专利名称：一种抗真菌的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗真菌的药物，系香豆素类化合物的应用。该类化合物有明显的抗真菌作用，用于治疗甲沟炎，灰指甲等疾病。
背景技术：
香豆素属于邻-羟基桂皮酸的内酯，它广泛存在于伞形科、豆科、芸香科、菊科、虎耳草科、瑞香科等植物以及微生物代谢产物中，但是在动物世界中几乎不存在。香豆素在植物中各部分的含量从多到小的次序i为果实＞根须＞枝干＞叶子。到1980年，已发现的香豆素化合物大约有800多个。
呋喃香豆素(furanocoumarin)在传统药物中已经用了很长时间，印度的神话书藉《Athara Veda》就描述了用Psoralea corylifolia树中提炼出来的膏状药治疗白斑病，古埃及人曾用Ammi majus来治白癫风。第一个呋喃香豆素和5-甲氧基补骨脂素(5-methoxypsoralen)18是1838年Kalbrunner(Scott，B.R.；Pathak，M.A.；Mohn，G.R.Mutat.Res.，1976，39，29.)从香柠檬油中分离得到的。
香豆素类化合物具有广泛的生物活性，例如抗凝血(anticoagulant)，动物激素(estrogenic)，抗皮肤敏感活性(dermal photosensitizing activity)，抗菌(antimicrobial)，降温(hypothermal)，血管扩张(vasodilator)，软体动物杀灭剂(molluscacidal)，驱虫剂(anthelmintic)，.镇静剂和催眠药(sedative and hypnotic)，止痛剂和降温剂(analgesic and hypothermal activity)((a).Soine，T.O.J.Pharm.Sci.，1964，53，231.(b).Edelson，R.L.Sci.Am.，1988，August，68.(c).Dini，A.；Ramundo，E.；Satumino，P.；Stagno，d’Alcontres，I.Boll.Soc.Ital.Biol.Sper.，1992，Univ.Lodz.)。事实上，香豆素类化合物具有如此广泛的生物活性，以致有人称之为“药学上的多面手”(Pharmacological promiscuity)(Hoult，J.R.；Paya，M.Gen.Pharmacol.，1996，27，713.)。比较显著的生理学效果有黄曲霉毒素(aflatoxin)的急性肝毒性和致癌性(acute hepatotoxicity andcarcinogenicity)，双香豆醇(dicoumarol)的抗凝血性(Rocha，L.；Marston，A.；Kaplan，M.；Stoeckli-Evans，H.；Thull，U.；Testa，B.；Hostettmann，K.Phytochem.，1994，36，1381.)，新生霉素(novobiocin)和coumermycin A1的抗生素活性，一些线性呋喃香豆素在细胞上的光敏性已经引起了生物化学界的广泛兴趣，被用于协助交叉连接DNA片断。在中列出了一些化合物的结构和生理活性。Stud.Nat.Prod.Chem.，2000，33(Bioactive Natural Products(Part D))，350.
Dicoumarol(抗凝血性) Herniarin(抗真菌性) Scopletin(抗真菌性) Warfarin sodium salt(抗凝血剂) Ayapin(抗凝血剂)Columbianadin(诱导钙离子吸收) AflatoxinB2(抗血清)由于香豆素类化合物在植物中存在的广泛性和其优良的生理活性，其中很多化合物都被用作为药物，因而引起了化学家，药学家和生物学家的强烈兴趣。
发明内容
本发明目的是提供一种抗真菌的药物。
本发明中所涉及的一种抗真菌的药物，其结构新颖独特，是一种香豆素类化合物，经过活性测定表明它们中的一部分具有强效的抗真菌作用。是一种治疗甲沟炎，灰指甲等疾病的药物。
本发明的药物具有如下结构式 其中R为苯基、或者R1、R2、R3、R4取代的香豆素、或H、CHO、OCH3、X、NO2、C1-10的烃基、CN、COOCH3、-OCH2O-(环二氧丙基)取代或多取代的芳基或萘基或氮杂芳基；R1、R2、R3、R4为H、C1-10的烃基、X、NO2、CN、OCH3、COOCH3或OR5；R5为H或C1-10的烃基；X＝卤素。
如以下化合物为例 或
本发明的化合物的合成方法可分类描述如下用分子式为R1、R2、R3、R4取代的香豆素磺酸酯类化合物作为底物，用二价或零价的钯或镍化合物和膦配体作为催化剂，在有机溶剂中和Zn存在下，以60～100℃的温度下与卤代芳香烃或R1、R2、R3、R4取代的卤代香豆素类化合物或者另一个R1、R2、R3、R4取代的卤代香豆素磺酸酯类化合物反应0.5到20小时得到结构式为 的香豆素类化合物，其中R1、R2、R3、R4取代的香豆素磺酸酯类化合物与二价或零价的钯或镍化合物、膦配体、Zn和卤代芳香烃或R1、R2、R3、R4取代的卤代香豆素类化合物或者另一个R1、R2、R3、R4取代的卤代香豆素磺酸酯类化合物的摩尔比为1∶0.05～1∶0.05～1∶1～5∶1～10，其中R1、R2、R3、R4如上所述，卤素为碘，溴，氯，所述的芳香烃是H、CHO、OCH3、X、NO2、C1-10的烃基、CN、COOCH3取代的卤代芳基或卤代萘基或卤代氮杂芳基。
换言之，在本发明的方法中，底物不仅可以与卤代芳香烃或R1、R2、R3、R4取代的卤代香豆素类化合物反应外，底物也可以进行自偶合反应。
上述的反应中，所述的二价或零价的钯或镍化合物可以是二(三苯基膦)二氯化钯(PaCl2(PPh3)2)、二(三苯基膦)二氯化镍(NiCl2(PPh3)2)、四(三苯基膦)钯(Pa(PPh3)4)、四(三苯基膦)镍(Ni(PPh3)4)等，所述的膦配体可以是1，2-二(二苯基膦)乙烷、1，3-二(二苯基膦)丙烷、1，4-二(二苯基膦)丁烷、1，1`-二(二苯基膦)二茂铁或2，2`-二(二苯基膦)联萘(BINAP)、三苯瞵，其中X为卤素碘，溴，氯。所述的有机溶剂可以是苯、甲苯、石油醚、四氯化碳、四氢呋喃。
本发明的方法也可以由下述典型反应式表示 在生理活性的测试中，左氧沙星没有表现出明显的活性，而本发明的化合物4，4′-双异秦皮定对所试表葡球菌有抗菌活性，较敏感菌株的MIC值为128mg/L。对白色念珠菌也呈现有抑菌作用，10ηg/ml浓度下其抑菌圈约为10mm。表明本发明的该类化合物有很好的抗真菌作用，可以用作治疗甲沟炎，灰指甲等疾病的药物。
具体实施例方式
通过下述实施例将有助于理解本发明，但并不限制本发明的内容。
实施例14-(4，5，6-三甲氧基-2-苯甲醛)香豆素(1)的合成 将底物4-香豆素甲烷磺酸酯(1～100mmol)，NiCl2(PPh3)2(0.2～20mmol)，PPh3(0.4～40mmol)，活化的锌粉(3～300mmol)一起加入10～1000毫升(ml)的干燥反应瓶，加入4～400ml的无水甲苯，油浴升温到90℃，用自动注射器慢慢滴加溶于4～400ml的无水甲苯的3，4，5-三甲氧基2-碘苯甲醛(1～100mmol)，搅拌0.5～20小时，然后自然降温到室温，往反应瓶中加入4～400ml5％的稀盐酸和4～400ml二氯甲烷(CH2Cl2)，搅拌1小时，待体系变澄清后，用CH2Cl2萃取水相(3×10～1000ml)，然后先后用饱和碳酸氢钠水溶液(aqNaHCO3)，饱和氯化钠水溶液(brine)洗有机相(10～1000ml)，收集有机相之后，用无水硫酸钠干燥2小时，过滤，浓缩，残余物经柱层析得产物4-(4，5，6-三甲氧基-2-苯甲醛)香豆素(1)，产率为71％；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.70(s，CHO，1H)，7.56(s，Ph，1H)，7.45-7.03(m，Ph，4H)，6.41(s，CH，1H)，4.02(s，OMe，3H)，3.99(s，OMe，3H)，3.73(s，OMe，3H)；EI-MS(m/z，％)341(M++1，100)，340(M+，91.40)，325(76.86)，297(47.70)，282(23.64)，281(34.42)，237(22.72)，155(17.46)；IR(KBr，cm-1)3007，2987，2941，1726，1677，1603，1587，1562，1484，1365，1331；元素分析.C19H16O6，计算值340.09469；实测值340.09561.
实施例24-(3-甲氧基苯基)香豆素(2)的合成 将底物4-香豆素甲烷磺酸酯(1～100mmol)，NiCl2(PPh3)2(0.2～20mmol)，PPh3(0.4～40mmol)，活化的锌粉(3～300mmol)一起加入10～1000毫升(ml)的干燥反应瓶，加入4～400ml的无水甲苯，油浴升温到90℃，用自动注射器慢慢滴加溶于4～400ml的无水甲苯的3-甲氧基2-碘苯(1～100mmol)，搅拌0.5～20小时，然后自然降温到室温，往反应瓶中加入4～400ml 5％的稀盐酸和4～400ml二氯甲烷(CH2Cl2)，搅拌1小时，待体系变澄清后，用CH2Cl2萃取水相(3×10～1000ml)，然后先后用饱和碳酸氢钠水溶液(aq NaHCO3)，饱和氯化钠水溶液(brine)洗有机相(10～1000ml)，收集有机相之后，用无水硫酸钠干燥2小时，过滤，浓缩，残余物经柱层析得产物4-(3-甲氧基苯基)香豆素(2)，产率为70％；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.56-7.05(m，Ph，6H)，6.99(s，Ph，1H)，6.40(s，CH，1H)，3.87(s，OMe，3H)ppm；EI-MS(m/z，％)263(M++1，19.70)，262(M+，100)，261(M+-1，20.31)，205(9.38)，184(13.98)，183(64.62)，108(22.78)，107(12.53)；IR(KBr，cm-1)3068，2846，1755，1720，1596，1583，1558，1470，1430，875，803，779，767，752，700；元素分析.C16H12O3.计算值252.07814；实测值252.07507.
实施例34-(4，6-二甲氧基-2-苯甲醛)香豆素(3)的合成操作同上，产率67％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.80(s，CHO，1H)，7.23-7.03(m，Ph，3H)，7.01(s，Ph，J＝6.6Hz，1H)，6.83(s，Ph，1H)，6.50(s，Ph，1H)，6.37(s，CH，1H)，3.88(s，OMe，3H)，3.76(s，OMe，3H)ppm；EI-MS(m/z，％)311(M++1，20.33)，310(M+，100)，282(32.64)，281(23.59)，267(19.94)，262(23.04)，57(24.13)，43(19.92)；IR(KBr，cm-1)3091，2874，1729，1689，1600，1564，1449，1349，1361，1326，1290；元素分析.C18H14O5.计算值C，69.67；H，4.55；实测值C，69.58；H，4.37.
实施例44-(5，6-二甲氧基-2-苯甲醛)香豆素(4)的合成操作同上，产率72％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.69(s，CHO，1H)，7.86(Ph，1H)，7.54(Ph，1H)，7.45(Ph，1H)，7.22-7.16(Ph，2H)，7.01(Ph，1H)，6.40(s，CH，1H)，4.05(s，OMe，3H)，3.70(s，OMe，3H)ppm；EI-MS(m/z，％)310(M+，70.50)，296(19.68)，295(100)，267(46.51)，252(29.37)，251(34.84)，236(21.91)，139(27.83)；IR(KBr，cm-1)3088，2947，2837，2733，1729，1695，1683，1604，1584，1566；元素分析.C18H14O5.计算值C，69.67；H，4.55；实测值C，69.86；H，4.57.
实施例5
(5)的合成操作同上，产率83％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.08(d，CH，J＝2.1Hz，1H)，7.64(s，Ph，1H)，7.54(d，Ph，J＝7.5Hz，1H)，7.51(d，Ph，J＝7.5Hz，1H)，7.42-7.21(m，Ph，4H)，6.45(d，CH，J＝2.1Hz，1H)，3.93(s，OMe，3H)ppm；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ175.12，160.67，157.84，154.08，153.90，151.45，148.05，132.41，127.02，124.91，124.52，120.90，120.03，118.95，117.70，117.45，105.45，56.28 ppm；EI-MS(m/z，％)320(M+，4.26)，292(10.00)，277(34.89)，262(92.13)，183(69.87)，105(100)，71(49.36)，69(40.64)；IR(KBr，cm-1)3078，2963，1720，1649，1610，1488，1446，1334，1271；HRMS.C19H12O5.计算值320.06848；实测值320.07339.
实施例64-(2-萘甲醛)香豆素(6)的合成操作同上，产率63％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.06(s，CHO，1H)，8.63-6.82(m，Ph，10H)，6.56(s，CH，1H)ppm；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ190.09，159.34，153.34，150.99，135.78，132.49，130.55，129.35，128.43，127.78，126.71，126.15，124.63，124.17，122.44，120.13，118.28，117.06，116.50，116.32 ppm；EI-MS(m/z，％)300(M+，63.03)，271(30.50)，215(29.10)，118(100)，90(43.25)，89(45.81)，63(27.80)，46(92.08)；IR(KBr，cm-1)3068，2855，1728，1687，1606，1562，1452；HRMS.C20H12O3.计算值300.08064；实测值300.08357.
实施例74-(3-N萘基)香豆素(7)的合成操作同上，产率30％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.42(s，NCH，1H)，8.13(d，Ph，J＝8.2Hz，1H)，7.73-7.46(m，Ph，5H)，7.13-7.01(m，Ph，2H)，6.55(s，CH，1H)ppm；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ160.50，154.00，132.63，132.24，132.07，131.77，128.67，128.60，128.54，128.49，128.47，128.45，127.26，124.70，124.69，124.51，117.90，117.58 ppm；EI-MS(m/z，％)274(M++1，23.33)，273(M+，84.23)，272(M+-1，100)，256(49.31)，245(22.69)，244(26.37)，216(31.90)，189(28.37)；IR(KBr，cm-1)2925，1752，1723，1605，1560，1501，1448，1360，757；HRMS.计算值C18H11NO2273.07900；实测值273.08120.
实施例86-甲基-4-(4-甲氧基-2-苯甲醛)香豆素(8)的合成操作同上，产率85％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.82(s，CHO，1H)，7.58(s，Ph，1H)，7.32-7.29(m，Ph，4H)，6.81(s，Ph，1H)，6.33(s，CH，1H)，3.94(s，OMe，3H)，2.26(s，CH3，3H)ppm；
EI-MS(m/z，％)294(M+，9.09)，268(25.37)，256(20.23)，240(21.80)，225(33.97)，199(100)，212(19.84)，105(51.00)；IR(KBr，cm-1)3442，2927，2850，1726，1606，1572，1487，1423，1280，1251；HRMS.计算值C18H14O4294.08921；实测值294.08517.
实施例9(9)的合成操作同上，产率90％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.70(s，CHO，1H)，7.54-7.30(m，Ph，5H)，6.80(s，CH，1H)，6.39(d，CH2，J＝1 5Hz，2H)ppm；EI-MS(m/z，％)3 12(M+，70.62)，284(83.77)，283(26.33)，270(28.03)，269(100)，256(44.59)，255(20.62)，170(24.33)；IR(KBr，cm-1)3075，2913，2861，1725，1682，1610，1571，1504，1482，1440，1369，1268，1253；HRMS.C18H11FO4.计算值312.04340；实测值312.03852.
实施例10(10)4，4′-双香豆素(10)的合成 干燥的10ml反应瓶中通高纯氩气，加入0.5mmol底物，0.1mmolNiCl2(PPh3)2，0.2mmol PPh3，1.5mmol活化的锌粉，3ml干燥的甲苯，小心地抽气，通高纯氩气，如此反复两次，尽量除去体系中的氧气。升温(90℃)搅拌，跟踪反应，待反应结束后，冷却至室温，加入3ml 5％稀盐酸，3ml CH2Cl2，剧烈搅拌至体系呈澄清透明，然后用CH2Cl2萃取水相，和并有机相，NaHCO3水溶液，水，brine洗涤有机相，干燥，浓缩，硅胶(300-400目)柱层析纯化。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.64(d，Ph，J＝9.0Hz，1H)，7.48(d，Ph，J＝9.0Hz，1H)，7.22(m，Ph，1H)，6.50(s，CH，1H)ppm；EI-MS(m/z，％)290(M+，38.52)，263(23.14)，262(100)，245(44.28)，234(31.48)，218(24.63)，205(37.60)，176(23.22)；IR(KBr，cm-1)1973，1854，1720，1604，1560，1487，1376，1357；HRMS.计算值C18H10O4290.05791.实测值290.05670.
实施例11(11)4，4′-双(7-甲基)香豆素(11)的合成操作同上，产率38％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.43(d，Ph，J＝8.4Hz，1H)，7.3 7(d，Ph，J＝8.4Hz，1H)，6.98(s，Ph，1H)，6.44(s，CH，1H)，2.31(s，CH3，3H)ppm；EI-MS(m/z，％)318(M+，38.85)，291(21.48)，290(100)，275(32.52)，273(67.88)，262(19.23)，261(19.01)，246(26.38)；IR(KBr，cm-1)1973，1724，1613，1573，1560，1489，1418，1180，1130，935，814；HRMS.计算值C20H14O4318.08921.实测值318.08975.
实施例12(12)4，4′-双(6-氟)香豆素(12)的合成操作同上，产率22％。
1H NMR(300MHz，d-DMSO)δ7.86(d，Ph，J＝7.5Hz，1H)，7.55(s，Ph，1H)，7.09(d，Ph，J＝8.1Hz，1H)，5.95(s，CH，1H)ppm；EI-MS(m/z，％)329(M++3，19.83)，328(M++2，100)，326(M+，14.10)，310(17.48)，299(16.14)，298(13.89)，258(13.10)，257(50.74)；IR(KBr，cm-1)3053，2925，1766，1721，1568，1485，1430，1263，1226，1189，1170，942，926，820；HRMS.计算值C24H6F2O4326.03906.实测值326.03667.
实施例13(13)4，4′-双(7-甲氧基)香豆素(13)的合成操作同上，产率55％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.65(d，Ph，J＝9.3Hz，1H)，7.38(d，Ph，J＝8.1Hz，1H)，6.84(s，Ph，1H)，6.27(s，CH，1H)，3.88(s，OMe，3H)ppm；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ163.06，161.55，156.12，143.74，132.38，132.25，129.02，128.85，128.69，113.30，112.88，112.76，101.04，56.03ppm；IR(KBr，cm-1)1721，1706，1614，1558，1506，1465，1400，1353，1284，1234；实施例14(14)4，4′-双(7，8-苯基)香豆素(14)的合成操作同上，63％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.66(d，Ar，J＝7.5Hz，1H)，7.89-7.57(m，Ar，4H)，7.15(d，Ar，J＝6.6Hz，1H)，6.62(s，CH，1H)ppm；EI-MS(m/z，％)390(M+，69.95)，363(30.42)，362(100)，345(31.52)，318(30.22)，305(32.67)，276(37.38)，138(38.32)；IR(KBr，cm-1)1720，1632，1548，1502，1469，1376，1355，1327；实施例15本发明的化合物经江苏恒瑞医药股份有限公司测试其中一个化合物4，4′-双异秦皮定的体外抗真菌活性，结果如下； 4，4′-双异秦皮定在生理活性的测试中，左氧沙星没有表现出明显的活性，而本发明的化合物4，4′-双异秦皮定对所试表葡球菌有抗菌活性，较敏感菌株的MIC值为128mg/L。对白色念珠菌也呈现有抑菌作用，10ηg/ml浓度下其抑菌圈约为10mm。
实施例16体内保护试验实验方法1.实验菌液的制备挑取试验菌的2～3个单菌落接种于沙氏液体培养基中，37℃培养18小时，用5％灭菌干酵母液适当稀释备用。
2.最小致死菌量(MLD)的测定3.取健康昆明种小鼠，体重18～22克，随机分组，每组5只小鼠，每鼠0.5ml，感染后连续观察7天，并记录小鼠死亡数，以引起小鼠100％死亡的最低菌量作为最小致死菌量(MLD)。用该菌量作为体内保护试验的感染菌量。
4.药液的配制试验用药均用0.5％CMC配制，氟康唑、4，4’-双异秦皮定配制成所需浓度。
5.感染及治疗实验方法将实验动物按性别、体重随机均匀分组，每组10只小鼠，雌雄各半，分别给小鼠腹腔注射感染菌液，0.5ml/鼠，感染前2h和感染后4小时分别给小鼠口服灌胃不同浓度的氟康唑和4，4’-双异秦皮定，给药量为0.5ml/次，20g，同时设感染对照组，记录感染后7天内小鼠死亡数按Bliss法计算半数有效剂量ED50及95％可信限。
实验结果氟康唑、4，4’-双异秦皮定对白色念珠菌02-6感染小鼠的体内保护作用按Bliss法计算半数有效剂量ED50及95％可信限。
表1 CD-011，氟康唑对小鼠体内感染白色念珠菌02-6的保护作用
结论
4，4’-双异秦皮定口服给药对小鼠体内感染白色念珠菌02-6具有一定保护作用，给药剂量为200mg/kg时，其存活率为70％，4，4’-双异秦皮定口服给药对小鼠体内感染白色念珠菌的体内保护作用与氟康唑基本相当。
实施例17体外药敏MIC试验方法将各测试菌用生理盐水制成菌悬液，并稀释成浊度为2.0McF(湿菌浓度mg/ml以上菌悬液，再用生理盐水稀释100倍，RPMI1640稀释10倍，样品二倍稀释，96孔培养板中培养72-96h，轻微振荡，490nm处进行光电比色。
试验菌酵母菌，白色念珠菌01-5，01-1，02-6，白色念珠菌CMCC，黑曲霉，新型隐球菌，红色隐球菌，疣状毛菌。
结果(MIC)如下表
结论4，4’-双异秦皮定对白色念珠菌的抗菌活性弱，MIC为128、＞128μg/ml，对霉菌中的黑曲霉菌、新型隐球菌、红色隐球菌、疣状毛菌具有抗菌活性，MIC值各为128，64，16，128μg/ml，其抗菌作用强弱与氟康唑基本相同。
实施例18细菌回复突变试验按照《新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药学、药理学、毒理学)》中致突变实验的要求，设定5、50、500、1000、5000μg/皿5个剂量组，在无S9实验系统中，对于4，4’-双异秦皮定进行了检测。结果显示，4，4’-双异秦皮定高剂量(5000μg/皿)可抑制TA97、TA98、TA100、TA102各菌株的细菌生长，其它4个剂量未见对各菌株的菌落数增加或抑制。提示，在本实验条件下，4，4’-双异秦皮定在高剂量时有抑制细菌生长作用，其余剂量对鼠沙门氏菌各菌株无诱变作用。
实施例19 4，4’-双异秦皮定诱发哺乳动物细胞CHL染色体畸变试验用CHL细胞评价4，4’-双异秦皮定的诱变作用。先按常规方法求得IC50，将其设为最高浓度剂量，再按0.5倍数依次稀释，共设3个剂量组。实验在-S9实验系统进行。4，4’-双异秦皮定的IC50为248μg/ml，其剂量设定为62、124、248μg/ml，将药物加入细胞培养直接作用至24h，以观察4，4’-双异秦皮定对CJL细胞有否诱变作用。结果显示，在本实验条件下，在-S9实验系统中，4，4’-双异秦皮定高剂量(248μg/ml)畸变率为12％，而中、低剂量组畸变率均为1％，三个剂量组的畸变率未显示出剂量相关关系。重复了两次试验，结果相似。因此，在此实验条件下，认为4，4’-双异秦皮定在较高剂量时为弱诱变剂。
实施例20 4，4’-双异秦皮定小鼠骨髓微核试验试验选用ICR小鼠70只，随机分为7组，每组10只，雌雄各半。小鼠单次灌胃4，4’-双异秦皮定的MTD＞5000mg/kg，因此最高剂量选择5000mg/kg，共设5000、2500、1250、625mg/kg 4个剂量组、1个阴性和1个阳性对照组。每天灌胃1次，连续2天。于末次投药后24h取样，镜检。结果表明，在本实验条件下，4，4’-双异秦皮定化合物无诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率增加的作用。
实施例21毒性试验考虑4，4’-双异秦皮定具有抗真菌作用，因此在细菌回复突变试验中，在高剂量时具有抑制细菌生长作用，是符合它本身的药效学作用的。在CHL染色体畸变试验中，只在较高的剂量显示出弱的诱变活性，如有必要，可进一步试验确定。
体内小鼠急毒试验结果表明4，4’-双异秦皮定的LD50测不出，只能检测最大耐受量为MTD＞5g/kg(14只小鼠，观察14天，无死亡)，说明毒性很小。我们同时检测了氟康唑的LD50约为1.6g/kg(4只小鼠，观察14天，死亡2只)，因此4，4’-双异秦皮定的毒性比氟康唑大约小3倍。更重要的是无诱发小鼠骨髓微核率增加的作用。因此，4，4’-双异秦皮定很可能是一个毒性小于氟康唑，而抗真菌作用较强的新型化合物。
权利要求
1，一种抗真菌的药物，其具有如下结构式的4-取代香豆素类化合物 其中R为苯基、或者R1、R2、R3、R4取代的香豆素、或H、CHO、OCH3、X、NO2、C1-10的烃基、CN、COOCH3、-OCH2O-取代或多取代的芳基或萘基或氮杂芳基；R1、R2、R3、R4为H、C1-10的烃基、X、NO2、CN、OCH3、COOCH3或OR5；R5为H或C1-10的烃基；X＝卤素。
2，如权利要求1所述的一种抗真菌的药物，其特征是所述的化合物具有如下结构式 或
3，如权利要求1所述的一种抗真菌的药物，其特征是用于治疗甲 沟炎或灰指甲疾病的抗真菌的药物。
全文摘要
本发明涉及一种抗真菌的药物，是具有如下结构式的4－取代香豆素类化合物其中R为苯基、或者R
文档编号A61P3/10GK1679540SQ20051006549
公开日2005年10月12日 申请日期2003年5月15日 优先权日2003年5月15日
发明者林国强, 雷建光 申请人:中国科学院上海有机化学研究所