磷脂酰胆碱组成，其重量比为1～3∶3～1。
其特殊之处在于其还包括以下一种或几种成分土温、司盘、苄泽类非离子型表面活性剂、泊洛沙姆、胆酸盐。
以下提供几种吡柔比星脂质体的生产方法方法一，包括下述步骤(1)准确称量吡柔比星10g、大豆磷脂11.5g、二棕榈酰磷脂酰胆碱8.5g、胆固醇10g于10000ml茄形瓶中，加入无水乙醇，超声使其充分溶解；(2)将茄形瓶置于25～35℃恒温水浴中减压旋转蒸发，将乙醇蒸干，至药物、大豆磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱和胆固醇在茄形瓶壁上形成一层红色透明的磷脂膜，期间，每间隔10min充氮气1次；(3)将pH7.0磷酸缓冲液4000ml倒入茄形瓶中，氮气保护，水合2.5小时，涡流振荡，将茄形瓶壁上的磷脂膜完全溶解下来；(4)混合液体加pH7.0磷酸缓冲液至5000ml，经0.8μm孔径的聚碳酸纤维膜挤压过滤2次，0.45μm孔径的聚碳酸纤维膜挤压过滤3次，得吡柔比星脂质体。
方法二包括下述步骤(1)准确称量吡柔比星10g、氢化卵磷脂220g、豆甾醇糖苷40g、胆固醇80g于10000ml三角烧瓶中，75℃加热熔融，置于75℃恒温水浴中备用；(2)将注射用水8000ml置水浴中，加热至75℃，加入脂质熔融液中，振荡混合，冷却；(3)加注射用水至10000ml，经微射流仪处理3次，得吡柔比星脂质体。
以下提供一种吡柔比星脂质体冻干剂的生产方法，包括下述步骤(1)准确称量吡柔比星10g、二硬脂酰磷脂酰胆碱160g、土温-802g、胆固醇150g于10000ml三角烧瓶中，65℃加热熔融，置于65℃恒温水浴中备用；(2)将pH7.4磷酸缓冲液4000ml置水浴中，加热至65℃，加入脂质熔融液中，振荡混合，冷却，加pH7.4磷酸缓冲液至5000ml；(3)混合液体加入甘露醇200g，涡流振荡至完全溶解，再加pH7.4磷酸缓冲液至10000ml；(4)经高压均质处理，高压60Mpa3次，低压10MPa2次。药液-80℃预冻24h，于冷冻干燥机中冻干，冻干条件-60℃～-55℃，0.1-0.3psi，冻干24-36小时，至成红色、均匀晶状固体粉末，得吡柔比星脂质体冻干剂。
采用脂质体作为吡柔比星的载体，有以下特点(1)制各工艺简单；
(2)水溶性和脂溶性两种类型的药物都可以包封于同一脂质体中，药物的包封率主要与药物本身的油水分配系数和膜材性质有关；(3)脂质体本身对人体毒性小，对人体无免疫抑制作用；(4)在生物体内具有定向分布的靶向特征；(5)药物在脂质体中是以共价键结合，改变某种物理因素，如改变用药部位的pH值或病变部位的温度等能明显改变脂质体膜的通透性，可在指定部位完全释放，提高药物疗效；(6)脂质体进入体内后主要被网状内皮系统吞噬，激活机体的自身免疫功能，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中累积，从而提高药物的治疗指数，减少药物的用药剂量和降低药物毒性；(7)通过改变脂质体的粒径大小和电荷，可以控制药物在组织中的分布和在血液中的清除率，能有效的控制药物释放，延长药物作用时间，提高药物在体内外的稳定性。
采用上述技术方案后，将吡柔比星制成新型给药系统中的靶向制剂——吡柔比星脂质体，不仅可以降低吡柔比星的毒副作用，而且可以提高吡柔比星对靶部位的靶向性，因此，研制吡柔比星脂质体，具有重要的临床价值。本发明吡柔比星脂质体适用于多种癌症的治疗，如膀胱癌、白血病、乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、恶性淋巴癌等多种癌症，具有较好的疗效。
附图1为吡柔比星脂质体与吡柔比星注射剂对小鼠体内S180肉瘤大小的作用对比——(A)1mg·kg-1；(B)3mg·kg-1(-◆-表示生理盐水；-■-表示吡柔比星注射剂；-▲-表示吡柔比星脂质体)
具体实施例方式
以下实施例用于进一步说明本发明。
实施例1准确称量吡柔比星10g、蛋黄卵磷脂500g、胆固醇400g于10000ml茄形瓶中，加入无水乙醇，超声使充分溶解。茄形瓶置于25-45℃恒温水浴中减压旋转蒸发，将乙醇蒸干，至磷脂和胆固醇在茄形瓶壁上形成一层红色透明的磷脂膜。将注射用水8000ml倒入茄形瓶中，氮气保护，水合，涡流振荡，将茄形瓶壁上的磷脂膜完全溶解下来。混合液体加注射用水至10000ml，经高压均质处理(高压60Mpa，低压10MPa)5次，得吡柔比星脂质体。
实施例2准确称量吡柔比星10g、大豆磷脂10g、胆固醇10g于10000ml茄形瓶中，加入无水乙醇，超声使充分溶解，茄形瓶置于25-45℃恒温水浴中减压旋转蒸发，将乙醇蒸干，至磷脂和胆固醇在茄形瓶壁上形成一层红色透明的磷脂膜。将pH7.0磷酸缓冲液4000ml倒入茄形瓶中，氮气保护，水合，涡流振荡，将茄形瓶壁上的磷脂膜完全溶解下来。混合液体加pH7.0磷酸缓冲液至5000ml，经聚碳酸纤维膜挤压过滤，得吡柔比星脂质体。
实施例3准确称量吡柔比星10g、二棕榈酰磷脂酰胆碱200g、泊洛沙姆3g、胆固醇100g于10000ml茄形瓶中，加入乙醚，超声使充分溶解，加入注射用水8000ml，涡流振荡，置于25-45℃恒温水浴中减压旋转蒸发，将乙醇蒸干，混合液体加注射用水至10000ml，经超声处理10min，得吡柔比星脂质体。
实施例4准确称量吡柔比星10g、氢化卵磷脂220g、胆固醇80g于10000ml三角烧瓶中，加热熔融，置于75℃恒温水浴中备用。将注射用水8000ml置水浴中，加热至75℃，加入脂质熔融液中，振荡混合，冷却，加注射用水至10000ml，经微射流仪处理3次，得吡柔比星脂质体。
实施例5准确称量吡柔比星10g、二硬脂酰磷脂酰胆碱160g、土温-802g、胆固醇150g于10000ml三角烧瓶中，加热熔融，置于75℃恒温水浴中备用。将pH7.4磷酸缓冲液4000ml置水浴中，加热至75℃，加入脂质熔融液中，振荡混合，冷却，加pH7.4磷酸缓冲液至5000ml。混合液体加入甘露醇200g，涡流振荡至完全溶解，再加pH7.4磷酸缓冲液至10000ml，经高压均质处理(高压60Mpa，低压10MPa)5次。药液-80℃预冻24h，于冷冻干燥机中冻干。冻干条件-60℃～-55℃，0.1-0.3psi，冻干24-36小时，至成红色、均匀晶状固体粉末，得吡柔比星脂质体冻干剂。
实施例6准确称量吡柔比星10g、二棕榈酰磷脂酰胆碱90g、蛋黄卵磷脂90g、胆固醇120g于10000ml茄形瓶中，加入无水乙醇，超声使其充分溶解，将茄形瓶置于25-45℃恒温水浴中减压旋转蒸发，将乙醇蒸干，至磷脂和胆固醇在茄形瓶壁上形成一层红色透明的磷脂膜。将注射用水8000ml倒入茄形瓶中，氮气保护，水合，涡流振荡，将茄形瓶壁上的磷脂膜完全溶解下来。混合液体加入蔗糖160g，涡流振荡至完全溶解，再加注射用水至10000ml，经微射流仪处理2次。药液-80℃预冻24h，于冷冻干燥机中冻干。冻干条件-60℃～-45℃，0.1-0.3psi，冻干24-36小时，至成红色、均匀晶状固体粉末，得吡柔比星脂质体冻干剂。
实施例7准确称量吡柔比星10g、大豆磷脂11.5g、二棕榈酰磷脂酰胆碱8.5g、胆固醇10g于10000ml茄形瓶中，加入无水乙醇，超声使充分溶解；茄形瓶置于25～35℃恒温水浴中减压旋转蒸发，将乙醇蒸干，至药物、大豆磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱和胆固醇在茄形瓶壁上形成一层红色透明的磷脂膜，期间，每间隔10min充氮气1次；将pH7.0磷酸缓冲液4000ml倒入茄形瓶中，氮气保护，水合2.5小时，涡流振荡，将茄形瓶壁上的磷脂膜完全溶解下来；混合液体加pH7.0磷酸缓冲液至5000ml，经0.8μm孔径的聚碳酸纤维膜挤压过滤2次，0.45μm孔径的聚碳酸纤维膜挤压过滤3次，得吡柔比星脂质体。
实施例8准确称量吡柔比星10g、氢化卵磷脂220g、豆甾醇糖苷40g、胆固醇80g于10000ml三角烧瓶中，75℃加热熔融，置于75℃恒温水浴中备用；将注射用水8000ml置水浴中，加热至75℃，加入脂质熔融液中，振荡混合，冷却；加注射用水至10000ml，经微射流仪处理3次，得吡柔比星脂质体。
实施例9准确称量吡柔比星10g、二硬脂酰磷脂酰胆碱160g、土温-802g、胆固醇150g于10000ml三角烧瓶中，65℃加热熔融，置于65℃恒温水浴中备用；将pH7.4磷酸缓冲液4000ml置水浴中，加热至65℃，加入脂质熔融液中，振荡混合，冷却，加pH7.4磷酸缓冲液至5000ml。混合液体加入甘露醇200g，涡流振荡至完全溶解，再加pH7.4磷酸缓冲液至10000ml；经高压均质处理，高压60Mpa3次，低压10MPa2次。药液-80℃预冻24h，于冷冻干燥机中冻干；冻干条件-60℃～-55℃，0.1-0.3psi，冻干24-36小时，至成红色、均匀晶状固体粉末，得吡柔比星脂质体冻干剂。
吡柔比星脂质体抗肿瘤活性试验。
取实施例6中吡柔比星脂质体冻干剂，用注射用水溶解，配制为含吡柔比星1mg/ml。取IC2小鼠，雌雄各半，体重18-20g，随机分为5组，每组10只，腋下接种S180肉瘤(1×107)。按照1、3mg·kg-1体重尾静脉注射给药，第5、9、12天重复给药。空白对照组给予生理盐水。分别于6、10、14天测量瘤的体积。第14天处死小鼠，称瘤重。抑瘤率(GIE)按下式计算GIE＝(1-T/C)×100％，T为试验组平均瘤重，C为对照组平均瘤重。
表1 吡柔比星脂质体与吡柔比星注射剂对小鼠体内S180肉瘤重量的作用对比
*与生理盐水组比较，P＜0.05.
由附图1与表1可见，携瘤小鼠给予吡柔比星脂质体后，肿瘤体积、重量显著下降，抑瘤率显著提高，表明吡柔比星脂质体较注射剂具有较好的抗肿瘤活性。
吡柔比星脂质体降毒试验。
取实施例6中吡柔比星脂质体冻干剂，用注射用水溶解，配制为含吡柔比星1mg/ml。取正常IC2小鼠，雌雄各半，体重18-20g，随机分为2组，每组10只，分别尾静脉注射给药吡柔比星脂质体与吡柔比星注射剂，求出半数致死量LD50。结果吡柔比星注射剂与吡柔比星脂质体的LD50分别为5.66、7.18mg/kg，提示吡柔比星脂质体可显著降低吡柔比星的毒性。
本发明既能提高吡柔比星作用的靶向性，又能降低吡柔比星的毒副作用，更有利于药物制剂的应用。
本发明公开的吡柔比星脂质体，其原料药吡柔比星可以称为吡柔比星、盐酸吡柔比星、吡喃阿霉素。
本发明公开的吡柔比星脂质体，可以为乳状液体，也可以为冻干剂。
本发明公开的吡柔比星脂质体，其脂质体冻干剂中可以包括以下一种或几种成分甘露醇、木糖醇、山梨醇、氯化钠、水溶性淀粉、右旋糖苷、葡萄糖、蔗糖、甜菊糖、乳糖等。
本发明公开的吡柔比星脂质体，既能提高吡柔比星作用的靶向性，又能降低吡柔比星的毒副作用，更有利于药物制剂的应用。
本发明所述的吡柔比星脂质体具有下述主要优点1.提高吡柔比星作用的靶向性，减少药物的用药剂量即增加药物的抗肿瘤疗效和降低药物毒性。脂质体具有类似细胞膜的双层磷脂膜，主要成分是磷脂和胆固醇，两者都具亲水和疏水两种基团，其分子相互间定向排列形成疏水基向内、亲水基向外的类脂双分子层。脂质体在生物体内与细胞的相互作用有多种方式如脂质体被吸附在细胞表面；脂质体与细胞相接触的部位发生磷脂交换；脂质体的膜与细胞膜相融合或脂质体被细胞吞噬，将脂质体内包封的药物或脂质体外吸咐的药物送入细胞。因此，脂质体在生物体内具有定向分布的靶向特征，可以提高药物的治疗指数，减少药物的用药剂量和降低药物毒性。
2.可与药物制剂配方中其他组分调配。脂质体是一种高度亲水性的药物载体，将吡柔比星用脂质体包裹，能明显提高药物的亲水性，可与药物制剂配方中其他组分调配。
权利要求
1.一种吡柔比星脂质体，其特征在于由原料药与辅料制成，其中，原料药为吡柔比星或盐酸吡柔比星，辅料包括磷脂和胆固醇，其剂型可以是针剂，也可以是冻干剂。
2.按照权利要求1所述的吡柔比星脂质体，其特征在于辅料还包括氢化卵磷脂和豆甾醇糖苷。
3.按照权利要求1所述的吡柔比星脂质体，其特征在于辅料还包括大豆磷脂和豆甾醇糖苷。
4.按照权利要求1所述的吡柔比星脂质体，其特征在于辅料还包括聚乙二醇-硬脂酰磷脂酰胺。
5.按照权利要求1所述的吡柔比星脂质体，其特征在于其重量比为吡柔比星或盐酸吡柔比星1份、磷脂1～50份、胆固醇1～40份。
6.按照权利要求5所述的吡柔比星脂质体，其特征在于所述磷脂由大豆磷脂与二棕榈酰磷脂酰胆碱组成，其重量比为1～3∶3～1。
7.按照权利要求6述的吡柔比星脂质体，其特征在于辅料可以包括以下一种或几种成分土温、司盘、苄泽类非离子型表面活性剂、泊洛沙姆、胆酸盐。
8.一种吡柔比星脂质体的生产方法，包括下述步骤(1)准确称量吡柔比星10g、大豆磷脂11.5g、二棕榈酰磷脂酰胆碱8.5g、胆固醇10g于10000ml茄形瓶中，加入无水乙醇，超声使其充分溶解；(2)将茄形瓶置于25～35℃恒温水浴中减压旋转蒸发，将乙醇蒸干，至药物、大豆磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱和胆固醇在茄形瓶壁上形成一层红色透明的磷脂膜，期间，每间隔10min充氮气1次；(3)将pH7.0磷酸缓冲液4000ml倒入茄形瓶中，氮气保护，水合2.5小时，涡流振荡，将茄形瓶壁上的磷脂膜完全溶解下来；(4)混合液体加pH7.0磷酸缓冲液至5000ml，经0.8μm孔径的聚碳酸纤维膜挤压过滤2次，0.45μm孔径的聚碳酸纤维膜挤压过滤3次，得吡柔比星脂质体。
9.一种吡柔比星脂质体的生产方法，包括下述步骤(1)准确称量吡柔比星10g、氢化卵磷脂220g、豆甾醇糖苷40g、胆固醇80g于10000ml三角烧瓶中，75℃加热熔融，置于75℃恒温水浴中备用；(2)将注射用水8000ml置水浴中，加热至75℃，加入脂质熔融液中，振荡混合，冷却；(3)加注射用水至10000ml，经微射流仪处理3次，得吡柔比星脂质体。
10.一种吡柔比星脂质体冻干剂的生产方法，包括下述步骤(1)准确称量吡柔比星10g、二硬脂酰磷脂酰胆碱160g、土温-80 2g、胆固醇150g于10000ml三角烧瓶中，65℃加热熔融，置于65℃恒温水浴中备用；(2)将pH7.4磷酸缓冲液4000ml置水浴中，加热至65℃，加入脂质熔融液中，振荡混合，冷却，加pH7.4磷酸缓冲液至5000ml；(3)混合液体加入甘露醇200g，涡流振荡至完全溶解，再加pH7.4磷酸缓冲液至10000ml；(4)经高压均质处理，高压60Mpa3次，低压10MPa2次。药液-80℃预冻24h，于冷冻干燥机中冻干，冻干条件-60℃～-55℃，0.1-0.3psi，冻干24-36小时，至成红色、均匀晶状固体粉末，得吡柔比星脂质体冻干剂。
全文摘要
本发明涉及一种吡柔比星脂质体及其制备方法。吡柔比星具有较好的抗肿瘤作用，但亦有一定的毒副作用。本发明要解决的技术问题是如何克服现有技术的上述缺陷，提供一种疗效显著、毒副作用小、靶向性好的吡柔比星脂质体及其制备方法。为了克服现有吡柔比星制剂毒副作用大、靶向性差的缺陷，本发明吡柔比星脂质体，由原料药与辅料制成，其中，原料药为吡柔比星或盐酸吡柔比星，辅料包括磷脂和胆固醇，其剂型可以是针剂，也可以是冻干剂。本发明吡柔比星脂质体适用于多种癌症的治疗，如膀胱癌、白血病、乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、恶性淋巴癌等多种癌症，具有较好的疗效。
文档编号A61K9/127GK1931178SQ20051003726
公开日2007年3月21日 申请日期2005年9月15日 优先权日2005年9月15日
发明者罗国安, 王义明, 刘清飞, 田维维, 梁琼麟 申请人:珠海清华科技园技术研究发展有限公司